הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

השבתה של פתוגנים באמצעות פוטוליזה של אור נראה של ריבופלבין-5′-פוספט

2.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63531

⸱

6 באפריל 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biotechnology, Ming Chuan University, 2Department of Tourism and Leisure, Hsing Wu University, 3Department of Science Education and Application, National Taichung University of Education, 4Department of Soil and Environmental Sciences, National Chung Hsing University

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מציגים פרוטוקול להשבתת חיידקים פתוגניים עם מיני חמצן תגובתי המיוצרים במהלך פוטוליזה של פלווין מונונוקלאוטיד (FMN) תחת קרינת אור כחול וסגול בעוצמה נמוכה. פוטוליזה FMN הוכחה כשיטה פשוטה ובטוחה לתהליכים סניטריים.

תקציר

ריבופלבין-5'-פוספט (או פלווין מונונוקלאוטיד; FMN) רגיש לאור הנראה. תרכובות שונות, כולל מיני חמצן תגובתי (ROS), יכולות להיווצר מפוטוליזה של FMN בעת הקרנה עם אור נראה. ה-ROS שנוצר מפוטוליזה של FMN מזיק למיקרואורגניזמים, כולל חיידקים פתוגניים כגון סטפילוקוקוס אאורוס (S. aureus). מאמר זה מציג פרוטוקול להשבתת S. aureus, כדוגמה, באמצעות תגובות פוטוכימיות המערבות FMN תחת קרינת אור נראה. האניון הרדיקלי סופראוקסיד (באנגלית: Superoxide radical anion) שנוצר במהלך פוטוליזה של FMN מוערך באמצעות הפחתת טראזוליום כחול ניטרו (figure-abstract-1NBT). הכדאיות המיקרוביאלית של S. aureus המיוחסת למינים תגובתיים figure-abstract-2 שימשה לקביעת יעילות התהליך. קצב ההשבתה של החיידקים פרופורציונלי לריכוז ה-FMN. אור סגול יעיל יותר בהשבתת S. aureus מאשר קרינת אור כחול, בעוד שהאור האדום או הירוק אינו מניע פוטוליזה של FMN. המאמר הנוכחי מדגים פוטוליזה FMN כשיטה פשוטה ובטוחה לתהליכים סניטריים.

מבוא

ריבופלבין-5′-פוספט (FMN) נוצר על ידי פוספורילציה במיקום 5′-ריבופלבין של שרשרת הצד של הריביטיל ונדרש על ידי כל חלבוני הפלבופרוטאין לתהליכים תאיים רבים כדי לייצר אנרגיה. זה גם משחק את התפקיד של ויטמין עבור כמה פונקציות בגוף האדם1. FMN מסיס בערך פי 200 במים מאשר ריבופלבין2.

ההשבתה הפוטודינמית האנטי-בקטריאלית (aPDI) של חיידקים היא דרך יעילה לשלוט בעמידות לחיידקים 3,4 מכיוון שהיא אינה תלויה במצב עמידות החיידקים. מבחינה קלינית, aPDI משמש לטיפול בזיהומים ברקמות רכות על מנת להפחית זיהום של עור nosocomial עקב חיידקים עמידים מרובים 5,6,7,8,9. aPDI גם מייצר מוות תאי על ידי יצירת מיני חמצן תגובתי (ROS). ROS, כגון רדיקלים סופראוקסיד (באנגלית: ROS), כגון רדיקלים סופראוקסיד, חמצן סינגלט, רדיקלים הידרוקסיליים (figure-introduction-1•OH) ורדיקלים פרוקסיליים, הם רדיקלים חופשיים או מולקולות המכילות חמצן תגובתי 10,11,12 והן בדרך כלל תגובתיות 13. בדומה לנזק לדנ"א שנגרם על ידי ROS, חמצון ממברנה והרס של תאי אנדותל הם גם תגובות ביוכימיות שליליות המיוחסות ל- ROS בתאים12.

השימוש ב- aPDI עבור חיידקים פתוגניים כרוך במקור אור נראה או UV כדי להשבית מיקרואורגניזמים בנוכחות תרכובות כימיות, כגון מתילתיוניניום כלוריד 14, PEI-c e6 מצומד15, פורפירין16, טיטניום דו-חמצני 17, טולוידין כחול O 18, וננו-חלקיקים של תחמוצת אבץ 19. כחול טולוידין O ומתילן כחול הם צבעי פנותיאזיניום ולכחול מתילן יש תכונות רעילות. ננו-חלקיקים של תחמוצת אבץ וקרינת UV קשורים להשפעות בריאותיות וסביבתיות שליליות. ככזה, הניצול של פוטו-סנסיטייזר אמין, מאובטח ופשוט באמצעות פוטוליזה תחת הקרנה נראית לעין ראוי למחקר נוסף.

המיקרונוטריאנט, ריבופלבין או FMN, אינו רעיל ואכן משמש לייצור מזון או להאכלה20. גם FMN וגם ריבופלבין רגישים מאוד לקרינת אור2. תחת UV 1,2,21,22,23 וקרינת אור כחול 10,24, שתי תרכובות אלה משיגות מצב נרגש. הריבופלבין המופעל או FMN המיוצר על ידי פוטוליזה מקודם למצב השלישייה שלו ו- ROS נוצרים בו זמנית 2,25. Kumar et al. דיווחו כי ריבופלבין המופעל על ידי אור UV באופן סלקטיבי גורם לפגיעה מוגברת בגואנין מואטי של דנ"א במיקרואורגניזמים פתוגניים26. תחת הקרנה על ידי אור UV, ריבופלבין המופעל פוטודינמית הוכח כמקדם את הדור של 8-OH-dG, שהוא סמן ביולוגי לעקה חמצונית, בדנ"אדו-גדילי 27. הוא דיווח כי S. aureus ו E. coli מושבתים על ידי ROS במהלך riboflavin או FMN photolysis 10,24,28. מחקר קודם של המחברים הראה כי התגובות הפוטוליטיות המערבות ריבופלבין ו- FMN מפחיתות את סגול הגביש, צבע טריארילמתאן וסוכן אנטיבקטריאלי שמייצר figure-introduction-2, ומבטלות את רוב היכולת האנטי מיקרוביאלית של קריסטל סגול28. כאשר פלווין אדנין דינוקלאוטיד או FMN מוקרן על ידי אור כחול, ROS וכתוצאה מכך לייצר אפופטוזיס בתאי HeLa עבור הרעלתם במבחנה29. באמצעות טיפול פוטוכימי בנוכחות ריבופלבין, Cui et al. לימפוציטים מומתים על ידי עיכוב התפשטותם וייצור ציטוקינים30.

הפוטוליזה של ריבופלבין משמשת להשבתה של פתוגן הדם על ידי UV 10,24, אך מרכיבי הדם יכולים להיפגע תחת קרינת אור UV30. כמו כן, דווח כי טסיות שנחשפו ל- UV משפרות בהדרגה את הביצועים של סמני ההפעלה P-selectin ו- LIMP-CD63 על הממברנות שלהם. יש לחקור את הציטוטוקסיות של UV והקרנה בעוצמה גבוהה ופוטו-סנסיטייזר שאינו מסובך ובטוח במהלך פוטו-ריאקציה של FMN המערבת אור נראה יהיה שימושי מאוד.

אור באורכי גל קצרים יותר הוא בעל אנרגיה רבה יותר והוא נוטה הרבה יותר לגרום נזק חמור לתאים. עם זאת, בנוכחות פוטוסנסיטייזר מתאים, הקרנה עם אור סגול בעוצמה נמוכה יכולה לעכב מיקרואורגניזמים פתוגניים. לפיכך, חשוב לחקור את הרגישות לאור הפוטו-סנסיטיזציה ואת יצירתה על figure-introduction-3 ידי FMN כאשר היא מוקרנת באור סגול, על מנת לקבוע את המסלול שבו ROS מפוטוליזה של FMN מגבירה את ההשבתה של חיידקים.

