הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל שחיקה אפיתליאלית לחקר ריפוי פצעי הקרנית

3.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63112

⸱

29 בדצמבר 2021

 ,  ,  ,  , 
1College of Optometry, University of Houston, 2Children’s Nutrition Research Center, Baylor College of Medicine, 3Center for Translational Research on Inflammatory Diseases (CTRID), Michael E. DeBakey Veterans Affairs Medical Center

במאמר זה

סיכום

כאן מתואר פרוטוקול ליצירת פצע שחיקה מרכזי באפיתל הקרנית בעכבר באמצעות טרפין וספוד של מועדון גולף קהה. מודל זה של ריפוי פצעי הקרנית ניתן לשחזור רב ומשמש כיום להערכת ריפוי פצעי בקרנית שנפגעו בהקשר של מחלות.

תקציר

הקרנית קריטית לראייה, ומהווה כשני שלישים מכוח השבירה של העין. חיוני לתפקיד הקרנית בראייה הוא השקיפות שלה. עם זאת, בשל מיקומה החיצוני, הקרנית רגישה מאוד למגוון רחב של פציעות שעלולות להוביל לאובדן שקיפות הקרנית ועיוורון בסופו של דבר. ריפוי יעיל של פצעי הקרנית בתגובה לפציעות אלה הוא חיוני לשמירה על הומאוסטזיס של הקרנית ולשימור שקיפות הקרנית ויכולות השבירה. באירועים של פגיעה בריפוי פצעי הקרנית, הקרנית הופכת פגיעה לזיהומים, כיבים והצטלקות. בהתחשב בחשיבות הבסיסית של ריפוי פצעי הקרנית לשמירה על שקיפות וראייה של הקרנית, הבנה טובה יותר של תהליך הריפוי הרגיל של פצע הקרנית היא תנאי מוקדם להבנת ריפוי לקוי של פצעי הקרנית הקשורים לזיהומים ולמחלות. לקראת מטרה זו, מודלים של מורין של פציעת קרנית הוכיחו את עצמם כיעילים לקידום הבנתנו את מנגנוני ריפוי פצעי הקרנית הפועלים בתנאים פיזיולוגיים רגילים. כאן מתואר פרוטוקול ליצירת שחיקה מרכזית של אפיתל הקרנית בעכבר באמצעות טרפין וספוד מועדון גולף קהה. במודל זה, טרפין עגול בקוטר 2 מ"מ, שמרכזו מעל הקרנית, משמש לתיחום אזור הפצע. מועדון הגולף spud משמש בזהירות כדי debride את האפיתל וליצור פצע עגול מבלי לפגוע בקרום מרתף אפיתל הקרנית. התגובה הדלקתית המתקבלת מתרחשת כמפל מאופיין היטב של אירועים תאיים ומולקולריים שהם קריטיים לריפוי פצעים יעיל. מודל פשוט זה של ריפוי פצעי הקרנית ניתן לשחזור רב ופורסם היטב, וכעת הוא משמש להערכת ריפוי פצעי קרנית שנפגעו בהקשר של מחלות.

מבוא

הקרנית היא החלק הקדמי השקוף של שליש מהעין. הקרנית משרתת מספר פונקציות כולל הגנה על המבנים הפנימיים של העין ויצירת מחסום מבני המגן על העין מפני זיהומים1. חשוב מכך, הקרנית חיונית לראייה, ומספקת כשני שלישים מכוח השבירה של העין 2,3. חיוני לתפקיד הקרנית בראייה הוא השקיפות שלה. עם זאת, בשל מיקומה החיצוני, הקרנית חשופה למגוון רחב של פציעות על בסיס יומיומי שעלולות להוביל לשיבוש בתפקוד המחסום שלה, לאובדן שקיפות ולעיוורון בסופו של דבר. אובדן שקיפות הקרנית הוא גורם מוביל ללקוי ראייה ברחבי העולם 4,5. שחיקות קרנית הן סיבה נפוצה לביקורים בחדר המיון (ER), המהווים מחצית מהמקרים הקשורים לעין המוצגים במיון6. על פי הערכות, יותר ממיליון בני אדם סובלים מפציעות הקשורות לעיניים מדי שנה בארצות הברית7. ריפוי יעיל של פצעי הקרנית בתגובה לפציעות אלה הוא חיוני לשמירה על הומאוסטזיס של הקרנית ולשימור השקיפות ויכולות השבירה שלו. באירועים של פגיעה בריפוי פצעי הקרנית, הקרנית הופכת פגיעה לזיהומים, כיבים וצלקותשל 8,9. כמו כן, הפופולריות הגוברת של ניתוחי שבירה מציבה אתגר טראומטי ייחודי על הקרנית10. בהתחשב בחשיבות הבסיסית של ריפוי פצעי הקרנית לשמירה על שקיפות וראייה של הקרנית, הבנה טובה יותר של תהליך הריפוי הרגיל של פצע הקרנית היא תנאי מוקדם להבנת ריפוי לקוי של פצעי הקרנית הקשורים לזיהומים ולמחלות.

