מאמר זה נועד להציג שיטה אופטימלית להערכת פקקת ורידים במודל סרטן עכברים, באמצעות קליפסים וסקולריים להשגת קשירה ורידית. אופטימיזציה ממזערת את השונות במדידות הקשורות לפקקת ומשפרת את הרלוונטיות לפקקת ורידים הקשורה לסרטן אנושי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
מאמר מתודולוגי זה מדגיש את הניואנסים הכירורגיים של מודל מכרסם של פקקת ורידי, במיוחד בהקשר של פקקת הקשורה לסרטן (CAT). פקקת ורידים עמוקים היא סיבוך שכיח בקרב מחלימים מסרטן ועלולה להיות קטלנית. המודלים הנוכחיים של פקקת ורידים מורין כוללים בדרך כלל חסימה מכנית מלאה או חלקית של הווריד הנבוב התחתון (IVC) באמצעות תפר. הליך זה גורם לקיפאון מלא או חלקי של נזק לדם ולאנדותל, ומפעיל טרומבוגנזה. למודלים הנוכחיים מגבלות כגון שונות גבוהה יותר במשקלי קרישי דם, שיעור תמותה משמעותי ועקומת למידה ממושכת. דו"ח זה מציג חידודים כירורגיים באמצעות קליפסים וסקולריים כדי להתמודד עם חלק ממגבלות אלה. באמצעות מודל עכבר סינגני של סרטן המעי הגס, השתמשנו בקליפסים מותאמים אישית של כלי דם כדי לקשור את הווריד האינפרא כלייתי קאווה. קליפסים אלה מאפשרים מרווח שפתיים שיורי בדומה לתפר פוליפרופילן 5-0 לאחר קשירת IVC. עכברים בשיטת התפרים שימשו כבקרות. שיטת קליפס כלי הדם הביאה לחסימה חלקית עקבית של כלי הדם ולמשקלי קריש גדולים יותר עם פחות שונות מאשר שיטת התפרים. משקלי הקריש הגדולים יותר, מסת הקריש הגדולה יותר והקריש לשטח הפנים הלומינלי IVC היו צפויים בשל פרופיל הלחץ הגבוה יותר של אטבי כלי הדם בהשוואה לתפר פוליפרופילן 6-0. הגישה אומתה על ידי אולטרה-סאונד בקנה מידה אפור, אשר חשף מסת קריש גדולה יותר באופן עקבי בווריד הווריד האינפרא כלייתי עם קליפסים וסקולריים בהשוואה לשיטת התפרים. תצפיות אלה אוששו עוד יותר עם צביעת האימונופלואורסצנטיות. מחקר זה מציע שיטה משופרת ליצירת מודל פקקת ורידים בעכברים, אשר ניתן להשתמש בו כדי להעמיק את ההבנה המכניסטית של CAT ובמחקר תרגומי כגון גילוי תרופות.
מבוא
טרומבואמבוליזם ורידי הקשור לסרטן (VTE)
הסיכון לטרומבואמבוליזם ורידי (VTE) גבוה פי 4 עד 7 במחלימים מסרטן בהשוואה לאוכלוסייה הכללית 1,2,3. מצב זה מתגלה כקטלני באחד מכל שבעה חולי סרטן. שכיחות VTE משתנה בהתאם לסוג הסרטן ולנטל הגידול והיא הגבוהה ביותר בקרב חולים עם סרטן הלבלב והקיבה4.
VTE הקשור לסרטן בחולי סרטן יש משמעות פרוגנוסטית. היא קשורה להישרדות כללית שלילית בשנה הראשונה לאחר אבחון סרטן, גם לאחר התאמה לגיל, גזע ושלב של סרטן בסיסי5. ממצאים אלה מדגישים את החשיבות של בחינת VTE הקשור ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
במחקר זה נעשה שימוש ב-16 נקבות עכברי C57Bl6/J, בגילאי 8-12 שבועות ובמשקל גוף של 20 עד 25 גרם. העכברים שוכנו בתנאים סטנדרטיים והוזנו בצ'או ובמים אד ליביטום. מחקר זה בוצע באישור הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) באוניברסיטת בוסטון. ההליכים הפתוחים המתוארים כאן נעשו במצב סטרילי.
