הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

דור של הוק איסכמיה-רפרפוזיה מודל באמצעות שלושה ימים מתפתח אפרוח עובר

3.9K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63288

⸱

19 בפברואר 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Stem Cell and Restorative Neurology, Department of Biotechnology, Era’s Lucknow Medical College Hospital, Era University, 2Era University, 3Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Era University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מאמר זה מתאר איסכמיה-reperfusion (I/R) דוגמנות בעובר אפרוח 3 ימים באמצעות מחט עמוד השדרה מותאם אישית וו כדי להבין טוב יותר את התפתחות I / R וטיפול. דגם זה פשוט, מהיר וזול.

תקציר

הפרעות איסכמיה ורפרפוזיה (I/R), כגון אוטם שריר הלב, שבץ ומחלות כלי דם היקפיות, הן חלק מהגורמים המובילים למחלות ומוות. מודלים רבים במבחנה וב-in vivo זמינים כיום לחקר מנגנון ה-I/R במחלות או ברקמות פגומות. עם זאת, עד כה, לא דווח על מודל Ovo I/R, אשר יאפשר הבנה טובה יותר של מנגנוני I/R הקרנת סמים מהירה יותר. מאמר זה מתאר מידול I/R באמצעות וו מותאם אישית של מחט עמוד השדרה בעובר אפרוח בן 3 ימים כדי להבין מנגנוני פיתוח וטיפול במנת מ"ר. המודל שלנו יכול לשמש כדי לחקור אנומליות ברמות ה- DNA, הרנ"א והחלבון. שיטה זו פשוטה, מהירה וזולה. ניתן להשתמש במודל הנוכחי באופן עצמאי או בשילוב עם דגמי הפריה ויטרו קיימים ובדגמי I/R של vivo.

מבוא

פגיעה ברקמת איסכמיה-רפרפוזיה נקשרה למספר פתולוגיות, כולל התקפי לב, שבץ איסכמי, טראומה ומחלות כלי דם היקפיות1,2,3,4,5. זאת בעיקר בשל חוסר הבנה מקיפה של התקדמות המחלה והיעדר מודל מחקר יעיל. פגיעה איסכמית מתרחשת כאשר אספקת הדם לאזור מסוים של הרקמה מנותקת. כתוצאה מכך, רקמה איסכמית בסופו של דבר נמק, אם כי הקצב משתנה בהתאם לרקמה. לפיכך, שיקום אספקת הדם עשוי לעזור למתן את הנזק. עם זאת, נצפתה, במקרים מסוימים, כי רפרופוזיה גורמת יותר נזק לרקמות מאשר איסכמיה לבד עושה 6,7,8. לכן, הבנת המנגנונים המולקולריים והתאים של איסכמיה-רפרפוזיה נדרשת לפתח התערבות טיפולית יעילה. נכון לעכשיו, לא ידוע על טיפול יעיל לפציעות מס 30. פער זה הניע את יצירתם של מודלים ניסיוניים חדשים, החל מהפריה ויטרו ועד דגמי ויוו, כדי לטפל בבעיה הקיימת9,10,11,12,13.

עוברים אפרוח (Gallus gallus domesticus) נמצאים בשימוש נרחב במחקר בגלל קלות הגישה שלהם, מקובלות אתית, גודל גדול יחסית (בהשוואה לעוברים אחרים), עלות נמוכה, וצמיחה מהירה14. השתמשנו בעובר אפרוח בשעה 72 שעות של פיתוח כדי ליצור I/R ovo על ידי חסימת ושחרור העורק vitelline הנכון בסיוע מחט עמוד השדרה. קראנו לו מודל איסכמיה-רפרפוזיה הוק-I/R (איור 1). המודל המשמש במחקר זה מסוגל לדמות במדויק את כל התהליכים במורד הזרם, כולל מסלולים חמצוניים ודלקתיים, הקשורים לעתים קרובות לנזקי I/R15,16,17.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הוועדה הממסדית לאתיקה לבעלי חיים במכללה הרפואית ובבית החולים של Era's Lucknow פרסמה ויתור בכתב לפיו לא נדרש אישור רשמי לביצוע ניסויים אלה בהתאם לוועדה לצורך בקרה ופיקוח על ניסויים בבעלי חיים (CPCSEA). עם זאת, נהלי הפעלה סטנדרטיים בוצעו כדי למזער כל פוטנציאל למצוקה עוברית.

