הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בניית מודל של איבר-על-שבב של תא שריר חלק של אבי העורקים לשחזור זן ביומכני בדופן אבי העורקים

3.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/64122

⸱

6 ביולי 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiac Surgery and Shanghai Institute of Cardiovascular Diseases, Zhongshan Hospital, Fudan University, 2Institutes of Biomedical Sciences and the Shanghai Key Laboratory of Medical Epigenetics, Shanghai Medical College, Fudan University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כאן פיתחנו מודל של איבר על-שבב של תאי שריר חלקים באבי העורקים כדי לשכפל את הזן הביומכני in vivo של תאי שריר חלקים בדופן אבי העורקים האנושי.

תקציר

טכניקות קונבנציונליות של תרביות תאים דו-ממדיות ומודלים של בעלי חיים שימשו במחקר של מפרצת ודיסקציה של אבי העורקים החזי האנושי (TAAD). עם זאת, TAAD אנושי לפעמים לא יכול להיות מאופיין על ידי מודלים של בעלי חיים. קיים פער מינים לכאורה בין מחקרים קליניים בבני אדם לבין ניסויים בבעלי חיים שעשויים לעכב גילוי של תרופות טיפוליות. לעומת זאת, מודל תרבית התאים הקונבנציונלי אינו מסוגל לדמות גירויים ביומכניים in vivo . לשם כך, טכניקות מיקרו-פבריקציה ומיקרופלואידיות התפתחו מאוד בשנים האחרונות, ומספקות טכניקות חדשניות לביסוס מודלים של אורגנואידים על שבב המשכפלים את המיקרו-סביבה הביומכנית. במחקר זה פותח מודל של איבר-על-שבב של תאי שריר חלקים של אבי העורקים (HASMC-OOC) כדי לדמות את הפרמטרים הפתופיזיולוגיים של ביומכניקה של אבי העורקים, כולל המשרעת והתדירות של מאמץ מחזורי שחווים תאי שריר חלק באבי העורקים האנושי (HASMCs) הממלאים תפקיד חיוני ב-TAAD. במודל זה, המורפולוגיה של HASMCs התארכה בצורתה, התיישרה בניצב לכיוון המתח, והציגה פנוטיפ מתכווץ יותר בתנאי מאמץ מאשר בתנאים קונבנציונליים סטטיים. זה עלה בקנה אחד עם כיוון התא והפנוטיפ בדפנות אבי העורקים האנושי המקומי. בנוסף, תוך שימוש ב-TAAD (BAV-TAAD) הקשור למסתם אבי העורקים ו-TAAD (TAV-TAAD) הקשור למסתם אבי העורקים טריקוספיד שמקורו בחולי HASMCs, הקמנו מודלים של מחלות BAV-TAAD ו-TAV-TAAD, המשכפלים את מאפייני HASMC ב-TAAD. מודל HASMC-OOC מספק פלטפורמה חדשנית במבחנה המשלימה מודלים של בעלי חיים להמשך חקר הפתוגנזה של TAAD וגילוי מטרות טיפוליות.

מבוא

מפרצת ודיסקציה של אבי העורקים החזי (TAAD) היא הרחבה מקומית או דלמינציה של דופן אבי העורקים הקשורה לתחלואה גבוהה ותמותה1. תאי שריר חלק באבי העורקים האנושי (HASMCs) ממלאים תפקיד חיוני בפתוגנזה של TAAD. HASMCs אינם תאים ממוינים באופן סופני, ו- HASMCs שומרים על פלסטיות גבוהה, מה שמאפשר להם להחליף פנוטיפים בתגובה לגירויים שונים2. HASMCs נתונים בעיקר למתח מתיחה קצבי in vivo, וזהו אחד הגורמים המרכזיים המווסתים שינויים מורפולוגיים בשרירים חלקים, התמיינות ותפקודים פיזיולוגיים 3,4. לכן, לא ניתן להתעלם מתפקידו של זן מחזורי בחקר ה- HASMCs. עם זאת, תרביות תאים דו-ממדיות קונבנציונליות אינן יכולות לשכפל את הגירוי הביומכני של זן מחזורי שחווים HASMCs in vivo. בנוסף, בניית מודל TAAD של בעלי חיים אינה מתאימה לסוגים מסוימים של TAAD, כגון TAAD הקשור לשסתום אבי העורקים הביקוספיד (BAV). יתר על כן, לא ניתן להתעלם מהפער בין מחקרים קליניים בבני אדם לניסויים בבעלי חיים. זה מעכב את התרגום הפרמצבטי בפרקטיקה הקלינית. לפיכך, יש צורך דחוף במערכות מורכבות ופיזיולוגיות יותר כדי לדמות את הסביבה הביומכנית in vivo במחקר של מחלות אבי העורקים.

