מאמר שיטה

אינדוקציה ומדדי הערכה מגוונים של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית

DOI:

10.3791/63866

⸱

9 בספטמבר 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Putuo People's Hospital, Shanghai Key Laboratory of Signaling and Disease Research, School of Life Sciences and Technology, Tongji University, 2National Laboratory of Biomacromolecules, CAS Center for Excellence in Biomacromolecules, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, 3Department of Infectious Diseases, Shanghai Key Laboratory of Infectious Diseases and Biosafety Emergency Response, National Medical Center for Infectious Diseases, Huashan Hospital, Fudan University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול הנוכחי מתאר אינדוקציה של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית במודל עכברי המשתמש בגליקופרוטאין מיאלין אוליגודנדרוציטים וניטור תהליך המחלה באמצעות מערכת ניקוד קלינית. תסמינים אוטואימוניים ניסיוניים הקשורים לאנצפלומיאליטיס מנותחים באמצעות ניתוח טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת של עצם הירך ובדיקת שדה פתוח כדי להעריך את תהליך המחלה באופן מקיף.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טרשת נפוצה (MS) היא מחלה אוטואימונית טיפוסית של מערכת העצבים המרכזית (CNS) המאופיינת בחדירה דלקתית, דה-מיאלינציה ונזק אקסונאלי. נכון לעכשיו, אין אמצעים לריפוי מלא של טרשת נפוצה, אך קיימים טיפולים רבים המשנים את המחלה (DMT) כדי לשלוט בהתקדמות המחלה ולמתן אותה. ישנם קווי דמיון משמעותיים בין התכונות הפתולוגיות של מערכת העצבים המרכזית של אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) לבין חולי טרשת נפוצה. EAE נמצא בשימוש נרחב כמודל מייצג כדי לקבוע את היעילות של תרופות לטרשת נפוצה ולחקור את הפיתוח של טיפולים חדשים למחלת טרשת נפוצה. אינדוקציה פעילה של EAE בעכברים היא בעלת השפעה יציבה וניתנת לשחזור והיא מתאימה במיוחד לחקר ההשפעות של תרופות או גנים על דלקת עצבית אוטואימונית. השיטה לחיסון עכברי C57BL/6J עם גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים מיאלין (MOG35-55) וההערכה היומית של תסמיני המחלה באמצעות מערכת ניקוד קלינית משותפת בעיקר. בהתחשב באטיולוגיה המורכבת של טרשת נפוצה עם ביטויים קליניים מגוונים, מערכת הניקוד הקלינית הקיימת אינה יכולה לספק את הערכת הטיפול במחלה. כדי למנוע את החסרונות של התערבות אחת, אינדיקטורים חדשים להערכת EAE בהתבסס על ביטויים קליניים של מצבי רוח דמויי חרדה ואוסטאופורוזיס בחולי טרשת נפוצה נוצרים כדי לספק הערכה מקיפה יותר של טיפול בטרשת נפוצה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלות אוטואימוניות הן ספקטרום של הפרעות הנגרמות על ידי התגובה החיסונית של מערכת החיסון לאנטיגנים שלה וכתוצאה מכך נזק לרקמות או תפקוד לקוי1. טרשת נפוצה (MS) היא מחלה אוטואימונית כרונית של פולינוירופתיה במערכת העצבים המרכזית (CNS), המאופיינת בחדירה דלקתית, דה-מיאלינציה וניוון אקסונאלי עצבי 2,3. נכון לעכשיו, טרשת נפוצה השפיעה על לא פחות מ-2.5 מיליון אנשים ברחבי העולם, רובם צעירים ואנשים בגיל העמידה בגילאי 20-40, שהם לעתים קרובות עמוד השדרה של משפחותיהם והחברה. זה גרם להשפעה רבה ופגיעה במשפחות ובחברה 2,4.