לשם כך פותחו מספר מודלים של בעלי חיים של ריפוי פצעי הקרנית 11,12,13,14,15. מודלים של מורין של ריפוי פצעי הקרנית הוכיחו את עצמם כיעילים בקידום הבנתנו את מנגנוני ריפוי פצעי הקרנית הפועלים בתנאים פיזיולוגיים רגילים. סוגים שונים של פצעי הקרנית שימשו בחקר ריפוי פצעי הקרנית, שכל אחד מהם מתאים לחקר היבטים שונים של תהליך ריפוי הפצע. הסוגים הנפוצים ביותר של מודלים של פצעים המשמשים במחקרי ריפוי פצעים בקרנית הם המודלים המכניים והכימיים של פצעים. פצעי קרנית כימיים, הכוללים בעיקר יצירת כוויות אלקליין על הקרנית, שימושיים לחקר כיבים בקרנית, אטימות וניאו-וסקולריזציה13. פצעי קרנית מכניים כוללים פצעי חיטוי (שחיקה) ופצעי כריתת קרטום 14,15,16. קרום מרתף אפיתל שלם או פרוץ של הקרנית מגדיר פצעי כריתה וקרתית דם, בהתאמה. בפצעי חיטוי, קרום מרתף האפיתל נשאר שלם, בעוד שבפצעי כריתת קרטום, קרום המרתף נפרץ עם חדירה בעיקר לתוך הסטרומה הקדמית. פצעי חיטוי הם השימושיים ביותר לחקר אפיתליאליזציה מחדש, התפשטות תאי אפיתל, תגובה חיסונית והתחדשות עצבים בעקבות פציעת הקרנית. פצעי כריתת קרטקומיה, לעומת זאת, שימושיים ביותר לחקר הצטלקות הקרנית14,15.

כאן מתואר פרוטוקול ליצירת פצע שחיקה מרכזי באפיתל הקרנית בעכבר באמצעות טרפין וספוד של מועדון גולף קהה. מודל ריפוי פצעי הקרנית הפשוט הזה ניתן לשחזור רב ופורסם היטב, וכעת הוא משמש להערכת ריפוי פצעי הקרנית שנפגעו בהקשר של מחלה17.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הפרוטוקולים של בעלי חיים אושרו על ידי הוועדות המוסדיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת יוסטון ובמכללת ביילור לרפואה. ההנחיות שפורטו בהצהרת האגודה למחקר בראייה וברפואת עיניים (ARVO) בדבר השימוש בבעלי חיים בראייה ובמחקרי עיניים, בוצעו בטיפול בעכברים ובשימוש בהם.

1. הכנה

  1. הכנת תמיסת פלואורסצין
    1. יש להכין תמיסת פלואורסציין של 1% על ידי המסת 10 מ"ג של מלח נתרן פלואורסציין ב-1 מ"ל של מלח סטרילי או מי מלח סטריליים 1x פוספטים (PBS).
      הערה: הכינו תמיסת נתרן פלואורסציין ביום השימוש או יום לפני כן כדי למנוע זיהום מיקרוביאלי. כאשר מכינים זאת יום לפני השימוש, יש לאחסן את תמיסת הפלואורסצין במרחק של 4 מעלות צלזיוס מהאור. עוטפים צינורות בנייר אלומיניום כדי למנוע הלבנת תמונות.
    2. חלקו את התמיסה לאליפוטים המתאימים לשימוש בניסוי אחד. 1-1.5 μL של תמיסת פלואורסציין משמש לכל עכבר לכל נקודת זמן. השתמש בנוסחה הבאה כדי לחשב את נפח ה- aliquot המתאים לניסוי יחיד:
      figure-protocol-1
      הערה: לדוגמה, אם שישה עכברים נחקרים בניסוי יחיד עם גודל פצע מנוטר בחמש נקודות זמן, נפח האליקוט המתאים לניסוי יחיד זה יהיה:
      figure-protocol-2
  2. הכנת קוקטייל קטמין/קסילאזין להרדמה של עכברים.
    1. כדי להכין 10 מ"ל של קוקטייל, יש לערבב 2.0 מ"ל של קטמין (100 מ"ג/מ"ל) עם 1.0 מ"ל של קסילאזין (20 מ"ג/מ"ל), ולהוסיף 7.0 מ"ל של PBS סטרילי. מכינים קוקטייל קטמין/קסילאזין יום לפני או ביום הניתוח.
      הערה: יש להשתמש בכל הפתרונות בטמפרטורת החדר, אלא אם כן צוין אחרת.

