מאמר שיטה

פנים אל פנים הכנה לכרית אנדוקרדיאלית לניתוח מורפוגנזה מישורית בעוברי עכברים

DOI:

10.3791/64207

⸱

27 ביולי 2022

 ,  , 
1Intercellular Signalling in Cardiovascular Development and Disease Laboratory, Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), 2Ciber de Enfermedades Cardiovasculares

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באופן קלאסי, האנדוקרדיום של פרימורדיום המסתם העוברי של העכבר נותח באמצעות חתכים רוחביים, קורונליים או סגיטליים. הגישה החדשנית שלנו להדמיה דו-ממדית של האנדוקרדיום באזורים וולוולוגניים מאפשרת קוטביות מישורית וניתוח סידור מחדש של התאים של האנדוקרדיום במהלך התפתחות המסתם.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חקר המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס התפתחות לב היונקים חיוני לטיפול במחלות לב מולדות אנושיות. התפתחות מסתמי הלב הפרימיטיביים כרוכה במעבר אפיתליאלי למזנכימלי (EMT) של תאים אנדוקרדיאליים מאזורי התעלה האטריובנטריקולרית (AVC) ודרכי היציאה (OFT) של הלב בתגובה לאותות שריר הלב והאנדוקרדיאליים האינדוקטיביים המקומיים. ברגע שהתאים מתפרקים ופולשים למטריצה החוץ-תאית (ג'לי לבבי) הממוקמת בין האנדוקרדיום לשריר הלב, נוצרות כריות אנדוקרדיאליות פרימיטיביות (EC). תהליך זה מרמז על כך שהאנדוקרדיום צריך למלא את הפערים שהותירו התאים הדה-לאומיים ועליו לארגן את עצמו מחדש כדי להתכנס (להצטמצם) או להתארך (להאריך) לאורך ציר. המחקר הנוכחי עירב את מסלול קוטביות התאים המישוריים (PCP) בוויסות הלוקליזציה התת-תאית של הגורמים המעורבים בתהליך זה. באופן קלאסי, השלבים הראשונים של התפתחות מסתמי הלב נחקרו בחתכים של לבבות עובריים או בצמחי ex vivo AVC או OFT שגודלו בתרבית על ג'ל קולגן. גישות אלה מאפשרות ניתוח של קוטביות אפיקו-בסיסית, אך אינן מאפשרות ניתוח של התנהגות התא בתוך מישור האפיתל או של השינויים המורפולוגיים של תאים נודדים. כאן, אנו מראים גישה ניסיונית המאפשרת הדמיה של אנדוקרדיום באזורים valvulogenic כשדה מישורי של תאים. גישה ניסיונית זו מספקת את ההזדמנות לחקור PCP, טופולוגיה מישורית ותקשורת בין-תאית בתוך אנדוקרדיום של OFT ו- AVC במהלך פיתוח שסתום. פענוח מנגנונים תאיים חדשים המעורבים במורפוגנזה של מסתמי הלב עשוי לתרום להבנת מחלות לב מולדות הקשורות למומים בכרית הלב האנדוקרדיאלית.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הלב הוא האיבר הפונקציונלי הראשון של עובר יונקים. בסביבות היום העוברי (E) 7.5 בעכברים, תאי מזודרם קדם-לבביים דו-צדדיים יוצרים את הסהר הלבבי בצד הגחוני1. הסהר הלבבי מכיל שתי אוכלוסיות של תאים קדם-לבביים הכוללים אבות של שריר הלב והאנדוקרדיום2. בסביבות E8.0, מבשרי הלב מתמזגים בקו האמצע, ויוצרים את צינור הלב הפרימיטיבי המורכב משתי רקמות אפיתל, שריר הלב החיצוני והאנדוקרדיום הפנימי, שהוא אנדותל מיוחד המופרד על ידי מטריצה חוץ-תאית בשם ג'לי לב. מאוחר יותר, ב- E8.5, צינור הלב עובר לולאה ימינה. ללב הלולאה יש אזורים אנטומיים שונים עם חתימות מולקולריות ספציפיות כגון מערכת הזרימה (OFT), החדרים והתעלה האטריו-חדרית (AVC)3. למרות שבתחילה צינור הלב מתרחב בצד הזרימה שלו באמצעות תוספת של תאים4, ב- E9.5, התפשטות לב אינטנסיבית גורמת לבלון של החדרים והקמת הרשת הטרבקולרית5. היווצרות המסתם מתרחשת ב- AVC (שסתומים מיטרליים וטריקוספידים עתידיים) וב- OFT (שסתומים אבי העורקים והריאתי העתידיים).

