ביסוס הריון הוא תהליך דינמי הכולל הצלבה מורכבת של עוברים ורחם. התרומות המדויקות של סביבת הרחם האימהית לתהליכים אלה נותרו תחום מחקר פעיל. כאן, פרוטוקולים מפורטים מסופקים כדי לסייע בעיצוב מודלים של בעלי חיים in vivo כדי לענות על שאלות מחקר אלה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שיטות לחקר תרומות הרחם לביסוס הריון במודל עכבר לכריתת שחלות
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
כדי לבסס הריון, בלסטוציסט בר קיימא חייב לקיים אינטראקציה מוצלחת עם רירית הרחם (רירית הרחם) כדי להקל על ההשתלה והיווצרות השליה ולאפשר הריון מתמשך. המגבלות להצלחת הריון הנגרמות על ידי מומים עובריים ידועות היטב והתגברו במידה רבה בעשורים האחרונים עם עליית הפריה חוץ גופית (IVF) וטכנולוגיות רבייה מסייעות. עם זאת, עד כה, התחום לא התגבר על המגבלות הנגרמות על ידי אנדומטריום שאינו פתוח כראוי, ובכך הביא לקיפאון בשיעורי ההצלחה של הפריה חוץ גופית. תפקודי השחלות ורירית הרחם שלובים זה בזה באופן הדוק, שכן הורמונים המיוצרים על ידי השחלה אחראים למחזוריות הווסת של רירית הרחם. לכן, בעת שימוש במודלים מכרסמים של הריון, זה יכול להיות קשה לקבוע אם תוצאה שנצפתה נובעת מגירעון בשחלות או ברחם. כדי להתגבר על כך, פותח מודל עכבר שחלתי עם החזרת עוברים או דצידואליזציה מלאכותית כדי לאפשר מחקר של תרומות ספציפיות לרחם להריון. מאמר זה יספק הוראות כיצד לבצע כריתת שחלות ויציע תובנות לגבי טכניקות שונות לאספקת הורמונים אקסוגניים לתמיכה בדצידואליזציה מלאכותית מוצלחת או בהריון לאחר החזרת עוברים מתורמים בריאים. טכניקות אלה כוללות הזרקה תת עורית, כדוריות שחרור איטי ומשאבות מיני אוסמוטיות. יידונו היתרונות והחסרונות העיקריים של כל שיטה, המאפשרים לחוקרים לבחור את עיצוב המחקר הטוב ביותר לשאלת המחקר הספציפית שלהם.
מבוא
עם השימוש הגובר בטכנולוגיות רבייה בסיוע בעשורים האחרונים, התגברו על מחסומים רבים להתעברות, המאפשרים לזוגות רבים להקים משפחות למרות בעיות פוריות1. לעתים קרובות ניתן לעקוף ביציות או גירעונות זרע באמצעות הפריה חוץ גופית או הזרקת זרע intracytoplasmic; עם זאת, נושאים הקשורים לרחם וקליטת רירית הרחם נותרו "קופסה שחורה" חמקמקה של פוטנציאל רבייה2.
הריון נוצר כאשר עובר באיכות גבוהה בהצלחה אינטראקציה עם אנדומטריום פתוח (רירית הרחם). הסיכויים להריון מוצלח בכל מחזור חודשי נתון נמוכים, בסביבות 30%3,4. מבין אלה שמצליחים, רק 50%-60% מתקדמים מ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל בעלי החיים שוכנו במתקנים מבוקרי טמפרטורה ובעלי מחסום גבוה (מעבדת המחקר לבעלי חיים של אוניברסיטת מונאש) עם גישה חופשית למזון ומים ומחזור אור כהה של 12 שעות. כל ההליכים בוצעו בהתאם לאישור ועדת האתיקה של פלטפורמת המחקר בבעלי חיים מונאש (#21908, 17971) ובוצעו בהתאם לקוד העיסוק של המועצה הלאומית לבריאות ולמחקר רפואי לטיפול ושימוש בבעלי חיים.
1. הכנה כירורגית
- Autoclave כל כלי הניתוח, גזה, מגבות נייר הדרושים עבור ההליכים על מחזור סחורות קשות / יבש ב 121 ° C עם זמן אחיזה של 30 דקות זמן ייבוש של 30 דקות.
- הניחו כרית ספסל סטרילית לסביבת העבודה הכירורגית והכינו משככי כאבים.
- לדלל קרפרופן במי מלח סטריליים ל-....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
מודל מאופיין היטב של דצידואליזציה מלאכותית מתואר במאמר פרוטוקול זה (איור 1A). כאן, נקבות עכברות צעירות (בנות 8 שבועות) עברו כריתת שחלות כירורגית כמתואר בסעיף 1 ובסעיף 2. לאחר מכן העכברות נחו במשך שבועיים כדי להבטיח שהורמוני השחלות האנדוגניים יתפוגגו לפני שנתמכו בהורמונים אקסוגניים כמתואר בסעיפים 3-7 וסעיף 9. דצידואליזציה מלאכותית נגרמה על ידי הזרקה תוך נרתיקית של שמן שומשום, ולאחר מכן החיות נחו עד לאיסוף רקמות, כמתואר בסעיף 9. במחקר זה, דצידואליזציה מלאכותית בוצעה בעכבר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מאמר זה מספק הוראות שלב אחר שלב כיצד לבצע OVX ולספק הורמונים אקסוגניים למחקרים המתמקדים בהבנת תרומת הרחם להריון ולפוריות. שני פרוטוקולים מפורטים מסופקים על שני יישומים ניסיוניים של שיטות אלה, כולל ביצוע החזרת עוברים וגרימת דצידואליזציה באופן מלאכותי.
