הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד של עורקים תוך-ריאתיים ותאי שריר חלק כדי לחקור תגובות כלי דם

4.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63686

⸱

8 ביוני 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology, Faculty of Medical Science and Center of Excellence for Innovation in Chemistry, Naresuan University, 2Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 3Cosmetics and Natural Products Research Center, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 4Snyder Institute for Chronic Diseases, Airways Inflammation Research Group, Department of Physiology and Pharmacology, University of Calgary

במאמר זה

סיכום

ניתן לחקור תגובות וסקולריות של זרימת הדם הריאתית העורקית באמצעות עורק תוך פולמונרי (IPA) ותאי שריר חלק וסקולריים (VSMCs). המחקר הנוכחי מתאר בפירוט את הבידוד של IPA ואת הפרוטוקולים המשמשים לחקר vasorelaxation בתגובה לגירויים פיזיולוגיים.

תקציר

ניתן להשתמש בעורק התוך-ריאתי (IPA) ובתאי השריר החלק של כלי הדם (VSMCs) שבודדו מריאות חולדות כדי לחקור את המנגנונים הבסיסיים של התפשטות כלי דם ו-vasorelax. לאחר בידוד ה- IPA וה- VSMCs, ניתן להעריך את המאפיינים של תגובות כלי הדם בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים בהעדר גורמים חיצוניים כגון אותות עצביים, הורמונים, ציטוקינים וכו '. לפיכך, ה- IPA וה- VSMCs משמשים מודלים מצוינים לחקר פיזיולוגיה / פתופיזיולוגיה של כלי הדם, יחד עם חקירות ניסיוניות שונות, כגון אפנון על ידי סוכנים פרמקולוגיים, ניתוח אלקטרופיזיולוגי של מהדק טלאי, הדמיית סידן וכו '. כאן, השתמשנו בטכניקה לבידוד ה-IPA כדי לחקור תגובות וסקולריות במערך אמבט איברים. מקטעי IPA הורכבו על תא אמבט האיברים באמצעות חוטים אינטראלומינליים ועוררו על ידי סוכנים פרמקולוגיים שונים. השינויים בטונוס כלי הדם של IPA (כלומר, vasoconstriction ו-vasorelax), תועדו באמצעות מתמר כוח איזומטרי ותוכנה לניתוח נתונים פיזיולוגיים. יישמנו מספר פרוטוקולים ניסיוניים, שניתן להתאים אותם כדי לחקור את המנגנונים של vasorelax/vasoconstriction לחקר הפעילות הפרמקולוגית של תרופות פיטוכימיות או סינתטיות. הפרוטוקולים יכולים לשמש גם להערכת תפקידן של תרופות בוויסות מחלות שונות, כולל יתר לחץ דם ריאתי עורקי. מודל IPA מאפשר לנו לחקור את עקומת תגובת הריכוז, שהיא חיונית בהערכת הפרמטרים הפרמקודינמיים של תרופות.

מבוא

כלי הדם הריאתיים הם מערכת כלי דם בלחץ נמוך שבה הפונקציה העיקרית היא לספק דם deoxygenated לאזור החלפת גז של הריאות. העורקים הריאתיים בריאות מסודרים בענפים מקבילים לעץ הסימפונות, ובסופו של דבר יוצרים רשת נרחבת של נימים שהיא רציפה על פני כמה נאדיות, ולבסוף, מתאחדת לתוך ורידים וורידים. הטון הווסקולרי של עורק הריאה נשלט על ידי מספר גורמים, המערבים את האינטראקציה בין האנדותל לבין תאי השריר החלק של כלי הדם (VSMCs)1.