ניסויים בבעלי חיים המשמשים במחקר ביו-רפואי ובפיתוח תרופות הם יקרים, גוזלים זמן ומוטלים בספק מבחינה אתית. בנוסף, התוצאות ממחקרים בבעלי חיים לעתים קרובות אינן מצליחות לחזות את התוצאות המתקבלות בניסויים קליניים בבני אדם 5,6. היעדר מודלים פרה-קליניים אנושיים ושיעור הכישלון הגבוה בניסויים קליניים הביאו למעט תרופות יעילות למרפאה, מה שהגדיל את עלויות הטיפול הרפואי7. לכן, דחוף למצוא מודלים ניסיוניים אחרים כדי להשלים מודלים של בעלי חיים. טכניקות מיקרו-פבריקציה ומיקרופלואידיות התפתחו מאוד בשנים האחרונות, ומספקות טכניקות חדשניות לביסוס מודלים של אורגנואידים על שבב המתקן את החסרונות של טכניקות מסורתיות של תרביות תאים דו-ממדיות ומבססים מודל in-vitro מציאותי יותר, בעלות נמוכה ויעילה יותר למחקרים פיזיולוגיים ופיתוח תרופות. באמצעות התקנים מיקרופלואידיים, איברים על שבבים נוצרים כדי לתרבת תאים חיים בתאים בגודל מיקרומטר עם גירויים שונים כדי לשכפל את הפונקציות העיקריות של רקמה או איבר. המערכת מורכבת ממיקרו-תעלות מיקרופלואידיות בודדות או מרובות, כאשר סוג אחד של תאים מתרבית בתא משוכפל פונקציות מסוג רקמה אחד או סוגי תאים שונים בתרבית על ממברנות נקבוביות כדי ליצור מחדש ממשקים בין רקמות שונות. לאורגנואידים מבוססי מיקרופלואידיקה בשילוב עם תאים שמקורם בחולה יש יתרון ייחודי של גישור על ההבדלים בין המינים הגדולים בין מודלים של מחלות עכברים ובני אדם והתגברות על החסרונות של תרבית תאים דו-ממדית מסורתית לצורך מחקר מנגנוני מחלה וגילוי תרופות. עם ההתפתחות המהירה של מיקרופלואידיקה בשנים האחרונות, חוקרים הבינו את התועלת של מודלים של איבר על שבב (OOC) במבחנה המשכפלים פרמטרים ביולוגיים מורכבים in vivo 8. אורגנואידים מיקרופלואידיים אלה מדמים סביבות ביומכניות במבחנה, כגון מתח מחזורי, עקת גזירה ולחץ נוזלי, ומספקים סביבת תרבית תאים תלת-ממדית (3D). עד כה, מספר מודלים OOC הוקמו כדי לדמות גירויים ביומכניים באיברים כגון הריאה9, כליה 10, כבד11, המעי 12, ולב 13, אבל אלה לא יושמו באופן נרחב על המחקר של מחלת אבי העורקים האנושי.

במחקר זה, אנו מציגים מודל של איבר-על-שבב של תאי שריר חלקים של אבי העורקים האנושי (HASMC-OOC) שיכול לשלוט בכוחות ובמקצבים המכניים הביומימטיים המופעלים על HASMCs ראשוניים שמקורם ב-TAAD. השבב מורכב מלוחות עבים תלת-שכבתיים של פולידימתילסילוקסן (PDMS) החרוטים בתעלות ושני ממברנות PDMS ממוסחרות וגמישות במיוחד. HASMCs מתורבתים על ממברנות PDMS. הערוץ במרכז השבב מלא במדיום תרבית לתרבית תאים. הערוצים העליונים והתחתונים של השבב מחוברים למערכת אספקת לחץ ואקום שיכולה לשלוט בקצב ובתדירות של מתח מתיחה מכני של ממברנות PDMS. ניתן לדמות זן קצבי שחווים HASMCs ב-HASMC-OOC, תוך שכפול המיקרו-סביבה הביומכנית של רקמה או איבר שאינם ניתנים להשגה פונקציונלית עם מערכות תרבית דו-ממדיות קונבנציונליות. עם היתרון של הדמיה בזמן אמת ברזולוציה גבוהה ומיקרו-סביבה ביומכנית, ניתן לחקור את הפעילויות הביוכימיות, הגנטיות והמטבוליות של תאים חיים להתפתחות רקמות, פיזיולוגיה של איברים, אטיולוגיה של מחלות, מנגנונים מולקולריים וזיהוי סמנים ביולוגיים, מחלות לב וכלי דם ומחלות אבי העורקים. בשילוב עם תאים ספציפיים לרקמות ולמטופלים, מערכת זו יכולה לשמש לבדיקת תרופות, רפואה מותאמת אישית ובדיקות רעילות. מודל HASMC-OOC זה מספק פלטפורמה חדשנית במבחנה לחקר הפתוגנזה של מחלת אבי העורקים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

דגימות אבי העורקים האנושיות נוצלו לבידוד ראשוני של HASMC באישור בית החולים ז'ונגשאן, ועדת האתיקה של אוניברסיטת פודאן (NO. B2020-158). דגימות אבי העורקים נאספו מחולים שעברו ניתוח אבי העורקים בבית החולים ז'ונגשאן, אוניברסיטת פודאן. הסכמה מדעת בכתב התקבלה מכל המטופלים לפני ההשתתפות.

1. בידוד תאי שריר חלק אבי העורקים האנושי העיקרי

  1. לשטוף את האזור הצדדי הימני של אבי העורקים העולה עם PBS סטרילי, 1x-2x.
  2. הסר את שכבות האינטימה והאדוונטיטיה של הרקמה עם שני מלקחיים אופתלמיים ולשמור על שכבת המדיה כדי לקצור את התאים.
  3. מניחים את שכבת המדיה על צלחת תרבית בקוטר 10 ס"מ וחותכים אותה לחתיכות קטנות (2-3 מ"מ) בעזרת מספריים. הוסף 5 מ"ל של תרבית תאי שריר חלק (SMCM) המכיל 10% FBS ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין.
  4. מעבירים את הרקמה הקטנה לבקבוק התרבית עם טפטפת סטרילית, ומפזרים את הרקמה באופן שווה. השליכו את מדיום התרבית ככל האפשר, ואז הפכו את הבקבוק הפוך.
  5. הוסיפו 2 מ"ל של SMCM לבקבוק התרבית ההפוך והכניסו אותו לחממה (5% CO 2) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 1-2 שעות, ואז סובבו אותו באיטיות לצד ימין למעלה והוסיפו עוד2 מ"ל של SMCM.
  6. לאחר 5-7 ימים של דגירה, להחליף את SMCM עם 4 מ"ל של SMCM טרי. באופן כללי, תאי שריר חלקים ספורדיים מטפסים החוצה תוך כשבועיים.
  7. השליכו באיטיות את ה-SMCM והוסיפו אותו באיטיות בעת החלפת המדיום. להעביר את בקבוק התרבית באיטיות בעת מעבר לתחנת מיקרוסקופ; אחרת, הרקמות יצופו, והתאים יגדלו לאט.
  8. כאשר התאים מגיעים לכ-80% מפגש, יש לשטוף עם 2 מ"ל של PBS, לעכל עם 2 מ"ל של 0.25% טריפסין, ולחלק אותם לשני בקבוקי תרבית חדשים עם 4 מ"ל של SMCM טרי.
  9. זהה את התאים באמצעות ניתוח אימונופלואורסצנטי של ארבעה סמנים ספציפיים שונים לתאי שריר חלק (CNN1, SM22)14.

2. הכנת שבב PDMS

  1. כדי להתפלמר PDMS, הוסף חומר ריפוי (רכיב B) לבסיס (רכיב A) ביחס משקל של A: B = 10:1 w/w וערבב את הקומפלקס לחלוטין במשך 5 דקות; הנפח תלוי בצורך של המחקר.
  2. מניחים את ג'ל PDMS המוכן במיכל מיצוי ואקום למשך 30-60 דקות ושומרים על הלחץ מתחת ל-0.8 mPa.
    הערה: לחץ גבוה יוביל למיצוי לא מספיק של בועות קטנות בתוך ג'ל PDMS שישפיע על השלב הבא של ייצור השבבים.
  3. באמצעות תוכנת תכנון בעזרת מחשב (CAD), תכנן את התבנית עם מבנה מסגרת חיצונית של 100 מ"מ × 40 מ"מ × 8 מ"מ ותעלה של 70 מ"מ × 6 מ"מ × 4 מ"מ.
  4. הכינו בהתאמה אישית את התבניות של שלוש השכבות באמצעות מכונת חריטה ממוחשבת בעלת בקרה נומרית ברמת דיוק גבוהה. גלפו את מסגרת התבניות והמיקרו-ערוצים באמצעות לוחות פולימתיל מתקרילט (PMMA), ולאחר מכן הדביקו אותם על צלחת PMMA אחרת.
  5. יוצקים את ג'ל PDMS מוכן על תבנית עם 100 מ"מ × 40 מ"מ × מסגרת חיצונית 6 מ"מ ו 70 מ"מ × 6 מ"מ × ערוץ 4 מ"מ, ולאחר מכן להצליב ב 70 °C במשך 1-2 שעות.
  6. יש לקלף את לוחות ה-PDMS הצולבים מהתבנית ולחתוך את ממברנות ה-PDMS הממוסחרות למקטעים של 100 מ"מ × 40 מ"מ.
  7. טפלו בשלושת לוחות ה-PDMS שהוכנו ובשני ממברנות PDMS באמצעות פלזמת חמצן למשך 5 דקות להפעלת פני השטח של PDMS. החל את ההגדרות הספציפיות הבאות: אוויר החדר כגז התהליך; לחץ מוגדר ל -100 kPa; הנוכחי מוגדר ל 180--200 Ma; מתח מוגדר ל 200 V; זמן תהליך עד 5 דקות.
  8. נקב חורים בשלושת לוחות PDMS באמצעות מנקב חורים בקוטר 1 מ"מ כדי ליצור את הכניסה והיציאה של האוויר ומיקרו-ערוצים בינוניים בשבב PDMS.
  9. חברו שלושה לוחות PDMS ושני ממברנות PDMS יחד לפי הסדר: לוח PDMS של ערוץ אוויר (שכבה עליונה) - קרום PDMS - לוח PDMS של ערוץ בינוני (שכבה אמצעית) - ממברנת PDMS - לוח PDMS של ערוץ אוויר (שכבה תחתונה). בצע שלב זה תחת מיקרוסקופ סטריאוסקופי ב-4x כדי לחפוף באופן מלא את המיקרו-ערוצים של האוויר עם המיקרו-ערוצים הבינוניים.
  10. מניחים את שבב PDMS המורכב באינקובטור של 70 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת.
  11. הכינו מספר צינורות לטקס בקוטר פנימי של 1 מ"מ ובאורך 3 ס"מ. הכנס מחט נירוסטה בקוטר חיצוני של 1 מ"מ ובאורך 1 ס"מ לקצה אחד של הצינור המוכן, ולאחר מכן הכנס Luer לקצה השני של הצינור כדי ליצור את הצינור המחובר לאוויר ולמיקרו-ערוצים בינוניים של שבב PDMS.
  12. הכנס את הצינורות המוכנים לתוך שקעים וכניסות של האוויר ומיקרו-ערוצים בינוניים על שבב PDMS.

3. טיפול משטח שבב PDMS ועיקור

  1. יש להחדיר 2 מ"ל של קולגן עכברי 80 מ"ג/מ"ל למיקרו-ערוץ הבינוני של שבב PDMS באמצעות מזרק של 2 מ"ל ולדגירה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
  2. לאחר הדגירה, להסיר את הקולגן מן הערוץ להיזכר עם מזרק 2 מ"ל. הניחו את שבבי ה-PDMS המצופים בקולגן באינקובטור של 60°C למשך הלילה.
  3. הניחו את שבבי ה-PDMS במעקר UV למשך יותר משעה. הניחו את שבבי ה-PDMS המעוקרים על ספסל אולטרה-נקי כהכנה לניסוי בתא.

4. זריעת תאים על שבב PDMS ותהליך מתיחת תאים

  1. תרבית 4 x 10 5 תאי שריר חלק אנושיים ראשוניים (HASMCs) מחולים המשתמשים במדיום תאי שריר חלק (SMCM) המכילים 2% סרום בקר עוברי (FBS) ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין באינקובטור5 % CO2 בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
  2. כאשר צפיפות HASMC מגיע 80%, להשליך את SMCM ולשטוף את התאים עם 2 מ"ל של PBS.
  3. לעכל את התאים באמצעות 1 מ"ל של 0.25% טריפסין במשך 2 דקות צנטריפוגה ב 100 x גרם במשך 5 דקות. הסר את supernatant ו להשעות את גלולת התא ב 1 מ"ל של SMCM טרי. השתמש ב-8 מ"ל של SMCM כדי לתרבת את התאים על צלחת תרבית בגודל 10 ס"מ.
  4. חשב את מספר התא באמצעות ציטומטר והשתמש בתאים בריכוז סופי של 2 x 105 תאים למ"ל.
  5. יש לשפוך באיטיות 2 מ"ל של PBS לתוך שבב PDMS בינוני מצופה קולגן ומעוקר, ולאחר מכן להשליך באמצעות מזרק של 2 מ"ל.
  6. יש לשפוך באיטיות סך של 2 מ"ל של 2 x 105 תאים / מ"ל HASMC ההשעיה לתוך המיקרו-ערוץ הבינוני של שבב PDMS באמצעות מזרק 2 מ"ל. לאחר מכן, סגור את Luer בכניסה ויציאה של שבב PDMS. מניחים את שבב PDMS באינקובטור (5% CO2) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך יום אחד.
  7. לאחר שהתאים מחוברים לממברנת PDMS בשבב PDMS, כמעט לאחר 24 שעות, חבר את יציאת המיקרו-ערוץ האוויר בשבב PDMS למערכת בקר הוואקום. כאשר התא מחובר, ניתן לראות מתחת למיקרוסקופ צורה תאית מוארכת ונורמלית, בניגוד לתאים העגולים המרחפים.
  8. הפעל את שסתום הסולנואיד ואת משאבת הוואקום. פתחו את וסת הוואקום והתאימו את רמת הלחץ ל-10 kPa עבור זן של 7.18 ± 0.44% ו-15 kPa עבור זן של 17.28 ± 0.91%.
  9. לאחר הגדרת הפרמטרים של מערכת הבקרה, מניחים את שבבי PDMS באינקובטור (5% CO2) ב 37 °C ומותחים במשך 24 שעות.

5. הכנת מערכת הבקרה המכנית

  1. הכן מספר שסתומי סולנואיד, מסנני ואקום, וסתי ואקום, משאבת ואקום, משאבה פריסטלטית ובקר לוגי ניתן לתכנות (PLC) השולט בשסתום הסולנואיד.
  2. תכנת את בקר ה- PLC והגדר את מרווח זמן ההפעלה/כיבוי ל- 1 Hz. חבר את שסתומי הסולנואיד לבקר המתוכנת.
  3. חבר את כניסת משאבת הוואקום למסנני הוואקום ולאחר מכן חבר את השקע של מסנני הוואקום לווסתי הוואקום. חבר את השקע של וסתי הוואקום לשסתומי סולנואיד, ולבסוף, חבר את השקע של שסתומי הסולנואיד לשקעים של מיקרו-ערוצי האוויר של שבבי PDMS.
  4. חבר את היציאה של המשאבה הפריסטלטית לכניסה של המיקרו-ערוץ הבינוני של שבב PDMS ואת הכניסה של המשאבה הפריסטלטית לשקע של שבב PDMS מיקרו-ערוצי בינוני להחלפת תרבית בינונית וטיפול בתרופות.
  5. התאם את המשרעת של המתח על ידי הרגולטור ואת תדר המתח על ידי המיקרו-בקר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

מודל HASMC-OOC מורכב ממערכת בקרת ואקום, מערכת מחזור ושבבי PDMS, והתכנון הסכמטי של מודל HASMC-OOC (איור 1). מערכת בקרת הוואקום מורכבת ממשאבת ואקום, שסתומי סולנואיד ובקר PLC. כדי לפעול כמערכת המחזור, נעשה שימוש במשאבה פריסטלטית כדי לרענן את מדיום תרבית התאים ולהוסיף תרופות. שבב ה-PDMS הורכב משני תאי ואקום ותא אמצעי מלא ב-SMCM לצמיחת תאים. על פי התכנון של מבנה השבב, תבנית PMMA הוכנה, ושלושת לוחות PDMS הוכנו על ידי מזיגה לתוך תבניות וקישור צולב ב 70 מעלות צלזיוס במשך 2 שעות. לאחר טיפול בפלזמה, ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

עם ההתפתחות המהירה של טכנולוגיה מיקרופלואידית, מודלים של OOC שיכולים לשכפל את התפקוד הביולוגי והמבנה של איבר אחד או יותר במבחנה התפתחו בשנים האחרונות ליישומים בביולוגיה, רפואה ופרמקולוגיה15. OOC יכול לדמות תפקודים מרכזיים של המיקרו-סביבה הפיזיולוגית האנושית, החיוניים לחקר מנגנוני מחלה ולקידום תרגום תרופות פרה-קליניות 8,16. למרות ש- OOC עדיין נמצא בשלבים המוקדמים ויש צורך בקלט נוסף כדי לייעל את העיצוב של OOC, התקדמות רבה הושגה בשני...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

המחברים מכירים בכך שעבודה זו נתמכה על ידי מענקים מוועדת המדע והטכנולוגיה של עיריית שנגחאי (20ZR1411700), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81771971) ותוכנית השייט של שנגחאי (22YF1406600).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4% פרפורמלדהידBeyotimeP0099-100 מ"למשמש לקיבוע תאים
Alexa Fluor 350-Labeled Goat Anti-Rabbit IgGBeyotimeA0408נוגדנים המשמשים לצביעה חיסונית
אלבומין בסרום בקרBeyotimeST025-20g
סידן AM/PIInvitrogenL3224
בקבוק תרבית תאים קורנינג430639
CNN1Abcam Ab46794
מסחרי גמיש
ממברנת PDMS		האנגג'ואו קירח חומרים מתקדמיםKYQ-200
F-actinInvitrogenR415
FBSSigmaM8318
צינורותנוזל Runze96410קוטר פנימי 1 מ"מ; קוטר חיצוני 3 מ"מ; עובי דופן 1 מ"מ; כתובת האתר הרשמי: https://www.runzefluidsystem.com
קו תאי שריר חלק
אבי העורקים האנושי CRL1999		ATCCמספר פריט:70019189
תמונה JImagej.net/fiji/downloadsלהורדה בחינם:פלטפורמת הדמיה https://fiji.sc המשמשת לזיהוי עוצמת הקרינה
חממתThermo Fisher Scientificמבטיח שהטמפרטורה,
לחות וחשיפה לאור זה><ה לחלוטין לאורך כל הניסוי
.
LuerRunze FluidRH-M016כתובת האתר הרשמית: https://www.runzefluidsystem.com.
מיקרוסקופקולגן עכבר אולימפוס
סיגמאC7661
פלזמת חמצן מכשיר צ'אנגג'ואו הונגמינגHM-Plasma5L
פסטר פיפטהBiologix30-0138A1
PBSBeyotimeC0221A
עט-סטרפטוקSigmaP4458-100 מ"לאנטיביודיקה המשמשת למניעת זיהום חיידקים
של תאים במהלך התרבית.
משאבה פריסטלטיתKamoerF01A-STP-B046
צלחת פטריקורנינג430167
בקר PLCZhejiang Jun Teng (BenT) מפעל CNCBR010-11T8X2Mניתן למצוא את הגדרת התוכנית המפורטת בהשלמה. כתובת האתר הרשמי: files.http://www.btcnc.net
polydimethylsiloxane (PDMS)Dow CorningSylgard 184
SM22Abcam ab14106
SMCMScienCellCat 1101
שסתום סולנואידSMC (סין)VQZ300
בקטון, דיקינסון ושות'300841
Triton-X 100BeyotimeST795לחדירה לקרומי התאים
TrizolInvitrogen10296010משמש למיצוי RNA
טריפסיןסיגמא
SMC (סין)ZFC5-6רשמי כתובת האתר:
משאבת ואקוםhttps://www.smc.com.cn KamoerKVP15-KL-S
ווסת ואקוםAirTACGVR-200-06
<חזק>פריימרים
שם פריימרקדימה (5' עד 3')הפוך (5' עד 3')
SM22CCGTGGAGATCCCAACTGGCCATCTGAAGGCCAATGACAT
CNN1CTCCATTGACTCGAACGACTCCAGGTCTGCGAAACTTTAGA
מזרק מסנן ואקום 15400054

מקורות

  1. Olsson, C., Thelin, S., Ståhle, E., Ekbom, A., Granath, F. Thoracic aortic aneurysm and dissection: increasing prevalence and improved outcomes reported in a nationwide population-based study of more than 14,000 cases from 1987 to 2002. Circulation. 114 (24), 2611-2618 (2006).
  2. van Varik, B. J., et al. Mechanisms of arterial remodeling: lessons from genetic diseases. Frontiers in Genetics. 3 (290), 1-10 (2012).
  3. Halka, A. T., et al. The effects of stretch on vascular smooth muscle cell phenotype in vitro. Cardiovascular Pathology. 17 (2), 98-102 (2008).
  4. Wang, Y., et al. Arterial wall stress induces phenotypic switching of arterial smooth muscle cells in vascular remodeling by activating the YAP/TAZ signaling pathway. Cellular Physiology and Biochemistry. 51 (2), 842-853 (2018).
  5. Fabre, K., et al. Introduction to a manuscript series on the characterization and use of microphysiological systems (MPS) in pharmaceutical safety and ADME applications. Lab on a Chip. 20, 1049-1057 (2020).
  6. Golding, H., Khurana, S., Zaitseva, M. What is the predictive value of animal models for vaccine efficacy in humans? The importance of bridging studies and species-independent correlates of protection. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 10 (4), 028902(2018).
  7. Ingber, D. E. Human organs-on-chips for disease modelling, drug development and personalized medicine. Nature Reviews. Genetics. 25, 1-25 (2022).
  8. Niu, L., et al. Microfluidic chip for odontoblasts in vitro. ACS Biomaterials Science & Engineering. 5 (9), 4844-4851 (2019).
  9. Huh, D., et al. Reconstituting organ-level lung functions on a chip. Science. 328 (5986), 1662-1668 (2010).
  10. Musah, S., et al. Mature induced-pluripotent-stem-cell-derived human podocytes reconstitute kidney glomerular-capillary-wall function on a chip. Nature Biomedical Engineering. 1 (69), 1-25 (2017).
  11. Yoon No, D., Lee, K. H., Lee, J., Lee, S. H. 3D liver models on a microplatform: well-defined culture, engineering of liver tissue and liver-on-a-chip. Lab on a Chip. 15 (19), 3822-3837 (2015).
  12. Bein, A., et al. Microfluidic organ-on-a-chip models of human intestine. Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 5 (4), 659-668 (2018).
  13. Jastrzebska, E., Tomecka, E., Jesion, I. Heart-on-a-chip based on stem cell biology. Biosensors & Bioelectronics. 75 (1), 67-81 (2016).
  14. Rensen, S. S., Doevendans, P. A., van Eys, G. J. Regulation and characteristics of vascular smooth muscle cell phenotypic diversity. Netherlands Heart Journal. 15 (3), 100-108 (2007).
  15. Perestrelo, A. R., Águas, A. C., Rainer, A., Forte, G. Microfluidic organ/body-on-a-chip devices at the convergence of biology and microengineering. Sensors. 15 (12), 31142-31170 (2015).
  16. Liu, Y., et al. Construction of cancer-on-a-chip for drug screening. Drug Discovery Today. 26 (8), 1875-1890 (2021).
  17. Yang, Q., et al. Design of organ-on-a-chip to improve cell capture efficiency. International Journal of Mechanical Sciences. 209, 106705(2021).
  18. Yang, Q., Lian, Q., Xu, F. Perspective: Fabrication of integrated organ-on-a-chip via bioprinting. Biomicrofluidics. 11 (3), 031301(2017).
  19. Mohammed, M. I., et al. Fabrication of microfluidic devices: improvement of surface quality of CO2 laser machined poly (methylmethacrylate) polymer. Journal of Micromechanics and Microengineering. 27 (1), 015021(2017).
  20. Tsao, C. W. Polymer microfluidics: Simple, low-cost fabrication process bridging academic lab research to commercialized production. Micromachines. 7 (12), 225-236 (2016).
  21. Kirschbaum, S. E., Baeumner, A. J. A review of electrochemiluminescence (ECL) in and for microfluidic analytical devices. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 407 (14), 3911-3926 (2015).
  22. Stefanadis, C., et al. Pressure-diameter relation of the human aorta. A new method of determination by the application of a special ultrasonic dimension catheter. Circulation. 92 (8), 2210-2219 (1995).
  23. Williams, B. Mechanical influences on vascular smooth muscle cell function. Journal of Hypertension. 16 (12), 1921-1929 (1998).
  24. Abudupataer, M., et al. Aorta smooth muscle-on-a-chip reveals impaired mitochondrial dynamics as a therapeutic target for aortic aneurysm in bicuspid aortic valve disease. eLife. 10, 69310(2021).
  25. Poussin, C., et al. 3d human microvessel-on-a-chip model for studying monocyte-to-endothelium adhesion under flow - application in systems toxicology. Altex. 1, 47-63 (2020).
  26. Yasotharan, S., Pinto, S., Sled, J. G., Bolz, S., Gunther, A. Artery-on-a-chip platform for automated, multimodal assessment of cerebral blood vessel structure and function. Lab on a Chip. 15, 2660-2669 (2015).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

PDMS
בניית מודל של איבר-על-שבב של תא שריר חלק של אבי העורקים לשחזור זן ביומכני בדופן אבי העורקים
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.