האנדותל הוא מבנה משולב דינמי הממלא תפקיד חשוב בתפקודים פיזיולוגיים רבים כגון אנגיוגנזה, המוסטאזיס, דלקת והומאוסטזיס. האנדותל גם ממלא תפקיד חשוב בפתופיזיולוגיות כגון טרשת עורקים, יתר לחץ דם וסוכרת. תאי אנדותל יוצרים את הרירית הפנימית של כלי הדם והלימפה ומפגינים הטרוגניות במבנה ובתפקוד. קבוצות שונות העריכו את הפונקציונליות של תאי אנדותל שמקורם בדם היקפי אנושי תוך התמקדות בתאי אב אנדותל שמקורם בתאי גזע המטופויטיים או בתאי אנדותל בוגרים (או תאים יוצרי מושבות אנדותל). תאים אלה מספקים משאב אוטולוגי לטיפולים ולמידול מחלות. תאים קסנוגניים עשויים לספק מקור חלופי לטיפולים בשל זמינותם וההומוגניות המושגת על ידי שימוש בבעלי חיים דומים גנטית שגודלו בתנאים דומים. לפיכך, הוצג פרוטוקול חזק לבידוד והרחבה של תאי אנדותל בעלי שגשוג דם גבוה מדם היקפי חזירי. תאים אלה יכולים לשמש ליישומים רבים כגון הנדסת רקמות לב וכלי דם, תרפיה תאית, מידול מחלות, בדיקת תרופות, לימוד ביולוגיה של תאי אנדותל, ותרביות מבחנה כדי לחקור תגובות דלקתיות וקרישה בהשתלת קסנו.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
תקציר
מבוא
האנדותל הוא מבנה מורכב ודינמי ביותר ומרכיב חיוני בדופן כלי הדם. הוא מצפה את פני השטח הפנימיים של כלי הדם כדי לספק ממשק פיזי בין מחזור הדם לבין הרקמות הסובבות אותו. מבנה הטרוגני זה ידוע לבצע פונקציות שונות כגון אנגיוגנזה, דלקת, vasoregulation, hemostasis 1,2,3,4. תאי אנדותל של וריד הטבור האנושי הם סוג תא שנחקר באופן נרחב כדי להעריך את הפונקציונליות של תאי אנדותל. עם זאת, השתנות האצווה הספציפית למטופל, פנוטיפ לא עקבי ויעילות פיצול מינימלית מצביעים על צורך לקבוע מקור תא שיכול לשפר את כל התכונות הללו5.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל המחקרים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדות המוסדיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) בהתאמה במכללה הרפואית של ויסקונסין ומאיו קליניק.
הערה: במחקר זה נעשה שימוש בחזירי בית יורקשייר/לנדרייס/דורוק (Sus domesticus), זכר ונקבה, 40-80 ק"ג, בני 3-6 חודשים.
1. איסוף דם היקפי חזירי
- הכינו חומרים.
- לדלל את תמיסת הפרין ל 100 U/mL במי מלח סטריליים.
- הוסף 3-4 מ"ל של תמיסת הפרין לכל אחד משני צינורות חרוטי 50 מ"ל ושני מזרקים 60 מ"ל.
- משוך תמיסת הפרין לא מדוללת (1,000 U/mL) לתוך צינור מאריך.
- חבר מחט 19 G לקצה אחד של צינור הארכה מלא הפרין ומזרק המכיל הפרין 60....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
המורפולוגיה של התאים בתרבית נצפתה מתחילת התרבית ועד שנצפו מושבות BOEC (איור 1). אוכלוסייה קטנה יותר של תאים דבקים החלה להיצמד לצלחות התרבית ולגדול, בעוד שתאים לא נצמדים הוסרו עם שינויים בינוניים בתרבית (איור 1B). מושבות הופיעו לראשונה ביום 6 כאוסף של תאים דמויי אנדותל המתרבים רדיאלית החוצה מנקודה מרכזית (איור 1D). ככל שהתרבית התקדמה, מושבות התאים נעשו צפופות יותר והציגו מורפולוגיה מרוצפת הדומה לתאי אנדותל בוגרים (
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
BOECs הם כלי רב עוצמה שניתן להשתמש בו בגישות מדעיות וטיפוליות שונות 7,8,16. BOECs שימשו לניתוח ביטוי גנים EC כדי להבהיר את גורמי המפתח האחראים להתפתחות מחלות כלי דם וסרטן 5,19,20,21. BOECs שימשו גם ביישומים טיפוליים כגון התחדשות כלי דם והעברת גנים22,23,24
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
המחברים מבקשים להכיר במימון מ-NIH/NHLBI R00 HL129068.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מחט 19 גרם | Covidien | 1188818112 | |
| 50 מ"ל צינורות חרוטיים | קורנינג | 352098 | |
| 6 בארות צלחת | BD Falcon | 353046 | |
| 60 מ"ל | אמוניום כלוריד Covidien | ||
| 0.8%) | Stemcell Technologies | 07850 | |
| תמיסה אנטיביוטית/אנטי-פטרייתית (100x) | Gibco | 15240-062 | |
| צנטריפוגה | תרמו מדעית | 75-253-839 | |
| מדיום תרבות EGM-2 | Lonza Walkersville | CC-3162 | |
| צינור הארכה | Hanna Pharmaceutical Supply Co. | 03382C6227 | |
| סרום בקר עוברי (FBS) | Atlas Biologicals | F-0500-A | |
| Ficoll-Paque 1077 | Cytiva | תמיסת שיפוע צפיפות | 17144003 |
| הזרקת נתרן הפרין (1,000 יחידות/מ"ל) | פייזר | 00069-0058-01 | |
| פיברונקטין פלזמה אנושית | Gibco | 33016-015 | |
| Ice | N/A | N/A | |
| תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS) | Gibco | 10010-023 | |
| סט פיפטות | Eppendorf | 2231300004 | |
| מים סטריליים | Gibco | 15230-162 | |
| פיפטה דקה | Celltreat Scientific | 229280 |
מקורות
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: II. Representative vascular beds. Circulation Research. 100 (2), 174-190 (2007).
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: I. Structure, function, and mechanisms....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