האנדוקרדיום ממלא תפקידים מכריעים בהתפתחות המסתם. תאים אנדוקרדיאליים עוברים מעבר אפיתל-מזנכימלי (EMT) ב-AVC וב-OFT כדי ליצור את כריות הלב האנדוקרדיאליות, מבנה המופיע בתחילת התפתחות המסתם. מסלולי איתות שונים מפעילים את התהליך הזה; ב-E9.5 בעכברים, NOTCH המופעל באנדוקרדיום בתגובה ל-BMP2 שמקורו בשריר הלב מקדם EMT פולשני של תאים אנדוקרדיאליים באזורי AVC ו-OFT באמצעות הפעלה של TGFβ2 ו-SNAIL (SNAI1), אשר מדכא ישירות את הביטוי של קדהרין אנדותל וסקולרי (VE-cadherin), מרכיב טרנס-ממברני של צמתים דבקים (AJs)6,7,8 . ב- OFT, הפעלת האנדוקרדיום להפעלת EMT מתווכת על ידי FGF8 ו- BMP4, שהביטוי שלהם מופעל על ידי NOTCH 9,10,11,12.

התקדמות ה-EMT כרוכה בדינמיקה תאית כאשר תאים משנים צורה, שוברים ויוצרים מחדש צמתים עם שכניהם, מתפרקים ומתחילים לנדוד13. שינויים אלה כוללים שיפוץ AJ ופירוק הדרגתישל 14,15, איתות קוטביות תאים מישורית (PCP), אובדן קוטביות אפיקו-בסיסית (ABP), כיווץ אפיקלי וארגון ציטוסקטלי16,17. ABP מתייחס להתפלגות החלבונים לאורך הציר הקדמי-אחורי של התא. בלב המתפתח, ויסות ABP בקרדיומיוציטים נדרש להתפתחות החדר18. PCP מתייחס להתפלגות מקוטבת של חלבונים בתוך תאים על פני מישור הרקמה ומווסת את התפלגות התאים; אפיתליה עם גיאומטריה יציבה מורכבת מתאים בצורת משושה, כאשר רק שלושה תאים מתכנסים בקודקודים 19,20,21,22. תהליכים תאיים שונים, כגון חלוקת תאים, חילופי שכנים או דלמינציה המתרחשת במהלך מורפוגנזה אפיתליאלית, מייצרים עלייה במספר התאים המתכנסים על קודקוד ובמספר התאים השכנים שישלתא נתון 22. התנהגויות תאיות אלה הקשורות ל-PCP ניתנות לוויסות על-ידי מסלולי איתות שונים, דינמיקה של אקטין או סחר תוך-תאי23.