בקרה אנטי-מיקרוביאלית היא בעיה נפוצה, והתפתחות של אנטיביוטיקות חדשות נמשכת לעתים קרובות עשרות שנים. לאחר הקרנה באור סגול, פוטו-אינאקטיבציה המתווכת על ידי FMN יכולה להשמיד חיידקים פתוגניים סביבתיים. מחקר זה מציג פרוטוקול אנטי-מיקרוביאלי יעיל במבחנה המשתמש באור סגול להנעת פוטוליזה של FMN ובכך יוצר figure-introduction-4 עבור aPDI. הכדאיות המיקרוביאלית של S. aureus משמשת לקביעת ההיתכנות של aPDI המושרה על ידי FMN.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הגדרת מערכת פוטוליזה

  1. הרכיבו שש דיודות פולטות אור (LED) (DC 12 V) על החלק הפנימי של פלסטיק אטומה (8 ס"מ x 7 ס"מ) כפי שמוצג באיור 1 כדי ליצור מערכת פוטוליזה31.
  2. הוסיפו מגיבים (ראו בהמשך) למבחנות הזכוכית (בקוטר 13 מ"מ ובגובה 100 מ"מ) והדקו את הצינורות בחלק העליון של הכוס, כפי שמוצג באיור 1. מקם את מערך הניסוי בחדר עם טמפרטורה קבועה של 25 ± 3 מעלות צלזיוס.
  3. נטר ורשום את הטמפרטורה של יחידות הבדיקה לאורך התגובות הפוטוליטיות על ידי מדחום אינפרא אדום.
    הערה: איור 2 מציג את ספקטרום הפליטה עבור אורות כחולים, ירוקים, אדומים וסגולים, כפי שתועד באמצעות ספקטרומטר אופטי מכויל UV-Vis. אורכי הגל המתאימים למקסימום הספיגה עבור נורות LED כחולות, ירוקות, אדומות וסגולות ששימשו במחקר הם 465, 529, 632 ו-405 ננומטר, בהתאמה. שבבי ה- LED יכולים לחמם את המנגנון במהלך ניסויי הקרנה. כל מערכת הפוטו-ריאקציה בכל ניסוי הונחה, אם כן, בחדר שבו הטמפרטורה נשמרה קבועה ב 25 ± 3 מעלות צלזיוס.

2. ההשפעה של אורך גל האור על הפוטוליזה של FMN (איור 3)

  1. הכן תמיסת FMN של 0.1 mM בחיץ אשלגן פוספט (PB) של 100 mM (pH 7.8). חשוף דגימות FMN (3 מ"ל כל אחת) לאור כחול, ירוק, אדום או סגול בעוצמה של 10 ואט/מ"רלמשך 5 דקות. שמור 3 מ"ל של תמיסת FMN בחושך כבקרה.
  2. תעד את הספיגה של דגימות FMN מוקרנות בטווח של 250-750 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר UV/נראה.

3. שיטת הפחתת הטרזוליום הכחול של ניטרו (NBT) לזיהוי figure-protocol-1 (איור 4).

הערה: שיטת הפחתת ה- NBT המשמשת כאן שונתה מעט מהבדיקה עבור תגובת פוטו-רחיפה של ריבופלבין. שיטת הפחתת NBT משמשת להערכת רמת figure-protocol-2 הפוטוליזה של FMN. ה-FMN הנרגש מבחינה פוטוכימית מצטמצם תחילה על-ידי L-מתיונין לסמיקינון, אשר לאחר מכן תורם אלקטרון לחמצן ומוליד 31figure-protocol-3. כפי שנוצר figure-protocol-4 מקטין NBT כדי formazan, אשר יש ספיגה אופיינית ב 560 ננומטר32.