2. הרדמה

  1. שקלו את העכבר (עכברי C57BL/6 wildtype בני 8-12 שבועות) כדי לקבוע את הכמות המתאימה של חומר הרדמה למתן. השתמש בטכניקת ריסון העכבר בשתי ידיים כדי לרסן ולטפל בעכברים להזרקת ההרדמה18. יש לתת קטמין/קוקטייל קסילאזין תוך-צפקינלי (i.p.) בריכוז סופי של 80 מ"ג/ק"ג של קטמין ו-8 מ"ג/ק"ג קסילאזין.
  2. יש להמתין עד שתושג הרדמה מלאה לפני ביצוע פציעת קרנית בעכבר. להעריך את עומק ההרדמה על ידי הערכת רפלקס הדוושה לאחר צביטה בבוהן. כאשר הרדמה נאותה מושגת, העכבר לא צריך לזוז על צביטה הבוהן.
    הערה: מכיוון שעכברים מאבדים במהירות את חום הגוף במהלך ההרדמה, חשוב לספק מקור חום לעכברים כדי למנוע היפותרמיה. הניחו את העכברים על מקור חום (כרית חימום) בשלבי ההרדמה וההחלמה.

3. יצירת פצע הקרנית

  1. פצעו את עין ימין או שמאל בלבד. שמרו על עקביות עם העין (כלומר, שמאלה או ימינה) שנפצעת בעת מעבר מעכבר לעכבר.
    הערה: מכיוון ששפשופים פוגעים בעצבי הקרנית ומפחיתים את החדות, פציעה בשתי העיניים עלולה לגרום לאי נוחות ופגיעה משמעותית. מאחר שלמשככי כאבים יש פוטנציאל לדכא תגובות דלקתיות, השימוש בהם עשוי להיות מבלבל בניסויים מסוימים שמטרתם להבין את דלקת הקרנית. הימנעות ממשככי כאבים בניסויים בפצעי קרנית אושרה על ידי הוועדה המוסדית שלנו לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC).
  2. כדי ליצור את פצע הקרנית אפיתל
    1. תחת מיקרוסקופ ניתוח, השתמשו בטרפין בקוטר 2 מ"מ (ראו איור 1) כדי לתחם את מרכז הקרנית, והשאירו את העין פתוחה לרווחה באמצעות האגודל והאצבע המורה כדי להחזיק את העפעפיים. סובבו בעדינות את הטרפין כדי לעשות רושם על אפיתל הקרנית.
      הערה: יש להקפיד שלא להפעיל לחץ מוגזם בעת שימוש בטרפין מכיוון שהדבר עלול לגרום לניקוב הקרנית. כמו כן, יש להקפיד למקם את הטרפין במרכז. האישונים יכולים לשמש כנקודת ציון לאיתור מרכז הקרנית.
    2. תחת מיקרוסקופ מנתח, החזיקו את ה-spud של מועדון הגולף הקהה (ראו איור 1) במרחק של כ-45° מפני השטח של הקרנית בתוך האזור התוחם עם הטרפין. בזהירות וברציפות לגרד את האפיתל בתוך האזור התוחם עם spud כדי debride את האפיתל.
      הערה: אין להפעיל כוח מופרז ב- debridement מכיוון שזה יכול גם לגרום לניקוב הקרנית. עיניהם של עכברים יכולות להתייבש במהלך תהליך הפציעה, מה שמקשה על ההדברה. במקרה כזה, להחיל PBS סטרילי על משטח העין כדי לשמור על הידרציה אופטימלית.

