הדמיה של מיאלינציה היא מטרה חשובה עבור חוקרים רבים החוקרים את מערכת העצבים. CARS היא טכניקה התואמת את האימונופלואורסצנציה שיכולה לדמות באופן טבעי שומנים בתוך רקמות כגון המוח המאיר מבנים מיוחדים כגון מיאלין.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
יישום ספקטרוסקופיית ראמן קוהרנטית נגד סטוקס (CARS) להדמיית מיאלינציה בפרוסות מוח
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
ספקטרוסקופיית ראמן קוהרנטית נגד סטוקס (CARS) היא טכניקה המשמשת באופן קלאסי על ידי כימאים ופיזיקאים כדי לייצר אות קוהרנטי של תנודות חתימה של מולקולות. עם זאת, חתימות רטט אלה אופייניות גם למולקולות בתוך רקמה אנטומית כמו המוח, מה שהופך אותו יותר ויותר שימושי וישים עבור יישומים במדעי המוח. לדוגמה, CARS יכולה למדוד שומנים על ידי קשרים כימיים מרגשים במיוחד בתוך מולקולות אלה, מה שמאפשר כימות של היבטים שונים של רקמות, כגון מיאלין המעורב בהעברה עצבית. בנוסף, בהשוואה לטכניקות אחרות המשמשות בדרך כלל לכימות מיאלין, ניתן גם להגדיר את CARS כך שיהיה תואם לטכניקות אימונופלואורסצנטיות, מה שמאפשר תיוג משותף עם סמנים אחרים כגון תעלות נתרן או רכיבים אחרים של העברה סינפטית. שינויים במיאלינציה הם מנגנון חשוב מטבעו במחלות דה-מיאלינציה כגון טרשת נפוצה או מצבים נוירולוגיים אחרים כגון תסמונת X שביר או הפרעות בספקטרום האוטיזם הוא תחום מחקר מתפתח. לסיכום, ניתן להשתמש ב-CARS בדרכים חדשניות כדי לענות על שאלות בוערות במדעי המוח ולספק ראיות למנגנונים בסיסיים הקשורים למצבים נוירולוגיים רבים ושונים.
מבוא
פוטנציאל פעולה הוא יחידת המידע הבסיסית במוח, ופוטנציאל פעולה המתפשט באמצעות אקסונים מהווה נדבך אחד של עיבוד מידע 1,2,3. תאי עצב בדרך כלל מקבלים קלטים ממספר תאי עצב אחרים ומשלבים את הקלטים האלה בחלון זמן צר נתון 4,5. לכן, מנגנוני הפעולה של התפשטות פוטנציאלית באקסונים קיבלו כמות משמעותית של תשומת לב מהחוקרים.
בעת התפשטות דרך אקסון, פוטנציאל פעולה מתחדש שוב ושוב לאורך האקסון כדי להבטיח התפשטות אמינה6. ברוב תאי העצב של בעלי חוליות לסתות (gnathostomes) אקסונים מוקפים בנדן של מיאלין, שהוא חומר עשיר בשומנים המיוצר על ידי אוליגודנדרוציטים סמוכים או תאי שוואן, שהם סוגים של תאי גליה (שנסקרוב-7,8). מעטפת המיאלין הזו מבודדת חשמלית את האקסון, מפחיתה את קיבוליותו ומאפשרת התפשטות פוטנציאלית של פעולה ביעילות, במהירות ובצריכת אנרגיה נמוכה יותר. המיאלין אינו מכסה את האקסון באופן אחיד, אך הוא עוטף את האקסון במקטעים שיש ביניהם רווחים קצרים, הנקראים הצמתים של Ranvier (נסקרב-9,10). הן עובי המיאלינציה, השולט ברמת הבידוד החשמלי של אקסון, והן הריווח של הצמתים של Ranvier, השולטים בתדירות שבה פוטנציאל הפעולה מתחדש לאורך אקסון, משפיעים על מהירות התפשטות פוטנציאל הפעולה (נבדק ב-11).
