הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

טכניקות מולקולריות ואימונולוגיות במודל עכבר מהונדס גנטית של גידול סטרומלי במערכת העיכול

2.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/63853

⸱

2 במאי 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Hospital of the University of Pennsylvania

במאמר זה

סיכום

מטרת כתב יד זה היא לתאר את מודל העכבר Kit V558Δ/+ ואת הטכניקות לניתוח ועיבוד מוצלחים של דגימות עכברים.

תקציר

גידול סטרומלי במערכת העיכול (GIST) הוא הסרקומה האנושית הנפוצה ביותר והוא מונע בדרך כלל על ידי מוטציה אחת בקולטן KIT. על פני סוגי גידולים, פותחו מודלים רבים של עכברים על מנת לחקור את הדור הבא של הטיפולים בסרטן. עם זאת, ב- GIST, רוב מחקרי in vivo משתמשים במודלים של עכברי קסנוגרפט שיש להם מגבלות מובנות. כאן, אנו מתארים מודל עכברי בעל יכולת חיסונית, מהונדס גנטית, של גידול סטרומלי במערכת העיכול עם מוטציה של KitV558Δ/+ . במודל זה, KIT המוטנטי, האונקוגן האחראי על רוב ה-GISTs, מונע על ידי המקדם האנדוגני שלו המוביל ל-GIST המחקה את המראה ההיסטולוגי ואת החדירה החיסונית שנראית ב-GISTs אנושיים. יתר על כן, מודל זה שימש בהצלחה כדי לחקור הן טיפולים מולקולריים ממוקדים והן טיפולים חיסוניים. כאן, אנו מתארים את הרבייה והתחזוקה של מושבת עכברים Kit V558Δ/+ . בנוסף, מאמר זה מפרט את הטיפול והרכש של GIST, ניקוז בלוטות לימפה מזנטרית, וצקום צמוד בעכברי KitV558Δ/+ , כמו גם הכנה לדוגמה לניתוחים מולקולריים ואימונולוגיים.

מבוא

GIST היא הסרקומה הנפוצה ביותר בבני אדם עם שכיחות של כ -6,000 מקרים בארצות הברית של אמריקה1. נראה כי מקורו של GIST בתאי קוצב הלב במערכת העיכול הנקראים תאי הביניים של קאג'אל, והוא מונע בדרך כלל על ידי מוטציה בודדת בטירוזין קינאז KIT או PDGFRA2. ניתוח הוא עמוד התווך של הטיפול ב- GIST ויכול להיות מרפא, אך חולים עם מחלה מתקדמת עשויים להיות מטופלים עם מעכב טירוזין קינאז (TKI), imatinib. מאז הצגתו לפני למעלה מ-20 שנה, אימטיניב שינתה את פרדיגמת הטיפול ב-GIST, ושיפרה את ההישרדות במחלות מתקדמות מ-1 ליותר מ-5 שנים 3,4,5. למרבה הצער, imatinib הוא רק לעתים רחוקות מרפא בשל מוטציות KIT נרכש, ולכן יש צורך בטיפולים חדשים עבור גידול זה.

מודלים של עכברים הם כלי מחקרי חשוב בחקר טיפולים חדשניים בסרטן. מספר מודלים תת עוריים של קסנוגרפט וקסנוגרפט שמקורם בחולה פותחו ונחקרו ב-GIST 6,7. עם זאת, עכברים אימונו-יעילים אינם מייצגים באופן מלא את ה-GIST האנושי מכיוון ש-GISTs הם בעלי פרופיל חיסוני דיפרנציאלי בהתאם למוטציה האונקוגנית שלהם, ושינוי המיקרו-סביבה של הגידול במערכת העיכול משפר את ההשפעות של טיפול TKI 8,9. לעכבר KitV558Δ/+ יש מחיקה של חיידק הטרוזיגוטי ב-Kit exon 11, המקודדת את תחום ה-juxtamembrane, האתר בעל המוטציה הנפוצה ביותר ב-GIST10 האנושי. עכברי KitV558Δ/+ מפתחים GIST סקאל יחיד עם 100% חדירה, ולגידולים יש היסטולוגיה דומה, איתות מולקולרי, חדירה חיסונית ותגובה לטיפול כמו GIST 8,11,12,13 אנושי. כאן, אנו מתארים רבייה, טיפול ובידוד ועיבוד דגימות בעכברי KitV558Δ/+ לשימוש במחקר מולקולרי ואימונולוגי ב- GIST.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל העכברים שוכנו בתנאים נטולי פתוגנים באוניברסיטת פנסילבניה על פי הנחיות NIH ובאישור אוניברסיטת פנסילבניה IACUC. המתת חסד בוצעה בעקבות נהלי ההפעלה הסטנדרטיים של משאבי בעלי חיים במעבדה של אוניברסיטת פנסילבניה.

1. ערכהV558Δ/+ גידול עכברים

  1. החזירו את עכברי ה-KitV558Δ/+ יותר מ-10 פעמים לרקע C57BL/6J באמצעות עכברי C57BL/6J. לשם כך, מגדלים את זכר עכברי KitV558Δ/+ עם נקבת עכברי C57BL/6J ביחס של 1:2.
    הערה: הגנוטיפ של הערכה ההומוזיגוטיתV558Δ/V558Δ היא קטלנית ברחם. ניתן לגדל נקבות קיטV558Δ/+ עכברים עם עכברי C57BL/6J זכרים, אך גודל הפסולת הוא כמחצית מזה שנראה מנקבת עכברי C57BL/6J. יתר על כן, נקבות עכברי KitV558Δ/+ מייצרות המלטות מוגבלות לאחר גיל 4 חודשים.
  2. גנוטיפ הגורים בגיל 7-14 ימים על ידי חיתוך הבוהן כדי לאשר את נוכחותו של הגנוטיפ של Kit V558Δ/+ . השתמש בפריימר הקדמי: TCTCCTCCAGAAACCCATGTATGAA; כתב 1: CCTCGACAACCTTCCA; פריימר הפוך: TTGCGTCGGGTCTATGTAAACAT; וכתב 2: TCTCCTCGACCTTCCA לגנוטיפ.

2. ערכהV558Δ/+ טיפול בעכבר

  1. הגיל והמין תואמים את הערכהV558Δ/+עכברים לפני הטיפול. השתמש בעכברים תואמי גיל ומין בקבוצות, שכן גידולים מנקבת עכברי KitV558Δ/+ גדולים יותר מאלה שבעכברים זכרים. טפלו בעכברים בגיל 8-12 שבועות, ואז נוצרים גידולים (איור 1).
  2. תן מעכבי טירוזין קינאז בעל פה או על ידי הזרקה תוך-צפקית (i.p.); KitV558Δ/+ גידולים רגישים למעכבי טירוזין קינאז. ספקו אימטיניב במינון של 600 מ"ג/ל' במי שתייה או זריקות i.p. של 45 מ"ג/ק"ג פעמיים ביום. מדוד את הירידה במשקל הגידול באמצעות קשקשים דיגיטליים לאחר כריתת הגידול כפי שמוצג בשלב 3, שהם כ-50% בשבוע אחד ו-80% לאחר 4 שבועות לאחר הטיפול באימטיניב (איור 2).

3. ערכהV558Δ/+ קצירת איברי עכבר

  1. המתת עכברים על ידי נרקוזה CO2 בקצב זרימה של 60% נפח תא לדקה. השאירו את העכברים בחדר לפחות 2 דקות לאחר הפסקת הנשימה, ואז בצעו נקע צוואר הרחם כדי לאשר את המוות.
  2. לעקר את כל המכשירים, ללבוש כפפות לאורך כל ההליך, ולשמור על שדה סטרילי. הכן את העור עם 70% אתנול. בצע חתך אנכי בקו האמצע של 2 ס"מ באמצעות מספריים והיכנס לחלל הבטן. בחדות למדוד כל הידבקויות תוך-בטניות.
  3. כדי להסיר את בלוטת הלימפה המזנטרית המתנקזת, בצע את השלבים המתוארים להלן.
    1. זהה את ה-cecum והרים את המזנטריה שלו בצורה מעולה. בערך באמצע הדרך לבסיס המזנטריה המעי הגסית, זהה את בלוטת הלימפה המזנטרית ונתח אותה בחדות. בלוטת הלימפה היא אוף-ווייט וגודלה כ-0.5 ס"מ על 0.5 ס"מ.
    2. מחלקים את רקמת בלוטות הלימפה לשלישים לבידוד חלבונים, היסטולוגיה ותרחיף של תאים בודדים, לפי הצורך. עבור תרחיפים של תאים בודדים, יש להניח את רקמת בלוטת הלימפה ב-20 מ"ל של מדיה נטולת סרום (RPMI) ולשמור על קרח.
  4. לבידוד של ה-GIST וה-cecum, בצע את השלבים המתוארים להלן.
    1. הצקום בעכברי KitV558Δ/+ מוחלף ברובו על ידי GIST. בזהירות לחלק את הצומת האילאוקולי מבסיס הגידול. כדי לאסוף את cecum, לחלק את המעי הגס שוב, 2 ס"מ פרוקסימלי לבסיס הגידול.
    2. ב-50%-60% מעכברי KitV558Δ/+ של Kit V558Δ/+ , ראש הגידול מכיל מכסה של רקמת צ'ק, שבדרך כלל מכילה נוזל סרוסי, אך לעתים רחוקות עשויה להכיל מוגלה (איור 3). לנתח בחדות את רקמת הכובע הרחק מרקמת הגידול.
    3. מחלקים את רקמת הגידול ו/או את ה-cecum לשלישים לצורך בידוד חלבונים, היסטולוגיה ותרחיף של תאים בודדים, לפי הצורך. עבור תרחיפים של תאים בודדים, יש למקם רקמת גידול או cecum ב-HBSS עם 2% FCS, מספיק כדי לכסות את הדגימה ולשמור על קרח.

4. ניתוח כתם מערבי של רקמת GIST

  1. הכינו מאגר ליזה של רקמות המכיל 50 mM TrisHCl (pH 7.5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% חומר ניקוי שאינו מתכלה, 2 mM Na3VO4, 1 mM PMSF, 10 mM NaF ותערובת מעכבי פרוטאינאז של 20 μl/ml.
  2. הכינו תמיסת מלח משולשת אחת עם 1x Tween 20 (TBST) על ידי שילוב של 1800 מ"ל של מים שעברו דה-יוניזציה, 2 מ"ל של Tween 20 ו-200 מ"ל של 10x מי מלח עם חיץ Tris (TBS).
  3. יש לבצע החייאה של רקמה משלב 3.4.3 בצינור FACS ב-5 מ"ל/גרם של חיץ ליזיס רקמתי ולהומוגניזציה פעמיים עם הומוגנייזר מכני ב-15,000 סל"ד במשך 15 שניות על קרח. דגירה ליזאטה במשך 30 דקות על קרח.
  4. מעבירים את הליזאט לצינור מיקרוצנטריפוג' בגודל 1.5 מ"ל. צנטריפוגה במהירות מקסימלית למשך 20 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. מעבירים את ה-supernatant לתוך צינור מיקרו-צנטריפוג' חדש.
  5. הפעילו ליאסטים על ג'ל שיפוע של 4% עד 15%, ואז העבירו לקרום ניטרוצלולוז, כמתוארב-14.
  6. יש לשטוף את הממברנה פעם אחת ב-1x TBS למשך 5 דקות ולאחר מכן לחסום את הממברנה בחלב 5% למשך שעה אחת. שוב, לשטוף קרום פעם אחת 1x TBS במשך 10 דקות.
  7. ממברנת הדגירה בנוגדן ראשוני מדולל 1:1000 ב-5% BSA ב-4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה. יש לשטוף את הממברנה 3x ב-1x TBST למשך 10 דקות כל אחת. כתם דגירה עם נוגדן משני מדולל 1:2500 בחלב 2.5% למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.
  8. יש לשטוף את הממברנה פעם אחת ב-1x TBS למשך 5 דקות. הוסף מספיק מצע HRP כדי לכסות את הממברנה, בדרך כלל 200-500 μL, והשתמש בתמונה דיגיטלית כדי לזהות ולכמת chemiluminescence.

5. אימונוהיסטוכימיה של רקמת GIST

  1. תקן רקמה משלב 3.3.2 או 3.4.3 ב 4% paraformaldehyde ב 4 ° C לילה. אחסן רקמות ב-70% EtOH עד שיהיה מוכן לעיבוד. הטמעה וחתך בלוקים בעובי של 5 מיקרומטר על גבי מגלשות זכוכית, כמתואר15,16.
  2. זיהוי אימונוהיסטוכימי מלא באמצעות ערכת אימונודציה בסיסית, כפי שתואר קודם לכן17.