במחקר זה אנו מתמקדים בכלי הדם התלויים-תלותיים והעצמאיים של העורק התוך-פולמונרי (IPA). בנוגע לווסורגנציה התלויה באנדותל, מנגנונים שונים המתרחשים על פני השטח של תאי האנדותל עשויים להגביר את ריכוז Ca2+ התוך-תאי (לדוגמה, קשירת אצטילכולין [ACh] עם קולטן מוסקריני [M3]), מה שמוביל להיווצרות תחמוצת החנקן (NO), פרוסטציקלין (PGl 2) וגורם היפרפולריזציה שמקורו באנדותל (EDHF) (איור 1 ). NO הוא הגורם המרגיע העיקרי שמקורו באנדותל, המסונתז מ-L-ארגינין על-ידי סינתאז תחמוצת החנקן של האנדותל (eNOS)2, אשר לאחר מכן מתנתק מתאי האנדותל ל-VSMCs (איור 1) וממריץ את האנזים המסיס גואניליל ציקלאז (sGC); האנזים הזה משנה את הגואנוזין טריפוספט (GTP) לגואנוזין מונופוספט מחזורי (cGMP), שמפעיל את החלבון קינאז G (PKG) ומפחית את רמות Ca2+ הציטוזוליקיות, ובכך גורם לדלקת כלי הדם (איור 1). PGl 2 מסונתז על ידי תאי אנדותל דרך מסלול ציקלו-אוקסיגנאז (COX) 3,4. הוא נקשר לקולטן הפרוסטציקלין (IP) ב-VSMCs וממריץ את האנזים אדניליל ציקלאז (AC), אשר לאחר מכן ממיר אדנוזין טריפוספט (ATP) לאדנוזין מונופוספט מחזורי (cAMP) (איור 1)3,4. cAMP מפעיל את החלבון קינאז A (PKA), מפחית את רמות Ca2+ הציטוזולי וגורם לווזורגנציה5 (איור 1). מסלול ה-EDHF משתתף גם בוויסורגנציה תלוית אנדותל באמצעות מתווכי אנדותל שונים ואירועים חשמליים. ההפעלה של מסלול EDHF מובילה להיפרפולריזציה של VSMCs, ובכך סוגרת ערוצי Ca2+ (VOCCs) המופעלים באמצעות מתח, מפחיתה את רמותCa 2+ התוך-תאיות, וגורמת לוויסורגנציה6. הוויסורגנציה הבלתי תלויה באנדותל מתרחשת ישירות על VSMCs באמצעות מספר מנגנונים, כגון הפחתת רמתCa 2+ תוך-תאית, עיכוב של קינאז שרשרת אור מיוזין (MLCK), הפעלת פוספטאז שרשרת אור מיוזין (MLCP), והפחתת רגישות Ca2+ למנגנון ההתכווצות של VSMCs. במחקר זה, אנו מתמקדים בווזורגנציה הנגרמת על ידי פתיחת ערוצי K+ שונים, חסימת תרכובות אורגניות נדיפות ועיכוב שחרור Ca 2+ מהרשתית הסרקופלסמית7, מה שמוביל לירידה ברמות Ca 2+ תוך-תאיות, ובכך מפחית את זרחון שרשרת האור VSMC מיוזין וקשירת מיוזין-אקטין או היווצרות גשר צולב, בהתאמה, ובסופו של דבר התוצאה היא vasorelaxation.

הטכניקה להערכת מדידות vasoconstriction ו vasorelaxation ב IPA מבודד מבוססת היטב עבור מכרסמים, אבל הנתונים השתנו בהתאם לפרוטוקולים הניסוי. המחקר הנוכחי מתאר את השיטה המשמשת להערכת תגובתיות כלי הדם של תכשירי IPA של חולדות במבחנה, שנעשו בהיעדר גורמים חיצוניים המווסתים את תגובת כלי הדם in vivo, כגון אותות עצביים, הורמונים, ציטוקינים, לחץ דם וכו '.

השתמשנו במספר פרוטוקולים ניסיוניים תוך שימוש בתמצית הצמח כדוגמה לחקר תגובתיות כלי הדם של IPA. חוסמים שונים (איור 1) שימשו כדי לזהות את המנגנונים של כלי דם תלויי אנדותל ובלתי תלויים המושרים על-ידי תמצית הצמח. עם זאת, ניתן להתאים את אותם פרוטוקולים כדי להעריך את תגובות כלי הדם של IPA לכל תרופות, תמציות או פיטוכימיקלים המשמשים לטיפול בפאתולוגיות ריאתיות שונות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הניסויים שבוצעו במחקר זה אושרו על ידי ועדת האתיקה של ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת Naresuan (NUACUC), פרוטוקול מספר NU-AE620921, לטיפול ושימוש בבעלי חיים למטרות מדעיות.

1. הרכב של פתרונות פיזיולוגיים

  1. צור תמיסת קרבס על ידי המסת כימיקלים במים מזוקקים כדי להשיג את הריכוזים הסופיים כדלקמן: 122 mM NaCl, 10 mM HEPES, 5 mM KCl, 0.5 mM KH 2 PO 4, 0.5 mM NaHPO4, 1 mM MgCl 2, 1.8 mM CaCl 2ו- 11 mM גלוקוז8. יש להתאים את ה-pH של התמיסה ל-7.3 עם 1 M NaOH ולחמם מראש ל-37°C לפני השימוש.
  2. הכן תמיסת קרבס קרה באופן דומה כפי שצוין בשלב 1.1. לשימוש כאמצעי בידוד של IPA, כמתואר בשלב 2.

2. בידוד של עורק תוך פולמונרי (IPA)

  1. הרדימו חולדות Wistar זכרים בני 8 שבועות באמצעות הזרקה תוך-צפקית של נתרן תיאופנטל (100 מ"ג/ק"ג)9. בדקו את תגובת החולדות לגירויים כואבים בשינה עמוקה על ידי שימוש במלקחיים המהודקים לכפות רגליהן, ולאחר מכן ודאו שלחולדות אין תגובת משיכה לאחור של כף הרגל לפני שהן מרדימות אותן בשלב 2.2.
  2. חותכים את בית החזה האמצעי של החולדה ואת מסוף הלב עם מספריים (גודל 14 ס"מ). לאחר מכן, אתר את שורש הריאה עם מספריים (גודל 14 ס"מ). קוצרים את כל הריאה על ידי חיתוך במספריים וטובלים אותה בתמיסת קרבס קרה10,11.
  3. פורסים אונה אחת של הריאה בעזרת מספריים (גודל 11 ס"מ) ומניחים על צלחת פטרי (גודל 9 ס"מ) כשהצד המדיאלי/שורש של הריאה פונה כלפי מעלה (איור 2A, B). שימו לב וזהו את היישור של הווריד, הסימפונות והעורק מלמעלה למטה (איור 2B).
  4. חותכים את הברונכוס לאורך עם מספריים (גודל 11 ס"מ). לאחר מכן, השתמש מלקחיים (גודל 11 ס"מ) כדי לתפוס את קצה ברונכוס. נתחו בעדינות והוציאו את הברונכוס והוורידים מהריאה. שים לב שה- IPA תמיד מיושר אנטומית מתחת לברונכוס.
  5. לאחר מכן, ניתן לדמיין את ה-IPA הראשי (איור 2C). השתמש במלקחיים (גודל 11 ס"מ) כדי לתפוס את קצה ה- IPA ולנתח אותו בזהירות מתוך רקמת הריאה עם מספריים (גודל 11 ס"מ).
  6. שמור את ה- IPA המבודד בתמיסת קרבס קרה עד להתקנת מכלול אמבט האיברים (pH 7.3 וטמפרטורה 4 ° C)1 1.

3. בידוד של תאי שריר חלק וסקולריים (VSMCs)

  1. בודד את IPA כפי שתואר קודם לכן בשלב 2. חותכים את הענף הראשי של ה-IPA לאורך המספריים (גודל 11 ס"מ) וחותכים לרצועות קטנות (2 מ"מ) (איור 3A).
  2. לטבול את רצועות ה-IPA במדיום דיסוציאציה (DM)10,12 המכיל 110 mM NaCl, 5 mM KCl, 0.5 mM KH 2 PO 4, 0.5 mM NaH 2 PO4, 10 mM NaHCO3, 10 mM HEPES, 0.03 mM פנול אדום, 10 mM טאורין, 0.5 mM EDTA, 2 mM MgCl 2, 11 mM גלוקוז ו-0.16 mM CaCl 2, ולהתאים את ה-pH ל-7.0 עם 1 M NaOH. דגרו את הרצועות במשך שעה אחת ב-4 מעלות צלזיוס ב-DM המכילות פפאין 1 מ"ג/מ"ל, אלבומין בסרום בקר 0.04% (BSA), ו-0.4 mM 1,4- dithiothreitol (DTT), ודגרה נוספת ב-37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. יש להוסיף 1 מ"ג/מ"ל קולגן מסוג 1A ב-DM ולדגור עוד יותר בטמפרטורה של 37°C למשך 5 דקות.
    הערה: DM הוא פתרון המשמש לשמירה על כדאיות התאים. פפאין וקולגןאז מסוג 1A הם אנזימים המפרקים את חלבוני המטריצה החוץ-תאית כדי לבודד תאים בודדים. BSA הוא חלבון אלבומין בסרום המשמש לייצוב אנזימים במהלך אחסון ותגובות אנזימטיות. DTT הוא חומר מחזר המשמש לייצוב וקידום פעילותם של אנזימים במהלך תהליך בידוד התאים. טאורין היא חומצת אמינו גופרתית המשמשת לייצוב קרום התא ושלמות התא.
  3. העבירו את הרקמות ל-DM טרי והתפזרו באמצעות טריטורציה עדינה באמצעות פיפטה פסטר מזכוכית (איור 3B). המשיכו לטרטור עד ש-VSMCs מבודדים יופיעו בתמיסת הרחצה שמתחת למיקרוסקופ (איור 3C).
    הערה: ניתן להשתמש ב- VSMCs מבודדים טריים לחקר פיזיולוגיה / פתופיזיולוגיה של כלי הדם, יחד עם חקירות ניסיוניות שונות, כגון אפנון על ידי סוכנים פרמקולוגיים, ניתוח אלקטרופיזיולוגי של מהדק מדבקה, הדמיית סידן וכו '. עם זאת, המחקר הנוכחי מתמקד רק על vasorelaxation של IPA מבודד באמצעות טכניקת אמבט איברים.

4. טכניקת אמבט איברים

  1. בודד את IPA כפי שתואר קודם לכן בשלב 2. חתכו את הענף הראשי של ה-IPA לטבעות באורך של ~2 מ"מ (איור 2D)13.
  2. הצמידו את טבעות ה-IPA לתאי אמבטיה של איברים (איור 4) על-ידי השחלתן על שני חוטי נירוסטה בקוטר 40 מיקרומטר (איור 2E)11,13,14.
  3. חבר חוטי נירוסטה המותקנים עם טבעות IPA למתמרים הכוח האיזומטריים המחוברים למכשיר איסוף הנתונים ולמערכת המחשב המותקנת עם התוכנה הפיזיולוגית המתאימה לרישום וניתוח נתונים, ולאחר מכן העלה בעדינות את המתח של טבעת ה- IPA ל -1 גרם11.
  4. אפשרו למקטעי כלי השיט להתאזן למשך כ-45 דקות במתח מנוחה של 1 גרם. במהלך תקופת שיווי המשקל, ודא כי פתרון קרבס משתנה באופן קבוע כל 15 דקות. לאחר תקופה זו של שיווי משקל, בדוק את הכדאיות של כלי הדם על ידי מדידת הווסו-קונסטריקציה שלהם לתמיסת K+ חוץ-תאית גבוהה (80 mM) המכילה 47.4 mM NaCl, 80 mM KCl, 10 mM HEPES, 0.5 mM KH 2 PO 4, 0.5 mM NaHPO4, 1.8 mM CaCl 2, 1 mM MgCl 2ו- 11 mM גלוקוז10,11.
  5. הערך את נוכחותו או היעדרו של אנדותל על ידי חישוב תגובת ההרפיה לאצטילכולין (1 x 10−5 M) בטבעות שנדבקו מראש בפנילפרין (PE, 1 x 10−5 M) (שים לב שהתכווצויות כלי הדם נשארות יציבות במשך שעה אחת לאחר הוספת PE). חשבו על הטבעות כעל אנדותל שלם אם הן מכמתות הרפיה של יותר מ-70% (איור 5A). אם יש להן פחות מ-10% הרפיה, חשבו על הטבעותכ-13 בעלות נטייה לאנדותל (איור 5B). באופן מכני להסיר את האנדותל על ידי שפשוף עדין בתוך כלי עם חוט קטן כדי לגרום denudation.
  6. שוב שיווי משקל טבעות העורקים במשך 30 דקות לפני תחילת ניסויי הבדיקה.

5. תגובת וזורקסנטים לתמצית צמחים

  1. חקרו את ההשפעה המרגיעה של תמצית הצמח על ידי חימום מראש של טבעות IPA עם PE (1 x 10−5 M).
  2. לאחר מכן, הוסיפו בזהירות את תמצית הצמח (1-1,000 מיקרוגרם/מ"ל) באופן מצטבר לטבעות שלמות של אנדותל ולטבעות עם אנדותל כדי לגרום לדלקת כלי דם (איור 6A, B) ולרכוש עקומת תגובה תלוית ריכוז (איור 6C).
  3. ודא שגם ההשפעה של דימתיל סולפוקסיד (DMSO) המשמש כממס מוערכת באופן דומה כדי לשמש כבקרה שלילית (איור 6C).

6. מנגנון של וזורגנציה הנגרמת על ידי תמצית צמחים באמצעות האנדותל

  1. הערך את מנגנון הפעולה של תמצית הצמח באמצעות סינתאז תחמוצת החנקן האנדותליאלית (eNOS), ציקלו-אוקסיגנאז (COX)13 ומסלולים של גורם היפר-קוטבי (EDHF) שמקורו באנדותל על-ידי דגירה של טבעות IPA שלמות באנדותל למשך 30 דקות עם המעכבים הבאים (איור 7A): 1 x 10−4 M NG-nitro-L-ארגינין מתיל אסטר (L-NAME, מעכב eNOS)9, 1 x 10−5 M אינדומתצין (מעכב COX)9, או שילוב של 1 x 10−7 M apamin (חוסם תעלות אשלגן קטן המופעל על ידי סידן) ו-1 x 10−7 M charybdotoxin (חוסם תעלות אשלגן המופעל על ידי סידן בינוני ומוליך גדול), לפני גרימת התכווצויות של IPA עם 1 x 10−5 M PE.
  2. לאחר מכן, לאחר ההתכווצויות לייצוב PE, יש להוסיף ריכוזים מצטברים (0.1-1,000 מיקרוגרם/מ"ל) של תמצית הצמח.
  3. הציגו את ההשפעות של תמצית צמחים כאחוז הרפיה של טבעות ה-IPA בנוכחות מעכבים בהשוואה לתגובה של טבעות IPA ללא מעכבים (איור 7B-D) ובנו את עקומת תגובת הריכוז.

7. מנגנון של וזורגנציה המושרה על ידי תמצית צמחים באמצעות תעלות K+ של שריר חלק וסקולרי

  1. טבעות IPA טרום-דגירה של אנדותל למשך 30 דקות עם 1 x 10−3 M 4-אמינופירידין (4-AP), חוסם של תעלת אשלגן מגודרת מתח (KV) (איור 8A), 1 x 10−5 M glibenclamide, חוסם של תעלת אשלגן רגישה ל-ATP (KATP), או 1 x 10−7 M iberiotoxin, חוסם של מוליכות גדולה Ca 2+-מופעל K+ ערוצים (K Ca), לפני גרימת התכווצויות של IPA עם 1 x 10−5 M PE.
  2. לאחר מכן, מוסיפים ריכוזים מצטברים של תמצית הצמח.
  3. הציגו את ההשפעות של תמצית צמחים כאחוז הרפיה של טבעות IPA עם מעכב בהשוואה לטבעות IPA ללא מעכב (איור 8B-D) ובנו את עקומת הריכוז-תגובה.

8. מנגנון של וזורגנציה הנגרמת על ידי תמצית צמחים באמצעות עיכוב של זרם סידן חוץ-תאי (Ca2+) ב-VSMCs

  1. טבעות IPA שעברו דגירה מוקדמת של אנדותל למשך 30 דקות בתמיסת קרבס נטולת Ca2+, המכילה 1 mM אתילן גליקול-ביס (2-אמינואתיל-ת'ר)-N,N,N',N'-חומצה טטראאצטית (EGTA) (איור 9A).
  2. לאחר מכן, החלף את תמיסת הרחצה בתמיסת Ca2 + free-80 mM K+ למשך 10 דקות כדי לבצע דה-פולריזציה של ה-VSMCs, אשר לאחר מכן פותחים את תרכובות אורגניות נדיפות (איור 9A).
  3. הוסיפו במצטבר את CaCl2 (0.01-10 מ"מ) כדי לגרום להתכווצות כלי הדם של ה-IPA ולבנות את עקומת תגובת הריכוז (איור 9A).
  4. חזור על פרוטוקול זה באותן טבעות IPA אך דגירה מראש עם תמצית צמחים או 1 μM nicardipine (חוסם ערוצים מסוג L Ca 2+) ב- Ca2+ המכיל תמיסת 80 mM K+ למשך 10 דקות ולאחר מכן תוספת מצטברת של CaCl2 8.
  5. לבסוף, השוו את תגובת ההתכווצות לתגובת ההתכווצות המרבית שנוצרה בעבר על ידי אתגרי CaCl2 של בקרה (איור 9B).

9. מנגנון של וזורגנציה הנגרמת על ידי תמצית צמחים באמצעות עיכוב של סידן תוך תאי (Ca2+) מהרשתית הסרקופלסמית (SR)

  1. חשוף טבעות IPA עם ניקוד אנדותל לתמיסת K+ של 80 mM למשך כ-5 דקות, תוך דה-פולריזציה של ה-VSMCs, פתיחת תרכובות אורגניות נדיפות, ובסופו של דבר יצירת העמסת Ca2+ לתוך ה-SR (איור 10A).
  2. החליפו את תמיסת הרחצה למשך 10 דקות בתמיסת Ca2+ ללא קרבס המכילה 1 mM EGTA (איור 10A).
  3. לאחר מכן, אתגרו את טבעות ה-IPA עם 1 x 10−5 M PE, מה שמפעיל את מסלול הפוספוליפאז C/IP3 , ובסופו של דבר משחרר את Ca2+ מה-SR ומעורר התכווצות חולפת של IPA (איור 10A).
  4. חזור על אותו פרוטוקול כדי לוודא גם התכווצויות חולפות ל- PE.
  5. אתגרו שוב את טבעות ה-IPA עם תמיסת K+ של 80 mM למשך כ-5 דקות, ולאחר מכן החליפו את תמיסת הרחצה בתמיסת קרבס נטולת Ca2+ המכילה EGTA של 1 mM עם או בלי תמצית הצמח למשך 10 דקות.
  6. שוב, אתגר את טבעות IPA עם 1 x 10−5 M PE.
  7. השוו את התכווצויות ה-IPA הנגרמות על-ידי PE בין המצב עם ובלי תמצית הצמח (איור 10B).

10. ניתוח סטטיסטי

  1. להביע את התוצאות כממוצע ± SEM. השווה ערכים אלה באמצעות מבחן t של התלמיד או נתח על ידי ניתוח של שונות (ANOVA) ואחריו מבחן טוקי-קרמר פוסט הוק באמצעות תוכנה סטטיסטית מתאימה. שקול את ההבדלים ב - p < 0.05 כמובהקים סטטיסטית. כאן, היו n = 6 חולדות / פרוטוקול ניסיוני.
    הערה: ניתן להעריך את ההקלטה של vasoconstriction ו vasorelaxation עם תוכנה מתאימה המותקנת במחשב. לדוגמה, איור 5A מראה שכאשר כלי הדם מגורה על-ידי ה-PE הגורם להתכווצות, ניתן לראות זאת מהמתח המוגבר של העקיבה המקורית. העקיבה תתייצב תוך 20-30 דקות, מה שנחשב להתכווצות של 100%. לאחר מכן, ACh מגרה את כלי הדם, גרימת הרפיה, אשר ניתן לראות מן המתח המופחת של המעקב המקורי. לפיכך, המתח המופחת מחושב כאחוז לעומת 100% התכווצות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הפרוטוקול במחקר הנוכחי פותח כדי לקבוע את תנאי הניסוי האופטימליים למדידת תופעות פיזיולוגיות שנצפו בתגובות כלי הדם של תכשירי IPA מבודדים. ניסויי הפיילוט בוצעו כדי לתאר את התוצאות הפוטנציאליות המסייעות להבנת ההשפעות הווסקולריות והבסיס המכניסטי של פעולת הווזו-רלאקסנט של תמצית הצמח, כדלקמן.

אפקט Vasorelaxant של תמצית הצמח
כפי שניתן לראות באיור 6A,B, ב-IPA שלם של אנדותל (E+), תמצית הצמח עוררה תגובה תלוית ריכוז של כלי דם (EC50 = 66.88 מיקרו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בכתב יד זה אנו מתארים את הטכניקה לבידוד של חולדות IPA ו- VSMCs. מספר פרוטוקולים ניסיוניים שימשו כדי לחקור את התגובה הווסקולרית של IPA במבחנה, אשר ניתן להשתמש בהם כדי לאפיין את האפקט הפרמקולוגי ואת הבסיס המכניסטי של IPA vasorelaxation המושרה על ידי תמצית צמחים.

בנוגע לפעולת מרחיב כלי הדם התלוי באנדותל של תמצית הצמח, נעשה שימוש בחוסמים שונים כגון L-NAME (eNOS), אינדומתצין (COX) ואפמין+charybdotoxin (EDHF). הנתונים המייצגים הראו הן תוצאות חיוביות (כלומר, הפחתה משמעותית של תגובת מרחיבי כל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

המחברים מבקשים להודות למועצת המחקר הלאומית של תאילנד, למרכז המצוינות לחדשנות בכימיה (PERCH-CIC) ולרשת המחקר הבינלאומית (IRN61W0005) על מתן תמיכה כספית, ולמחלקה לפיזיולוגיה הפקולטה למדעי הרפואה, אוניברסיטת נארסואן, על תמיכה במתקני מחקר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1,4-דיתיותרייטול (DTT)סיגמא-אולדריץ'D0632
CAS מס' 348-12-3
4-אמינופירידין (4-AP)אולדריץ' כימיקלA78403
CAS מס' 504-24-5
אצטילכוליןסיגמא-אולדריץ'A6625
CAS מס' 60-31-1
אפאמיןסיגמא-אולדריץ'A9459
CAS מס' 24345-16-2
בקר אלבומין בסרום (BSA)סיגמא-אולדריץ'A2153
CAS מס' 9048-46-8
כוריד סידןAjax FinechemAJA960
CAS מס' 1707055184
CharybdotoxinSigma-AldrichC7802
CAS מס' 95751-30-7
קולגנאז מסוג 1Aסיגמא-אולדריץ'C9891
CAS מס' 9001-12-1		מ- Clostridium histolyticum
D(+)- גלוקוז מונוהידראטMillipore CorporationK50876942 924
CAS מס' 14431-43-7
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)סיגמא-אולדריץ'D4540
CAS מס' 67-68-5
אתילן גליקול-ביס (2-אמינואתילאתר)-N,N,N',N'-חומצה טטראצטית (EGTA)סיגמא-אולדריץ'E3889
CAS מס' 67-42-5
חומצה אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA)סיגמא-אולדריץ'E9884
CAS מס' 60-00-4
מלקחיים 11 ס"מ.ללא חלודה
14 ס"מ.Rustless Dumoxel-Glibenclamide
Sigma-AldrichG6039
CAS NO. 16673-34-0
GraphPad Prism תוכניתתוכנה גרסת תוכנה 5.0 (סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב)
HEPESSigma-AldrichH3375
CAS מס' 7365-45-9
IberiotoxinSigma-AldrichI5904
CAS מס' 1002546960		רקומביננטי מ- Mesobuthus tamulus
IndomethacinSigma-AldrichI7378
CAS מס' 53-86-1
תוכנת תוכנית Labchartגרסה 7.0 (A.D. Instrument, Castle Hill, אוסטרליה).
מגנזיום כלורידAjax Finechem296
CAS מס' 1506254995
חולדות וויסטאר זכרNomura Siam International Co. Ltd., בנגקוק, תאילנד
NG-nitro-L-ארגינין מתיל אסטר (L-NAME)סיגמא-אולדריץ'N5751
CAS מס' 51298-62-5
ניקרדיפיןסיגמא-אולדריץ'N7510
CAS מס' 54527-84-3
אמבט איברים 15 מ"ל.--הזמנה ספציפית של החוקרים
פפאיןסיגמא-אולדריץ'P4762
CAS מס' 9001-73-4		מפפאיה לטקס
פנאלי אדוםסיגמא-אולדריץ'P5530
CAS מס' 34487-61-1
פנילפריןסיגמא-אולדריץ'P6126
CAS מס' 61-76-7
אשלגן כלוריקמאוסKA383
CAS מס' 7447-40-7
אשלגן דיהידרוגנפוספטAldrich כימיקלEC231-913-4
CAS מס' 7778-77-0
S+A2:E36odium כלורידKemausKA465
CAS מס' 7647-14-5
מספריים 11 ס"מ.מספריים אל חלד
14 ס"מ.Spallנירוסטה-נתרן
ביקרבונטAjax Finechem475
CAS מס' 912466
נתרן דיהידרוגנפוספטאולדריץ' כימיקל33,198-8
CAS מס' 7558-80-7
נתרן הידרוקסידAjax Finechem482
CAS מס' 1506196602
נתרן תיופנטלאנסטלJPN3010002
CAS מס' 1C 314/47
טאוריןסיגמא-אולדריץ'T0625
CAS מס' 107-35-7
ווטרבאת' WBU 45Memmert2766
CAS מס' -
דומוקסל-מלקחיים

מקורות

  1. Lyle, M. A., Davis, J. P., Brozovich, F. V. Regulation of pulmonary vascular smooth muscle contractility in pulmonary arterial hypertension: Implications for therapy. Frontiers in Physiology. 8, 614(2017).
  2. Cyr, A. R., Huckaby, L. V., Shiva, S. S., Zuckerbraun, B. S. Nitric oxide and endothelial dysfunction. Critical Care Clinics. 36 (2), 307-321 (2020).
  3. Ruan, K. -H. Advance in understanding the biosynthesis of prostacyclin and thromboxane A2 in the endoplasmic reticulum membrane via the cyclo-oxygenase pathway. Mini Reviews in Medicinal Chemistry. 4 (6), 639-647 (2004).
  4. Del Pozo, R., Hernandez Gonzalez, I., Escribano-Subias, P. The prostacyclin pathway in pulmonary arterial hypertension: A clinical review. Expert Review of Respiratory Medicine. 11 (6), 491-503 (2017).
  5. Morgado, M., Cairrão, E., Santos-Silva, A. J., Verde, I. Cyclic nucleotide-dependent relaxation pathways in vascular smooth muscle. Cellular and Molecular Life Sciences. 69 (2), 247-266 (2012).
  6. Schmidt, K., de Wit, C. Endothelium-derived hyperpolarizing factor and myoendothelial coupling: The in vivo perspective. Frontiers in Physiology. 11, (2020).
  7. Fan, G., Cui, Y., Gollasch, M., Kassmann, M. Elementary calcium signaling in arterial smooth muscle. Channels. 13 (1), 505-519 (2019).
  8. Wisutthathum, S., et al. Extract of Aquilaria crassna leaves and mangiferin are vasodilators while showing no cytotoxicity. Journal of Traditional and Complementary Medicine. 9 (4), 237-242 (2019).
  9. Kamkaew, N., Paracha, T. U., Ingkaninan, K., Waranuch, N., Chootip, K. Vasodilatory effects and mechanisms of action of Bacopa monnieri active compounds on rat mesenteric arteries. Molecules. 24 (12), 2243(2019).
  10. Chootip, K., Kennedy, C., Gurney, A. Characterization of P2 receptors mediating contraction of the rat isolated pulmonary vasculature. British Journal of Pharmacology. 131, 167(2000).
  11. Paracha, T. U., et al. Elucidation of vasodilation response and structure activity relationships of N2, N4-disubstituted quinazoline 2, 4-diamines in a rat pulmonary artery model. Molecules. 24 (2), 281(2019).
  12. Chootip, K., Gurney, A. M., Kennedy, C. Multiple P2Y receptors couple to calcium-dependent, chloride channels in smooth muscle cells of the rat pulmonary artery. Respiratory Research. 6 (1), 1-10 (2005).
  13. Wisutthathum, S., et al. Eulophia macrobulbon extract relaxes rat isolated pulmonary artery and protects against monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension. Phytomedicine. 50, 157-165 (2018).
  14. Kruangtip, O., et al. Curcumin analogues inhibit phosphodiesterase-5 and dilate rat pulmonary arteries. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 67 (1), 87-95 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

שריר חלק כלי דםטכניקת אמבט איבריםמנגנוני כיווץ כלי דםמנגנוני הרפיית כלי דםיתר לחץ דם ריאתיעקומת תגובה לריכוזהסרת אנדותלמתמר כוח איזומטרי
בידוד של עורקים תוך-ריאתיים ותאי שריר חלק כדי לחקור תגובות כלי דם
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.