הנתונים שהופקו בחקר התפתחות המסתם בעכברים התקבלו מקטעים רוחביים, קורונליים או סגיטליים של לבבות עובריים E8.5 ו- E9.5, שבהם האנדוקרדיום מוצג כקו של תאים במקום כשדה של תאים - האנדוקרדיום מכסה את כל פני השטח הפנימיים של צינור הלב24. חלקים עובריים אינם מאפשרים ניתוח של PCP באנדוקרדיום של עוברי עכבר. שיטת הניסוי החדשנית שלנו מאפשרת ניתוח של התפלגות תאים אנדוקרדיאליים, אניזוטרופיה של AJ וניתוח צורת תא בודד, כפי שמוצג בתוצאות המייצגות. סוג זה של נתונים נדרש לניתוח PCP, יחד עם תיאור של מולקולות אחרות הקשורות ל- PCP, שאינן מוצגות בדוח זה. אימונופלואורסצנציה שלמה, הכנת דגימה ספציפית ושימוש בעכברים מהונדסים גנטית מאפשרים ניתוח קוטביות מישורית באנדוקרדיום עם תחילת התפתחות המסתם בעכברים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקרים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים של המרכז הלאומי לניסויים בבעלי חיים (Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares) ועל ידי קהילת מדריד (ref. PROEX 155.7/20). כל נהלי בעלי החיים תאמו את הנחיית האיחוד האירופי 2010/63EU והמלצה 2007/526/EC בנוגע להגנה על בעלי חיים המשמשים למטרות ניסוייות ומדעיות אחרות, שנחקקו בחוק הספרדי תחת Real Decreto 1201/2005.

1. הסתרה של AVC ו / או OFTs (מותאם מ Xiao et al. 25)

  1. הגדר צלבים אחר הצהריים בין mTmG נקבה לבין זכר VE-Cadherin-Cre-ERT/+.
  2. למחרת בבוקר, בדוק אם יש תקע נרתיקי. אם יש תקע נרתיקי, ספרו אותו כחצי יום (E0.5). בהתאם לניסוי של עניין, לספור 8 ימים או 9 ימים.
  3. 24 שעות לפני הדיסקציה, יש לגדל את הנקבה ההרה דרך הפה עם 50 μL של 5 מ"ג/מ"ל 4-OH-טמוקסיפן מדולל בשמן תירס.
    הערה: מינון זה יגרום לכמות מוגבלת של רקומבינציה בתיווך CRE המתגלה על ידי נוכחות של שיבוטים חיוביים ל-GFP. המינון המתאים יצטרך להיקבע עם כל אצווה חדשה של 4-OH-טמוקסיפן.
  4. להקריב את הנקבה ההרה ב E8.5 או E9.5 על ידי נקע צוואר הרחם.
  5. פתח את הבטן של העכברות ההרות באמצעות מספריים והסר את הרחם המכיל את העוברים באמצעות מספריים ומלקחיים עדינים.
  6. מניחים את הרחם בצלחת פטרי המכילה מי מלח קרים כקרח 1x עם אגירת פוספט (PBS) עם 0.1% Tween-20 (PBT).
  7. הסר את deciduae בודדים מן הרחם תחת מיקרוסקופ ניתוח באמצעות מלקחיים עדינים.
  8. באמצעות פינצטה עדינה, לבצע חתך בחלק הלבן של ה-decidua, שם נמצא העובר, להסיר אותו בעדינות, להימנע ממשיכה, ולהעביר את העוברים לצלחת פטרי חדשה עם PBT טרי באמצעות P1000 עם קצה חתוך, משאיר קוטר גדול מספיק כדי שהעובר יעבור דרכו מבלי להישבר.
  9. עבור גנוטיפ, לקחת חתיכה קטנה של שק החלמון (0.5 מ"מ2) או חתיכה של הזנב (מהקצה האחורי, לספור 5 עד 10 סומיטים לכיוון הראש) ולעכל אותו 100 μL של חיץ מתאים.
  10. מתחת למכסה המנוע, העבירו את העוברים ל-4% פרפורמלדהיד קר כקרח (4% PFA) ב-PBS מסונן סטרילי בצינור מיקרוצנטריפוגה (2 מ"ל) בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. לתקן את העוברים מ 2 שעות עד לילה (O / N) ב 4 מעלות צלזיוס על nutator.
  11. מתחת למכסה האדים, הסר את קיבוע 4% PFA מצינורות המיקרוצנטריפוגה מבלי לגעת בעוברים. יש להשליך את ה-PFA בגורם מכיל מתאים.
  12. שטפו את העוברים 5x ב-PBT קר במשך 10 דקות כל אחד בטמפרטורת החדר (RT).
  13. באמצעות מלקחיים עדינים, הסר את הלב והעבר אותו לצינור מיקרוצנטריפוגה חדש של 1.5 מ"ל עם PBT טרי.