טרשת נפוצה היא מחלה רב-גורמית בעלת ביטויים קליניים מגוונים ומורכבים. בנוסף להפרעות נוירולוגיות קלאסיות המאופיינות בחדירה דלקתית ודה-מיאלינציה, טרשת נפוצה מראה לעתים קרובות ליקוי ראייה, דיסקינזיה של הגפיים והפרעות קוגניטיביות ורגשיות 5,6,7. אם חולי טרשת נפוצה לא יקבלו את הטיפול הנכון והראוי, מחציתם יחיו בכיסאות גלגלים לאחר 20 שנה, וכמעט מחציתם יחוו תסמיני דיכאון וחרדה, מה שיוביל לרמות גבוהות בהרבה של מחשבות אובדניות מאשר האוכלוסייה הכללית 8,9.

למרות תקופת מחקר ארוכה, האטיולוגיה של טרשת נפוצה נותרה חמקמקה, והפתוגנזה של טרשת נפוצה עדיין לא הובהרה. מודלים חייתיים של טרשת נפוצה אפשרו לשמש ככלי בדיקה לחקר התפתחות מחלות וגישות טיפוליות חדשות, למרות ההבדלים המשמעותיים בין מערכת החיסון של המכרסם למערכת החיסון האנושית, ובמקביל חולקים כמה עקרונות בסיסיים. אנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) היא כיום המודל החי האידיאלי לחקר טרשת נפוצה, המשתמשת בחסינות אוטואנטיגנית מחלבוני מיאלין כדי לגרום לאוטואימוניות למרכיבי CNS בעכברים רגישים, בתוספת אדג'ובנט מלא של פרוינד (CFA) ורעלן שעלת (PTX) כדי לשפר את התגובה החיסונית ההומורלית. בהתאם לרקע הגנטי ולאנטיגנים החיסוניים, מתקבלים תהליכי מחלה שונים, כולל חריפים, חוזרים-חוזרים או כרוניים, כדי לחקות צורות קליניות שונות של טרשת נפוצה10,11,12. האימונוגנים הרלוונטיים המשמשים בדרך כלל לבניית מודלים של EAE מגיעים מחלבוני CNS עצמיים, כגון חלבון בסיסי מיאלין (MBP), חלבון פרוטאוליפיד (PLP), או גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים (MOG). עכברי SJL/L מחוסני MBP או PLP מפתחים מסלול חוזר-חוזר, ו-MOG מפעיל EAE פרוגרסיבי כרוני בעכברי C57BL/611,12,13.

המטרה העיקרית של טיפול משנה מחלה (DMT) היא למזער את תסמיני המחלה ולשפר את התפקוד6. מספר תרופות משמשות קלינית כדי להקל על טרשת נפוצה, אך עדיין לא נעשה שימוש בתרופה כדי לרפא אותה לחלוטין, מה שחושף את הצורך בטיפול סינרגטי. עכברי C57BL/6 הם כיום הנפוצים ביותר לבניית עכברים מהונדסים, ובעבודה זו, מודל EAE המושרה על ידי MOG35-55 בעכברי C57BL/6J עם סולם של 5 נקודות שימש לניטור התקדמות המחלה. דוגמניות EAE סובלות גם ממצבי רוח דמויי חרדה ואובדן עצם, ומהנגעים הידועים בדמילין. כאן מתוארת גם השיטה להעריך את הסימפטומים של EAE מנקודות מבט מרובות באמצעות בדיקת שדה פתוח וניתוח טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (Micro-CT).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הוועדה לטיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת טונג'י אישרה את העבודה הנוכחית, וכל ההנחיות לטיפול בבעלי חיים בוצעו. עכברי C57BL/6J זכרים או נקבות בגילאי 8-12 שבועות שימשו לניסויים. הובטח כי הגיל והמין יהיו זהים בקבוצות הניסוי; אחרת, הרגישות למחלה הושפעה. עכברים שוכנו בסביבה ספציפית נטולת פתוגנים עם מחזורי אור וחושך מתחלפים של 12 שעות בתנאים קבועים (טמפרטורת החדר 23 ± 1 מעלות צלזיוס, לחות 50% ± 10%), עם גישה חופשית למזון ולמים של עכברים.