1. הכנת מאגר (טבלה 1)

  1. הכן את הפתרון של רינגר
    1. כדי להכין את הפתרון של רינגר, להמיס 0.72 גרם של NaCl (123 מ"מ מ"מ), 0.017 גרם של CaCl2 (1.53 מ"מ), 0.037 גרם של KCl (4.96 מ"מ) ב 70 מ"ל של H2O מזוקק סטרילי, עם נפח סופי של 100 מ"ל. כוונן את ה-pH ל-7.4. תן לו להתמוסס לחלוטין ו autoclave. לאחר מכן, לסנן דרך מסנן 0.22 מיקרומטר, aliquot לתוך כמויות חד פעמיות (כ 10 מ"ל) ולאחסן בטמפרטורת החדר.
  2. הכן תמיסת מלח רגילה (0.9% נתרן כלורי, NaCl).
    1. ב 70 מ"ל של H2O מזוקק סטרילי, להמיס 0.9 גרם של NaCl (154 mM). האיפור את עוצמת הקול ל- 100 מ"ל. כל נסיעה אוטומטית למשך 15 דקות ב-121 °C (70 °F). התאימו את ה-pH ל-7.4 עם 0.1 N HCl או 0.1 N NaOH במידת הצורך. הפוך 10 mL aliquots בצינור צנטריפוגה סטרילי 15 מ"ל ולאחסן בטמפרטורת החדר.
  3. הכן 70% אתנול (v/v).
    1. יש לערבב 70 מ"ל של אתנול טהור (Mol. wt. 46.07 גרם/ליטר) עד 30 מ"ל של H2O סטרילי. התכוננו לפי הצורך או אחסנו בטמפרטורת החדר. אין צורך בחיטוי.
  4. הכן 1x תמיסת מלח פוספט (1x PBS).
    1. הכן 100 מ"ל של 1x PBS על ידי הוספת 0.144 גרם של Na2HPO4·7H2O (5.37 מ"מ), 0.8 גרם של NaCl (136.8 מ"מ), 0.2 גרם של KCl (26.8 מ"מ), 0.2 גרם של KH2PO4 (14. 6 מ"מ) עד 70 מ"ל של מים מזוקקים. להמיס ולהשלים את הנפח ל 100 מ"ל ו autoclave במשך 15 דקות ב 121 °C (70 °F). הביאו את רמת ה-pH ל-7.4, הוסיפו כמה טיפות של 0.1 N HCl או 0.1 N NaOH, במידת הצורך. הפוך aliquots של 10 מ"ל בצינור צנטריפוגה סטרילי 15 מ"ל ולאחסן בטמפרטורת החדר.

2. יום 1

  1. מסדרים את כל הכלים הדרושים לעיקור ביצים (70% אתנול, מגבונים לניקוי, מתלה ביצים וסמן OHP).
  2. נקו את הביצים ל-0 ימים עם 70% אתנול באמצעות מגבונים מנייר טישו. השתמש רק ביצה 0 ימים, כמו ביצים מבוגרות לא יכול להוליד עובר.
  3. כתוב את התאריך הנוכחי על ביצים עם סמן OHP.
  4. מניחים את הביצים באינקובטור ביצים שנקבע לטמפרטורה של 36-37 מעלות צלזיוס ורמת לחות של 60%-65%. לדגור על הביצים במשך 24 השעות הבאות.