1. מודל Xenograft
- תרבית תאים
- לפני ההשתלה ההטרוטופית התת עורית, יש לגדל תאי MC-38 כחד-שכבה למפגש של 80%.
- לאחר טריפסיניזציה והשעיה במדיה 10% המכילה FBS, תאי צנטריפוגות ב 277 x גרם, 4 ° C למשך 5 דקות. לאחר מכן, השהה מחדש את התאים במדיה נטולת סרום לריכוז של 1 x 104 תאי MC-38 / מדיה נטול....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
לקבוצה של נקבות עכברי C57Bl6/J, בנות 8-12 שבועות, הוזרקו תאי MC-38 בשלב הלוגריתמי של גדילת התא. הקסנוגרפטים גדלו במהירות בין השבוע השלישי לרביעי לאחר ההזרקה18. ברגע שהגידולים הגיעו לנפח ממוצע של 400 מ"מ3, עכברים חולקו באופן אקראי לקבוצות הביקורת והניסוי. קבוצת הביקורת עברה קשירת IVC עם תפר, ואילו עכברי הניסוי עברו קשירת IVC עם יישום קליפס כלי דם. נפחי הגידול בקבוצת הביקורת ובקבוצות הניסוי היו דומים ללא הבדלים משמעותיים (353 ± 100 מ"מ 3 לעומת 367 ± 46.2 מ"מ3, p = 0.445).<.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
במודל סינגני של סרטן המעי הגס, אנו רואים טרומבוגניות גבוהה יותר וביטויים גבוהים יותר של סמני קרישה בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת הביקורת. חשוב לציין כי השונות בכל הפרמטרים הללו הייתה נמוכה יותר בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת הביקורת. השינוי כלל החדרת קליפ כלי דם עם פרופיל לחץ ספציפי בנקודת המפגש של IVC ווריד הכליה השמאלי. הקליפ הונח מעל ספייסר, שהיה תפר פוליפרופילן 5-0. שינוי זה מפחית את השונות בגודל הקריש ובסמני פקקת. כל העכברים חוו 100% הישרדות.
ניואנסים טכניים
ההליך כלל תשו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי AHA קרדיו-אונקולוגיה SFRN CAT-HD CENTER GRANT 857078 (KR, VCC, XY ו- SL) ו- R01HL166608 (KR ו- VCC).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| בופרנורפין 0.3 מ"ג/מ"ל | PAR פרמצבטי& | nbsp; NDC 42023-179-05 | |
| עכברי C57BL/6J | מעבדת ג'קסון | IMSR_JAX:000664 | |
| קליפר | VWR International, רדנור, פנסילבניה | 12777-830 | |
| CD31 | Abcam | Ab9498 | |
| מונה תאים | MOXIE | MXZ000 | |
| מהדק | כלים מדעיים | 13002-10 | |
| קליפים ASSI. מהדק יחיד B2V, מטרה כללית, | כירורגי מדויק & מכשירים מדעיים | PR 2 144.50 289.00 | |
| Dumont #5SF מלקחיים | כלים מדעיים עדינים | 11252-00 | |
| פיברין | Millipore | MABS2155-100UG | |
| מספריים עדינים - לולאות גדולות | כלי מדע עדינים | 14040-10 | |
| מלקחיים | Fine Science Tools | 11002-12 | |
| Hill Hemostat | Fine Science Tools | 13111-12 | |
| Isoflurane, USP | Covetrus | NDC 11695-6777-2 | |
| MC-38 תא | סיגמא אולדריץ' | SCC172 | |
| מיקרוסקופ | ניקון אקליפס מיקרוסקופ הפוך | TE2000 | |
| מספריים | כלי מדע עדין | 14079-10 | |
| תפירה- ויקריל | AD-כירורגי | #L-G330R24 | |
| תפירה-ניילון 2-0 | אתילון | 664H | |
| תפירה-פרולן 5-0 | אתיקון | 8661G | |
| תפירה-פרולן 6-0 | אתיקון | PDP127 | |
| VEV03100 | VisualSonics | FujiFilm | |
| Vitrogel מטריג'ל מטריקס | הבאר ביו-סיינס | VHM01 |
מקורות
- Blom, J. W., et al. Incidence of venous thrombosis in a large cohort of 66,329 cancer patients: results of a record linkage study. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 4 (3), 529-535 (2006).
- Gabre, J., et al.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
