מאמר שיטה

פרוטוקול קדם-אנליטי של ביופסיה נוזלית סטנדרטית ליישומי דנ"א ללא מחזור במורד הזרם

DOI:

10.3791/64123

⸱

16 בספטמבר 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Liquid Biopsy and Biomarker Working Module, the Biomedical Research Network in Cancer (CIBERONC)

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הביופסיה הנוזלית חוללה מהפכה בגישה שלנו למחקרים תרגומיים אונקולוגיים, כאשר איסוף הדגימות, האיכות והאחסון היוו שלבים מכריעים ליישום הקליני המוצלח שלה. כאן אנו מתארים פרוטוקול מתוקנן ומאומת ליישומי דנ"א ללא מחזור במורד הזרם, שניתן ליישם ברוב מעבדות המחקר התרגומיות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המונח ביופסיה נוזלית (LB) מתייחס למולקולות כגון חלבונים, דנ"א, רנ"א, רנ"א, תאים או שלפוחיות חוץ-תאיות בדם ובנוזלי גוף אחרים שמקורם בגידול הראשוני ו/או הגרורתי. LB התגלתה כעמוד תווך במחקר תרגומי והחלה להפוך לחלק מהפרקטיקה האונקולוגית הקלינית, המספקת חלופה זעיר פולשנית לביופסיה מוצקה. ה- LB מאפשר ניטור בזמן אמת של גידול באמצעות מיצוי דגימה זעיר פולשנית, כגון דם. היישומים כוללים גילוי מוקדם של סרטן, מעקב אחר מטופלים לגילוי התקדמות המחלה, הערכה של מחלה שיורית מינימלית, וזיהוי פוטנציאלי של התקדמות מולקולרית ומנגנון עמידות. על מנת להשיג ניתוח אמין של דגימות אלה שניתן לדווח עליהן במרפאה, יש לשקול בזהירות את ההליכים הקדם-אנליטיים ולעקוב בקפדנות. איסוף דגימות, איכות ואחסון הם שלבים חיוניים שקובעים את התועלת שלהם ביישומים במורד הזרם. כאן, אנו מציגים פרוטוקולים סטנדרטיים ממודול העבודה שלנו בביופסיה נוזלית לאיסוף, עיבוד ואחסון דגימות פלזמה וסרום לניתוח ביופסיה נוזלית במורד הזרם בהתבסס על דנ"א ללא מחזור הדם. הפרוטוקולים המוצגים כאן דורשים ציוד סטנדרטי והם גמישים מספיק כדי להיות מיושמים ברוב המעבדות המתמקדות בהליכים ביולוגיים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המונח "ביופסיה נוזלית" הוגדר בשנת 20101 כנוכחות של מולקולות (למשל, חלבון, חומצה דאוקסיריבונוקלאית (DNA), חומצה ריבונוקלאית (RNA)), תאים או שלפוחיות חוץ-תאיות (למשל, אקסוזומים) בדם ובנוזלי גוף אחרים שמקורם בגידול הראשוני. השימוש בדגימות ביופסיה נוזלית חולל מהפכה במחקר האונקולוגי התרגומי, שכן ביופסיות רקמות, המוגבלות לאזור מסוים ברגע מסוים, עלולות להחמיץ שיבוטים רלוונטיים בשל הטרוגניות הגידול. בנוסף, ביופסיה נוזלית ממלאת תפקיד רלוונטי בסוגי גידולים שבהם הרקמה הראשונית נדירה או אינה נגישה, שכן היא עשויה למנוע ביופסיה פולשנית, ולהפחית עלויות וסיכון לחולים. יתר על כן, המאפיינים המולקולריים של הגידול מתפתחים ללא הרף בעיקר בשל לחץ הטיפול, ודגימות ביופסיה נוזליות יכולות ללכוד את הדינמיקה הקלונלית של הגידול כפי שניתן לקחת אותן לאורך, בזמנים קליניים וטיפוליים שונים של המחלה כגון בסיס, על הטיפול, על הטיפול, התגובה הטובה ביותר, ובהתקדמות המחלה או אפילו לפני כן. הרעיון של "ביופסיה נוזלית בזמן אמת" פירושו שניתן לעקוב אחר שינויים דינמיים בגידול בזמן אמת, ובכך לאפשר רפואה מדויקת במחלה זו. לביופסיה הנוזלית יש יישומים פוטנציאליים רבים במרפאה, כולל סינון וגילוי מוקדם של סרטן, ניטור בזמן אמת של המחלה, זיהוי מחלה שיורית מינימלית, חקר מנגנונים לעמידות לטיפול וריבוד חולים ברמה הטיפולית1. הגילוי המוקדם של הישנות המחלה והתקדמותה הם צורך קליני שלא קיבל מענה בסוגי גידולים רבים ומהווים גורם מפתח בהגדלת ההישרדות ואיכות החיים של חולי סרטן. שיטות הדמיה שגרתיות וסמני גידול מסיסים עשויים להיות חסרים את הרגישות ו/או הספציפיות הנדרשות למשימה זו. לפיכך, יש צורך דחוף בסמני חיזוי חדשניים במרפאה, כגון אלה המבוססים על הפצת חומצות גרעין חופשיות במחזור הדם.