figure-protocol-3
איור 1: טרפין 2 מ"מ וספוד מועדון גולף קהה. הטרפין משמש לתיחום אזור מעגלי במרכז הקרנית, ומועדון הגולף spud משמש להסרת האפיתל בתוך האזור התוחם. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

4. מעקב אחר סגירת הפצע ואפיתליזציה מחדש

  1. פיפטה 1-1.5 μL של תמיסת פלואורסציין של 1% על פני השטח הפצועים וקרנית תמונה באמצעות מיקרוסקופ דיגיטלי עם מקור אור כחול.
  2. רכשו תמונות בדקה הראשונה של תוספת תמיסת הפלואורסצין כדי למנוע התפשטות לאפיתל שמסביב, מה שמוביל להערכת יתר של גודל הפצע. קרניות פצועות מצולמות בזמנים ספציפיים (כלומר, 0 שעות, 12 שעות, 18 שעות, 24 שעות ו-30 שעות) לאחר הפציעה.
    הערה: בכל נקודות הזמן, ההדמיה מתבצעת בהרדמה; קטמין/קסילאזין משמש בזמן הפציעה בעוד איזופלורן משמש בנקודות הזמן הבאות. עכברים שוכנים בנפרד בכלובים נפרדים למשך כל הזמן של ניטור סגירת הפצע. כאשר הם שוכנים יחד, עכברים נוטים ללקק את עיניו של חבר המלטה, התנהגות שהוכחה כמשפיעה על ריפוי פצעים ברקמות שונות19,20.
  3. נתח תמונות שצולמו, תוך התחקות אחר אזור הפצע באמצעות תוכנת ניתוח תמונות. אזור הפצע עבור כל נקודת זמן מתבטא כאחוז מאזור הפצע המקורי בשעה 0.

5. הדמיה וניתוח אימונופלואורסצנטיות

  1. המתת חסד עכברים בשיטה שאושרה על ידי IACUC (במקרה זה, מנת יתר של פחמן דו חמצני ואחריה נקע צוואר הרחם) בנקודות הזמן הרצויות לאחר הפציעה.
  2. קציר את גלגלי העיניים על ידי לחיצה עדינה על הקנטוס הצדדי כדי לעקור את גלגל העין באמצעות מספריים מעוקלים בקשתית. הנחה את המספריים מאחורי גלגל העין לתפוס בחוזקה את עצב הראייה, ולאחר מכן לחתוך את העצב, המאפשר להסיר את גלגל העין.
  3. קבעו כל גלגל עיניים ב-1 מ"ל של 1x PBS המכיל 2% פרפורמלדהיד למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שטפו שלוש פעמים ב-1 מ"ל של 1x PBS למשך 5 דקות כל אחד.
  4. תחת מיקרוסקופ ניתוח, השתמש בלהב כירורגי כדי לבצע חתך בסקלרה, כ-500 מיקרומטר דיסטלי ללימבוס, ולאחר מכן חתך את כדור הארץ. באמצעות מלקחיים, הסר בעדינות את חומר הקשתית מהקרנית, ולאחר מכן חתך בזהירות את הרקמה הסקלרלית, תוך הקפדה להשאיר את הלימבוס שלם.
  5. בצע ארבעה חתכים רדיאליים חלקיים, כל אחד באורך של כ-1 מ"מ, המשתרעים מהקרנית ההיקפית ועוצרים קצר מהמרכז כדי לאפשר לקרנית להשתטח.
  6. מחלחלים וחוסמים קרניות ב-1 מ"ל של 2% אלבומין בסרום בקר (BSA) ו-0.01% TritonX -100 ב-1x PBS למשך 15 דקות ולאחר מכן חוסמים 2% BSA ב-1x PBS למשך 45 דקות נוספות בטמפרטורת החדר.
  7. דגירה של קרניות למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בקוקטייל של נוגדנים מצומדים פלואורוכרום ייחודיים המסומנים ישירות, המוכנים ב-1x PBS המכילים 2% BSA.
    הערה: נוגדנים ממוקדים לסימון תאים ורקמות ספציפיים בעלי עניין. לדוגמה, אנדותל, נויטרופילים וטסיות דם מסומנים בנוגדנים נגד CD3121,22, אנטי-Ly-6G23,24 ונוגדנים נגד CD4125,26, בהתאמה. 4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול (DAPI) מתווסף לקוקטייל הנוגדנים כדי להמחיש גרעינים.
  8. לאחר הדגירה, יש לשטוף קרניות שלוש פעמים ב-1x PBS למשך 15 דקות כל אחת.
  9. הר קרניות על שקופית מיקרוסקופ בטיפה של תווך הרכבה פלואורסצנטית נגד דהייה, כיסוי עם כיסוי, ותמונה עם ההגדלה הרצויה (4x עד 100x מטרה) באמצעות מיקרוסקופ אור פלואורסצנטי. צלם תמונות בעובי מלא של הקרנית באזורים שונים, כפי שמודגם באיור 2A.
    הערה: תבנית הניתוח המיקרוסקופי המתוארת באיור 2A משמשת לניתוח שינויים אזוריים ספציפיים בדלקת ובחלוקת תאים. גם צביעת DAPI וגם Ly-6G משמשים לזיהוי הנויטרופילים האקסטרווסקולריים. עם צביעת DAPI, לנויטרופילים כדוריים יש גרעין ייחודי בצורת פרסה או סופגנייה (איור 2B).

