כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת קסנושתרים אורתוטופיים של קרצינומה הפטוצלולרית עם ובלי קשירת עורק הכבד ומבצעים הדמיית טומוגרפיה לא פולשנית של פליטת פוזיטרונים (PET) של היפוקסיה גידולית באמצעות [18 F]Fluoromisonidazole ([18 F]FMISO) ו- [18 F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG).
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הדמיית PET/MR לא פולשנית במודל עכבר אורתוטופי של קרצינומה הפטוצלולרית
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מודלים ניסיוניים פרה-קליניים של קרצינומה הפטוצלולרית (HCC) המחזירים מחלות אנושיות מייצגים כלי חשוב לחקר גידולים ולהערכת גישות טיפוליות חדשניות. הדמיה לא פולשנית של כל הגוף באמצעות טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים (PET) מספקת תובנות קריטיות לגבי מאפייני in vivo של רקמות ברמה המולקולרית בזמן אמת. אנו מציגים כאן פרוטוקול ליצירת קסנוגרפט HCC אורתוטופי עם וללא קשירת עורק כבד (HAL) כדי לגרום להיפוקסיה של הגידול והערכת חילוף החומרים של הגידול שלהם in vivo באמצעות [18 F]Fluoromisonidazole ([18 F]FMISO) ו- [18 F]Fluorodeoxyglucose ([18F]FDG) PET/הדמיית תהודה מגנטית (MR). ניתן היה לדמיין היפוקסיה של הגידול בקלות באמצעות סמן ההיפוקסיה [18 F]FMISO, ונמצא כי ספיגת [18 F]FMISO הייתה גבוהה יותר בעכברי HCC שעברו HAL מאשר בקבוצה שאינה HAL, בעוד [18F]FDG לא יכול היה להבחין בהיפוקסיה גידולית בין שתי הקבוצות. גידולי HAL הראו גם רמה גבוהה יותר של ביטוי גורם היפוקסיה (HIF)-1α בתגובה להיפוקסיה. כימות גידולי HAL הראה עלייה של פי 2.3 בספיגת [18F]FMISO בהתבסס על גישת ספיגת הערך המתוקנן (SUV).
מבוא
קרצינומה הפטוצלולרית (HCC) היא הסרטן השישי המאובחן ביותר וגורם המוות השלישי בשכיחותו מסרטן ברחבי העולם, עם יותר מ -900,000 מקרים חדשים ו -800,000 מקרי מוות בשנת 20201. גורם הסיכון העיקרי הוא שחמת הכבד, המתרחשת כתוצאה מזיהומים ויראליים (נגיפי הפטיטיס B ו- C), שימוש לרעה באלכוהול, סוכרת וסטאטוהפטיטיס2 שאינו אלכוהולי. הניהול של HCC הוא מורכב למדי, ומספר אפשרויות טיפול זמינות, כולל כריתה כירורגית, אבלציה תרמית או כימית, השתלה, כימואמבוליזציה transarterial, הקרנות, וכימותרפיה, בהתאם למחלה היערכות 2,3. HCC הוא גידול עמיד לכימותרפיה עם הישנות המחלה בעד 70% מהחולים לאחר ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל המחקרים בבעלי חיים בוצעו בהתאם לוועדה לשימוש בבעלי חיים בהוראה ובמחקר (CULATR) במרכז לחקר רפואה השוואתית (CCMR) באוניברסיטת הונג קונג, תוכנית המוכרת על ידי האגודה להערכה והסמכה של טיפול בחיות מעבדה בינלאומיות (AAALAC). החיות ששימשו במחקר היו נקבות עכברים BALB/cAnN-nu (עירום) בגיל 6-8 שבועות, במשקל של 20 גרם ± 2 גרם. מזון ומים סופקו עד לליביטום.
1. הזרקה תת עורית של קווי תאי קרצינומה הפטוצלולרית האנושית
הערה: MHCC97 הוא קו תאי HCC אנושי המשמש ליצירת מודל HCC xenograft תת עורי. תאי MHCC97L מתקבלים מהמכון לסרטן הכבד, בית החולים Zhongshan של אוניברסיטת פודאן, שנחאי, הרפובליקה העממית של סין<....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כדי להשיג בלוק גידול מתאים להשתלה אורתוטופית עוקבת, שיבוטים יציבים נוצרו תחילה על-ידי הזרקה תת-עורית של 200 מיקרוליטר של תרחיף תאים ב-DPBS (המכיל תאי MHCC97L) לתוך האגף התחתון של עכברים עירומים (איור 1A). צמיחת הגידול נוטרה, וכאשר גודל הגידול הגיע ל 800-1000 מ"מ 3 (כ -4 שבועות לאחר ההזרקה), עכברים הורדמו, וגוש הגידול שנוצר נחתך לכ 1 מ"מ3 מקטעים להשתלה אורתוטופית בכבד לאחר מכן בקבוצה אחרת של עכברים עירומים (n = 6). עכברים חולקו באקראי לשתי קבוצות: קבוצת ביקורת (C1, n = 3.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במחקר זה, תיארנו את ההליכים לביצוע HAL על HCC xenografts אורתוטופי בכבד באמצעות גידולים תת עוריים, יחד עם שיטות לניטור לא פולשני של היפוקסיה גידולית ב xenografts אורתוטופיים באמצעות [18 F]FMISO ו [18F]FDG PET/MR. העניין שלנו הוא הדמיה מטבולית של מודלים שונים של סרטן ומחלות לאבחון מוקדם והערכת תגובה לטיפול11,13,14,15. עד כה, יצירת HAL HCC xenografts ומטבוליזם הגידול in .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.
תודות
אנו מודים על תמיכתה של קרן הנאמנות נגד סרטן של הונג קונג, קרן המחקר השיתופית של מועצת מענקי המחקר של הונג קונג (CRF C7018-14E) לניסויי הדמיה בבעלי חיים קטנים. אנו מודים גם לתמיכת המרכז לדימות מולקולרי וציקלוטרון רפואי (MIMCC) באוניברסיטת הונג קונג על אספקת [18 F]FMISO ו- [18F]FDG.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.9% מי מלח סטריליים | BBraun | N/A | 0.9% נתרן כלוריד עירוי תוך ורידי, 500 מ"ל |
| 10# להב אזמל | RWD Life Science Co., ltd | S31010-01 | כלי לניתוח בעלי חיים |
| 10% תמיסת פובידון-יוד | Banitore | 6.425.678 | לחיטוי |
| מחט 25G עם מזרק 1 מ"ל | BD PrecisionGlide | N/A | מזרק 1 מ"ל עם מחט 25G לזריקות מתלי תאים |
| מזרק 5 מ"ל | Terumo | SS05L | 5 מ"ל מזרק Luer Lock |
| 70% אתנול | Merck | 1.07017 | לחיטוי |
| אוטומטי מונה תאים | Invitrogen | AMQAF2000 | לספירת תאים אוטומטית |
| Buprenorphine | HealthDirect | N/A | הזרקה תת עורית (0.05-0.2 מ"ג/ק"ג/12 שעות) עבור משכך כאבים לאחר ניתוח |
| צלחת תרבית תאים (קוטר 60 מ"מ) | Thermo Scientific | 150462 | לעיבוד רקמות גידול |
| צנטריפוגה | סיגמא | 3-16KL, רוטור זווית קבועה 12311 | לאיסוף תרחיפי תאים |
| צינור חרוטי | Eppendorf | EP0030122151 | לאיסוף תרחיפי תאים |
| מדיית תרבית (Dulbecco' s שונה Eagle' s בינוני) | Gibco | 10566024 | גלוקוז גבוה, GlutaMAX™ תוסף |
| קליפר דיגיטלי | RS PRO | 841-2518 | למדידת גודל גידול תת עורי |
| חום ישיר CO2 incubator | Techcomp Limited | NU5841 | לכיול |
| מינון | תרבית תאים Biodex | לא ישים Atomlab | 500 |
| DPBS (Dulbecco' s תמיסת מלח חוצצת פוספט) | Gibco | 14287072 | לשטיפת תאים והזרקה |
| חומר סיכה לעיניים | Alcon Duratears | N/A | משחת סיכה סטרילית לעיניים, 3.5 גרם |
| סרום בקר עוברי (FBS) | Gibco | A4766801 | משמש למגוון רחב של סוגי תאים, במיוחד קווי תאים רגישים |
| מלקחיים (קהים עדינים וישרים) | RWD Life Science Co., ltd | F12012-10 & F12011-13 | כלי לניתוחי בעלי חיים |
| כרית חימום | ALA מכשירים מדעיים | N/A | כרית חום לעכברים במהלך ניתוח |
| מזרק אינסולין | Terumo | 10ME2913 | מזרק אינסולין 1 מ"ל עם מחט להזרקות רדיואקסר |
| תוכנת היתוך InterView | Mediso | גרסה 3.03 | תוכנת עיבוד וניתוח תמונה |
| מיקרוסקופ הפוך | Yu Lung סיינטיפיק ושות', בע"מ | BM-209G | להדמיית מורפולוגיה של תאים |
| Isoflurane | Chanelle Pharma | Iso-Vet | , חומר הרדמה באינהלציה, 250 מ"ל |
| קטמין | Alfasan International B.V. | HK-37715 | תמיסת הזרקת קטמין 10%, 10 מ"ל |
| חמצן רפואי | Linde HKO | 101-HR | גז דחוס, 99.5% טוהר |
| nanoScan PET/MR סורק | Mediso | N / | A 3 טסלה MR |
| מחזיק מחט | RWD מדעי החיים ושות', בע"מ | F31026-12 | כלי ניתוח בעלי חיים |
| Nucline nanoScan תוכנה | Mediso | גרסה 3.0 | תוכנת הפעלה |
| סורק תפר ניילון (6/0 ו- 5/0) | Healthy Medical Company Ltd | 000524 & 000526 | כלי לניתוח בעלי חיים |
| פניצילין- סטרפטומיצין | Gibco | 15140122 | אמצעי תרבית לריכוז סופי של 50 עד 100 יחב"ל/מ"ל פניצילין ו-50 עד 100 ומיקרו; גרם/מ"ל סטרפטומיצין. |
| Pentabarbital | AlfaMedic | 13003 | הזרקה תוך צפקית (330 מ"ג/ק"ג) כדי לגרום להפסקת נשימה של עכברים |
| מספריים חדים | RWD Life Science Co., ltd | S14014-10 | כלי לניתוח בעלי חיים |
| מספריים אביב | RWD Life Science Co., ltd | S11005-09 | כלי לניתוח בעלי חיים |
| Trypan Blue Solution, 0,4% | Gibco | 15250061 | לספירת תאים |
| חומצה טריפסין-אתילנדיאמינטטראצטית (EDTA, 0.25%), פנול אדום. | Gibco | 25200072 | לעיכול תאים |
| Xylazine | Alfasan International B.V. | HK-56179 | תמיסת הזרקת קסילזין 2%, 30 מ"ל |
מקורות
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Chen, C., Lou, T.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