3. יום 2

  1. סדר את הציוד הדרוש לנסיגה של 5-6 מ"ל של אלבומין (מספריים חדים קצה, מזרק 5 מ"ל, מחט 18 G, משליך מזרק, וסרט הדבקה).
  2. לנגב את המספריים כירורגי עם 70% אתנול או לחטא באמצעות autoclave לאחר ניגוב אותם עם 70% אתנול.
  3. עכשיו לקחת את הביצה מן אינקובטור ביצה 37 °C לספירה עבור שכבות.
  4. מניחים את הביצה על מתלה ביצים נקי.
  5. חבר חתיכה קטנה של סרט הדבקה (גודל: כ 1 אינץ 'אורך x רוחב) לקצה הביצה.
  6. לעשות חור קטן בקצה קליפת הביצה באמצעות מספריים קצה מחודד חד. הכנס מזרק של 5 מ"ל בזווית משוערת של 75°.
    הערה: מזרק 5 מ"ל מגיע עם מחט 24 G x 1 (סטרילי), אבל זה טוב להחליף את 24 G x 1 מחט עם מחט 18 G x 1.5 (סטרילי). המחט 18 G x 1.5 היא 1.25 x 38 מ"מ רוחב. לכן, זה יקל על הסרת אלבומין.
  7. לאחר החדרת המחט לתוך שק החלמון, לאט לסגת 5-6 מ"ל של אלבומין.
    הערה: זה מספק לעובר מיטה שעליה הוא יכול לגדול. משיכת אלבומין מונעת ספיגת יתר של אלבומין בעת הקמת חלון. לבסוף, הסיכון של העובר להיפגע במהלך החלון הוא מקל על ידי ביטול 5-6 מ"ל של אלבומין.
  8. לאחר הסרת האלבום, לאחם מחדש את הפתח עם סרט הדבק ולהשאיר את הביצים לדגור ב 37 °C (48 °F).

4. יום 4

  1. הכן את הפתרון של הצלצול, 0.9% תמיסת מלח רגילה, ו- PBS 1x כמתואר בסעיף 1 של הפרוטוקול. לאחר מכן, תבודדו אוטומטית את שלושת הפתרונות. לאחר autoclaving, למקם את הפתרון המתאים בטמפרטורת החדר.
  2. מוציאים את הביצה מאינקובטור הביצים 37 מעלות צלזיוס וחותכים את הקליפה לצורה מעגלית. לפני חיתוך קליפת הביצה, לכסות את האזור כדי להיות חתוך עם סרט דבק.
    הערה: כיסוי אזור החלון בסרט דבק מונע שבירת קליפת הביצה למקומות לא רצויים. עם זאת, אם אתה פורץ למקום לא רצוי, לאטום את האזור עם סרט הדבק. כיסוי המקומות לחיתוך בנייר דבק מונע מחתיכות קליפה ליפול על שק החלמון.
  3. צור חור קטן בקליפת הביצה עם מספריים מחודדים בחדות במקום שבו החלון הרצוי ולהתחיל לחתוך פתח מעגלי. תהליך זה נקרא חלון.
    הערה: ודא כי החתך המעגלי גדול מספיק כדי לאפשר גישה קלה לעובר מכל כיוון. במידת הצורך, לשנות את תנוחת הביצה כדי להתאים את המיקום של העובר.
  4. לאחר מכן, באמצעות מיקרוסקופ כירורגי זום סטריאו, לאתר את העורק vitelline הנכון (RVA).
    הערה: עוברי עוף בדרך כלל עוברים פיתול בית החזה (יחד עם כיפוף צוואר הרחם, וכו ') כפי שהם מתפתחים, כך הצד השמאלי של הראש הוא נגד החלמון בשלב 72 שעות. באופן יותר ערמומי, כאשר עורקי הרטט יוצאים מהגוף, העובר אינו מעוות בהרבה, וחלק זה של הגוף שוכב בצד הגחון כלפי מטה לכיוון החלמון. לכן, בצפייה ישירה, זכות העובר היא מימין לחוקר.
  5. לאחר מיקום ה-RVA, צרו שני חורים קטנים בצד שמאל ובצד ימין של ה-RVA באמצעות מחט 26 G (איור 2).
  6. הנח את בדיקת הדמיית זרימת הדם דופלר מעל RVA. ודא כי בדיקת הדמיית זרימת הדם דופלר ממוקמת 5 ± 1 מ"מ מאתר איסכמיה ולקראת הקצה הדיסטלי של RVA. קח קריאת שטף במשך 2 דקות ו 30 s (או יותר אם תרצה). זו תהיה קריאת השלב הנורמוקסית.
  7. בינתיים, באמצעות צבת האף ומלקחיים עם שיניים, עיצבו ידנית את קצה מחט עמוד השדרה בצורת וו (איור 3). לעשות זאת על ידי כיפוף הקצה של מחט עמוד השדרה עבור כ 1 מ"מ. גודל גדול יותר יקשה על החדרה והסרה של מחט עמוד השדרה במהלך הליך ה- I/R.
  8. הכנס את מחט עמוד השדרה ישירות מתחת לעורק הרטט הימני באמצעות מיקרו-מניפולטור.
    הערה: הכנס את מחט עמוד השדרה בזהירות רבה כדי למנוע פגיעה ב- RVA או בעורקים סמוכים. הטכניקה האופטימלית היא להתאים את הוו המותאם אישית של מחט עמוד השדרה בדיוק מעל הצד הימני של חור ה- RVA, ולאחר מכן להכניס בהדרגה את הקצה המותאם אישית של מחט עמוד השדרה לתוך שק החלמון בסיוע מיקרו-מניפולטור בהנחיית מיקרוסקופ כירורגי זום סטריאו דרך החור הימני. ברגע שהקרס של מחט עמוד השדרה נמצא בשכבת החלמון, התאם בהדרגה את הוו מתחת ל- RVA כך שהקצה שלו ממוקם בדיוק מתחת לחור השמאלי. עכשיו זה הזמן להרים את מחט עמוד השדרה.
  9. עכשיו, בסיועו של micromanipulator, בהדרגה להרים את העורק עד שטף זרימת הדם דופלר מצביע על ירידה מינימלית של 80% בזרימת העורקים.
  10. לאחר ירידה של 80% או יותר בשטף דופלר מושגת, להשאיר את מחט עמוד השדרה הרים (מושך את העורק כלפי מעלה) במשך 5 דקות. זו תהיה תקופת איסכמיה ב- RVA.
    הערה: זה קריטי כדי לפקח על שטף דופלר במהלך איסכמיה. אם נמצאה כמות משמעותית של תנודות, סיים את הבדיקות.
  11. לאחר תקופת איסכמיה של 5 דקות, שחררו בהדרגה את העורק כדי לשחזר את רמות זרימת הדם הרגילות. ודא קריאת מד זרימת דם דופלר מציג ערכים דומים לאלה שהושגו במהלך נורמוקסיה. זו תהיה תקופת הרפרפוזיה ב-RVA (איור 4).
  12. לאחר הליך I/R, להחיל כמה טיפות (2-3) של 1x PBS לעובר ולצפות בו במשך 2-3 דקות.
    הערה: השימוש ב- 1x PBS מסייע במניעת התייבשות העובר.
  13. לבסוף, לאחסן מחדש את החלון עם סרט דבק ולהניח את הביצה בחזרה באינקובטור הביצים במשך 5 שעות ו 55 דקות.
  14. לאחר 5 שעות ו -55 דקות, לקחת את הביצה מן אינקובטור הביצה, למקם אותו על מדף הביצים, לפתוח מחדש את החלון, ופעל לפי פרוטוקול הטיפול במורד הזרם.

5. טיפולים

  1. לטיפול בעורקים עם תרופות, מפעילים או מעכבים, excise את RVA לאחר 1 שעה של תהליך I/R.
  2. עבור מחקרים במורד הזרם, הראשון להסיר את העובר מן קליפת הביצה על ידי הצבתו על צלחת פטרי סטרילי 90 מ"מ.
  3. לאחר העובר משתחרר לתוך צלחת פטרי, excise RVA באמצעות קשתית העין תחת הדרכתו של מיקרוסקופ כירורגי זום סטריאו.
  4. ודא כי ממד כריתה של RVA הוא עד 15 ± 1 מ"מ (distal מן תא המטען), 5 ± 1 מ"מ כל בצד שמאל וימין של העורק, ו 2 ± 1 מ"מ לכיוון תא המטען.
    הערה: ניתן להשתמש בסרגל כדי למדוד את האזור שיש לסלקו (אופציונלי).
  5. לאחר כריתת RVA, לשטוף אותו עם 1x PBS בצלחת פטרי סטרילית המכילה 1x PBS.
  6. עבור הטיפולים הרצויים, מניחים את העורק בצינור צנטריפוגה 1.5 מ"ל (מעוקר) מלא 500 μL של הפתרון של רינגר. מניחים את RVA בצינור הצנטריפוגה ומניחים אותו בחממה של 37 מעלות צלזיוס למשך 5 שעות ו -55 דקות.
    הערה: בהתאם לטיפולים, או להשתמש בתמיסה של רינגר ללא כל טיפול, או טיפול עם הנפח הרצוי וריכוז של תרופה, מפעיל, או מעכב.
  7. לאחר 5 שעות ו 55 דקות של דגירה, להוציא את RVA מן החממה במעבדה 37 °C, ולהמשיך עם הטיפולים הרצויים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

טכניקת הדמיית זרימת הדם דופלר שימשה להערכת האפקטיביות של המודל שלנו. בקיצור, השווינו את הנתונים מקבוצת הביקורת עם הנתונים מקבוצת RVA כדי לקבוע את הצלחת היצירה שלנו. איור 4A מתאר שטף אופייני הקשור לחית השליטה, ואילו איור 4B מתאר את התוצאות שהתקבלו מ-RVA. המספר 1-8 מייצג את האירועים השונים המשויכים לשלבי I/R. בקצרה, מספר 1-3 מתאים לשלב הנורמוקסיה, בעוד ירידה חדה בשטף בנקודות 3 ו -4 מייצגת את האירועים הקשורים לירידה בזרימת הדם ב- RVA. לאחר שהושגה ירידה של 80% ומעלה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מטרת מחקר איסכמיה-רפרפוזיה היא ליצור אסטרטגיות טיפוליות המונעות מוות של תאים ומקדמות התאוששות29,30. כדי להתגבר על האילוצים הנוכחיים במחקר I/R, עיצבנו מודל של עובר של הוק I/R כדי לייצר מודל I/R אמין ושחזורי. למיטב ידיעתנו, מודל ה- I/R הראשון שנוצר אי פעם בעובר אפרוח בן 3 ימים לניסויי I/R שגרתיים, מלבד לימוד אותות מתח (למשל, מתח חמצוני ודלקתי). בהתחשב ביתרונות הגודל והנגישות ביום 3 של development31, העובר האפרוח שימש בשלב התפתחותי של 72 שעות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין אינטרסים מתחרים.

תודות

אנחנו רוצים להביע את הכרת התודה שלנו להארי שנקר על התשומות הביקורתיות שלו במהלך צילום וידאו ועריכה, מר בקר חוסיין לקריינות, מר אסגהאר ריזווי לעריכת וידאו, מר מוחמד היידר לצילומי וידאו, מר מוחמד דני סידיקי לסיוע במהלך הניסויים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
(-80° ג) מקפיאHaier,סין-1.5
מ"ל צינור צנטריפוגהTARSONS, הודו500010X
100 מ"מ צלחת פטרי (סטרילית)Tarsons, הודו460050
18G מחט (18G× 1.5 (1.25 ופעמים; 38 מ"מ)רמסונס, הודו13990
1 מ"ל מזרקDISPOVAN-26G
מחט (26G& 1/2 (10.45x13 מ"מ)DISPO VAN, הודו30722D
37° חממת ביצים C עם אחוז לחות מתכוונןGentek, הודוGL-100
37° חממת מעבדה CSCIENCE TECH, הודוCB 101-14
3-מתילאדנין (3-MA)סיגמא אולדריץ', ארה"בM9281
3 מ"ל פיפטת מרעהTARSONS, הודו940050
50 מ"לTARSONS,הודו-מזרק
5 מ"לDISPO VAN, הודוIP53
70% אתנולMerck Millipore, ארצות הברית64-17-5
סרט דבק / סרט צ'לוזריחה,הודו-אמברה
1 פריימריםיישומיים ביוסיסטמס, פוסטר סיטי, ארה"בHs00387943_m1
טכנולוגיית איתות תאיIgG נגד עכברים7076S
Anti-Rabbit IgGJackson Immuno Research Laboratories, ארה"ב711-035-152
Atg7R& D Systems, ארה"בMAB6608
פריימרים Atg7Applied Biosystems, פוסטר סיטי, ארה"בHs00893766_m1
תיק חיטויTarsons, הודו550022
מכונת חיטויתוצרת מקומית, לאקנאו,
Proteintech, ארה"ב66665-1-IG
בטא אקטיןImmunoTag, ארה"בITT07018
סרום בקר אלבומיןHimedia, מומבאי, הודוTC194
סידן כלורידHimedia, מומבאי, הודוGRM534
CatalaseImmunoTag, ארה"בITT5155
מגבוני ניקויקימברלי-קלארק, הודו370080
Cleaved Caspase3ImmunoTag, ארה"בITT07022
די-נתרן מימן פוספט heptahydrateHimedia, מומבאי, הודוGRM39611
מד זרימת דם דופלרמכשיר Moors, בריטניהmoorVMS-LDF1
מתלה ביצים-
מתלה ביצים-
GAPDHImmunoTag, ארה"בM1000110
פריימרים GAPDHApplied Biosystems, פוסטר סיטי, ארה"ב
GlycineHimedia, מומבאי, הודוMB013
מגש כליותHOSPITO-LC3A
/Bטכנולוגיית איתות תאים, ארה"ב4108S
מעבדות מתנולRankem, מומבאי, הודוM0252
מיקרומניפולטורNarishige, יפןM-152
N-אצטיל-L-ציסטאין (NAC)סיגמא אולדריץ', ארה"בA7250
NaringeninSigma Aldrich, ארה"67604-48-2
NF-kβתרמו פישר סיינטיפיק, ארה"ב51-0500
NLRP3ImmunoTag, ארה"בITT07438
צבת אףתוצרת מקומית, לאקנאו,הודו-מלקחיים
עינייםסטולטינג, גרמניה52106-40
לקשתית העין, ג'איפור, הודומספריים מיקרו מספריים לגיל קשה בזווית 8 ס"מ / 3 1/8 אינץ'
OHP עט טושCamlin,
ImmunoTag, ארה"בITT08329
מספריים מחודדים בקצה חדStoelting, גרמניה52132-11
אשלגן כלוריHimedia, מומבאי, הודוMB043
אשלגן פוספט חד בסיסינטול מים Himedia, מומבאי, הודוMB050
Abcam, ארצות הבריתAb65621
SOD-1ImmunoTag, ארה"בITT4364
נתרן כלוריפישר סיינטיפיק, מומבאי, הודו27605
נתרן דודציל סולפטHimedia, מומבאי, הודוGRM886
מחט עמוד השדרה 25GA; 3.50 אינץ' (90.51 X 90 מ"מ)רמסון, הודוGS-2029
מיקרוסקופ כירורגי סטריאו זוםאולימפוס, יפןSZ2-STU3
מזרקיםBIOHAZARD882210
מלקחיים עם שינייםStoelting, גרמניה52102-30
Tris BaseG Biosciences, ארצות הבריתRC1217
Tris Hydrochloric Acid Himedia, מומבאי, הודוMB030
Tween 20G Biosciences, ארצות הבריתRC1227
ביצי עוף לגהורן לבן 0 יום--
(OMe)-FMKMP Biomedicals, LLC, ארה"בFK009
, ארה"ב הודו-Beclin-1 Hs02758991_g1ב מכשירים כירורגיים הודו-ORP-150 מעכב פרוטאז Z-Val-Ala-Asp

מקורות

  1. Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
  2. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Medicine. 17 (11), 1391-1401 (2011).
  3. Raza, S. S., et al. Neuroprotective effect of naringenin is mediated through suppression of NF-κB signaling pathway in experimental stroke. Neuroscience. 29 (230), 157-171 (2013).
  4. Raza, S. S., et al. Hesperidin ameliorates functional and histological outcome and reduces neuroinflammation in experimental stroke. Brain Research. 28 (1420), 93-105 (2011).
  5. Raza, S. S., et al. Silymarin protects neurons from oxidative stress associated damages in focal cerebral ischemia: a behavioral, biochemical and immunohistological study in Wistar rats. Journal of the Neurological Sciences. 15 (1-2), 45-54 (2011).
  6. Fan, L., Zhou, L. AG490 protects cerebral ischemia/reperfusion injury via inhibiting the JAK2/3 signaling pathway. Brain and Behavior. 11 (1), 01911(2021).
  7. Wu, M. Y., et al. Current Mechanistic Concepts in Ischemia and Reperfusion Injury. Cellular Physiology and Biochemistry. 46 (4), 1650-1667 (2018).
  8. Collard, C. D., Gelman, S. Pathophysiology, clinical manifestations, and prevention of ischemia-reperfusion injury. Anesthesiology. 94 (6), 1133-1138 (2001).
  9. Allen, D. D., et al. Cell lines as in vitro models for drug screening and toxicity studies. Drug Development and Industrial Pharmacy. 31 (8), 757-768 (2005).
  10. Schmeer, C., Gamez, A., Tausch, S., Witte, O. W., Isenmann, S. Statins modulate heat shock protein expression and enhance retinal ganglion cell survival after transient retinal ischemia/reperfusion in vivo. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 49 (11), 4971-4981 (2008).
  11. Huang, K. Y., et al. A systematic review and meta-analysis of acupuncture for improving learning and memory ability in animals. BMC Complementary and Alternative Medicine. 16 (1), 297(2016).
  12. Sommer, C. J. Ischemic stroke: Experimental models and reality. Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).
  13. Yang, W., Chen, J., Meng, Y., Chen, Z., Yang, J. Novel targets for treating ischemia-reperfusion injury in the liver. International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), 1302(2018).
  14. Seabra, R., Bhogal, N. In vivo research using early life stage models. In Vivo. 24 (4), 457-462 (2010).
  15. Liu, H., et al. Adiponectin peptide alleviates oxidative stress and NLRP3 inflammasome activation after cerebral ischemia-reperfusion injury by regulating AMPK/GSK-3beta. Experiments in Neurology. 329, 113302(2020).
  16. Aboutaleb, N., Jamali, H., Abolhasani, M., Pazoki Toroudi, H. Lavender oil (Lavandula angustifolia) attenuates renal ischemia/reperfusion injury in rats through suppression of inflammation, oxidative stress and apoptosis. Biomedicine and Pharmacotherapy. 110, 9-19 (2019).
  17. Wallert, M., et al. alpha-Tocopherol preserves cardiac function by reducing oxidative stress and inflammation in ischemia/reperfusion injury. Redox Biology. 26, 101292(2019).
  18. Ashafaq, M., et al. Catechin hydrate ameliorates redox imbalance and limits inflammatory response in focal cerebral ischemia. Neurochemical Research. 37 (8), 1747-1760 (2012).
  19. Gallagher, S., Chakavarti, D. Immunoblot analysis. Journal of Visualized Experiments. 20 (16), 759(2008).
  20. Abt, M. A., Grek, C. L., Ghatnekar, G. S., Yeh, E. S. Evaluation of lung metastasis in mouse mammary tumor models by quantitative real-time PCR. Journal of Visualized Experiments. (107), e53329(2016).
  21. Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments. Journal of Visualized Experiments. (62), e3923(2012).
  22. Wu, Y., et al. Cathelicidin aggravates myocardial ischemia/reperfusion injury via activating TLR4 signaling and P2X(7)R/NLRP3 inflammasome. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 139, 75(2020).
  23. Franke, M., et al. The NLRP3 inflammasome drives inflammation in ischemia/reperfusion injury after transient middle cerebral artery occlusion in mice. Brain Behaviour and Immunity. 92, 223(2021).
  24. Lawrence, T. The nuclear factor NF-kappaB pathway in inflammation. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (6), 001651(2009).
  25. Liu, H., et al. Pterostilbene attenuates astrocytic inflammation and neuronal oxidative injury after ischemia-reperfusion by inhibiting NF-kappaB phosphorylation. Frontiers in Immunology. 10, 2408(2009).
  26. Prakash, R., et al. Sivelestat-loaded nanostructured lipid carriers modulate oxidative and inflammatory stress in human dental pulp and mesenchymal stem cells subjected to oxygen-glucose deprivation. Materials Science and Engineering: C Materials for Biological Applications. 120, 111700(2021).
  27. Prakash, R., et al. Oxidative stress enhances autophagy in stem cells through Erk1/2 signaling pathway - implications for neurotransplantations. Stem Cell Reviews and Reports. , (2021).
  28. Ahmad, A., et al. Gelatin-coated polycaprolactone nanoparticle-mediated naringenin delivery rescue human mesenchymal stem cells from oxygen glucose deprivation-induced inflammatory stress. ACS Biomaterials Science and Engineering. 5 (2), 683-695 (2019).
  29. Guan, X., et al. The neuroprotective effects of carvacrol on ischemia/reperfusion-induced hippocampal neuronal impairment by ferroptosis mitigation. Life Science. 235, 116795(2019).
  30. Jin, Z., Guo, P., Li, X., Ke, J., Wang, Y., Wu, H. Neuroprotective effects of irisin against cerebral ischemia/ reperfusion injury via Notch signaling pathway. Biomedicine and Pharmacotherapy. 120, 109452(2019).
  31. Wainrach, S., Sotelo, J. R. Electron microscope study of the developing chick embryo heart. Zeitschrift fur Zellforschung und mikroskopische Anatomie. 55, 622-634 (1961).
  32. Joshi, V. C., Wilson, A. C., Wakil, S. J. Assay for the terminal enzyme of the stearoyl coenzyme A desaturase system using microsomes. Journal of Lipid Research. 18 (1), 32-36 (1977).
  33. Kain, K. H., et al. The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research. Development Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).
  34. Mann, R. A., Moore, K. L., Persaud, T. V. N. Limitations in the u~e of the early chick embryo 88 a teratological model. Teratology. 7, 22-23 (1973).
  35. Chen, T., Vunjak-Novakovic, G. In vitro models of ischemia-reperfusion injury. Regenerative English and Translation Medicine. 4 (3), 142-153 (2018).
  36. Ma, R., et al. Animal models of cerebral ischemia: A review. Biomedicine and Pharmacotherapy. 131, 110686(2020).
  37. Bromage, D. I., et al. Remote ischaemic conditioning reduces infarct size in animal in vivo models of ischaemia-reperfusion injury: a systematic review and meta-analysis. Cardiovascular Research. 113 (3), 288-297 (2017).
  38. Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. Cell biology of ischemia/reperfusion injury. International Review of Cell and Molecular Biology. 298, 229-317 (2012).
  39. Hogers, B., DeRuiter, M. C., Baasten, A. M., Gittenberger-de Groot , A. C., Poelmann, R. E. Intracardiac blood flow patterns related to the yolk sac circulation of the chick embryo. Circ Res. 76 (5), 871-877 (1995).
  40. Rezzola, S., et al. angiogenesis-inflammation cross talk in diabetic retinopathy: novel insights from the chick embryo chorioallantoic membrane/human vitreous platform. Frontiers in Immunology. 11, 581288(2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל עובר עוףמודל In Ovoמודל איסכמיה באמצעות ווזרימת דם בדופלרעורק ויטליני ימניWestern Blottingסממני אוטופגיהציטוקינים דלקתייםמסלולי אפופטוזיס
דור של הוק איסכמיה-רפרפוזיה מודל באמצעות שלושה ימים מתפתח אפרוח עובר
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.