  1. יש להוסיף 109.3 מ"ג של L-מתיונין ל-73.3 מ"ל של PB (100 מ"מ; pH 7.8). מערבלת את התמיסה להמסת L-מתיונין.
  2. לאחר שה-L-מתיונין מומס במלואו, יש להוסיף 10 מ"ג של אבקת NBT ו-1.53 מ"ל של 0.117 mM FMN לתמיסה. עבור כל 1 מ"ל של תמיסת התגובה (כלומר, תערובת של FMN, L-מתיונין ו-NBT), הריכוזים הסופיים של FMN, מתיונין ו-NBT הם 2.4 x 10-6 M, 1.0 x 10-2 M ו-1.6 x 10-4 M, בהתאמה.
  3. חשוף את תמיסת התגובה (1 מ"ל) לקרינת אור LED כחול או סגול בהספק של 10 ואט/מ"רלמשך 1-5 דקות.
  4. לזהות את figure-protocol-5 המין (מן הספיגה ב 560 ננומטר) המיוצר על ידי התגובה הפוטוכימית, אשר מפחית NBT ומייצר formazan.

4. הכדאיות של S. aureus לאחר פוטוליזה של FMN (איור 5)

  1. להעביר מושבה של S. aureus(BCRC 10451) מצלחת מתורבתת לתוך 10 מ"ל של מרק Lysogeny נלקח במבחנה 15 מ"ל בורג מכסה. תרבית בשייקר בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 16 שעות.
  2. העבר 0.5 מ"ל מהתרבית לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל. הוסף מים מעוקרים לצינור הצנטריפוגה כדי לדלל את התרבית לצפיפות אופטית של 0.5 ב-600 ננומטר (OD600) (~6 x 107 CFU/mL).
  3. מעבירים 0.5 מ"ל מהתרבית לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל, צנטריפוגה ב-14,000 x גרם למשך 10 דקות ומעבירים את הסופר-נטנט כדי לקבל כדור תא.
  4. הוסף 1 מ"ל של תמיסה חוצצת FMN (30, 60 ו-120 μM FMN ב-PB) לכדורי התא שהתקבלו כמו בשלב 4.3, ולמערבולת. לבקרה מוקרנת, יש להוסיף 1 מ"ל של PB בלבד.
  5. העבירו 1 מ"ל כל אחד מתמיסות תאי חיידקים בנות קיימא המכילות 30 μM FMN ו-PB בלבד לתוך צינורות זכוכית, והקרינו אותם באור סגול ב-10 W/m 2 למשך 30 דקות.
  6. מעבירים 1 מ"ל כל אחד מתמיסות תאי חיידקים בנות קיימא המכילות 30, 60 ו-120 מיקרומטר FMN ו-PB בלבד לתוך צינורות זכוכית ומקרינים אותם באור כחול ב-20 W/m2 למשך 120 דקות. הגדר צינור זכוכית נוסף עם 1 מ"ל של תמיסת תאי חיידקים בת קיימא המכילה 120 μM FMN והקרן אותו באור כחול ב 20 W / m2 במשך 60 דקות.
  7. הגדר מבחנות כמתואר בשלבים 4.5 ו-4.6 וכסה אותן ביריעות אלומיניום עבות. צינורות אלה משמשים כבקרות כהות.
  8. שמור את תא ההקרנה (כמו גם את הפקדים הכהים) בחדר קר ב 9 ± 1 מעלות צלזיוס במהלך תקופת הקרנה 30-120 דקות.
    הערה: לא ניתן להתעלם מחום המשתחרר על ידי נורות LED מכיוון ששבבי ה-LED המונחים בתוך הכוס יכולים לחמם את מערכת הפוטו-ריאקציה במהלך ניסויי הקרנה. הניסויים נערכו, אם כן, בחדר קר שנשמר בטמפרטורה של 9 ± 1 מעלות צלזיוס.
  9. לאחר ההקרנה, העבר 0.2 מ"ל מכל אחת מתמיסות התגובה לצלחת לוריא אגר (LA). מורחים את החיידקים על הצלחת על ידי מוט זכוכית בצורת L ודוגרים למשך הלילה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
  10. חשב את ספירת הצלחות הקיימות ואת שיעורי ההשבתה של S. aureus לאחר צמיחה בן לילה.
    הערה: שיעור ההשבתה של S. aureus מחושב כהפחתה באחוזים, השווה ל-[1 -I / D] ×100%, כאשר I ו - D מציינים, בהתאמה, את מספר ה- CFUs בדגימה המוקרנת ובבקרה הכהה. ההפחתה באחוזים מוגדרת כערך שלילי של שיעור ההשבתה.