2. כל הר אימונופלואורסצנציה של הלב העוברי של העכבר

  1. החלף PBT ב- PBSTr (0.4% טריטון X-100 ב- PBS) ושטוף את הדגימות 3x, 5 דקות כל אחת, ב- RT על שייקר מסלולי.
  2. החלף PBSTr בתמיסה חוסמת (PBSTr עם סרום בקר 10% מומת בחום). דגירה מ-2 שעות ל-O/N ב-4 מעלות צלזיוס על שייקר מסלולי.
  3. החלף תמיסת חסימה בתמיסת חסימה המכילה נוגדן ראשוני בריכוז הרצוי (לנוגדן אנטי-GFP או אנטי-VE-Cadherin,יש להשתמש בדילול 1:1000). דגירה O/N על שייקר מסלולי ב-4 מעלות צלזיוס.
  4. לאחר דגירה O/N ב-4 מעלות צלזיוס, דגירה במשך 1.5 שעות ב-RT על שייקר מסלולי. שלב זה חשוב מאוד כדי להגדיל את יחס האות לרעש.
  5. הסר ושמור בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס את תמיסת הנוגדנים העיקרית לעד שלושה ניסויים עתידיים (הוסף נתרן אזיד לריכוז סופי של 0.02% לשימור מיטבי).
  6. שטפו את העוברים 3x עם PBSTr למשך 3 דקות כל אחד.
  7. לשטוף את העוברים עם PBSTr 3x במשך 30 דקות כל אחד על שייקר אורביטלי ב 4 מעלות צלזיוס.
  8. לאחר השטיפה האחרונה, יש להוסיף 1 מ"ל של תמיסה חוסמת המכילה 1:1000 נוגדנים משניים מצומדים פלואורסצנטיים כנגד המין המארח העיקרי של הנוגדנים. מוסיפים גם 1:3000 DAPI לתמיסה ומדגרים את העוברים O/N על שייקר אורביטלי ב-4 מעלות צלזיוס.
  9. לאחר דגירה O/N ב-4 מעלות צלזיוס, דגירה במשך 1.5 שעות ב-RT על שייקר מסלולי. שלב זה חשוב מאוד כדי להגדיל את יחס האות לרעש.
  10. שטפו את העוברים 3x עם PBSTr למשך 3 דקות כל אחד.
  11. שטפו את העוברים עם PBSTr 3x-5x למשך 30 דקות כל אחד על שייקר מסלולי ב-RT.