figure-protocol-4
איור 2: אסטרטגיית הדמיית הקרנית וחדירת נויטרופילים לאחר שחיקה מרכזית. (A) ייצוג סכמטי של הקרנית כולה המציג תשעה שדות מיקרוסקופיים בקוטר הקרנית. השטח האפור מייצג את אזור הפצע המקורי. הרוחב של כל אזור הוא 500 מיקרומטר. (B) שימו לב לצורת הפרסה או הסופגנייה המובהקת של גרעיני נויטרופילים עם צביעת DAPI. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 3 מראה מיקרוגרף אלקטרוני תמסורת של פצע בקרנית שנוצר עם ספוד מועדון הגולף הקהה, ומדגים כי קרום המרתף האפיתליאלי אכן שלם לאחר פציעה.

figure-results-1
איור 3: קרום מרתף אפיתל נשאר שלם לאחר שחיקת הקרנית. מיקרוגרף אלקטרונים של תמסורת של פצע קרנית שנוצר עם מועדון הגולף הבוטה spud. ראשי החצים מצביעים על קרום המרתף שמתחת...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מטרת מאמר השיטות הזה הייתה לתאר פרוטוקול ליצירת פצע שחיקה מרכזי באפיתל הקרנית בעכבר באמצעות טרפין וספוד של מועדון גולף קהה. מודל מורין זה שימש לחקר דלקת הקרנית ותרומתה לריפוי פצעים. סוג זה של מודל יכול לשמש לחקר מנגנוני ריפוי פצעי הקרנית בתנאים פיזיולוגיים רגילים ובפתולוגיות 17,28,29,41,42. המודל שימש לחקר ריפוי פצעי הקרנית בתנאים פתולוגיים כפי שמעיד מחקר על ר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

מימון: נתמך על ידי: NIH EY018239 (A.R.B., C.W.S., ו- R.E.R.), P30EY007551 (A.R.B.), ומענק סיגמא שי בסיוע למחקר (P.K.A.). התוכן הוא באחריותם הבלעדית של המחברים ואינו מייצג את הדעות הרשמיות של המכונים הלאומיים לבריאות, או סיגמא שי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נוגדן נגד CD31BD Bioscience, Pharmingen550274
נוגדן נגד CD41 BDBioscience, Pharmingen553847
נוגדן Anti-Ly6GBD Bioscience, Pharmingen551459
אלבומין בסרום בקר (BSA)ThermoFisherמדעיB14
C57BL/6 עכבריםמעבדות ג'קסון664
DAPISigma AldrichD8417
DeltaVision מיקרוסקופ פלואורסצנטי דה-קונבולוציה בשדה רחבGE מדעי
מיקרוסקופ ניתוח מיקרו-מערכותLeica
מאזני טעינה אלקטרוניים (סולם שקילה)פישר סיינטיפיק
אתנולThermoFisher T038181000CS מדעי
מחבט גולף סטפנסמכשיריםS2-1135
מספריים עקומת איריספישר סיינטיפיק31212
איזופלורןפטרסון וטרינרי07-893-1389
קטמיןפטרסון וטרינרי07-890-8598
פוספט חוצץ מלח (PBS)ThermoFisher מדעיAM9624
מלח נתרן פלואורסצאיןסיגמא אולדריץ'46970
להב כירורגי (להב סקייפל)כלים מדעיים עדינים10022-00
טרפיןאינטגרה Miltex33-31
TritonX -100פישר סיינטיפיק50-295-34
מלקחייםכלים מדעיים עדינים11923-13
קסילזיןפטרסון וטרינרי07-808-1947
החיים