ישנה ספרות גדולה המציעה כי עובי המיאלינציה משפיע על מהירות ההתפשטות הפוטנציאלית של הפעולה באקסונים12,13,14. יתר על כן, שינויים במיאלינציה של האקסון יכולים לגרום למספר גירעונות CNS 15,16,17,18,19,20,21. לכן אין זה מפתיע שהתמקדות במאמצי מחקר רבים כרוכה במדידה ואפיון של אקסון מיאלינציה. מדידות של עובי המיאלין נעשו לרוב באמצעות מיקרוסקופיית אלקטרונים, טכניקה הדורשת כמות משמעותית של הכנת רקמות ומאתגרת לשימוש בשילוב עם אימונוהיסטוכימיה. עם זאת, יש גם טכניקה מהירה ופשוטה יותר למדידת מיאלינציה של אקסון המבוססת על ספקטרוסקופיית ראמן קוהרנטית נגד סטוקס (CARS). ניתן לכוונן לייזר CARS לתדרים שונים וכאשר מכוונים אותו לתדרים המתאימים לעורר שומנים, ניתן לדמות את המיאלין ללא צורך בתוויות נוספות22. ניתן לשלב את הדמיית השומנים עם אימונוהיסטוכימיה סטנדרטית כך שניתן לדמות שומנים יחד עם מספר תעלות פלואורסצנטיות23. הדמיה של מיאלינציה עם CARS מהירה משמעותית ממיקרוסקופיית אלקטרונים ויש לה רזולוציה שהיא, אם כי נמוכה יותר מ- EM, מספיקה כדי לזהות אפילו הבדלים קטנים במיאלינציה באותו סוג של אקסונים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל הניסויים עמדו בכל החוקים החלים, הנחיות המכונים הלאומיים לבריאות, ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת קולורדו אנשוץ.
1. בעלי חיים
- השתמש בעכברי C57BL/6J (מלאי #000664) (Mus musculus ) שהתקבלו ממעבדת ג'קסון או גרבילים מונגולים (Meriones unguiculatus) שהתקבלו במקור מנהר צ'ארלס.
2. הכנת רקמות
- עבור זלוף שריר הלב, מנת יתר של מיני מכרסמים בעלי עניין עם פנטוברביטל (120 מ"ג/ק"ג משקל גוף) וטרנס-קרדית מחלחלים אליהם עם תמיסת מלח חוצצת פוספט (PBS; 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.76 mM KH 2 PO 4, 10 mM Na2HPO 4)ואחריה4% paraformaldehyde (PFA)24.
- באופן ספציפי, לפתוח את הבטן ואת כלוב הצלעות באמצעות מספריים להחזיק את כלוב הצלעות במקום עם מלקחיים hemostatic קלי כדי לחשוף את הלב.
- יש להחדיר מחט 23 GA המחוברת למשאבת זלוף לחדר השמאלי ולחתוך במהירות את האטריום הימני באמצעות מספריים עדינים.
- יש לתת PBS דרך משאבת הזלוף והמחט בלב למשך 10 דקות כדי לנקות את המוח והגוף מדם.
- החלף את משאבת הזלוף ל- 4% PFA למשך 10 דקות ובדוק את קשיחות הגפיים והזנב כדי לאשר זלוף מוצלח.
- לאחר הזילוף, ערפו את בעלי החיים והסירו את מוחם מהגולגולת. השאירו את המוחות למשך הלילה ב-4% PFA לפני המעבר ל-PBS. מטמיעים את גזעי המוח ב-4% אגרוז (ב-PBS) ופורסים באופן קורונלי באמצעות ויברטום בעובי של 200 מיקרומטר.
3. מכתים
- חלקים צפים נטולי כתמים עבור Nissl, כדי לדמיין גופי תאים (1:100), במדיית נוגדנים (מדיה AB: 0.1 M חיץ פוספט (PB: 50 mM KH 2 PO 4,150 mM Na2HPO4), 150 mM NaCl, 3 mM Triton-X, 1% אלבומין בסרום בקר (BSA)) למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר על שייקר מעבדה סטנדרטי25.
- יש להגן על חלקים מפני אור באמצעות רדיד אלומיניום ו/או כיסוי. אורכי גל של 550 ננומטר ומטה תואמים להדמיית CARS (איור 1).
הערה: בעוד שאיננו מצפים של-Triton-X או לריאגנטים אחרים תהיה השפעה על הדמיית שומנים ב-CAS, ייתכן שיהיה צורך בבקרות נוספות עם מדיית נוגדנים ספציפית.
- יש להגן על חלקים מפני אור באמצעות רדיד אלומיניום ו/או כיסוי. אורכי גל של 550 ננומטר ומטה תואמים להדמיית CARS (איור 1).
- נקודת השהיה: אחסן חלקים צפים חופשיים (כאשר הם מוגנים מפני אור) ב- PBS עד להדמיה. לאחר הניתוח, התמונה מקטעי מוח תוך שבועיים.
איור 1: ניתן לשלב הדמיית CARS עם הדמיה אימונופלואורסצנטית. הגרפים מראים כי הדמיית CARS מתרחשת בספקטרום אות אדום 660/640 ננומטר26. אורך גל זה רחוק מספיק מתחום הירוק, הכחול או ה-UV, מה שמאפשר שילוב של אות ה-CARS עם אימונופלואורסצנציה בטווחים אלה. באופן ספציפי, הגרף מציין גם את העירור והפליטה עבור ניסל המתויג עם פלואורופור כחול, אשר שולב עם CARS במהלך איסוף התוצאות הייצוגיות עבור פרסום זה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.
4. הדמיה
הערה: מערך הלייזר של CARS מכיל לייזר סיבים המספק את השעון של 80 MHz, ולייזר OPO (מתנד פרמטרי אופטי) עם טווח כוונון של 770-990 ננומטר כאשר קרן סטוקס קבועה ב- 1031 ננומטר, הדרושים לאיסוף אות ה- CARS. יש צמצם אחד לשתי הקורות.
- לפני הבאת דגימות למיקרוסקופ, הפעל וחמם את לייזר CARS למשך שעה אחת לפחות, יישר את לייזר ה- CARS, ואת Koehler את אופטיקת המעבה ואת הסרעפת של המיקרוסקופ להדמיית CARS קדימה.
הערה: שלב זה הוא קריטי לתפקוד תקין של מיקרוסקופיה של CARS.- ליישור מרחבי של שתי קרני הלייזר (משאבה וסטוקים), גש לשני קובצי ה-PSD הפנימיים (גלאים רגישים למיקום) באמצעות ממשק המשתמש הגרפי של לייזר CARS.
- השג יישור זמני באמצעות פונקציית ההשהיה בממשק המשתמש הגרפי של לייזר CARS, שיכולה לעזור לחפוף את הפולסים של שני הלייזרים (משאבה וסטוקס) בעלי פיזור שונה בגלל אורכי הגל השונים שלהם. לכן, הן החפיפה הטמפורלית והן החפיפה המרחבית של קורות המשאבה והסטוקים נעשות עם קלט המשתמש דרך ממשק המשתמש הגרפי.
- כוונן את הפריסקופ החיצוני (שתי המראות האחרונות של המערך) כדי למרכז את שני הלייזרים החופפים מרחבית על מראות ראש הסריקה של המיקרוסקופ.
- לזיהוי הטוב ביותר של CARS ללא עיבוי, ודא שהמעבה הוא Koehler-ed (כלומר המעבה ממורכז וממוקד בסרעפת כדי להשיג תאורה אחידה)
- עבור דימות קונפוקלי אימונופלואורסצנטי והדמיית CARS, התאימו את לייזר ה-CARS, עם גלאים קדמיים ואפי-CARS שאינם מרוסנים (NDDs), על-ידי שילוב מיקרוסקופ קונפוקלי המצויד בלייזרים גלויים להדמיית פלואורסצנציה (איור 2).
- הניחו חלקים בצלחת תרבית עם כיסוי (למיקרוסקופיה הפוכה), PBS כדי למנוע את התייבשות הרקמה, ומשקל זכוכית כדי לשמור על הרקמה ליד הכיסוי.
- צלם z-stacks או תמונות בודדות עם מטרת מים מתוקנת אינפרא-אדום 60X, 1.2 NA, המשמשת לאיסוף אות CARS בכיוון האפי ודרך מעבה 0.55 NA בכיוון קדימה להדמיית אזורים במוח כגון הגרעין המדיאלי של גוף הטרפז (MNTB).
- צלם את תמונות ה-CARS במשאבה/בדיקה של כ-600 mW ובסטוקס של 300 mW, באמצעות ממשק המשתמש הגרפי של לייזר CARS. ערכי הספק לייזר אלה נמדדים באופן פנימי על ידי המערכת. כוחות שני הלייזרים במיקום הדגימה הם פחות מ-25 mW ובטוחים לדגימת הרקמה.
- חופפים את המשאבה ואת קורות סטוקס באופן מרחבי וזמני. כוונן את ה-OPO ל-797.2 ננומטר. זה מניב אורך גל של CARS של 650 ננומטר. בגלל רמת האנרגיה הגבוהה יותר, החזרה המתקבלת למצב הקרקע היא אנטי-סטוקס (כחול מועבר) לעירור.
- לכוד את אות ה-CARS בגלאים אפיים או קדמיים שאינם משומרים באמצעות מסנני פס (640-680 ננומטר) ולאחר מכן זיהוי רציף של תווית האימונופלואורסצנציה (במקרה זה מסומן באופן פלואורסצנטי Nissl).
הערה: סמן הסומא העצבי של Nissl אינו נתפס במסנן CARS 640-680 ננומטר, מה שמאפשר שילוב של פלואורסצנציה והדמיית CARS בתמונות המוצגות להלן. - ה-CARS והפלואורסצנציה אינן חולקות PMTs. השתמש בהגדרות אלה לאות שומנים אופטימלי כדי לדמות באופן סלקטיבי את המיאלינציה באזור המוח.
התראה: הגן על המשתמש מפני קרן הלייזר
- שמור את התמונות כקבצי .oib, שאותם ניתן לייבא לתוכנית ניתוח תמונות לכימות נוסף (איור 3).
איור 2: דיאגרמת מכשירים של CARS המציגה לייזרים של CARS (חיצים אדומים) וזיהוי קדימה שאינם מסולפים (NDD) המשולבים בקונפוקל סריקת לייזר. ב-NDD קדימה אנו רוכשים CARS עבור אג"ח C-H (חיצים אדומים כהים) ו-SHG (ג'נרטואין הרמוני שני) ב-515 ננומטר (חץ כתום). באפי NDD, אנו רוכשים CARS עבור קשרי C-H (חיצים אדומים כהים) ו-2PE (פליטת שני פוטונים) אוטופלואורסצנטיות (חץ כחול בהיר). ברצף, ניתן לרכוש תמונות קונפוקליות פלואורסצנטיות (חיצים ירוקים ללייזר גלוי, חצים כחולים לזיהוי קונפוקלי). אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.
איור 3: מכוניות יכולות להאיר מיאלין (מגנטה) ברקמת המוח (גזע המוח) תוך הדמיה של סימוני ניסל (ציאן) או פלואורסצנטיים. שני הפאנלים מראים תוצאות מייצגות מגרביל מונגולי (תמונה בודדת M. unguiculatus, איור 3A,C,E) ועכבר (z-stack max projection M. musculus, איור 2B,D,F), מה שמצביע על כך שניתן להשתמש בטכניקה זו בין מינים שונים. איור 3A,B המציג את Nissl בציאן, C,D מראים את אות ה-CARS במגנטה, E,F משלבים את אותות ניסל ו-CARS עם כל פאנל עבור גרביל או עכבר, בהתאמה. שתי קבוצות התמונות מציגות מקטע של הגרעין המדיאלי של גוף הטרפז (MNTB) בגזע המוח. נוירונים ב-MNTB מקבלים קלטים מאקסונים בעלי מיאלינציה כבדה, המסתיימים בקליקס של הולד, סוג של סינפסה ענקית27. סרגל קנה המידה הוא 20 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
אחד היתרונות הגדולים ביותר של מיקרוסקופיית CARS על פני טכניקות אחרות הוא התאימות עם הדמיה פלואורסצנטית23. איור 1 מראה את ספקטרום ה-CARS בהשוואה ל-Nissl המתויג עם סמן אימונופלואורסצנטי המציג חפיפה מועטה/ללא חפיפה בספקטרה. איור 2 ממחיש את מערך הלייזר עבור מכוניות בשילוב עם מיקרוסקופיה קונפוקלית. איור 3 מדגים שתי תמונות מייצגות, אחת כערימה בודדת ואחת כהקרנה מקסימלית של z-stack מגרביל ועכבר שניתן לקבל באמצעות הדמ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
גוף הולך וגדל של ספרות מדגיש את תפקידו של המיאלין בתפקוד המוח 13,16,21,28. יתר על כן, אנו יודעים כי עובי המיאלינציה ודפוס המיאלינציה יכולים להשתנות במספר מצבים נוירולוגיים כגון טרשת נפוצה (נבדק ב -29), הזדקנות (נבדק ב -30), אוטיזם20,31, ורבים אחרים. לכן אין זה מפתיע שיותר ויותר חוקרים צריכ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים על היעדר ניגוד עניינים.
תודות
נתמך על ידי NIH R01 DC 17924, R01 DC 18401 (קלוג), ו- NIH 1R15HD105231-01, T32DC012280 ו- FRAXA (מק'קולה). הדמיית CARS בוצעה בחלק הליבה של מיקרוסקופיית האור המתקדמת של המרכז לנוירוטכנולוגיה בקמפוס הרפואי של אוניברסיטת קולורדו אנשוץ, הנתמך בחלקו על ידי NIH P30 NS048154 ו-NIH P30 DK116073.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>הרדמה: < / חזק> | |||
| 1 מ"ל מזרק חד פעמי עם מחט 27 GA x 0.5 אינץ' | Exel int | 260040 | |
| קטלני + | Vortech | ||
| <חזק>ניתוח: < / מספריים חזקים> | |||
| קפיצים - 8 מ"מ | כלי מדע עדינים | 15024-10 | |
| פינצטה סטנדרטית | כלי מדע עדינים | 11027-12 | |
| <חזק>זלוף: | |||
| 4% פרפורמלדהיד | פישר כימיקל | SF994 (CS) | |
| מספריים עדינים - Sharp | Fine Science Tools | 14063-11 | |
| Kelly hemostats | Fine Science Tools | 13019-14 | |
| Millipore H2קצה מחט O | |||
| , 23 GA x 1 אינץ' | BD דיוק גלישה | 305193 | |
| פוספט חוצץ מלח (PBS): | |||
| אשלגן כלורי | Sigma | P9333 | |
| אשלגן פוספט מונו-בסיס | משאבת Sigma | P5655 | |
| עם זרימה משתנה או שווה ערך | |||
| נתרן כלורי | פישר כימיקל | s271-1 | |
| סודיום פוספט דו-בסיסי | סיגמא | S7907 | |
| <חזק>דיסקציה: בקבוקון | |||
| 50 מ"ל עם 4% PFA | |||
| Bochem Chemical Spoon 180 מ"מ | Bochem | 230331000 | |
| מספריים עדינים - Sharp | Fine Science Tools | 14063-11 | |
| Noyes מספריים אביביים | כלי מדע עדינים | 15011-12 | |
| זוג פינצטה עדינה (Graefe) | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| מגש זכוכית או פלסטיק רדוד, כ-10 אינץ' x 10 אינץ' | |||
| פינצטה | סטנדרטית Fine Science Tools | 11027-12 | |
| מספריים כירורגיים - מדע משובח קהה | כלים | 14000-20 | |
| <חזק>חיתוך: | |||
| אגר, צמח | RPI | 9002-18-0 | |
| Vibratome | Leica | VT1000s | |
| צלחת באר | Alkali Sci. | TPN1048-NT | |
| חזק>מכתים: < / חזק> | |||
| AB מדיה: | 1n 1,000 מ"ל של Millipore H2< / sub>O | ||
| פוספט חוצץ (PB): | |||
| אשלגן פוספט מונובסיס | סיגמא | P5655 | |
| נתרן פוסוהאט דו-בסיסי | סיגמא | S7907 | |
| BSA (אלבומין בסרום בקר) | סיגמא מדעי החיים | A2153-100 גרם | |
| נתרן כלורי | פישר כימיקל | s271-1 | |
| טריטון X-100 | סיגמא - אולדריץ' | x100-500 מ"ל | |
| ניסל 435/455 | Invitrogen | N21479 | |
| <חזק>מכוניות: | |||
| APE לייזר פיקואמרלד | Angewandte Physik & אלקטרוניק מסנן פס פס GmbH | ||
| (420-520 ננומטר) | Chroma Technology | HQ470/100m-2P | |
| מסנן פס פס (500-530 ננומטר) | Chroma Technology | HQ515/30m-2P | |
| מסנני פס פס (640-680 ננומטר) | Chroma Technology | HQ660/40m-2P | |
| מיקרוסקופ קונפוקלי | אולימפוס | FV1000 | |
| חתוך העברת פישר | 13-711-7M | ||
| מעבר ארוך דיכרואי 565 ננומטר | טכנולוגיית Chroma | 565dcxr | |
| מעבר ארוך דיכרואי 585 ננומטר | טכנולוגיית Chroma | 585dcxr | |
| מעבר קצר דיכרואי 750 ננומטר | Chroma Technology | T750spxrxt | |
| צלחת תרבות תחתונה זכוכית | MatTek | P35G-0-10-C | |
| משקל זכוכית (10 מ"מ x 10 מ"מ מוט בורו) | אלן סיינטיפיק זכוכית בע"מ | ||
| מסנן פליטת קצר מולטיפוטון 680 ננומטר | Chroma Technology | ET680sp-2p8 | |
| PBS |
מקורות
- Cole, K., Curtis, H. Electric impedance of the squid giant axon during activity. The Journal of General Physiology. 22 (5), 649-670 (1939).
- Cole, K. S., Curtis, H. J. Membrane potential of the squid giant axon during current flow. Journal of General Physiology. 24 (4), 551-563 (1941).
- Alcami, P., El Hady, A. Axonal computations. Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 413(2019).
- Neumann, E., Nachmansohn, D. Nerve excitability-Toward an integrating concept. Aharon Katzir Memorial Volume. , 99-166 (1975).
- Waxman, S. G. Integrative properties and design principles of axons. International Review of Neurobiology. 18, 1-40 (1975).
- Fitzhugh, R. Computation of impulse initiation and saltatory conduction in a myelinated nerve fiber. Biophysical Journal. 2 (1), 11-21 (1962).
- Zalc, B. The acquisition of myelin: a success story. Novartis Foundation Symposium. 276, 275-281 (2006).
- Salzer, J. L., Zalc, B. Myelination. Current Biology. 26 (20), 971-975 (2016).
- Boullerne, A. I. The history of myelin. Experimental Neurology. 283, 431-445 (2016).
- Kuhn, S., Gritti, L., Crooks, D., Dombrowski, Y. Oligodendrocytes in development, myelin generation and beyond. Cells. 8 (11), 1424(2019).
- Saab, A. S., Nave, K. -A. Myelin dynamics: protecting and shaping neuronal functions. Current Opinion in Neurobiology. 47, 104-112 (2017).
- Chomiak, T., Hu, B. What is the optimal value of the g-Ratio for myelinated fibers in the rat CNS? A theoretical approach. PLOS ONE. 4 (11), 7754(2009).
- Ford, M. C., et al. Tuning of Ranvier node and internode properties in myelinated axons to adjust action potential timing. Nature Communications. 6, 8073(2015).
- Stange-Marten, A., et al. Input timing for spatial processing is precisely tuned via constant synaptic delays and myelination patterns in the auditory brainstem. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (24), 4851-4858 (2017).
- Bu, J., Banki, A., Wu, Q., Nishiyama, A. Increased NG2+ glial cell proliferation and oligodendrocyte generation in the hypomyelinating mutant shiverer. Glia. 48 (1), 51-63 (2004).
- Pacey, L. K. K., et al. Delayed myelination in a mouse model of fragile X syndrome. Human Molecular Genetics. 22 (19), 3920-3930 (2013).
- Green, A. J., et al. Clemastine fumarate as a remyelinating therapy for multiple sclerosis (ReBUILD): a randomised, controlled, double-blind, crossover trial. Lancet. 390 (10111), London, England. 2481-2489 (2017).
- Jeon, S. J., Ryu, J. H., Bahn, G. H. Altered translational control of fragile X mental retardation protein on myelin proteins in neuropsychiatric disorders. Biomolecules & Therapeutics. 25 (3), 231-238 (2017).
- Barak, B., et al. Neuronal deletion of Gtf2i, associated with Williams syndrome, causes behavioral and myelin alterations rescuable by a remyelinating drug. Nature Neuroscience. 22 (5), 700-708 (2019).
- Phan, B. N., et al. A myelin-related transcriptomic profile is shared by Pitt-Hopkins syndrome models and human autism spectrum disorder. Nature Neuroscience. 23 (3), 375-385 (2020).
- Lucas, A., Poleg, S., Klug, A., McCullagh, E. A. Myelination deficits in the auditory brainstem of a mouse model of fragile X syndrome. Frontiers in Neuroscience. 15, 1536(2021).
- Wang, H., Fu, Y., Zickmund, P., Shi, R., Cheng, J. -X. Coherent anti-stokes raman scattering imaging of axonal myelin in live spinal ttissues. Biophysical Journal. 89 (1), 581-591 (2005).
- Kim, S. -H., et al. Multiplex coherent anti-stokes raman spectroscopy images intact atheromatous lesions and concomitantly identifies distinct chemical profiles of atherosclerotic lipids. Circulation Research. 106 (8), 1332-1341 (2010).
- Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).
- Tu, L., et al. Free-floating Immunostaining of Mouse Brains. Journal of Visualized Experiments. (176), e62876(2021).
- Fluorescence SpectraViewer. , Available from: https://www.thermofisher.com/order/fluorescence-spectraviewer (2022).
- Held, H. Die centrale gehörleitung. Arch Anat Physiol Anat Abt. 17, 201-248 (1893).
- Sherman, D. L., Brophy, P. J. Mechanisms of axon ensheathment and myelin growth. Nature Reviews Neuroscience. 6 (9), 683-690 (2005).
- Gruchot, J., et al. The molecular basis for remyelination failure in multiple sclerosis. Cells. 8 (8), 825(2019).
- Rivera, A. D., et al. Epidermal growth factor pathway in the age-related decline of oligodendrocyte regeneration. Frontiers in Cellular Neuroscience. 16, 838007(2022).
- Kútna, V., O'Leary, V. B., Hoschl, C., Ovsepian, S. V. Cerebellar demyelination and neurodegeneration associated with mTORC1 hyperactivity may contribute to the developmental onset of autism-like neurobehavioral phenotype in a rat model. Autism Research: Official Journal of the International Society for Autism Research. 15 (5), 791-805 (2022).
- Ozsvár, A., et al. Quantitative analysis of lipid debris accumulation caused by cuprizone induced myelin degradation in different CNS areas. Brain Research Bulletin. 137, 277-284 (2018).
- Prineas, J. W., Graham, J. S. Multiple sclerosis: capping of surface immunoglobulin G on macrophages engaged in myelin breakdown. Annals of Neurology. 10 (2), 149-158 (1981).
- Bégin, S., et al. Automated method for the segmentation and morphometry of nerve fibers in large-scale CARS images of spinal cord tissue. Biomedical Optics Express. 5 (12), 4145-4161 (2014).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