5. זיהוי של figure-protocol-6S. aureus (איור 6) 

  1. הכן את דגימות S. aureus כמתואר בשלב 4.
  2. לדלל את צפיפות החיידקים של הדגימות במים מעוקרים לצפיפות אופטית של 0.5 ב-600 ננומטר (OD600, ~6 x 106 CFU/mL). העבר 0.5 מ"ל מהתרבית לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל. צנטריפוגה ב 14,000 x גרם במשך 10 דקות ו decant את supernatant כדי לקבל גלולה תא.
  3. הוסיפו 0.1093 גרם של L-מתיונין, 0.1 גרם של NBT ו-25 מ"ל של FMN (400, 240 או 120 מיקרומטר) ל-75 מ"ל של PB. עבור כל 1 מ"ל של המגיב המיושם, הריכוזים הסופיים של FMN, מתיונין ו- NBT הם 100 (60 או 30) x 10-6 M, 7.3 x 10-3 M, ו- 1.2 x 10-3 M, בהתאמה.
  4. הוסף 1 מ"ל מכל תמיסה מגיבה (כלומר, עם ריכוזי FMN משתנים) לכדורי התא המתקבלים כמו בשלב 5.2. להקרין את התמיסות על ידי אור סגול ב-10 W/m2 למשך 10 דקות.
  5. צנטריפוגה את התערובת ב 14,000 x גרם במשך 10 דקות ואת decant את supernatant. יש להשהות את הכדור ב-1 מ"ל של דימתיל סולפוקסיד (DMSO) כדי למצות את ה-NBT המופחת. זהה את המינים המיוצרים figure-protocol-7 מהספיגה במהירות של 560 ננומטר.

6. ניתוח סטטיסטי

  1. להביע נתונים כממוצע ± סטיית תקן (SD) של שלוש בדיקות בלתי תלויות.
  2. החל מבחן t הומוסקדאסטי בן שתי דגימות כדי להעריך אם שתי מדידות שונות. ערכי p < 0.05 נחשבים מובהקים סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השפעת אורך גל האור על FMN
ספקטרום הספיגה של 0.1 mM FMN המוקרן באמצעות נוריות LED כחולות, ירוקות, אדומות וסגולות מוצג באיור 3. ישנן שתי פסגות עבור FMN (372 ננומטר ו-444 ננומטר) עבור הבקרה החשוכה. לאור ירוק ואדום אין השפעה מכיוון ששינויים בספקטרום אינם משמעותיים. מצד שני, הקליטה המתאימה של FMN ב-444 ננומטר מופחתת בכ-19% ו-34%, בהתאמה, לאחר הקרנת אור כחול וסגול ב-10 W/m2 למשך 5 דקות, מה שמרמז על כך שהקרנה עם אור כחול/סגול מגבירה את הפוטוליזה של FMN.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פוטוסנסיטייזר מגביר את התגובה הפוטוכימית של תרכובות כימיות כדי ליצור ROS. מיקרואורגניזמים פתוגניים יכולים להיות מושתקים על ידי הקרנת אור בנוכחות פוטוסנסיטייזרים. מחקר זה קובע את ה- aPDI של S. aureus עקב ROS שנוצר על ידי הקרנת אור סגול של פוטוסנסיטייזר אקסוגני, FMN.