בעוד שביצוע OVX יכול להיות מאתגר בהתחלה - במיוחד עבור חוקרים חדשים למודלים של מכרסמים - זהו הליך פשוט יחסית לאחר שאומן ותורגל כראוי. השלבים העיקריים בהליכים כוללים מעקב צמוד אחר בעלי החיים בזמן שהם תחת הרדמה ולוודא שלא נותרה רקמת שחלה מאחור. בדגמי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי אין אינטרסים כלכליים או אחרים מתחרים.
תודות
עבודה זו התאפשרה באמצעות תמיכת התשתיות התפעוליות של ממשלת מדינת ויקטוריה והמועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי של ממשלת אוסטרליה (NHMRC) IRIISS. עבודה זו נתמכה על ידי הפקולטה לרפואה, סיעוד ומדעי הבריאות באוניברסיטת מונאש מענק גישה ל- A.L.W. (Winship-PAG18-0343) כדי לגשת לפלטפורמת שירותי הרבייה של מונאש. א.ל.ו. נתמכת על ידי DECRA מימון DE21010037 ממועצת המחקר האוסטרלית (ARC). J.N.H. ו- L.R.A. נתמכים על ידי מלגת תוכנית הכשרת המחקר של ממשלת אוסטרליה. L.R.A. נתמכת על ידי מלגת הצטיינות בוגרי מונש. K.J.H. נתמך על ידי ARC Future Fellowship FT190100265.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ALZET 1002 מיני משאבות אוסמוטיות | BioScientific | 1002 | מספק 0.25 ומיקרו; ליטר לשעה למשך 14 ימים. השתמש בסעיף 7 (הליך ניסיוני - העברת עוברים). |
| ALZET 1003D מיני משאבות אוסמוטיות BioScientific | 1003D | מספק 1 ומיקרו; ליטר לשעה למשך 14 ימים. השתמש בסעיף 8 (נוהל ניסוי - דצידואליזציה מלאכותית). | |
| קליפס ALZET רפלקס 7 מ"מ | BioScientific | 0009971 | ניתן להשתמש בקליפס רפלקס או בקליפס מישל לסגירת פצעים, בהתאם להעדפה |
| מוליך קליפ רפלקס ALZET | BioScientific | 0009974 | ניתן להשתמש בקליפס רפלקס או בקליפס מישל לסגירת פצעים, בהתאם להעדפה |
| מסיר קליפ רפלקס ALZET | BioScientific | 0009976 | ניתן להשתמש בקליפס רפלקס או בקליפס מישל לסגירת פצעים, בהתאם להעדפה |
| הזרקת Bupivicaine | Pfizer | NA | Stock 0.5%. יש להשתמש ב-0.05% במי מלח |
| אסטרדיול | סיגמא | E8875 | |
| מלוקסיקם | איליום | NA | מרכיב פעיל 0.5 מ"ג/מ"ל. השתמש ב-3.5 מ"ל לכל בקבוק מים בכלוב של 400 מ"ל, או כפי שהווטרינר של המוסד שלך רושם. |
| מישל קליפס | דניאלס | NS-000242 | |
| איטום רב תכליתי | Dow Corning | 732 | |
| מכשיר העברת עוברים לא כירורגי (NSET) | ParaTechs | 60010 | מכיל ספקולום 6 מ"מ. לשימוש חד פעמי בלבד. |
| פרוגסטרון | סיגמא | P0130 | מסיס באתנול. השתמש עבור סעיף 3 (הכנת הורמונים - הזרקה תת עורית) ו סעיף 4 (הכנת הורמונים - כדורים בשחרור איטי) |
| פרוגסטרון | סיגמא | P7556 | מסיס במים. לשימוש בסעיף 5 (הכנת הורמונים - מיני משאבות אוסמוטיות)משחת |
| עיניים מרעננת | אלרגן | NA | 42.5% משקל/נפח פרפין נוזלי, 57.3% משקל/נפח פרפין לבן רך, |
| רימדיל קרפרופן | Zoetis | NA | מלאי 50 מ"ג/מ"ל. השתמש ב-1 מ"ג/מ"ל (במינון של 5 מ"ג/ק"ג) |
| צינורות גומי | Dow Corning | 508-008 | נשטף ב-100% אתנול וחתוך לחתיכות של 1 ס"מ. קוטר פנימי 1.57 מ"מ & 0.23 מ"מ; קוטר חיצוני 3.18 מ"מ &Plusmn; 0.23 מ"מ; קיר 0.81 מ"מ. |
| שמן שומשום | Sigma | S3547 | |
| תפרי משי Sofsilk גודל 3-0 | Covidien | GS-832 |
מקורות
- Szamatowicz, M. Assisted reproductive technology in reproductive medicine - Possibilities and limitations. Ginekologia Polska. 87 (12), 820-823 (2016).
- Evans, J., et al. Fertile ground: Human endometrial programming....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
