פרוטוקול זה מציג את כינונו של דום היפותרמי עמוק במחזור הדם בחולדות, אשר ניתן ליישם כדי לחקור תסמונת תגובה דלקתית מערכתית, פגיעה איסכמיה/רפרפוזיה, עקה חמצונית, דלקת עצבית וכו '.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
פרוטוקול זה מציג את כינונו של דום היפותרמי עמוק במחזור הדם בחולדות, אשר ניתן ליישם כדי לחקור תסמונת תגובה דלקתית מערכתית, פגיעה איסכמיה/רפרפוזיה, עקה חמצונית, דלקת עצבית וכו '.
דום היפותרמי עמוק במחזור הדם (DHCA) מיושם באופן שגרתי במהלך ניתוחים למחלות לב מולדות מורכבות ומחלת קשת אבי העורקים. המחקר הנוכחי נועד לספק שיטה ליצירת DHCA בחולדות. כדי להעריך את ההשפעה של תהליך DHCA על סימנים חיוניים, נעשה שימוש במודל חולדות מעקף קרדיו-פולמונרי בטמפרטורה רגילה (CPB) ללא מעצר במחזור הדם כבקרה. כצפוי, DHCA הוביל לירידה משמעותית בטמפרטורת הגוף וללחץ דם עורקי ממוצע. ניתוח גזי הדם הצביע על כך ש-DHCA העלה את רמות החומצה הלקטית, אך לא השפיע על ה-pH בדם ועל ריכוזי ההמוגלובין, המטוקריט, Na+, Cl−, K+ וגלוקוז. יתר על כן, בהשוואה לחולדות CPB בטמפרטורה רגילה, תוצאות מיקרוסקופיית האלקטרונים של ההולכה הראו עלייה קלה באוטופגוזומים בהיפוקמפוס בחולדות DHCA.
דום היפותרמי עמוק במחזור הדם (DHCA) משמש בניתוחי לב מאז 19531. DHCA כרוך בהורדת טמפרטורת הליבה של המטופל לרמות היפותרמיות עמוקות (15-22 מעלות צלזיוס) לפני הפרעה גלובלית לזרימת הדם לגוף2. המעצר במחזור הדם יכול לספק שדה ניתוח נטול דם יחסית. היפותרמיה עמוקה מקטינה את חילוף החומרים, במיוחד במוח ובשריר הלב, שהיא שיטה יעילה להגנה מפני איסכמיה3. DHCA מיושם בדרך כלל במהלך ניתוחים למחלות לב מולדות מורכבות, מחלת קשת אבי העורקים, ואפילו גידולים בכליות או יותרת הכליה עם פקקת קאווה ורידית 4,5. לכן, הקמת מודלים של בעלי חיים DHCA מספקת התייחסות חשובה לעידון ההליך ולמניעת סיבוכים במסגרות קליניות.
למרות שניתן להקים מודלים עם כלבים6, ארנבות7 ובעלי חיים אחרים, עדיף להשתמש בחולדות בגלל יכולת ההפעלה שלהן ועלותן הנמוכה. מודל החולדות DHCA תואר לראשונה בשנת 2006 על ידי Jungwirth et al.8. נמצא כי משך המעצר במחזור הדם השפיע על התוצאות הנוירולוגיות. מאז, מודלים של חולדות DHCA נחקרו באופן נרחב. הובהר כי DHCA עלול לעורר תסמונת תגובה דלקתית מערכתית (SIRS)9. במחקרים מאוחרים יותר, פרמקולוגים מצאו כי דלקת עצבית הקשורה ל-DHCA המושרה על-ידי SIRS יכולה להיות מוחלשת על-ידי רסברטרול10 וטריפטוליד11. הצוות שלנו מצא גם כי ניתן להחליש דלקת עצבית הקשורה ל-DHCA על-ידי עיכוב החלבון קושר ה-RNA12 הניתן להצטננות. במערכת הלב וכלי הדם, לסופראוקסיד דיסמוטאז יש השפעה קרדיו-פרוטקטיבית על פגיעות איסכמיה/רפרפוזיה (I/R) במהלך DHCA13. תוצאות אלה הרחיבו את ההבנה של תהליכים פתופיזיולוגיים הקשורים ל-DHCA והציעו כיוונים חדשים לשיפור התוצאות של DHCA. עם זאת, התוצאות לגבי אנדוטוקסמיה, עקה חמצונית ואוטופגיה לאחר DHCA אינן חד משמעיות. DHCA משתמשת באותה טכנולוגיה תפעולית כמו מעקף הלב-פולמונרי (CPB)14, אך אסטרטגיית הניהול שלה שונה, והצעדים ליצירת DHCA שונים בין צוותים שונים 8,9,10,11. המחקר הנוכחי נועד לספק שיטה לביסוס הליך DHCA בחולדות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הפרוטוקולים עברו בדיקה מוסדית וקיבלו אישור מהוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים, בית החולים פווואי, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה (FW-2021-0005). כל הליכי הניסוי בוצעו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שפורסם על ידי המכונים הלאומיים לבריאות.
הערה: חולדות ספראג-דאולי זכרים (משקל: 500-600 גרם, גיל: 12-14 שבועות) הוחזקו בתנאי מעבדה סטנדרטיים עם גישה חופשית למזון ומים. החולדות חולצו באופן אקראי לשתי קבוצות (n = 6, כל קבוצה): קבוצת DHCA, וקבוצת CPB בטמפרטורה רגילה (קבוצת NtCPB).
1. עבודת הכנה
2. הרדמה וקנולציה
3. ייזום DHCA
4. קירור
5. מעצר היפותרמי עמוק במחזור הדם
6. חימום ו reperfusion
7. גמילה מה-CPB
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כקבוצת הביקורת, חולדות CPB בטמפרטורה הרגילה (NtCPB) ללא דום במחזור הדם הראו לחץ דם עורקי יציב (MAP) וטמפרטורת גוף במהלך כל ההליך, בעוד שהמפה של חולדות DHCA ירדה במהלך דום הלב (p < 0.01, איור 3A). הטמפרטורה של חולדות DHCA ירדה במהירות במהלך שלב הקירור והתאוששה בהדרגה במהלך שלב החימום מחדש. כאשר גמלים את החולדות ממעגלי ה-DHCA, הטמפרטורה של חולדות ה-DHCA חזרה לנורמה (איור 3B).
ההשפעה של תהליך DHCA על חולדות נחקרה על ידי ניתוח...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
קנולציה היא ההליך הבסיסי ביותר להקמת DHCA בחולדות. לפני הצינור, השריית העורק עם 0.5 מ"ל של 2% לידוקאין תקל על הצינור. לאחר הקנולציה, יש צורך בהפריניזציה עם 500 IU/kg הפרין דרך הווריד הג'וגולרי החיצוני כדי למנוע היווצרות מיקרוטרומבוס17. מצאנו שוב ושוב כי מינון זה של הפרין יכול להשיג את המטרה של זמן קרישה מופעל (ACT) >480 שניות. תקופת החימום מחדש היא החלק הקשה ביותר. לקח יותר מ-60 דקות עד שהטמפרטורה עלתה מ-18 מעלות צלזיוס ל-34 מעלות צלזיוס בניסוי שלנו, בעוד שתקופת החימום מחדש יכלה להיעשות ת...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
המחברים מודים לליאנג ג'אנג על שעזר לאסוף את נתוני הווידאו במהלך הניסוי. מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מספר מענק: 82070479) וקרנות המחקר הבסיסיות לאוניברסיטאות המרכזיות (מספר מענק: 3332022128).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מחליף חום | Xi' מכשיר רפואי Xijing ושות', בע"מ | Animal-M | |
| ממברנה מחמצן | דונגגוואן Kewei Medical Instrument Co., Ltd. | מיקרו-M | |
| צג | צ'נגדו Techman ושות', בע"מ | BL-420s | |
| רולר משאבת | צ'אנגג'ואו Prefluid טכנולוגיה ושות', בע"מ | BL100 | |
| SD עכברוש | HFK Bioscience ושות', בע"מ | / | |
| Sevoflurane | Maruishi פרמצבטיקה ושות', בע"מ | H20150020 | |
| מכונת גילוח | Hangzhou Huayuan מוצרי חיות מחמד ושות', בע"מ | / | |
| וופורייזר | SPACECABS | / | |
| מאוורר | שנחאי Alcott Biotech Co., Ltd | ALC-V8S | |
| מיכל מים | מקט טיפול קריטי AB | Jostra HCU20-600 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.