מקורות

  1. DelMonte, D. W., Kim, T. Anatomy and physiology of the cornea. Journal of Cataract and Refractive Surgery. 37 (3), 588-598 (2011).
  2. Meek, K. M., Knupp, C. Corneal structure and transparency. Progress in Retinal and Eye Research. 49, 1-16 (2015).
  3. Sridhar, M. S. Anatomy of cornea and ocular surface. Indian Journal of Ophthalmology. 66 (2), 190-194 (2018).
  4. Flaxman, S. R., et al. Global causes of blindness and distance vision impairment 1990-2020: a systematic review and meta-analysis. The Lancet Global Health. 5 (12), 1221-1234 (2017).
  5. Robaei, D., Watson, S. Corneal blindness: A global problem. Clinical & Experimental Ophthalmology. 42 (3), 213-214 (2014).
  6. McGwin, G., Owsley, C. Incidence of emergency department-treated eye injury in the United States. Archives of Ophthalmology. 123 (5), 662-666 (2005).
  7. Ljubimov, A. V., Saghizadeh, M. Progress in corneal wound healing. Progress in Retinal and Eye Research. 49, 17-45 (2015).
  8. Wilson, S. L., Haj, A. J. E., Yang, Y. Control of scar tissue formation in the cornea: Strategies in clinical and corneal tissue engineering. Journal of Functional Biomaterials. 3 (3), 642(2012).
  9. Vaidyanathan, U., et al. Persistent corneal epithelial defects: A review article. Medical Hypothesis, Discovery and Innovation in Ophthalmology. 8 (3), 163-176 (2019).
  10. Netto, M., et al. Wound healing in the cornea: a review of refractive surgery complications and new prospects for therapy. Cornea. 24 (5), 509-522 (2005).
  11. Friedenwald, J. S., Buschke, W. Some factors concerned in the mitotic and wound-healing activities of the corneal epithelium. Transactions of the American Ophthalmological Society. 42, 371-383 (1944).
  12. Xu, K., Yu, F. -S. X. Impaired epithelial wound healing and EGFR signaling pathways in the corneas of diabetic rats. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3301-3308 (2011).
  13. Bai, J. Q., Qin, H. F., Zhao, S. H. Research on mouse model of grade II corneal alkali burn. International Journal of Ophthalmology. 9 (4), 487-490 (2016).
  14. Blanco-Mezquita, J. T., Hutcheon, A. E. K., Stepp, M. A., Zieske, J. D. αVβ6 integrin promotes corneal wound healing. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (11), 8505-8513 (2011).
  15. Blanco-Mezquita, J. T., Hutcheon, A. E. K., Zieske, J. D. Role of thrombospondin-1 in repair of penetrating corneal wounds. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 54 (9), 6262-6268 (2013).
  16. Stepp, M. A., et al. Wounding the cornea to learn how it heals. Experimental Eye Research. 121, 178-193 (2014).
  17. Hargrave, A., et al. Corneal dysfunction precedes the onset of hyperglycemia in a mouse model of diet-induced obesity. PLoS ONE. 15, 0238750(2020).
  18. Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (67), e2771(2012).
  19. Bodner, L., Dayan, D. Effect of parotid submandibular and sublingual saliva on wound healing in rats. Comparative Biochemistry and Physiology. Part A, Physiology. 100 (4), 887-890 (1991).
  20. Abbasian, B., Azizi, S., Esmaeili, A. Effects of rat's licking behavior on cutaneous wound healing. Iranian Journal of Basic Medical Sciences. 13 (1), 242-247 (2010).
  21. DeLisser, H. M., et al. Involvement of endothelial PECAM-1/CD31 in angiogenesis. The American Journal of Pathology. 151 (3), 671-677 (1997).
  22. Piali, L., et al. CD31/PECAM-1 is a ligand for alpha v beta 3 integrin involved in adhesion of leukocytes to endothelium. The Journal of Cell Biology. 130 (2), 451-460 (1995).
  23. Fleming, T. J., Fleming, M. L., Malek, T. R. Selective expression of Ly-6G on myeloid lineage cells in mouse bone marrow. RB6-8C5 mAb to granulocyte-differentiation antigen (Gr-1) detects members of the Ly-6 family. The Journal of Immunology. 151 (5), 2399-2408 (1993).
  24. Fleming, T. J., Malek, T. R. Multiple glycosylphosphatidylinositol-anchored Ly-6 molecules and transmembrane Ly-6E mediate inhibition of IL-2 production. The Journal of Immunology. 153 (5), 1955-1962 (1994).