1. הכנת תחליבMOG 35-55

  1. הוסף שחפת מיקובקטריום מומת בחום (MTB, H37Ra) כדי להשלים את האדג'ובנט של פרוינד (עצמו מכיל 1 מ"ג/מ"ל של MTB מומת בחום, H37Ra), וכתוצאה מכך ריכוז MTB סופי של 5 מ"ג/מ"ל (ראו טבלת חומרים).
    הערה: יש להשלים את הפעולה כולה בארון הבטיחות הביולוגית; אין לפתוח את האוויר הנושב.
  2. ממיסים את פפטיד MOG35-55 שעבר ליאופיליזציה (ראו טבלת חומרים) עם תמיסת מלח חצובה (PBS) סטרילית מקוררת מראש (PBS) (ללא יוני סידן ומגנזיום, pH 7.4) כדי להכין את תמיסת האנטיגן בריכוז של 2 מ"ג/מ"ל.
  3. קח צינור מיקרוצנטריפוגה נקי של 2 מ"ל והוסף כדור פלדה אחד מעוקר בקוטר 5 מ"מ (ראה טבלת חומרים) לכל צינור.
  4. הוסף 500 μL של אדג'ובנט שלם של פרוינד המכיל 5 מ"ג/מ"ל של MTB ו-500 μL של תמיסת אנטיגן MOG35-55 לצינור המיקרוצנטריפוגה הנ"ל המכיל כדור פלדה אחד.
  5. מנדנדים את הצינור הנ"ל על TissueLyser (ראו טבלת חומרים) במשך 10 דקות, מצננים על קרח במשך 10 דקות, וחוזרים על הפעולה ארבע פעמים כדי לערבב אותו היטב ולבסוף יוצרים תמיסה צמיגה לבנה.
    הערה: תחליב טוב הוא שלב מפתח בהכנת תחליב MOG35-55 , ולכן נדרש ערבוב יסודי. ה- TissueLyser מוגדר למהירות של 28 הרץ.

2. הכנת רעלן שעלת (PTX)

  1. הכן PTX עם ddH2O לתוך ריכוז 100 מיקרוגרם / מ"ל ולאחסן ב 4 °C.
  2. דלל את תמיסת המלאי PTX 50 פעמים עם PBS סטרילי 1x (ללא יוני סידן ומגנזיום, pH 7.4) כדי ליצור תמיסה של 200 ננוגרם/100 מיקרון לשימוש.