6. השעיה חד-תאית של בלוטת המזנטרית

  1. יוצקים מדיית RPMI עם דגימת בלוטות לימפה משלב 3.3.2 מעל מסנן של 100 מיקרומטר. העבר את המסנן לבלוטות לימפה חרוטיות ומחתיות חדשות של 50 מ"ל עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק 3 מ"ל. מסנן שטיפה עם 20 מ"ל של מדיית RPMI.
  2. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g ב 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט.
  3. גלולת Resuspend ב-20 מ"ל של 1% FBS ב-PBS (מאגר חרוזים) ושופכת מעל מסנן של 40 מיקרומטר. לאסוף את תפיח התא. לספור תאים באמצעות המוציטומטר.
  4. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g ב 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט. Resuspend במאגר חרוזים ב 6 x 107 תאים / מ"ל עבור ציטומטריה זרימה.

7. השעיה של תא יחיד של GIST

  1. הכינו את מאגר הקולג'אנאז על ידי הוספת 250 מ"ג של קולגן IV, טבליה אחת של מעכב פרוטאז ללא EDTA ו-100 μL של DNase I ל-50 מ"ל של HBSS. יש לסובב במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר עד להמסה.
  2. מניחים את GIST במנה סטרילית ומוסיפים 2.5 מ"ל של מאגר קולגןאז. גידול טחון באמצעות אזמל סטרילי ומספריים עד שהגידול נמצא בשברים עדינים. השתמשו בפיפטה בור גדולה כדי לשאוף את הגידול ואת הקולגן לתוך צינור 50 מ"ל.
  3. דגירה באינקובטור רועד ב-100 סל"ד ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. תגובת מרווה עם 2 מ"ל של FBS.
  4. יוצקים קולגן עם דגימת GIST על מסנן של 100 מיקרומטר וגידול מחית עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק 3 מ"ל ואסוף בצינור 50 מ"ל. לשטוף מסנן עם 20 מ"ל של HBSS. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g, 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט.
  5. בצעו החייאה של הכדור ב-20 מ"ל של מאגר חרוזים ושפכו מעל מסנן של 40 מיקרומטר. לאסוף את התסיסים ולספור את התאים באמצעות המוציטומטר. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g, 4 ° C במשך 5 דקות. לשאוף את הסופרנאטנט. Resuspend במאגר חרוזים ב 6 x 107 תאים / מ"ל עבור ציטומטריה זרימה.

8. השעיה של תא יחיד של cecum

  1. הכינו מאגר קולגן כמו בשלב 7.1. באמצעות מספריים, לפצל את cecum אורכית כדי לחשוף את הרירית הפנימית. חותכים למקטעים של 0.5 ס"מ ומניחים בצינור 50 מ"ל עם 5 מ"ל של HBSS עם 2% FBS. יש לנער במרץ במשך 30 שניות, לצנטריפוגה ב-450 x גרם במשך 20 שניות, ואז לשאוף לסופרנאטנט.
  2. הוסף 5 מ"ל של HBSS עם 2 mM EDTA. דגירה באינקובטור רועד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ב-100 סל"ד למשך 15 דקות. צנטריפוגה ב 450 x g עבור 20 s. לשאוף את הסופרנאטנט.
  3. הוסף 5 מ"ל של HBSS. יש לנער במרץ במשך 30 שניות, לצנטריפוגה ב-450 x גרם במשך 20 שניות, ואז לשאוף לסופרנאטנט. חזור על הפעולה פעם נוספת.
  4. הוסיפו 5 מ"ל של מאגר קולגןאז. דגירה באינקובטור רועד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות ב-100 סל"ד. לנער במרץ כל 10 דקות. תגובת מרווה עם 2 מ"ל של FBS.
  5. יוצקים קולגן עם דגימת cecum על מסנן של 100 מיקרומטר ומחית עם הקצה הרך של מזרק פלסטיק 3 מ"ל. לשטוף מסנן עם 20 מ"ל של HBSS. לאסוף תבעיר.
  6. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g במשך 5 דקות ב 4 ° C. לשאוף את הסופרנאטנט. גלולת Resuspend ב 20 מ"ל של מאגר חרוזים לשפוך מעל מסנן 40 מיקרומטר. לאסוף תסיסים ולספור תאים באמצעות המוציטומטר.
  7. צנטריפוגה את התסיס ב 450 x g במשך 5 דקות ב 4 ° C. לשאוף את הסופרנאטנט. Resuspend במאגר חרוזים ב 6 x 107 תאים / מ"ל עבור ציטומטריה זרימה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מודל העכבר Kit V558Δ/+ מאפשר לחקור טיפולים במודל עכברים אימונו-תחרותי. לערכהV558Δ/+ לעכברים יש תוחלת חיים ממוצעת של 8 חודשים עקב חסימת מעיים מתקדמת (איור 4). גידולים מ-KitV558Δ/+ עכברים מבטאים סמנים קנוניים של GIST כולל הטירוזין קינאז KIT ותעלת הטרנס-ממברנה DOG1 (איור 5), כמו גם גורם השעתוק ETV1 (לא מוצג). ניתן לחקור גידולים לשינויים במ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מודל העכבר Kit V558Δ/+ הוא כלי מחקר רב עוצמה בניתוח מולקולרי ואימונולוגי של GIST. למרות שאסטרטגיית הרבייה דורשת צלב יחיד, שימוש בקבוצת עכברים Kit V558Δ/+ בניסויים המנתחים את תגובת הגידול דורש רבייה נרחבת. עכברים צריכים להיות מותאמי גיל ומין כדי להבטיח משקל גידול דומה, ו -10% מהעכברים מתים לפני גיל 8 שבועות כאשר הגידולים נוצרים. אסטרטגיות רבייה פחות נרחבות אפשריות אם משתמשים בטכניקות הדמיה מתקדמות כגון CT או MRI כדי לעקוב אחר נפח הגידול בתוך עכברים בודדים. אף על פי כן, עכברי Kit...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