  25. Phillips, D. R., Charo, I. F., Scarborough, R. M. GPIIb-IIIa: the responsive integrin. Cell. 65 (3), 359-362 (1991).
  26. Nieswandt, B., et al. Acute systemic reaction and lung alterations induced by an antiplatelet integrin gpIIb/IIIa antibody in mice. Blood. 94 (2), 684-693 (1999).
  27. Li, Z., Burns, A. R., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. γδ T cells are necessary for platelet and neutrophil accumulation in limbal vessels and efficient epithelial repair after corneal abrasion. American Journal of Pathology. 171 (3), 838-845 (2007).
  28. Liu, Q., Smith, C. W., Zhang, W., Burns, A. R., Li, Z. NK cells modulate the inflammatory response to corneal epithelial abrasion and thereby support wound healing. American Journal of Pathology. 181 (2), 452-462 (2012).
  29. Gao, Y., et al. NK cells are necessary for recovery of corneal CD11c+ dendritic cells after epithelial abrasion injury. Journal of Leukocyte Biology. 94 (2), 343-351 (2013).
  30. Xiao, C., et al. Acute tobacco smoke exposure exacerbates the inflammatory response to corneal wounds in mice via the sympathetic nervous system. Communications Biology. 2, 33(2019).
  31. Wang, H., et al. Epothilone B speeds corneal nerve regrowth and functional recovery through microtubule stabilization and increased nerve beading. Scientific Reports. 8 (1), 2647(2018).
  32. Li, Z., Burns, A. R., Smith, C. W. Lymphocyte function-associated Antigen-1-dependent inhibition of corneal wound healing. Cell Injury. 169, 1590-1600 (2006).
  33. Wu, M., et al. The neuroregenerative effects of topical decorin on the injured mouse cornea. Journal of Neuroinflammation. 17 (1), 1-14 (2020).
  34. Rodrigues, M., Kosaric, N., Bonham, C. A., Gurtner, G. C. Wound healing: A cellular perspective. Physiological Reviews. 99 (1), 665-706 (2019).
  35. Rennard, S. I. Inflammation and repair processes in chronic obstructive pulmonary disease. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 160 (5), Pt 2 12-16 (1999).
  36. Landén, N. X., Li, D., Ståhle, M. Transition from inflammation to proliferation: a critical step during wound healing. Cellular and Molecular Life Sciences. 73 (20), 3861-3885 (2016).
  37. Li, Z., Rumbaut, R. E., Burns, A. R., Smith, C. W. Platelet response to corneal abrasion is necessary for acute inflammation and efficient re-epithelialteation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 47, 4794-4802 (2006).
  38. Lam, F. W., Burns, A. R., Smith, C. W., Rumbaut, R. E. Platelets enhance neutrophil transendothelial migration via P-selectin glycoprotein ligand-1. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 300 (2), 468-475 (2011).
  39. La Cruz, A. D., et al. Platelet and erythrocyte extravasation across inflamed corneal venules depend on CD18, neutrophils, and mast cell degranulation. International Journal of Molecular Sciences. 22 (14), 7360(2021).
  40. Li, Z., Burns, A. R., Smith, C. W. Two waves of neutrophil emigration in response to corneal epithelial abrasion: Distinct adhesion molecule requirements. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 47 (5), 1947-1955 (2006).
  41. Li, Z., Burns, A. R., Han, L., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. IL-17 and VEGF Are Necessary for Efficient Corneal Nerve Regeneration. The American Journal of Pathology. 178 (3), 1106-1116 (2011).
  42. Xue, Y., et al. Modulation of circadian rhythms affects corneal epithelium renewal and repair in mice. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 58 (3), 1865-1874 (2017).
  43. Zhang, W., Magadi, S., Li, Z., Smith, C. W., Burns, A. R. IL-20 promotes epithelial healing of the injured mouse cornea. Experimental Eye Research. 154, 22-29 (2017).
  44. Li, Z., Burns, A. R., Miller, S. B., Smith, C. W. CCL20, γδ T cells, and IL-22 in corneal epithelial healing. FASEB Journal. 25 (8), 2659-2668 (2011).