3. הרכבת העכבר AVC עוברי או OFTs

  1. שים את הלבבות על צלחת פטרי (35 מ"מ) המכילה PBS.
  2. באמצעות חוט טונגסטן ומלקחיים עדינים, לבודד את AVC או OFT, ולחתוך אותם לאורך26.
  3. הכן כיסויים (22 מ"מ x 22 מ"מ), שקופיות (60 מ"מ x 24 מ"מ), מלקחיים, פיפטה P200 עם הקצוות המתאימים, מגבת נייר וכל מדיה להרכבה מימית על בסיס גליצרול לפלואורסצנציה, ללא DAPI.
  4. תוך שימוש בגישה דומה לזו של Xiao, C. et al.25, הדביקו שתי רצועות של סרט הדבקה על מגלשה, מופרדות על ידי 0.3-0.6 ס"מ על מנת ליצור חלל חדר תלת-ממדי שיאפשר לדגימות לשמר את צורתו המקורית מבלי למעוך אותן.
  5. בזהירות, ותוך שימוש בנפח המינימלי של המאגר, שחרר את הדגימות על השקופית בין פסי הקלטת באמצעות פיפטה חתוך P200 חתוך. השתמש במיקרוסקופ מנתח כדי להגדיל את הדיוק.
  6. באמצעות מלקחיים עדינים, מניחים את הדגימות כאשר האנדוקרדיום פונה כלפי מעלה (שריר הלב כלפי מטה על המגלשה).
  7. הסר עודפי PBS באמצעות מגבת נייר (הימנע מלגעת בדגימה), ולאחר מכן ייבש את הדגימות למשך 1-2 דקות ב- RT כדי לגרום לדגימות להידבק לשקופית.
  8. הוסף 40 μL של מדיה הרכבה על בסיס מימי על הרקמה.
  9. מניחים את הכיסוי מעל שתי פיסות הסרט ומורידים אותו באיטיות על הרקמה בעזרת מחט או מלקחיים. הימנעו מיצירת בועות אוויר.
  10. אטמו את הכיסוי באמצעות טיפת לק אחת על כל קודקוד של הכיסוי.
  11. לאחר התייבשות הלק, נקו את עודפי ההרכבה מצידי הכיסוי באמצעות מגבת נייר סופגת. יש להימנע מהזזת הכיסוי.
  12. הוסיפו לק לאורך קצוות הכיסוי כדי לאטום אותו לחלוטין, ובכך למנוע התאדות של חומרי הקירור.
  13. באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי זקוף או הפוך, צלם תמונות ב-10x לתצוגה כללית וב-63x עם זום 3x לתמונות מפורטות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הנתונים שנוצרו באמצעות פרוטוקול זה מראים כי ניתן לבצע הדמיה פנים אל פנים של אנדוקרדיום של AVC. המטרה הראשונה הייתה לנתח את צורת התא של האנדוקרדיום במהלך היווצרות השסתומים ברזולוציה תאית (איור 1). כדי להדגיש תאים אנדוקרדיאליים בודדים ב-E9.5, השתמשנו בשני זני עכברים מהונדסים. (1) ROSAmT/mG הוא אלל כתב Cre פלואורסצנטי בעל שני צבעים (tdTomato/mT ו-EGFP/mG) שהפלואורסצנטיות שלו מתגלה בקרום התא. ללא הפעלה בתיווך Cre, הטרנסגן מבטא tdTomato (mT)...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנדוקרדיום הוא מונולאייר אפיתל המכסה את כל פני השטח הפנימיים של צינור הלב העוברי. במהלך התפתחות המסתם, תאים אנדוקרדיאליים באזורים הוולוולאריים הפרוספקטיביים עוברים EMT, וכך תאים אנדוקרדיאליים הופכים ומסדרים מחדש את השלד הציטוסקולרי שלהם כדי להתפרק מהאנדוקרדיום לכיוון ג'לי הלב. אנו ואחרים השגנו נתונים רלוונטיים על התפתחות שסתומים בעוברי עכברים על ידי ניתוח מקטעים רוחביים של לבבות עובריים E8.5 ו- E9.5, שבהם האנדוקרדיום מוצג כשורה של תאים 6,8,24,32.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי מענקים PID2019-104776RB-I00 ו- CB16/11/00399 (CIBER CV) מ- MCIN / AEI / 10.13039 / 501100011033 ל- J. L. P. J.G.-B. מומן על ידי Programa de Atracción de Talento מקומונידד דה מדריד (2020-5ª/BMD-19729). ט.ג.-ג. מומן על ידי Ayudas para la Formación de Profesorado Universitario (FPU18/01054). אנו מודים ליחידת CNIC של מיקרוסקופיה והדמיה דינמית, CNIC, ICTS-ReDib, במימון משותף של MCIN / AEI / 10.13039 / 501100011033 ו- FEDER "דרך להפוך את אירופה" (#ICTS-2018-04-CNIC-16). אנו מודים גם לא' גליציה ול' מנדס על גידול העכברים. עלות פרסום זה נתמכה בחלקה על ידי כספים מהקרן האירופית לפיתוח אזורי. ה- CNIC נתמך על ידי ISCIII, MCIN וקרן Pro CNIC והוא מרכז מצוינות של Severo Ochoa (מענק CEX2020-001041-S) במימון MCIN / AEI / 10.13039 / 501100011033.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4-OH-TamoxifenSigma AldrichH-6278
16% ParaformaldheydeElectron Microscopy Sciences157-10מדלל ל-4% במים
אנטי-GFPAves LabsFGP-1010
anti-VECadherinBD Biosciences555289
עיזים נגד עוף, Alexa Fluor 488Thermo Fisher ScientificA-11039
עז נגד עכבר Alexa Fluor 647Jackson ImmunoResearch115-605-174
DAPIAppliChemA4099,0005
שקופיות Superfrost PLUSVWR631-010825 מ"מ x 75 מ"מ x 1.0 מ"מ
Triton X-100Sigma AldrichX100-100ML
Tween 20A4974,0500AppliChem
Vectashield הרכבה מעבדות וקטורH-1000-10
בינוני

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Buckingham, M., Meilhac, S., Zaffran, S. Building the mammalian heart from two sources of myocardial cells. Nature Reviews Genetics. 6 (11), 826-835 (2005).
  2. Kelly, R. G., Buckingham, M. E., Moorman, A. F. Heart fields and cardiac morphogenesis. Cold Spring Harbour Perspectives in Medicine. 4 (10), 015750(2014).
  3. Ivanovitch, K., et al. outflow tract heart progenitors arise from spatially and molecularly distinct regions of the primitive streak. PLoS Biology. 19 (5), 3001200(2021).
  4. Rochais, F., Mesbah, K., Kelly, R. G. Signaling pathways controlling second heart field development. Circulation Research. 104 (8), 933-942 (2009).
  5. Moorman, A. F., Christoffels, V. M. Cardiac chamber formation: Development, genes, and evolution. Physiological Reviews. 83 (4), 1223-1267 (2003).
  6. Timmerman, L. A., et al. Notch promotes epithelial-mesenchymal transition during cardiac development and oncogenic transformation. Genes & Development. 18 (1), 99-115 (2004).
  7. Luna-Zurita, L., et al. Integration of a Notch-dependent mesenchymal gene program and Bmp2-driven cell invasiveness regulates murine cardiac valve formation. Journal of Clinical Investigation. 120 (10), 3493-3507 (2010).
  8. Papoutsi, T., Luna-Zurita, L., Prados, B., Zaffran, S., de la Pompa, J. L. Bmp2 and Notch cooperate to pattern the embryonic endocardium. Development. 145 (13), (2018).
  9. MacGrogan, D., Luna-Zurita, L., de la Pompa, J. L. Notch signaling in cardiac valve development and disease. Birth Defects Research Part A: Clinical and Molecular Teratology. 91 (6), 449-459 (2011).
  10. de la Pompa, J. L., Epstein, J. A. Coordinating tissue interactions: Notch signaling in cardiac development and disease. Developmental Cell. 22 (2), 244-254 (2012).
  11. Runyan, R. B., Markwald, R. R. Invasion of mesenchyme into three-dimensional collagen gels: a regional and temporal analysis of interaction in embryonic heart tissue. Developmental Cell. 95 (1), 108-114 (1983).
  12. Wu, B., et al. Nfatc1 coordinates valve endocardial cell lineage development required for heart valve formation. Circulation Research. 109 (2), 183-192 (2011).
  13. Amack, J. D. Cellular dynamics of EMT: Lessons from live in vivo imaging of embryonic development. Cell Communication and Signaling. 19 (1), 79(2021).
  14. Cano, A., et al. The transcription factor snail controls epithelial-mesenchymal transitions by repressing E-cadherin expression. Nature Cell Biology. 2 (2), 76-83 (2000).
  15. Batlle, E., et al. The transcription factor snail is a repressor of E-cadherin gene expression in epithelial tumour cells. Nature Cell Biology. 2 (2), 84-89 (2000).
  16. Weng, M., Wieschaus, E. Myosin-dependent remodeling of adherens junctions protects junctions from Snail-dependent disassembly. Journal of Cell Biology. 212 (2), 219-229 (2016).
  17. Weng, M., Wieschaus, E. Polarity protein Par3/Bazooka follows myosin-dependent junction repositioning. Developmental Biology. 422 (2), 125-134 (2017).
  18. Jimenez-Amilburu, V., et al. In vivo visualization of cardiomyocyte apicobasal polarity reveals epithelial to mesenchymal-like transition during cardiac trabeculation. Cell Reports. 17 (10), 2687-2699 (2016).
  19. Davey, C. F., Moens, C. B. Planar cell polarity in moving cells: Think globally, act locally. Development. 144 (2), 187-200 (2017).
  20. Grego-Bessa, J., et al. The tumor suppressor PTEN and the PDK1 kinase regulate formation of the columnar neural epithelium. Elife. 5, 12034(2016).
  21. Jones, C., Chen, P. Planar cell polarity signaling in vertebrates. Bioessays. 29 (2), 120-132 (2007).
  22. Mahaffey, J. P., Grego-Bessa, J., Liem, K. F., Anderson, K. V. Cofilin and Vangl2 cooperate in the initiation of planar cell polarity in the mouse embryo. Development. 140 (6), 1262-1271 (2013).
  23. Devenport, D. Tissue morphodynamics: Translating planar polarity cues into polarized cell behaviors. Seminars in Cell and Developmental Biology. 55, 99-110 (2016).
  24. Del Monte, G., Grego-Bessa, J., Gonzalez-Rajal, A., Bolos, V., De La Pompa, J. L. Monitoring Notch1 activity in development: Evidence for a feedback regulatory loop. Developmental Dynamics. 236 (9), 2594-2614 (2007).
  25. Xiao, C., Nitsche, F., Bazzi, H. Visualizing the node and notochordal plate in gastrulating mouse embryos using scanning electron microscopy and whole mount immunofluorescence. Journal of Visualized Experiments. (141), e58321(2018).
  26. Mahler, G., Gould, R., Butcher, J. Isolation and culture of avian embryonic valvular progenitor cells. Journal of Visualized Experiments. (44), e2159(2010).
  27. Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. A global double-fluorescent Cre reporter mouse. Genesis. 45 (9), 593-605 (2007).
  28. Wang, Y., et al. Ephrin-B2 controls VEGF-induced angiogenesis and lymphangiogenesis. Nature. 465 (7297), 483-486 (2010).
  29. Yilmaz, M., Christofori, G. EMT, the cytoskeleton, and cancer cell invasion. Cancer and Metastasis Reviews. 28 (1-2), 15-33 (2009).
  30. Nishimura, T., Honda, H., Takeichi, M. Planar cell polarity links axes of spatial dynamics in neural-tube closure. Cell. 149 (5), 1084-1097 (2012).
  31. Blankenship, J. T., Backovic, S. T., Sanny, J. S., Weitz, O., Zallen, J. A. Multicellular rosette formation links planar cell polarity to tissue morphogenesis. Developmental Cell. 11 (4), 459-470 (2006).
  32. Prados, B., et al. Myocardial Bmp2 gain causes ectopic EMT and promotes cardiomyocyte proliferation and immaturity. Cell Death and Disease. 9 (3), 399(2018).
  33. Camenisch, T. D., Biesterfeldt, J., Brehm-Gibson, T., Bradley, J., McDonald, J. A. Regulation of cardiac cushion development by hyaluronan. Experimental & Clinical Cardiology. 6 (1), 4-10 (2001).
  34. Courchaine, K., Rykiel, G., Rugonyi, S. Influence of blood flow on cardiac development. Progress in Biophysics and Molecular Biology. 137, 95-110 (2018).
  35. Goddard, L. M., et al. Hemodynamic forces sculpt developing heart valves through a KLF2-WNT9B paracrine signaling axis. Developmental Cell. 43 (3), 274-289 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

VE Cadherin

מאמרים קשורים