עכברי קיטV558Δ/+ הונדסו גנטית ושותפו על ידי ד"ר פיטר בסמר10. עבודה זו נתמכה על ידי מענקי NIH R01 CA102613 ו- T32 CA251063.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מסנן 100 מיקרוןEMSCO1194-2360
1x מאגר ליזה RBCLife Technologies00-4333-57
מזרק 3 מ"לThermo Fisher Scientific/BD Biosciences14823435
4– 15% ג'ל חלבון טרומי Mini-PROTEAN TGX, 10 בארות, 30 ומיקרו; lBio-Rad4561083
4% תמיסת פרפורמלדהידתרמו פישר סיינטיפיקAAJ19943K2
מסנן 40 מיקרוןEMSCO1194-2340
5M NaClSigma AldrichS6546
מסנן 70 מיקרוןEMSCO1194-2350
נוגדן AKT (C67E7)איתות תאים4691
עכברי C57BL / 6Jג'קסון
קולגנאז IVסיגמא אולדריץ'C5138
מעכב פרוטאז מיני EDTA ללא EDTA שלםתומאס סיינטיפיקC852A34
הרוזנת II מונה תאים אוטומטיתרמו פישר
תרמופישר מדעי / אקסל אינטרנשיונל14-840-00
Dnase Iתומאס סיינטיפיקC756V81
Dog1 נוגדןabcamab64085
EDTASigma AldrichE9884
ERK נוגדן (p44/42)איתות סלולרי9102
FBSתומאס סיינטיפיקC788U23
תוכנת FIJIפיג'יhttps://imagej.net/software/fiji
פישרברנד 850 הומוגנייזרתרמו פישר סיינטיפיק15-340-169
HBSSהתאים של אוניברסיטת פנסילבניה
Imatinib mesylateSelleck ChemicalsS1026
KIT נוגדן (D13A2)איתות תאים3074
KitV558Δ/+ גנוטיפטרנסנטיקס
צינורות מיקרוצנטריפוגה (1.5 מ"ל)Thermo Fisher Scientific05-408-129
ערכת זיהוי חיסוני של עכבר על עכבר,מעבדות וקטורBMK-2202
קרום ניטרוצלולוזה, חתוך מראש, 0.45 ומיקרו; mRio-Rad1620145
חלב יבש ללא שומןתרמו פישר ScientificNC9121673
Nonidet P 40 תחליףסיגמא אולדריץ'74385
p-AKT נוגדן (S473)איתות תאים4060
p-ERK נוגדן (p44/42)איתות תאים9101
p-KIT נוגדן (Y719)איתות תאים3391
מעכב פרוטאז PMSFThermo Fisher Scientific36978
Proeinase KThermo Fisher ScientificBP170050
צינורות בדיקת פוליסטירן תחתון עגול (FACS)בז / תרמו פישר סיינטיפיק14-959-2A
RPMIמרכז
נתרן פלואוריד (NaF)סיגמא אולדריץ'
נתרן אורתוונדאט (Na3VO4)Sigma AldrichS6508
SuperSignal West Dura מצע משך מורחבThermo Fisher Scientific34076
TBS buffer (10x)של מרכז
(100 מ"מ)Thermo Fisher Scientific/Falcon08-772E
TrisHCLThermo Fisher ScientificBP1757500
Tween 20Rio-Rad1706531
  פלטפורמת vivaCT 80Scanco Medical
מעבדת אזמל חד פעמי מדעי מרכז בסיסיות התאים של אוניברסיטת פנסילבניה201154צלחת תרבית רקמות התאים של אוניברסיטת פנסילבניה

מקורות

  1. Mastrangelo, G., et al. Incidence of soft tissue sarcoma and beyond: a population-based prospective study in 3 European regions. Cancer. 118 (21), 5339-5348 (2012).
  2. Joensuu, H., DeMatteo, R. P. The management of gastrointestinal stromal tumors: a model for targeted and multidisciplinary therapy of malignancy. Annual Review of Medicine. 63, 247-258 (2012).
  3. Blanke, C. D., et al. Long-term results from a randomized phase II trial of standard- versus higher-dose imatinib mesylate for patients with unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors expressing KIT. Journal of Clinical Oncology. 26 (4), 620-625 (2008).
  4. Demetri, G. D., et al. Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib (GRID): an international, multicentre, randomised, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet. 381 (9863), 295-302 (2013).
  5. Gold, J. S. Outcome of metastatic GIST in the era before tyrosine kinase inhibitors. Annals of Surgical Oncology. 14 (1), 134-142 (2007).
  6. Huynh, H., et al. Sorafenib induces growth suppression in mouse models of gastrointestinal stromal tumor. Molecular Cancer Therapeutics. 8 (1), 152-159 (2009).
  7. Na, Y. S., et al. Establishment of patient-derived xenografts from patients with gastrointestinal stromal tumors: analysis of clinicopathological characteristics related to engraftment success. Scientific Reports. 10 (1), 7996(2020).
  8. Balachandran, V. P., et al. Imatinib potentiates antitumor T cell responses in gastrointestinal stromal tumor through the inhibition of Ido. Nature Medicine. 17 (9), 1094-1100 (2011).
  9. Vitiello, G. A., et al. Differential immune profiles distinguish the mutational subtypes of gastrointestinal stromal tumor. Journal of Clinical Investigation. 129 (5), 1863-1877 (2019).
  10. Sommer, G., et al. Gastrointestinal stromal tumors in a mouse model by targeted mutation of the Kit receptor tyrosine kinase. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (11), 6706-6711 (2003).
  11. Cavnar, M. J., et al. KIT oncogene inhibition drives intratumoral macrophage M2 polarization. Journal of Experimental Medicine. 210 (13), 2873-2886 (2013).
  12. Medina, B. D., et al. Oncogenic kinase inhibition limits Batf3-dependent dendritic cell development and antitumor immunity. Journal of Experimental Medicine. 216 (6), 1359-1376 (2019).
  13. Zhang, J. Q., et al. Macrophages and CD8(+) T cells mediate the antitumor efficacy of combined CD40 ligation and imatinib therapy in gastrointestinal stromal tumors. Cancer Immunology Research. 6 (4), 434-447 (2018).
  14. General Protocol for Western Blotting. , Available from: https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Buttetin_6376.pdf (2022).
  15. Sadeghipour, A., Babaheidarian, P. Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 253-268 (2019).
  16. Sy, J., Ang, L. -C. Microtomy: Cutting formalin-fixed, paraffin-embedded sections. Biobanking: Methods and Protocols. , Springer. New York. 269-278 (2019).
  17. Seifert, A. M., et al. PD-1/PD-L1 blockade enhances T-cell activity and antitumor efficacy of imatinib in gastrointestinal stromal tumors. Clinical Cancer Research. 23 (2), 454-465 (2017).
  18. Liu, M., et al. Oncogenic KIT modulates Type I IFN-mediated antitumor immunity in GIST. Cancer Immunology Research. 9 (5), 542-553 (2021).
  19. Rossi, F., et al. Oncogenic Kit signaling and therapeutic intervention in a mouse model of gastrointestinal stromal tumor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (34), 12843-12848 (2006).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

עכברים מהונדסים גנטיתמודל עכברים עם מערכת חיסונית תקינהמוטציה של קיט (Kit)מיקרו-סביבה של גידולציטומטריה של זרימהסספנסיה של תאים בודדיםבידוד חלבוניםמעכבי טירוזין קינאזדיסקציה של גידול
טכניקות מולקולריות ואימונולוגיות במודל עכבר מהונדס גנטית של גידול סטרומלי במערכת העיכול
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.