כפי שניתן לראות באיור 3, עבור FMN, הספיגה ב-444 ננומטר מופחתת באופן משמעותי לאחר 5 דקות של הקרנה באמצעות אור סגול או כחול ואין שינוי משמעותי בבליעת ה-FMN תחת הקרנה עם אור ירוק או אדום. הפחתת NB...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים.

תודות

המחברים מודים לד"ר טאק-ווה וונג ולמר זונג-ג'ה הסייה על תמיכתם בניסויים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נורות LED כחולות, ירוקות ואדומותVita LED Technologies Co., טיינאן, טייוואןDC 12 V 5050
דימתיל סולפוקסידסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורימדחום
Raytek Co. סנטה קרוז, קליפורניהMT4
LB מרקDifco Co., NJ
L-MethionineSigma-Aldrich, סנט לואיס, MO1.05707
NBTBio Basic, Inc. מרקהם, אונטריו, קנדה
ספק כוחסין טק ושות', טאיפיי סיטי החדשה, טייוואןYP30-3-2
ריבופלבין 5&פריים;-פוספטסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, MOR7774
RNaseניו אינגלנד BioLabs, Inc. איפסוויץ', MA
מד כוח סולאריTenmars Electronics Co., טאיפיי, טייוואןTM-207
Staphylococcus aureus subsp. aureus Bioresourceאיסוף ומחקר מרכז (BCRC), שינג'ו, טייוואן10451
ספקטרומטר אופטי UV-Visאופטיקה אוקיינוס, דנידין, פלורידהUSB4000
UV-Visהיטאצ'י היי-טק מדע קורפוריישן, טוקיו, יפןU-2900
סגול LEDLong-hui אלקטרונית ושות', בע"מ, דונגגוואן, סין
אינפרא אדום 190186 ספקטרופוטומטר

מקורות

  1. Jian, H. L., Cheng, C. W., Chen, L. Y., Liang, J. Y. The photochemistry of riboflavin. MC-Transaction on Biotechnology. 3, 1-11 (2011).
  2. Lin, Y., Eitenmiller, R. R., Landen, W. O. Riboflavin. Vitamin analysis for the health and food sciences. , CRC Press. 329-360 (2008).
  3. Xie, L. J., Wang, R. L., Wang, D., Liu, L., Cheng, L. Visible-light-mediated oxidative demethylation of N(6)-methyl adenines. Chemical Communications. 53 (77), 10734-10737 (2017).
  4. Tim, M. Strategies to optimize photosensitizers for photodynamic inactivation of bacteria. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 150, 2-10 (2015).
  5. Maisch, T., et al. Photodynamic inactivation of multi-resistant bacteria (PIB) - a new approach to treat superficial infections in the 21st century. Journal of the German Society of Dermatology. 9 (5), 360-366 (2011).
  6. Hamblin, M. R. Antimicrobial photodynamic inactivation: a bright new technique to kill resistant microbes. Current Opinion in Microbiology. 33, 67-73 (2016).
  7. Del Rosso, J. Q. Oral Doxycycline in the management of acne vulgaris: Current perspectives on clinical use and recent findings with a new double-scored small tablet formulation. The Journal of Clinical and Aesthetic Dermatology. 8 (5), 19-26 (2015).
  8. Wong, T. W., et al. Photodynamic inactivation of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by indocyanine green and near infrared light. Dematologica Sinica. 36 (1), 8-15 (2018).
  9. Yuann, J. M. P., et al. Effects of free radicals from doxycycline hyclate and minocycline hydrochloride under blue light irradiation on the deactivation of Staphylococcus aureus, including a methicillin-resistant strain. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 226, 112370(2022).
  10. Liang, J. Y., Cheng, C. W., Yu, C. H., Chen, L. Y. Investigations of blue light-induced reactive oxygen species from flavin mononucleotide on inactivation of E. coli. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 143, 82-88 (2015).
  11. Yang, M. J., et al. Effects of blue-light-induced free radical formation from catechin hydrate on the inactivation of Acinetobacter baumannii, Including a carbapenem-resistant strain. Molecules. 23 (7), 1631(2018).
  12. Yuann, J. M. P., et al. A study of catechin photostability using photolytic processing. Processes. 9 (2), 293(2021).
  13. Yuann, J. M. P., Wang, J. S., Jian, H. L., Lin, C. C., Liang, J. Y. Effects of Clinacanthus nutans (Burm. f) Lindau leaf extracts on protection of plasmid DNA from riboflavin photoreaction. MC-Transaction on Biotechnology. 4 (1), 45-59 (2012).
  14. Rineh, A., et al. Attaching NorA efflux pump inhibitors to methylene blue enhances antimicrobial photodynamic inactivation of Escherichia coli and Acinetobacter baumannii in vitro and in vivo. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 28 (16), 2736-2740 (2018).
  15. Dai, T., et al. Photodynamic therapy for Acinetobacter baumannii burn infections in mice. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3929-3934 (2009).
  16. Nitzan, Y., Ashkenazi, H. Photoinactivation of Acinetobacter baumannii and Escherichia coli B by a cationic hydrophilic porphyrin at various light wavelengths. Current Microbiology. 42 (6), 408-414 (2001).
  17. Tseng, C. C., et al. Altered susceptibility to the bactericidal effect of photocatalytic oxidation by TiO2 is related to colistin resistance development in Acinetobacter baumannii. Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (19), 8549-8561 (2016).
  18. Boluki, E., et al. Antimicrobial activity of photodynamic therapy in combination with colistin against a pan-drug resistant Acinetobacter baumannii isolated from burn patient. Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 18, 1-5 (2017).
  19. Yang, M. Y., et al. Blue light irradiation triggers the antimicrobial potential of ZnO nanoparticles on drug-resistant Acinetobacter baumannii. Journal of Photochemistry and Photobiology B, Biology. 180, 235-242 (2018).
  20. Code of Federal Regulations. , Available from: https://www.gpo.gov/fdsys/pkg/CFR-2009-title21-vol6/pdf/CFR-2009-title21-vol6-sec582-5695.pdf (2022).
  21. Lu, C. Y., et al. Generation and photosensitization properties of the oxidized radical of riboflavin: a laser flash photolysis study. Journal of Photochemistry and Photobiology B, Biology. 52 (1-3), 111-116 (1999).
  22. Sato, K., et al. The primary cytotoxicity in ultraviolet-a-irradiated riboflavin solution is derived from hydrogen peroxide. The Journal of Investigative Dermatology. 105 (4), 608-612 (1995).
  23. Tripathi, A. K., et al. Attenuated neuroprotective effect of riboflavin under UV-B irradiation via miR-203/c-Jun signaling pathway in vivo and in vitro. Journal of Biomedical Science. 21 (1), 39(2014).
  24. Liang, J. Y., et al. Blue light induced free radicals from riboflavin on E. coli DNA damage. Journal of Photochemistry and Photobiology B, Biology. 119, 60-64 (2013).
  25. Ottaway, P. B. The Technology of Vitamins in Food. , Chapman and Hall. London. Ch. 5 233-244 (1993).
  26. Kumar, V., et al. Riboflavin and UV-light based pathogen reduction: extent and consequence of DNA damage at the molecular level. Photochemistry and Photobiology. 80 (1), 15-21 (2004).
  27. Ito, K., Inoue, S., Yamamoto, K., Kawanishi, S. 8-Hydroxydeoxyguanosine formation at the 5'site of 5'-GG-3'sequences in double-stranded DNA by UV radiation with riboflavin. Journal of Biological Chemistry. 268 (18), 13221-13227 (1993).
  28. Liang, J. Y., Yuann, J. M. P., Hsie, Z. J., Huang, S. T., Chen, C. C. Blue light induced free radicals from riboflavin in degradation of crystal violet by microbial viability evaluation. Journal of Photochemistry and Photobiology B, Biology. 174, 355-363 (2017).
  29. Yang, M. Y., Chang, C. J., Chen, L. Y. Blue light induced reactive oxygen species from flavin mononucleotide and flavin adenine dinucleotide on lethality of HeLa cells. Journal of Photochemistry and Photobiology B, Biology. 173, 325-332 (2017).
  30. Cui, Z., Huang, Y., Mo, Q., Wang, X., Qian, K. Inactivation of lymphocytes in blood products using riboflavin photochemical treatment with visible light. Photochemistry and Photobiology. 84 (5), 1195-1200 (2008).
  31. Wong, T. W., Cheng, C. W., Hsieh, Z. J., Liang, J. Y. Effects of blue or violet light on the inactivation of Staphylococcus aureus by riboflavin-5′-phosphate photolysis. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 173, 672-680 (2017).
  32. Russell, L. F., Vanderslice, J. T. Comprehensive review of vitamin B2 analytical methodology. Journal of Micronutrient Analysis. 8, 257-310 (1990).
  33. Cheng, C. W., Chen, L. Y., Chou, C. W., Liang, J. Y. Investigations of riboflavin photolysis via coloured light in the nitro blue tetrazolium assay for superoxide dismutase activity. Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. 148, 262-267 (2015).
  34. Huang, S. T., et al. Effects of 462 nm light-emitting diode on the inactivation of Escherichia coli and a multidrug-resistant by tetracycline photoreaction. Journal of Clinical Medicine. 7 (9), 278(2018).
  35. Barua, M. G., Escalada, J. P., Bregliani, M., Pajares, A., Criado, S. Antioxidant capacity of (+)-catechin visible-light photoirradiated in the presence of vitamin B2. Redox Report: Communications in Free Radical Research. 22 (6), 282-289 (2017).
  36. Castillo, C., Criado, S., Díaz, M., García, N. A. Riboflavin as a sensitiser in the photodegradation of tetracyclines. Kinetics, mechanism and microbiological implications. Dyes and Pigments. 72 (2), 178-184 (2007).
  37. Huvaere, K., Sinnaeve, B., Van Bocxlaer, J., Skibsted, L. H. Flavonoid deactivation of excited state flavins: reaction monitoring by mass spectrometry. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 60 (36), 9261-9272 (2012).
  38. Massad, W. A., Bertolotti, S., Garcia, N. A. Kinetics and mechanism of the vitamin B2-sensitized photooxidation of isoproterenol. Photochemistry and Photobiology. 79 (5), 428-433 (2004).
  39. Maclean, M., MacGregor, S. J., Anderson, J. G., Woolsey, G. High-intensity narrow-spectrum light inactivation and wavelength sensitivity of Staphylococcus aureus. FEMS Microbiology Letters. 285 (2), 227-232 (2008).
  40. Huang, S. T., et al. The influence of the degradation of tetracycline by free radicals from riboflavin-5'-phosphate photolysis on microbial viability. Microorganisms. 7 (11), 500(2019).
  41. Maisch, T., et al. Fast and effective photodynamic inactivation of multiresistant bacteria by cationic riboflavin derivatives. PLoS One. 9 (12), 111792(2014).
  42. Grijzenhout, M., et al. Ultraviolet-B irradiation of platelets induces a dose-dependent increase in the expression of platelet activation markers with storage. British Journal of Haematology. 83 (4), 627-632 (1993).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

פוטוליזה של ריבופלביןאינאקטיבציה באור נראהפלבין מונונוקלאוטידStaphylococcus Aureusמיני חמצן רב-פעיליםזיהוי רדיקלי סופראוקסידרדוקציית NBTהקרה באור סגולאינאקטיבציה בקטריאליתטיפול במרגישי אור
השבתה של פתוגנים באמצעות פוטוליזה של אור נראה של ריבופלבין-5′-פוספט
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.