פרוטוקול זה מתאר שיטה חדשנית להעברת תרופות אנטי-רטרו-ויראליות משולבות דרך הפה המדכאות בהצלחה שכפול RNA של HIV-1 בעכברים אנושיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
טיפול אנטי-רטרו-ויראלי משולב דרך הפה בעכברים נגועים ב- HIV-1
במאמר זה
סיכום
תקציר
מגפת נגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV-1) ממשיכה להתפשט ללא הפרעה ברחבי העולם, ונכון לעכשיו, אין חיסון זמין נגד HIV. למרות שטיפול אנטי-רטרו-ויראלי משולב (cART) הצליח לדכא שכפול נגיפי, הוא אינו יכול למגר לחלוטין את המאגר מאנשים נגועים ב- HIV. אסטרטגיית ריפוי בטוחה ויעילה להידבקות ב- HIV תדרוש שיטות רב-תכליתיות, ולכן ההתקדמות של מודלים חייתיים לזיהום ב- HIV-1 הם מרכזיים לפיתוח מחקר ריפוי HIV. עכברים אנושיים משחזרים תכונות מרכזיות של הידבקות ב- HIV-1. מודל העכבר האנושי יכול להיות נגוע ב- HIV-1 וניתן לשלוט בשכפול הנגיף באמצעות משטרי cART. יתר על כן, הפרעה ל-cART גורמת לריבאונד נגיפי מהיר בעכברים אנושיים. עם זאת, מתן cART לבעל החיים יכול להיות לא יעיל, קשה או רעיל, ומשטרי cART רלוונטיים רבים מבחינה קלינית אינם ניתנים לניצול מיטבי. לצד היותו עלול להיות לא בטוח עבור חוקרים, מתן cART על ידי הליך הזרקה יומי אינטנסיבי נפוץ גורם ללחץ על ידי ריסון פיזי של החיה. שיטת cART האוראלית החדשנית לטיפול בעכברים אנושיים נגועים ב- HIV-1 המתוארת במאמר זה הביאה לדיכוי של וירמיה מתחת לרמת הזיהוי, לשיעור מוגבר של שחזור CD4+ ולשיפור הבריאות הכללית בעכברים אנושיים נגועים ב- HIV-1.
מבוא
תוחלת החיים של אנשים הנגועים בנגיף הכשל החיסוני האנושי הכרוני (HIV) השתפרה באופן משמעותי עם טיפול אנטי-רטרו-ויראלי משולב (cART)1,2. cART מפחית בהצלחה את שכפול ה- HIV-1 ומגדיל את ספירת תאי ה- CD4+ T לנורמליות אצל רוב המשתתפים הנגועים ב- HIV-1 באופן כרוני3, וכתוצאה מכך בריאות כללית משופרת והפחתה דרמטית בהתקדמות המחלה4. עם זאת, מאגר HIV-1 סמוי נוצר גם כאשר ART הוא יזם במהלך זיהום חריף 5,6,7. המאגרים נמשכים לאורך שנים במהלך ART וריבאונד נגיפי מהיר לאחר שהפרעת ART מתועדת היטב....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
רקמת עובר אנושית אנונימית נרכשה באופן מסחרי. המחקר בבעלי חיים בוצע על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי אוניברסיטת קליפורניה, לוס אנג'לס, וועדת המחקר בבעלי חיים (UCLA) (ARC) בהתאם לכל ההנחיות הפדרליות, המדינתיות והמקומיות. באופן ספציפי, כל הניסויים בוצעו בהתאם להמלצות ולהנחיות לדיור וטיפול בחיות מעבדה של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) והאגודה להערכה והסמכה של טיפול בחיות מעבדה (AALAC) הבינלאומי תחת פרוטוקול ARC מספר UCLA 2010-038-02B. כל הניתוחים בוצעו תחת קטמין (100 מ"ג/ק"ג)/קסילזין (5 מ"ג/ק"ג) והרדמה איזופלורן (2-3 וולט%) וכל המאמצים נעשו כדי למזער את הכאב ואי הנוחות של בעלי החיים.
1. עכברים אנושיים נגועים ב- HIV-1
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בהנחה שעכבר ממוצע השוקל 25 גרם צורך 4 גרם מזון ביום, מינון התרופה היומית באמצעות צריכה פומית מתאים ל-2.88 מ"ג/ק"ג TFV, 83 מ"ג/ק"ג FTC ו-768 מ"ג/ק"ג RAL. כדי לבחון אם משטר המזון הממוטב רעיל ומשפיע על הבריאות הכללית בהשוואה להזרקה יומית של cART, משקל העכברים היה מנוטר מדי שבוע לפני ובמהלך cART באמצעות הזרקה דרך הפה או התת עור. לא היו הבדלי משקל משמעותיים לפני מתן cART בכל קבוצה (איור 1). עם זאת, משקל העכבר ירד ללא הרף במהלך הזרקת cART SC יומית. לעומת זאת, FTC/TDF/ELV או FTC/TDF/RAL ב-DietGel ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שיטת מתן cART דרך הפה מפותחת כאן עבור עכברים נגועים ב- HIV-1 על ידי שילוב של שלוש תרופות אנטי-רטרו-ויראליות בתוך מזון עשיר בחומרים מזינים. בהשוואה למתן על ידי זריקות יומיות, משלוח דרך הפה קל יותר לשימוש, מגביל את תדירות הניהול, מפחית את הטיפול בבעלי חיים, ממזער מתח ומשפר את הבטיחות55. עד לנקודה זו, רק מחקרים מעטים בעכברים אנושיים 24,37,41 השתמשו בכדורי מזון המכילים תרופות ART כתושות לטיפול בעכברים. עם זאת.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
SK היא המייסדת של CDR3 Inc. שאר המחברים מצהירים כי המחקר נערך בהיעדר קשרים מסחריים או פיננסיים שיכולים להתפרש כניגוד עניינים פוטנציאלי.
תודות
ברצוננו להודות לד"ר רומאס גלזיונאס ולג'ף מורי ולאנשים בגיליאד על אספקת התרופות האנטי-רטרו-ויראליות ששימשו במחקר זה. עבודה זו מומנה על ידי NCI 1R01CA239261-01 (למטבח), מענקי NIH P30AI28697 (ליבת הווירולוגיה של UCLA CFAR, ליבת הטיפול בגנים ותאים, וליבת עכבר אנושית), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (לג'ן), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (קאריו). עבודה זו נתמכה גם על ידי מכון האיידס של UCLA, קרן הצדקה על שם ג'יימס ב. פנדלטון וקרן משפחת מקארתי.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צלחת פטרי 60 מ"מ | Thermo Scientific Nunc | 150288 | לציטוט מזון ART |
| APC אנטי אנושי CD8 נוגדן | Biolegend | 344722 | לזרימה ציטומטריה |
| BD LSRFortessa | BD biosciences | לאיסוף נתוני זרימה | |
| CD34 מיקרו-חרוזים | Miltenyi Biotec | 130-046-702 | לייצור עכברי NSG-BLT |
| צינורות צנטריפוגה | Falcon | 14-432-22 | להמסת ART |
| DietGel Boost | ClearH2O | 72-04-5022 | להכנת מזון ART |
| Elvitegravir | Gilead | מתנה מגיליאד | |
| Emtricitabine | Gilead | מתנה מגיליאד | |
| FITC אנטי אנושי CD3 נוגדן | Biolegend | 317306 | לזרימה ציטומטריה |
| תוכנת | Flowjo FlowJo | לניתוח נתוני זרימה ציטומטרית | |
| פריימר קדימה HIV-1: 5′-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3′; | IDT | מותאם | אישית לעומס ויראלי RT-PCR |
| HIV-1 בדיקה: 5′-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3′; | IDT | מותאם | אישית לעומס ויראלי RT-PCR |
| HIV-1 פריימר הפוך: 5′-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3′; | IDT | מותאם אישית | לעומס ויראלי RT-PCR |
| רקמת עובר אנושית | Advanced Bioscience Resources, Inc | ||
| עכברים, זן NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ | מעבדת ג'קסון | 5557 | לבניית העכברים המואנשים |
| פסיפיק בלו אנטי אנושי CD45 | Biolegend | 304022 | לזרימה ציטומטריה |
| PerCP אנטי-אנושי CD4 נוגדן | Biolegend | 300528 | לזרימה ציטומטריית |
| QIAamp ערכות RNA ויראליות | Qiagen | 52904 | למדידת עומס נגיפי |
| Raltegravir | Merck | במתנה | |
| ממגרדי תאים סטריליים | Thermo Scientific | 179693 | לציון מזון ART |
| TaqMan RNA-To-Ct ערכת 1 שלב | יישומי ביוסיסטמס | 4392653 לזיהוי עומס נגיפי בפלזמה | |
| Tenofovir disoproxil fumarate | Gilead | מתנה מגיליאד | |
| Trimethoprim-Sulfamethoxazole | Pharmaceutical Associates | NDC 0121-0854-16 | לשמירה על מזון ART סטרילי. כל כפית של 5 מ"ל מכילה 200 מ"ג סולפאמתוקסזול, USP 40 מ"ג טרימתופרים, USP NMT 0.5% אלכוהול |
מקורות
- Antiretroviral Therapy Cohort Collaboration. Life expectancy of individuals on combination antiretroviral therapy in high-income countries: a collaborative analysis of 14 cohort studies. Lancet. 372 (9635), 293-299 (2008).
- May, M. T., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