סוגי הדגימות המשמשות למחקרי ביופסיה נוזלית כוללים, בין היתר, דגימות דם, שתן, רוק וצואה. דגימות אחרות הספציפיות לגידול יכולות להיות שאיפות תאים, נוזל מוחי, נוזל pleural, נוזל ציסטה ומיימת, כיח ומיץ לבלב2. הנוזלים הראשונים עשויים להכיל סוגים שונים של חומרים שמקורם בסרטן, תאי גידול במחזור הדם (CTC), או שברים כגון אקסוזומים ודנ"א גידולי במחזור ללא תאים (ctDNA). חומצות גרעין עשויות להיות עטופות בשלפוחיות חוץ-תאיות (רכבים חשמליים) או להשתחרר לנוזלי הגוף עקב מוות ונזק לתאים. דנ"א חופשי במחזור הדם (cfDNA) משתחרר בעיקר לזרם הדם מתאים אפופטוטיים או נמקיים ונמצא בכל האנשים, ומראה רמות מוגברות במחלות דלקתיות או אונקולוגיות3. אקסוזומים הם בועיות חוץ-תאיות קטנות (כ-30-150 ננומטר) המופרשות על-ידי תאים המכילים חומצות גרעין, חלבונים וליפידים. שלפוחיות אלה מהוות חלק מרשת התקשורת הבין-תאית והן נמצאות בדרך כלל בסוגים רבים של נוזלי גוף2. חומצות הגרעין הסגורות בתוך כלי רכב חשמליים מוגנות מפני הסביבה הקשה בנוזלי הגוף, ובכך מספקות דרך איתנה יותר לחקור את המולקולות הללו במסגרת הביופסיה הנוזלית.

באופן כללי, הרמות של חומצות גרעין במחזור הדם בדגימות ביופסיה נוזלית נמוכות מאוד, ולכן יש צורך בשיטות רגישות לזיהוי, כגון PCR דיגיטלי או ריצוף מהדור הבא (NGS). ניהול פרה-אנליטי של הדגימה הוא חיוני כדי למנוע תזה של תאי דם ושחרור של דנ"א שלם, מה שגורם לזיהום של ה-cfDNA עם הדנ"א הגנומי. יתר על כן, יש לנקוט משנה זהירות בעת חילוץ דגימות כדי למנוע נוכחות של מעכבים של שיטות ניתוח מבוססות אנזימים.

כאן אנו מציגים שיטה מתוקננת לאיסוף ואחסון של דגימות פלזמה וסרום, המהווה צעד ראשון מכריע עבור יישומים מבוססי ביופסיה נוזלית במורד הזרם, כולל ניתוחי חומצות גרעין במחזור הדם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אישור אתי מוקדם התקבל מהמרכזים המשתתפים לפני הפקת דגימות הדם. הפרוטוקולים הבאים לבידוד סרום ופלזמה בוצעו בהתאם לעקרונות האתיים למחקר ביו-רפואי.

הערה: שיקולים קודמים לפני תחילת הפרוטוקול מובאים כאן. נדרש אישור אתי מוקדם לשימוש בדגימות אנושיות במחקר ביו-רפואי, בהסכמה מדעת מתאימה. ארון בטיחות ביולוגית מדרגה II נדרש כדי לטפל בדגימות דם. יש ללבוש מעיל מעבדה, כפפות מגן ומשקפיים לאורך כל ההליך כדי למנוע זיהום על ידי פתוגנים הנישאים בדם. נדרש מינימום של 30 דקות לעיבוד דגימות סרום. לאחר שאיבת הדם בצינורות ללא נוגדי קרישה, יש לשמור על טמפרטורת החדר (RT) במשך 30-45 דקות כדי לאפשר היווצרות קרישי דם. לפחות 40 דקות נדרשות להכנת פלזמה, ויש לעבד דגימות תוך 4 שעות מרגע המיצוי בעת שימוש בצינורות חומצה טטרה-אצטית אתילנדיאמין (EDTA) או תוך 24-48 שעות אם משתמשים בצינורות איסוף מייצבי תאים או בצינורות איסוף DNA ספציפיים ללא תאים. עם זאת, לדברי כמה יצרנים, הדגימות יציבות עד שבועיים בצינורות מיוחדים אלה. חשוב לבדוק אם יש המוליזה, אשר תיתן לחלק הפלזמה או הסרום מראה אדמדם. עיין בסעיף פתרון הבעיות לקבלת דוגמאות המוליות בדיון.

1. הכנת סרום למחקרי ביופסיה נוזלית

הערה: הזמן הכולל הנדרש לביצוע שלב זה הוא 30 דקות (איור 1).

  1. יש לחלץ 4-10 מ"ל דם בצינורות שאינם מכילים נוגדי קרישה (כובע אדום או אדום/אפור-שחור) ולשמור ב-RT למשך 30-45 דקות. לעבד דגימות אלה תוך 4 שעות מרגע החילוץ.
  2. תעד את השעה והתאריך של חילוץ הדגימה ואת זיהוי הנושא (ID) במסד נתונים לדוגמה שתוכנן כראוי.
  3. לבוש במעיל מעבדה, כפפות מגן ומשקפיים, צנטריפוגה הצינור המכיל דם טרי ב- RT (15 °C -25 ° C) במשך 10 דקות ב 1,600 (± 150) x g, עם ההפסקה המקסימלית מוחלת.
  4. לאחר צנטריפוגה, בזהירות להסיר את הצינור מן הצנטריפוגה; השלב העליון של חומר-העל בסרום ייראה צלול וצהבהב (איור 2). בדקו אם הדגימה מראה סימנים של המוליזה (איור 3) ותעדו את נוכחות ההמוליזה בעת הצורך.
  5. בארון בטיחות ביולוגית מסוג II, העבירו את הסרום לצינורות האיסוף כ-250 μL aliquots.
    הערה: יש להתאים את נפח האליקוטים לדרישות המחקר.
  6. מיד להקפיא את הסרום זקוף בקופסת אחסון בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס ולרשום את זמן אחסון הדגימה.
  7. ודא שהדגימות עובדו במסגרת הזמן הנדרשת של 4 שעות.

2. הכנת פלזמה למחקרי ביופסיה נוזלית

הערה: הזמן הכולל הנדרש לביצוע שלב זה הוא 40 דקות (איור 4).

  1. יש לחלץ 4-10 מ"ל דם בצינורות המכילים חומצה טטרה-אצטית אתילנדיאמין (EDTA). לעבד את הדגימות ברדיוס של 4 שעות מרגע החילוץ.
  2. רשום את השעה והתאריך של חילוץ הדגימה ואת מזהה הנושא במסד נתונים לדוגמה שתוכנן כראוי.
  3. לבוש במעיל מעבדה, כפפות מגן ומשקפיים, צנטריפוגה בצינור EDTA ב- RT (15 °C -25 ° C) למשך 10 דקות ב 1,600 (± 150) x g, עם ההפסקה המרבית מוחלת.
    הערה: עיין בהוראות היצרן בעת שימוש בצינורות איסוף אחרים.
  4. לאחר צנטריפוגה, סופרנאטנט הפלזמה ייראה צלול וצהבהב. בדקו אם הדגימה מראה סימנים של המוליזה (איור 3) והעברת הפלזמה (סופרנטנט) לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל מבלי להפריע לשכבת התא באמצעות פיפטה סרולוגית חד פעמית (או פיפטת נורה חד פעמית או פיפטות p1000 עם קצה מסנן). השאירו נפח שיורי קטן של פלזמה מעל שכבת התא (כ-5 מ"מ).
  5. אם ההמוליזה נצפתה, השליכו את הדגימה לניתוחים נוספים. (איור 5). עיין בסעיף פתרון הבעיות בדיון כדי להעריך את ההמוליזה.
  6. צנטריפוגה הפלזמה בצינור צנטריפוגה 15 מ"ל ב- RT (15 °C-25 °C) למשך 10-20 דקות ב 3,000 (±150) x g. בצע שלב זה כדי להסיר את כל שאריות תאי הדם השלמים המועברים משלב הצנטריפוגה הראשון.
  7. לאחר צנטריפוגה, הסר בזהירות את הצינור מהצנטריפוגה והעביר 1-4 מ"ל של פלזמה לבקבוקונים קריוגניים של פוליפרופילן 1-4 מ"ל באמצעות פיפטה סרולוגית חד פעמית (או פיפטת נורה חד פעמית או פיפטות p1000 עם קצה מסנן). יש להשאיר נפח שיורי של פלזמה (כ-0.3 מ"ל או 7 מ"מ גובה) בתחתית הצינור כדי למנוע זיהום של הפלזמה בתאי הדם (איור 5).
  8. מיד להקפיא את הפלזמה זקופה בקופסת האחסון ב -80 מעלות צלזיוס ולרשום את זמן אחסון הדגימה. ודא שהדגימות עובדו במסגרת הזמן הנדרשת של 4 שעות.
  9. אספו את השכבה התאית (ציפוי באפי) באמצעות P1000 והקצה המסונן והעבירו אותה לצינור של 2 מ"ל. מיד להקפיא ולאחסן ב -80 °C (80 °F).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאחר צנטריפוגה של צינורות הדם ללא נוגדי קרישה, הפאזה העליונה נראית צהובה בהירה ומתאימה לשבר הסרום (איור 2). חלק זה מוסר בקפידה ומועבר לניתוח הבא.

המוליזה עשויה להיות נוכחת בחלק הפלזמה או הסרום, והפאזה העליונה תהיה בעלת מראה אדמדם, מה שמעיד על נוכחות ומידת ההמוליזה (איור 3).

לאחר צנטריפוגה של צינורות EDTA, מספר שלבים או שכבות יהיו גלויים; השלב העליון (צהוב חיוור) הוא שבר הפלזמה, המהווה 55% מנפח הדם הכולל; המ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לביופסיה הנוזלית יש יישומים פוטנציאליים רבים בזמנים שונים במהלך ניהול הסרטן. ראשית, באבחון כדי לזהות סמנים מולקולריים של גידולים שיצביעו על נוכחות של נגע פוטנציאלי בגידול שעשוי להיחקר עוד יותר מבחינה קלינית. שנית, במהלך הטיפול לניטור בזמן אמת של המחלה, הערכת התגובה המולקולרית של הטיפול, אבולוציה קלונלית וגילוי מוקדם של הישנות המחלה או עמידות לטיפול. לבסוף, לאחר הטיפול הכירורגי, ככלי לזיהוי מחלה שיורית מינימלית. האגודה האירופית לאונקולוגיה רפואית (ESMO) פרסמה לאחרונה הנחיות ליישום בדיקות מוטציות ctDNA בסרטן ריאה גרורתי של...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ביאטריס בלוסיו (BB): BB קיבלה כבוד על תפקיד הדוברת, הייעוץ או הייעוץ מאמג'ן, אסטרה-זנקה, ביוקרטיס, יאנסן, מרק-סרונו, נוברטיס, קיאג'ן, רוש דיאגנוסטיקה, רוש פארמה, תרמופישר, פייזר ו-BMS. שרה לופס-טרואלה (SL): SL קיבלה תואר כבוד על תפקיד הדוברת, הייעוץ או הייעוץ של אסטרה-זנקה/דאיצ'י-סנקיו, MSD, נוברטיס, פייזר, רוש פארמה, גיליאד, לילי, פייר פברה, סיגן, גלקסו סמית'קליין ו-Veracyte. נוליה טרזונה (NT): NT קיבלה תואר כבוד על תפקיד הדוברת, הייעוץ או הייעוץ מאמג'ן, פייזר, מרק-סרונו, Servier, SEOM ו-ESMO. חוויאר הרננדז-לוסה (JHL): קיבל תואר כבוד על תפקיד הדובר, הייעוץ או הייעוץ של אסטרה-זנקה, יאנסן, נוברטיס, רוש דיאגנוסטיקה, רוש פארמה, תרמופישר, לילי ודיאצ'וטיקה. רודריגו טולדו (RT) מדווח על קבלת מענקי מחקר הקשורים למחקר זה מנוברטיס ומענקי מחקר שאינם קשורים למחקר זה מ-AstraZeneca ו-Beigene. לשאר המחברים אין גילויים לגבי כתב היד.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברצוננו להודות לרשת המחקר הביו-רפואי בסרטן (CIBERONC) על תמיכתם ועל מענק הפרויקט הבא: LB CIBERONC PLATFORM: פלטפורמת CIBERONC לתקנון וקידום ביופסיה נוזלית. PI רודריגו טולדו, (CIBERONC), 2019-2021.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1.5 מ"ל צינורות אפנדורףEppendorf0030 120.086ניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטי
10 מ"ל פיפטות חד פעמיות סרולוגיותBIOFILGSP010010ניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטי 10
מ"ל Vacutainer K2 EDTA צינורBecton Dickinson367525צינורות אלה יכולים לשמש לאיסוף פלזמה
15 מ"ל צינורות צנטריפוגה מפוליפרופילןBIOFILCFT411150ניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטי
ואקוטיינר BD 3.5 מ"ל ללא נוגד קרישהBecton Dickinson368965ניתן להשתמש בצינורות של 8.5 או 3.5 מ"ל לאיסוף סרום
בקבוקון קריוגני 4 מ"ל פוליפרופילן, תחתית עגולה,430662 קורנינגניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטי ניתן להשתמש ב-4
מ"ל Vacutainer K2 EDTA צינורBecton Dickinson367864ניתן להשתמש בצינורות אלה לאיסוף פלזמה
4200 TapeStation SystemAgilentG2991BAמספר שיטות כימות זמינות עם a  יישום ספציפי עבור cfDNA
5 מ"ל פיפטות חד פעמיות סרולוגיותBIOFILGSP010005ניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטי
8.5 מ"ל BD Vacutainer שפופרת ללא נוגד קרישהBecton Dickinson366468ניתן להשתמש בצינורות של 8.5 או 3.5 מ"ל לצנטריפוגה לאיסוף סרום
, המסוגלת ל-~3000 x g עם רוטור דלי נדנדהThermo Fisher ScientificSorvall ST 16   10688725ניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטיים
קופסאות אחסון מקפיא עבור 1– 4 בקבוקונים מ"ל קריוגנייםקורנינג431120יש צורך בקופסאות אלה בעת שימוש בבקבוקונים של 4 מ"ל לאחסון
קצות פיפטה p1000קורנינג4809ניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטי
חומצות גרעין במחזור QIAampQiagen55114ניתן להשתמש בכל ערכה זמינה מסחרית הספציפית לבידוד cfDNA עם פרוטוקול זה לבדיקת דם.
סטרק  צינורות DNA BCT CE נטולי תאים 10 מ"לפס218997ניתן להשתמש בצינורות אלה לאיסוף פלזמה
מקפיא טמפרטורה (-80 ° ג)ESCO2180104ניתן להשתמש בכל צינורות/ציוד סטנדרטי
צינור עצמאי ערכת

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Alix-Panabières, C., Pantel, K. Clinical applications of circulating tumor cells and circulating tumor DNA as liquid biopsy. Cancer Discovery. 6 (5), 479-491 (2016).
  2. Zhou, B., et al. Application of exosomes as liquid biopsy in clinical diagnosis. Signal Transduction and Targeted Therapy. 5 (1), 144(2020).
  3. Bettegowda, C., et al. Liquid biopsies: Genotyping circulating tumor DNA. Nature Medicine. 4 (6), (2014).
  4. Heitzer, E., et al. Recommendations for a practical implementation of circulating tumor DNA mutation testing in metastatic non-small-cell lung cancer. ESMO Open. 7 (2), 100399(2022).
  5. Gennari, A., et al. ESMO Clinical Practice Guideline for the diagnosis, staging and treatment of patients with metastatic breast cancer. Annals of Oncology: Official Journal of the European Society for Medical Oncology. 32 (12), 1475-1495 (2021).
  6. Van Buren, T., Arwatz, G., Smits, A. J. A simple method to monitor hemolysis in real time. Scientific Reports. 10 (1), 5101(2020).
  7. Ignatiadis, M., Sledge, G. W., Jeffrey, S. S. Liquid biopsy enters the clinic - implementation issues and future challenges. Nature Reviews. Clinical Oncology. 18 (5), 297-312 (2021).
  8. Sidstedt, M., et al. Inhibition mechanisms of hemoglobin, immunoglobulin G, and whole blood in digital and real-time PCR. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 410 (10), 2569-2583 (2018).
  9. Maass, K. K., et al. From sampling to sequencing: A liquid biopsy pre-analytic workflow to maximize multi-layer genomic information from a single tube. Cancers. 13 (12), 3002(2021).
  10. Greytak, S. R., et al. Harmonizing cell-free DNA collection and processing practices through evidence-based guidance. Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research. 26 (13), 3104-3109 (2020).
  11. Trigg, R. M., Martinson, L. J., Parpart-Li, S., Shaw, J. A. Factors that influence quality and yield of circulating-free DNA: A systematic review of the methodology literature. Heliyon. 4 (7), 00699(2018).
  12. Boissier, E., et al. The centrifuge brake impacts neither routine coagulation assays nor platelet count in platelet-poor plasma. Clinical Chemistry and Laboratory Medicine. 58 (9), 185-188 (2020).
  13. Johansson, G., et al. Considerations and quality controls when analyzing cell-free tumor DNA. Biomolecular Detection and Quantification. 17, 100078(2019).
  14. Casas-Arozamena, C., et al. Genomic profiling of uterine aspirates and cfDNA as an integrative liquid biopsy strategy in endometrial cancer. Journal of Clinical Medicine. 9 (2), 585(2020).
  15. Alcoceba, M., et al. Liquid biopsy: a non-invasive approach for Hodgkin lymphoma genotyping. British Journal of Haematology. 195 (4), 542-551 (2021).
  16. Szpechcinski, A., et al. Cell-free DNA levels in plasma of patients with non-small-cell lung cancer and inflammatory lung disease. British Journal of Cancer. 113 (3), 476-483 (2015).
  17. Earl, J., et al. Somatic mutation profiling in the liquid biopsy and clinical analysis of hereditary and familial pancreatic cancer cases reveals kras negativity and a longer overall survival. Cancers. 13 (7), 1612(2021).
  18. Lampignano, R., et al. Multicenter evaluation of circulating cell-free DNA extraction and downstream analyses for the development of standardized (pre)analytical work flows. Clinical Chemistry. 66 (1), 149-160 (2020).
  19. Febbo, P. G., et al. Minimum technical data elements for liquid biopsy data submitted to public databases. Clinical Pharmacology and Therapeutics. 107 (4), 730-734 (2020).
  20. De Mattos-Arruda, L., Siravegna, G. How to use liquid biopsies to treat patients with cancer. ESMO Open. 6 (2), 100060(2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים