פרוטוקול זה מציג מערכת ביו-אסאי אופטימלית של עלים מנותקים להערכת היעילות של פטריות אנטומופתוגניות (EPF) נגד כנימת החרדל (Lipaphis erysimi (Kalt.)), חרק פרתנוגנטי. השיטה מתארת את תהליך איסוף הנתונים במהלך ניסויים בצלוחית פטרי, ומאפשרת לחוקרים למדוד באופן עקבי את האלימות של EPF נגד כנימות חרדל וחרקים פרתנוגנטיים אחרים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הערכת ההשפעה של פטריות אנטומופתוגניות נגד חרק פרתנוגנטי, כנימת חרדל, Lipaphis erysimi (Kalt.)
במאמר זה
סיכום
תקציר
כנימת החרדל (L. erysimi) היא מזיק השורץ גידולים מצליבים שונים ומעביר וירוסים צמחיים. כדי להשיג הדברה ידידותית לסביבה, פטריות אנטומופתוגניות (EPF) הן חומרי הדברה מיקרוביאליים פוטנציאליים להדברת מזיק זה. לכן, יש צורך בבדיקת אלימות של מבודדי EPF בתנאי צלחת פטרי לפני היישום בשטח. עם זאת, כנימת החרדל היא חרק פרתנוגנטי, מה שמקשה על רישום נתונים במהלך ניסויים בצלוחית פטרי. מערכת שונה לבדיקות ביולוגיות של עלים מנותקים פותחה כדי לטפל בבעיה זו, באמצעות מיקרו-מרסס כדי לחסן קונידיה על כנימות ולמנוע טביעה על ידי הקלה על ייבוש באוויר לאחר תרחיף נבגים. המערכת שמרה על לחות יחסית גבוהה לאורך כל תקופת התצפית, ודיסקית העלה נשארה טרייה במשך יותר מעשרה ימים, מה שאפשר רבייה פרתנוגנטית של הכנימות. כדי למנוע הצטברות צאצאים, בוצע תהליך של הסרה יומיומית באמצעות מברשת צביעה. פרוטוקול זה מדגים מערכת יציבה להערכת האלימות של מבודדי EPF נגד כנימות חרדל או כנימות אחרות, ומאפשר בחירה של מבודדים פוטנציאליים להדברת כנימות.
מבוא
כנימת החרדל (L. erysimi) היא מזיק ידוע לשמצה השורץ מגוון גידולים מצליביםוגורם להפסדים כלכליים משמעותיים 1. בעוד שהומלץ על מספר קוטלי חרקים שיטתיים כדי להילחם בנגיעות כנימות, השימוש התכוף בקוטלי חרקים אלה מעלה חששות לגבי עמידות לחומרי הדברה 2,3. לכן, במונחים של הדברה ידידותית לסביבה, פטריות אנטומופתוגניות (EPF) יכולות לשמש כאסטרטגיית הדברה חלופית מתאימה. EPF הוא פתוגן חרקים בעל יכולת להדביק פונדקאים על ידי חדירה לציפורניים שלהם, מה שהופך אותו לסוכן רב עוצמה להדברת כנימות וחרקים מוצצי צמחים אחרים4. יתר על כן, EPF הוכיחה את עצמה כטכניקת הדברה ישימה ובת קיימ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
הערה: תרשים הזרימה המלא מוצג באיור 1.
1. איסוף ותחזוקת כנימות חרדל
- אוסף כנימות חרדל
- הופכים את העלים ובודקים ויזואלית אם יש התפשטות של כנימות חרדל על גידולים מצליבים בשדה.
- רשום את פרטי אתר הדגימה (כלומר, GPS) ואת הצמחים המארחים, ואשר את ההיסטוריה של יישומי קוטלי חרקים עם החקלאים.
- השתמשו בשואב חרקים או במברשת צביעה עדינה (ראו טבלת חומרים) כדי לאסוף כ-50 כנימות חרדל לתוך צינור צנטריפוגה בנפח 50 מ"ל מגידולים מצליבים בשדה ולהביא את הדגימה למעבדה תוך 3 שעות.
- הכינו צלחת פטרי לתחזוקה זמנית עם עלים ממשפחת המצליבים שנכרתו ונייר פ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
תרשים הזרימה המוצג ממחיש את מצבן היציב של כנימות החרדל מאיסוף השטח ועד לסינון האלימות. תחזוקת הכנימות מאיסוף השדה הבטיחה גידול יציב במושבות הכנימות עם אספקת מזון נאותה. הכנימות שנאספו בשדה אושרו ככנימות חרדל באמצעות שימוש בסמנים מולקולריים, כולל גודל אמפליקון PCR וריצוף LeCO1. בדיקת האלימות, שנערכה בשיטת העלים המנותקים, חשפה שיעור הישרדות עקבי של כנימות חרדל, כאשר קבוצת הביקורת הציגה שיעור הישרדות של 85% (איור 4).
במהלך בדיקת האלימות, Cc-NCHU-213 הפגין את יכולת הר.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
המצליבים, קבוצה של ירקות, שורצים לעתים קרובות על ידי מינים רבים של כנימות, כולל כנימת חרדל (L. erysimi) וכנימת כרוב (Brevicoryne brassicae)26. שני המינים דווחו בטייוואן27, וייתכן שהם יתקיימו יחד באתר האיסוף. כדי להבחין בין מיני כנימות קרובים, מחקר זה השתמש בטכניקת זיהוי מולקולרית באמצעות ערכת פריימר מרובת מרבבים21. על ידי תכנון סמן מולקולרי ממקטע הגן COI של כנימת החרדל, זיהינו בהצלחה את כנימת החרדל, ובכך אישרנו את אמינות הסמן המולקו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי אין ניגוד עניינים בעבודה זו.
תודות
מחקר זה נתמך על ידי 109-2313-B-005 -048 -MY3 ממשרד המדע והטכנולוגיה (MOST).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 10 μ L לולאת חיסון | NEST Scientific | 718201 | |
| 100 bp סולם DNA III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| 50 מ"ל צינור צנטריפוגה | Bioman | Scientific ET5050-12 | |
| 6 ס"מ צלחת פטרי | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| שואב חרקים 6 מ"מ | MegaView Science | BA6001 | |
| נייר סינון 70 מ"מ מס' 1 | טויו רושי קאישה | ||
| 70% אתנול | |||
| 9 ס"מ צלחת פטרי | אלפא פלוס סיינטיפיק | 16001 | |
| אגר | ביומן מדעי | AGR001.1 | מיקרוביולוגיה כיתה |
| אגרוז | ביומן מדעי | PB1200 | |
| BioGreen בטוח DNA ג'ל מאגר | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow ג'ל / PCR ערכת | Geneaid | DFH300 | |
| ערכת בידוד DNA גנומי של Gene-Spin | Protech Technology | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Hemocytometer | Paul Marienfeld | 640030 | |
| עלי קומטסונה (Brassica rapa var. perviridis) | Tai Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Microsprayer | |||
| MiniAmp Thermal Cycler | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| כנימת חרדל (Lipaphis erysimi) | |||
| מברשת ציור | חברת מברשות טיאן צ'נג 4716608400352 | ||
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| עלי גלולה | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Dextrose מרק | HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS סטטיסטיקה | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
מקורות
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