3. הקמת מודל בעלי חיים EAE

  1. בנה את מודל EAE באמצעות עכברי C57BL/6J זכריים או נקביים בני 8-12 שבועות. ודאו שהעכברים התאקלמו כראוי בסביבת ההזנה לפני החיסון.
  2. צנטריפוגה של תחליב MOG35-55 מוכן (שלב 1) בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 2-3 שניות על ידי לחיצה על כפתור הדופק של הציוד (ראה טבלת חומרים) כדי לזרז את כל התחליבים בתחתית הצינור.
    הערה: ניתן לאחסן תחליב MOG35-55 בטמפרטורה של -20°C למשך מספר ימים. כדי למנוע כישלון סמים, מומלץ להשתמש בו בהקדם האפשרי.
  3. חברו מחט של 22 גרם לחבית מזרק של 1 מ"ל, שאפו את תחליב MOG 35-55 והעבירו את תחליב MOG35-55 לחבית מזרק חדשה של 1 מ"ל. אבטחו את החיבור בין חבית מזרק 1 מ"ל למחט 26 גרם עם סרט איטום (ראו טבלת חומרים).
    הערה: יש להימנע מבועות אוויר בעת טעינת תחליב MOG35-55 לתוך חביות מזרק 1 מ"ל.
  4. נגב וחטא את אתר ההזרקה עם 70% אתנול.
  5. להזריק את תחליב MOG35-55 תת עורית בכל צד של עמוד השדרה הגבי של העכברים, 100 μL בכל צד. שימו לב להיווצרות האוטומטית של המוני בולבוסים מתחת לעור הגב של העכברים לאחר השלמת פעולת ההזרקה.
    הערה: ודא שנסיינים מנוסים מבצעים את תהליך החיסון ושההזרקה מתבצעת בעדינות ובאיטיות כדי למזער את הלחץ על עכברים.
  6. להזריק לעכברים הנ"ל באופן תוך-צפקי 100 μL של PTX (שלב 2).
    הערה: יום החיסון הוא יום 0. כמו כן, ודא שניתן לזהות את העכברים במדויק לצורך הערכה יומית עוקבת, כגון שימוש בסמן צבע על זנב העכברים.
  7. להזריק את אותו מינון של PTX ביום 2 לאחר החיסון.
  8. הכינו קבוצה של עכברים לא מחוסנים כעכברים מסוג בר (WT).

4. ניטור קליני של עכברים

  1. רשום את משקל הגוף של עכברי EAE ו- WT מדי יום.
    הערה: חומרת EAE מתואמת באופן חיובי עם ירידה במשקל של עכברים, ולכן משקל הגוף הוא גם מדד ניטור חשוב מאוד.
  2. עקוב אחר מצב העכברים בין 0-21 יום לאחר החיסון באמצעות שיטת הניקוד 0-5 המפורטת בטבלה 1.
    הערה: התסמינים שביניהם נספרים כפלוס או מינוס 0.5 נקודות.

5. מבחן שדה פתוח

הערה: חיות הניסוי שנבחרו לשלב זה הן עכברי EAE בתקופות ההתחלה, השיא וההפוגה המוקדמות. בנוסף, עכברי WT שימשו כבקרה. יש לציין כי כל העכברים נבדקו להתנהגות דמוית חרדה לפני הדוגמנות כדי להוציא עכברים עם הפרעות חרדה למודלים של EAE. בנוסף, עכברי EAE בתקופות שיא והפוגה עם אי כושר מוטורי מלא לא נכללו במבחן.

  1. הכינו תא תגובת שדה פתוח בגודל 40 × 40 × 40 ס"מ3 ומערכת ניתוח וידאו של פעילות תנועה (שדה פתוח) (ראו טבלת חומרים).
    הערה: המצלמה מותקנת במצב המכסה לחלוטין את הקופסה, חדר התגובה מואר באופן שווה, וחדר הבדיקה נדרש להיות אזור שקט.
  2. הניחו את עכברי הבדיקה בחדר הבדיקה לצורך הרגלה של שעה לפני תחילת הניסוי.
  3. יש לרסס את כל האזור ב-70% אתנול ולנגב במגבת נייר נקייה כדי לוודא שתא התגובה נקי לפני תחילת הבדיקה.
  4. הסר כל עכבר בנפרד מהכלוב שלו והנח אותו באותה פינה של הזירה לפני שתתחיל לחקור.
    הערה: החלק התחתון של התיבה מחולק ל-16 רשתות, מתוכן אזור ארבע הרשתות האמצעיות הוא האזור המרכזי והסביבה היא האזור ההיקפי.
  5. לחץ על התחל ללכוד כפתור בשורת התפריטים של מערכת ניתוח הווידאו, הקלט זמן והתחל לצלם.
  6. שמרו על השקט בחדר הבדיקה.
  7. תן לעכבר לנוע בחופשיות במשך 5 דקות במהלך תהליך ההקלטה.
  8. עצור את מערכת הרכישה ושמור את הסרטון.
  9. הוציאו את העכבר מהזירה, החזירו אותו לכלוב והמשיכו לעכבר הבא.
    הערה: נקו את אזור הבדיקה עם 70% אתנול בין הריצות כדי להסיר ריחות וחומרים אחרים.
  10. נתח את התוצאות באמצעות מערכת ניתוח הווידאו.

6. ניתוח של פנוטיפ העצם

  1. הרדימו את עכברי EAE ו-WT על ידי נקע צוואר הרחם ביום ה-21.
    הערה: אנשי צוות המבצעים ניתוחי נקע צוואר הרחם חייבים להיות מאומנים היטב כדי למזער את הכאב הנגרם במהלך מותו של החיה.
  2. הפוך את העכבר לשכב שטוח במגש ניתוח ולתקן את הגפיים.
  3. החזק את עור הגפיים האחוריות של העכבר עם מלקחיים ופתח את עור העכבר ורקמת השריר עם מספריים.
  4. מפרידים בזהירות את עצם הירך מהשוקה ואת עצם הירך בעזרת מספריים.
  5. הסר את השריר הנדבק לעצם הירך עם מספריים והנח את עצם הירך ב 70% אתנול בטמפרטורת החדר.
  6. סרוק את עצם הירך הדיסטלית באמצעות מערכת מיקרו-CT (ראו טבלת חומרים) בגודל ווקסל איזוטרופי של 10 מיקרומטר, עם מתח שיא של צינור רנטגן של 70 קילו-וולט ועוצמת רנטגן של 0.114 mA.
    הערה: מסנן גאוס תלת-ממדי מאפשר סימון של תמונות סף דו-ממדיות.
  7. נתחו את 100 הפרוסות שנסרקו מפיר הירך האמצעי כדי למדוד פרמטרים של עצם הירך, כולל נפח עצם, נפח רקמה, צפיפות מינרלים בעצם, הפרדה טרבקולרית, מספר טרבקולרי, צפיפות חיבור טרבקולרי ועובי טרבקולרי וקליפת המוח.
    הערה: החל מהקצה הפרוקסימלי של לוחית הגדילה הדיסטלית של עצם הירך בעכברים, נמצאו מקטעים נטולי מבנים אפיפיזיים לחלוטין והמשיכו להרחיב 100 פרוסות לכיוון עצם הירך הפרוקסימלית, אשר שורטטו ידנית קווי מתאר בכמה ווקסלים הרחק מהמשטח קליפתי הפנימי כדי לזהות טרבקולה אפיפיזית.
  8. צור את השחזורים התלת-ממדיים על-ידי ערימת תמונות סף דו-ממדיות מאזורי קווי מתאר במערכת micro-CT.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאחר חיסון העכברים, משקל הגוף של העכברים נרשם מדי יום, והתסמינים הקליניים שלהם מוערכים על פי הפרוטוקול שתואר לעיל (שלב 4). בעכברי C57BL/6J המחוסנים בפפטיד MOG, מכיוון שמיקום הנגע מוגבל בעיקר לחוט השדרה, הפתוגנזה של עכברי EAE מתפשטת מקצה הזנב לראש. בתחילת המחלה, עכברי EAE מפגינים חולשה וצניחה של הזנב, ולאחר מכן חולשה של הגפיים האחוריות, תנועה לא מתואמת ושיתוק. ככל שהמחלה מחמירה, היא מתפתחת בהדרגה לחולשת הנולדים, שיתוק, ובמקרים חמורים, גורמת לקושי להזיז את העכברים ואף קרובה למוות. כפי שניתן לראות באיור...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