  45. Li, Z., Burns, A. R., Han, L., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. IL-17 and VEGF are necessary for efficient corneal nerve regeneration. American Journal of Pathology. 178 (3), 1106-1116 (2011).
  46. Reins, R. Y., Hanlon, S. D., Magadi, S., McDermott, A. M. Effects of topically applied Vitamin D during corneal wound healing. PLoS ONE. 11 (4), 0152889(2016).
  47. Gagen, D., et al. ICAM-1 mediates surface contact between neutrophils and keratocytes following corneal epithelial abrasion in the mouse. Experimental Eye Research. 91 (5), 676-684 (2010).
  48. Li, Z., Rivera, C. A., Burns, A. R., Smith, C. W. Hindlimb unloading depresses corneal epithelial wound healing in mice. Journal of Applied Physiology. 97 (2), 641-647 (2004).
  49. Byeseda, S. E., et al. ICAM-1 is necessary for epithelial recruitment of γδ T cells and efficient corneal wound healing. American Journal of Pathology. 175 (2), 571-579 (2009).
  50. Li, Z., Burns, A. R., Rumbaut, R. E., Smith, C. W. γδ T cells are necessary for platelet and neutrophil accumulation in limbal vessels and efficient epithelial repair after corneal abrasion. American Journal of Pathology. 171 (3), 838-845 (2007).
  51. Petrescu, M. S., et al. Neutrophil interactions with keratocytes during corneal epithelial wound healing: A role for CD18 integrins. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (11), 5023-5029 (2007).
  52. Pal-Ghosh, S., Pajoohesh-Ganji, A., Tadvalkar, G., Stepp, M. A. Removal of the basement membrane enhances corneal wound healing. Experimental Eye Research. 93 (6), 927-936 (2011).
  53. Pal-Ghosh, S., et al. Cytokine deposition alters leukocyte morphology and initial recruitment of monocytes and γδT cells after corneal injury. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (4), 2757-2765 (2014).
  54. Pal-Ghosh, S., Tadvalkar, G., Jurjus, R. A., Zieske, J. D., Stepp, M. A. BALB/c and C57BL6 mouse strains vary in their ability to heal corneal epithelial debridement wounds. Experimental Eye Research. 87 (5), 478-486 (2008).
  55. Kato, T., Chang, J. H., Azar, D. T. Expression of type XVIII collagen during healing of corneal incisions and keratectomy wounds. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44 (1), 78-85 (2003).
  56. Kure, T., et al. Corneal neovascularization after excimer keratectomy wounds in matrilysin-deficient mice. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44 (1), 137-144 (2003).
  57. Lin, A., et al. Bacterial keratitis preferred practice pattern. Ophthalmology. 126 (1), 1-55 (2019).
  58. Cable, E. J., Onishi, K. G., Prendergast, B. J. Circadian rhythms accelerate wound healing in female Siberian hamsters. Physiology and Behavior. 171, 165-174 (2017).
  59. Lyons, A. B., Moy, L., Moy, R., Tung, R. Circadian rhythm and the skin: A review of the literature. Journal of Clinical and Aesthetic Dermatology. 12 (9), 42-45 (2019).
  60. Westman, J., Grinstein, S., Marques, P. E. Phagocytosis of Necrotic Debris at Sites of Injury and Inflammation. Frontiers in Immunology. 10, 3030(2020).
  61. Gaudry, M., et al. Intracellular pool of vascular endothelial growth factor in human neutrophils. Blood. 90 (10), 4153-4161 (1997).
  62. Pan, Z., et al. Vascular endothelial growth factor promotes anatomical and functional recovery of injured peripheral nerves in the avascular cornea. FASEB Journal. 7, 2756-2767 (2013).
  63. Di, G., et al. VEGF-B promotes recovery of corneal innervations and trophic functions in diabetic mice. Scientific Reports. 7 (1), 1-13 (2017).
  64. Thomas, M. R., Storey, R. F. The role of platelets in inflammation. Thrombosis and Haemostasis. 114 (3), 449-458 (2015).
  65. Margraf, A., Zarbock, A. Platelets in inflammation and resolution. The Journal of Immunology. 203 (9), 2357-2367 (2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

שקיפות קרניתמודל קרנית עכבריקרום תחתוןסגירת פצעתגובה דלקתיתצביעת פלואורסצאיןמיקרוסקופיה דיגיטליתניתוח תמונות
מודל שחיקה אפיתליאלית לחקר ריפוי פצעי הקרנית
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.