טרשת נפוצה היא מחלה דלקתית של מערכת העצבים המרכזית והיא אחת ההפרעות הנוירולוגיות הנפוצות ביותר הגורמות לנכות כרונית בקרב צעירים, ומטילה נטל עצום על המשפחות והחברה 3,4. טרשת נפוצה תמיד סווגה כמחלה אוטואימונית ספציפית לתאי T בתיווך, מה שגורם למערכת האוטואימונית לשחוק לאט את מערכת העצבים המרכזית, מה שמערב מערכות מרובות בכל הגוף27. תסמינים קליניים אופייניים כוללים ליקוי ראייה, הפרעות מוטוריות, הפרעות קוגניטיביות ורגשיות וכו'<...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מכירים בתמיכת הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (32070768, 31871404, 31900658, 32270754) והמעבדה הממלכתית לחקר תרופות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרק 1 מ"ל (עם מחט 26 גרם)שנחאי חביב מכשירים רפואיים ושות', בע"מ60017031
צינור מיקרוצנטריפוגה 2 מ"לHAIKELASIKY-LXG2A
22 G מחטשנחאי חביב מכשירים רפואיים ושות', בע"מ60017208
שלם Freund' s AdjuvantSigmaF5881מאוחסן בטמפרטורה של 4 מעלות; C, 1 מ"ג של MTB מושבת בחום (H37Ra) למ"ל
מערכת העדפת מקום מותנהשנחאי Jiliang תוכנה טכנולוגיה ושות', בע"מהתנהגות בעלי חיים
אתנולסינופארם מגיב כימי ושות', בע"מ10009218מאוחסן במערכת
ניתוח וידאו RT פעילות תנועה (שדה פתוח)שנחאי Jiliang תוכנה טכנולוגיה ושות', בע"מDigBehv-002התנהגות
בעלי חייםMOG35-55 פפטידGill Biochemical Co., LtdGLS-Y-M-03590מאוחסן ב-20 ° C
Mycobacterium tuberculosis H37RaBD231141מאוחסן בטמפרטורה של 4 מעלות; C
תא תגובה בשדה פתוחשנחאי Jiliang תוכנה טכנולוגיה ושות', בע"מהתנהגות בעלי חיים
רעלן שעלתCalbiochem516560מאוחסן בטמפרטורה של 4 מעלות; C
פוספט חוצץ מלחתוצרת המעבדה שלנו
מספרייםשנחאי מכשיר רפואי (קבוצה) ושות', בע"מJ21010
סרט איטוםהית'רו סיינטיפיקHS 234526B
Sorvall Legend Micro 21R מיקרוצנטריפוגהתרמו מדעי75002447
כדור פלדהQIAGEN69975
TissueLyser IIQIAGEN85300
פינצטהשנחאי מכשיר רפואי (קבוצה) ושות', בע"מJD1060
μ סורק מיקרו-CT שולחני CT 35Scanco Medical AG, Bassersdorf, שוויץ

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhernakova, A., Withoff, S., Wijmenga, C. Clinical implications of shared genetics and pathogenesis in autoimmune diseases. Nature Reviews Endocrinology. 9 (11), 646-659 (2013).
  2. Filippi, M., et al. Multiple sclerosis. Nature Reviews Disease Primers. 4 (1), 43(2018).
  3. Dobson, R., Giovannoni, G. Multiple sclerosis - a review. Europen Journal of Neurology. 26 (1), 27-40 (2019).
  4. Rietberg, M. B., Veerbeek, J. M., Gosselink, R., Kwakkel, G., van Wegen, E. E. Respiratory muscle training for multiple sclerosis. Cochrane Database of Systematic Reviews. 12 (12), (2017).
  5. O'Brien, K., Gran, B., Rostami, A. T-cell based immunotherapy in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis. Immunotherapy. 2 (1), 99-115 (2010).
  6. Feinstein, A., Freeman, J., Lo, A. C. Treatment of progressive multiple sclerosis: what works, what does not, and what is needed. Lancet Neurology. 14 (2), 194-207 (2015).
  7. Li, H., Lian, G., Wang, G., Yin, Q., Su, Z. A review of possible therapies for multiple sclerosis. Molecular and Cellular Biochemistry. 476 (9), 3261-3270 (2021).
  8. Lewis, V. M., et al. depression and suicide ideation in people with multiple sclerosis. Journal of Affective Disorders. 208, 662-669 (2017).
  9. Boeschoten, R. E., et al. Prevalence of depression and anxiety in Multiple Sclerosis: A systematic review and meta-analysis. Journal of the Neurological Sciences. 372, 331-341 (2017).
  10. Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O'Brien, K., Gran, B. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS). British Journal of Pharmacology. 164, 1079-1106 (2011).
  11. Glatigny, S., Bettelli, E. Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) as Animal Models of Multiple Sclerosis (MS). Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 8 (11), 028977(2018).
  12. Procaccini, C., De Rosa, V., Pucino, V., Formisano, L., Matarese, G. Animal models of Multiple Sclerosis. European Journal of Pharmacology. 759, 182-191 (2015).
  13. Mix, E., Meyer-Rienecker, H., Hartung, H. P., Zettl, U. K. Animal models of multiple sclerosis-potentials and limitations. Progress in Neurobiology. 92 (3), 386-404 (2010).
  14. DiToro, D., et al. Insulin-like growth factors are key regulators of T helper 17 regulatory T cell balance in autoimmunity. Immunity. 52 (4), 650-667 (2020).
  15. Jain, R., et al. Interleukin-23-induced transcription factor Blimp-1 promotes pathogenicity of T helper 17 cells. Immunity. 44 (1), 131-142 (2016).
  16. Du, C., et al. Kappa opioid receptor activation alleviates experimental autoimmune encephalomyelitis and promotes oligodendrocyte-mediated remyelination. Nature Communications. 7, 11120(2016).
  17. Yang, C., et al. Betaine Ameliorates Experimental Autoimmune Encephalomyelitis by Inhibiting Dendritic Cell-Derived IL-6 Production and Th17 Differentiation. The Journal of Immunology. 200 (4), 1316-1324 (2018).
  18. McGinley, A. M., et al. Interleukin-17A serves a priming role in autoimmunity by recruiting IL-1β-producing myeloid cells that promote pathogenic T cells. Immunity. 52 (2), 342-356 (2020).
  19. Kocovski, P., et al. Differential anxiety-like responses in NOD/ShiLtJ and C57BL/6J mice following experimental autoimmune encephalomyelitis induction and oral gavage. Laboratory Animals. 52 (5), 470-478 (2018).
  20. Seibenhener, M. L., Wooten, M. C. Use of the Open Field Maze to measure locomotor and anxiety-like behavior in mice. Journal of Visualized Experiments. (96), e52434(2015).
  21. Walsh, R. N., Cummins, R. A. The Open-Field Test: a critical review. Psychological Bulletin. 83 (3), 482-504 (1976).
  22. Tauil, C. B., et al. Depression and anxiety disorders in patients with multiple sclerosis: association with neurodegeneration and neurofilaments. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 54 (3), 10428(2021).
  23. Gentile, A., et al. Interaction between interleukin-1beta and type-1 cannabinoid receptor is involved in anxiety-like behavior in experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Neuroinflammation. 13, 231(2016).
  24. Hearn, A. P., Silber, E. Osteoporosis in multiple sclerosis. Multiple Sclerosis. 16, 1031-1043 (2010).
  25. Gibson, J. C., Summers, G. D. Bone health in multiple sclerosis. Osteoporosis International. 22, 2935-2949 (2011).
  26. Ye, S., Wu, R., Wu, J. Multiple sclerosis and fracture. The International Journal of Neuroscience. 123, 609-616 (2013).
  27. Zamvil, S. S., et al. Lupus-prone' mice are susceptible to organ-specific autoimmune disease, experimental allergic encephalomyelitis. Pathobiology. 62 (3), 113-119 (1994).
  28. Oh, J., Vidal-Jordana, A., Montalban, X. Multiple sclerosis: clinical aspects. Current Opinion in Neurology. 31 (6), 752-759 (2018).
  29. Smith, P. Animal models of multiple sclerosis. Current Protocols. 1 (6), 185(2021).
  30. Aharoni, R., Globerman, R., Eilam, R., Brenner, O., Arnon, R. Titration of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)-Induced experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model. Journal of Neuroscience Methods. 351, 108999(2021).
  31. Lassmann, H., Bradl, M. Multiple sclerosis: experimental models and reality. Acta Neuropathological. 133 (2), 223-244 (2017).
  32. Goverman, J., Perchellet, A., Huseby, E. S. The role of CD8(+) T cells in multiple sclerosis and its animal models. Current Drug Targets. Inflammation and Allergy. 4 (2), 239-245 (2005).
  33. Schultz, V., et al. Acutely damaged axons are remyelinated in multiple sclerosis and experimental models of demyelination. Glia. 65 (8), 1350-1360 (2017).
  34. McRae, B. L., et al. Induction of active and adoptive relapsing experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) using an encephalitogenic epitope of proteolipid protein. Journal of Neuroimmunology. 38 (3), 229-240 (1992).
  35. Zamvil, S., et al. T-cell clones specific for myelin basic protein induce chronic relapsing paralysis and demyelination. Nature. 317 (6035), 355-358 (1985).
  36. Jackson, S. J., Lee, J., Nikodemova, M., Fabry, Z., Duncan, I. D. Quantification of myelin and axon pathology during relapsing progressive experimental autoimmune encephalomyelitis in the Biozzi ABH mouse. Journal of Neuropathology and Experimental Neurology. 68 (6), 616-625 (2009).
  37. Gudi, V., Gingele, S., Skripuletz, T., Stangel, M. Glial response during cuprizone-induced de- and remyelination in the CNS: lessons learned. Frontiers in Cellular Neuroscience. 8, 73(2014).
  38. Yu, Q., et al. Strain differences in cuprizone induced demyelination. Cell & Bioscience. 7, 59(2017).
  39. Dehghan, S., Aref, E., Raoufy, M. R., Javan, M. An optimized animal model of lysolecithin induced demyelination in optic nerve; more feasible, more reproducible, promising for studying the progressive forms of multiple sclerosis. Journal of Neuroscience Methods. 352, 109088(2021).
  40. Kuypers, N. J., James, K. T., Enzmann, G. U., Magnuson, D. S., Whittemore, S. R. Functional consequences of ethidium bromide demyelination of the mouse ventral spinal cord. Experimental Neurology. 247, 615-622 (2013).
  41. Haji, N., et al. TNF-alpha-mediated anxiety in a mouse model of multiple sclerosis. Experimental Neurology. 237, 296-303 (2012).
  42. Butler, E., Matcham, F., Chalder, T. A systematic review of anxiety amongst people with Multiple Sclerosis. Multiple Sclerosis and Related Disorders. 10, 145-168 (2016).
  43. Peres, D. S., et al. TRPA1 involvement in depression- and anxiety-like behaviors in a progressive multiple sclerosis model in mice. Brain Research Bulletin. 175, 1-15 (2021).
  44. Bouxsein, M. L., et al. Guidelines for assessment of bone microstructure in rodents using micro-computed tomography. Journal of Bone and Mineral Research. 25 (7), 1468-1486 (2010).
  45. Chappard, D., Retailleau-Gaborit, N., Legrand, E., Baslé, M. F., Audran, M. Comparison insight bone measurements by histomorphometry and microCT. Journal of Bone and Mineral Research. 20 (7), 1177-1184 (2005).
  46. Akhter, M. P., Lappe, J. M., Davies, K. M., Recker, R. R. Transmenopausal changes in the trabecular bone structure. Bone. 41 (1), 111-116 (2007).
  47. Wei, H., et al. Identification of Fibroblast Activation Protein as an Osteogenic Suppressor and Anti-osteoporosis Drug Target. Cell Reports. 33 (2), 108252(2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים