מאמר שיטה

כלי ליצירת רווחים יציבים וניתנים לשחזור ללא תאים לשיפור האמינות של בדיקת ריפוי פצעים בתאים

DOI:

10.3791/65794

⸱

4 באוקטובר 2024

 ,  ,  , 
1Faculty of Art and Communication, Kunming University of Science and Technology, 2The School of Integrated Chinese and Western Clinical Medicine, Anhui University of Chinese Medicine, 3School of Industrial Design, Hubei University of Technology

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

באמצעות שילוב של עיצוב חוויית אינטראקציה וניתוח דרישות משתמש, אנו מציגים מגרד תאים חדשני המשפר את מבחני ריפוי הפצעים התאיים במונחים של שחזור, אמינות, מעשיות, שלמות התא וחוויית המשתמש.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

האמינות של מדידת נדידת תאים במבחני ריפוי פצעים מתערערת לעתים קרובות על ידי חוסר היציבות המתודולוגית הנפוצה, כלומר שיטה מבוססת טיפים. אנו מציגים מכשיר חדשני שנועד להתמודד עם מגבלות אלה. מגרד התאים החדשני שלנו עולה על הגישה הנוכחית, ויוצר פער עקבי ויציב יותר ללא תאים. ניסויים ביולוגיים חוזרים ונשנים מגלים כי המרווח נטול התאים שנוצר על ידי מגרד התא מציג קצוות ישרים יותר וגודל וצורה אחידים בהשוואה לטכניקה מבוססת קצה (p < 0.05). מבחינת עיצוב המוצר, מגרד התאים מתהדר בערכת צבעים מעודנת המתאימה לסביבות מעבדה, המשפרת את ניטור תוצאות הניסויים, ומאפשרת עיקור באמצעות אוטוקלאבינג לשימוש חוזר. יש לציין כי לאחר הטיפול, מגרד התאים מדגים השפעה זניחה על כדאיות התא והתפשטותו (97.31% ו-24.41%, בהתאמה). לעומת זאת, השיטה מבוססת הקצה מניבה כדאיות תאים נמוכה יותר (91.37%) והתפשטות (18.79%). מחקר זה מציג את מגרד התאים כמכשיר חדשני לשימוש חוזר המסוגל ליצור מרווחים נטולי תאים הניתנים לשחזור תוך שמירה על הכדאיות התאית, ובכך להגביר את האמינות של בדיקות ריפוי פצעים בהשוואה לטכניקות קיימות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גידולים מאופיינים בסימני היכר מובהקים כגון יתרונות גדילה סלקטיבית, חיווט מחדש מטבולי ומודולציה חיסונית, שכולם תורמים באופן מסקרן לנדידת תאים מוגברת, התנהגות ממאירה קריטית של תאי הגידול. תכונה זו משפיעה ישירות על גרורות מרוחקות של הגידול הראשוני, ופוגעת בהישרדות ארוכת הטווח של חולים 1,2,3. יתרונות גדילה סלקטיבית מאפשרים לתאים סרטניים להתחרות בתאים נורמליים, בעוד שחיווט מחדש מטבולי תומך בהתרבות מהירה זו על ידי שינוי מסלולי אנרגיה. במקביל, אפנון חיסוני מאפשר לגידולים לחמוק מהגנות הגוף. מחקרים מדגישים את חומרת הבעיה, ומראים כי גרורות ריאה, לעתים קרובות תוצאה של נדידת תאים מוגברת, היא אירוע סופני המוביל למוות של חולים עם סוגי סרטן שונים4. לדוגמה, סרטן השד5, קרצינומה של צוואר הרחם4 ואוסטאוסרקומה6 מהווים 20%, 9% ו-30% מהמקרים הללו, בהתאמה. לכן, הערכת נדידת תאי הגידול הפכה לחלק בלתי נפרד מהמחקר האונקולוגי הנוכחי, ומדגישה עוד יותר את האופי הרב-גוני של התקדמות הגידול.

בדיקת ריפוי פצעי תאים היא שיטה קלה לשימוש למדידת נדידת תאים במבחנה , המשמשת לעתים קרובות במחקרים אונקולוגיים7. רוב הנסיינים משתמשים בקצוות פיפטה כדי ליצור פצעים בתאים באופן ידני8. למרות ששיטה כזו יכולה ליצור פצעים בתאים במהירות ובנוחות, עדיין יש לה מגבלות רבות המשפיעות על יכולת השחזור והדיוק להערכת נדידת תאים. ראשית, שימוש בקצוות פיפטה ליצירת שריטות באופן ידני מושפע מאוד מזווית ההפעלה, הכוח והמהירות של המפעיל, ומשפיע על יכולת החזרה של השיטה8. שנית, פגמים בתאים שנוצרו על ידי קצה בדרך כלל יש קצוות משוננים ולא קצוות ישרים כי קצוות פיפטה הם מוצרי פלסטיק עם גמישות מסוימת9. מחקרים מסוימים יוצרים פצעים על ידי הנחת תוספות תרבית טרומיות ישירות לתוך צלחת תרבית התא כדי להגביל את טווח התפשטות התאים10. גישה זו עוקפת את המגבלה של השיטה מבוססת הטיפים, כגון קצוות משוננים ויכולת שחזור. עם זאת, אפילו עם חומרים תואמים ביולוגית, הדו-קיום ארוך הטווח של ההטבעה עם התאים עדיין משפיע על צמיחת התאים11. יתר על כן, ההטבעה עלולה לגרום גם לשינויים אפיגנטיים תאיים באזור השוליים עקב הגבלת מגע12. כמו כן, החדרת מגע המיוצרת מחומרים תואמים ביולוגית היא יקרה וקשה לשימוש חוזר, מה שמגביל את היתכנותם13. לכן, יש צורך בכלי חדשני, ניתן לשחזור ומעשי כדי לכמת בקלות נדידת תאים במבחנה .

המטרה העיקרית של שיטה זו היא להציג כלי חדשני לכימות נדידת תאים במבחנה במחקרים אונקולוגיים, תוך התייחסות למגבלות הטכניקות הקיימות ושיפור יכולת השחזור והדיוק בהערכת נדידת תאים.

הרציונל מאחורי פיתוח טכניקה זו טמון בחשיבות הקריטית של הערכת נדידת תאי הגידול באונקולוגיה. גידולים מציגים סימני היכר ייחודיים, כולל יתרונות גדילה סלקטיבית, חיווט מחדש מטבולי ומודולציה חיסונית, כולם תורמים לנדידת תאים מוגברת, היבט בסיסי של ממאירות סרטן. שיטה זו נועדה לספק אמצעי אמין יותר לחקר נדידת תאים, ולתרום להבנה עמוקה יותר של התנהגות הגידול.

שיטה זו מציעה יתרונות משמעותיים על פני טכניקות קיימות. בדיקות גירוד ידניות עלולות לסבול מהפרעות תלויות מפעיל, בעוד שתוספות תרבית עשויות להשפיע על גדילת התאים וביטוי גנים. לעומת זאת, שיטה זו מציעה חזרתיות, דיוק ומעשיות משופרים, ומציגה פתרון חסכוני למדידת נדידת תאים במבחנה במחקר אונקולוגי. הוא עונה על צורך חיוני בכלי אמין ונגיש לחקר נדידת תאים בסוגי סרטן שונים, מה שהופך אותו לתוספת רבת ערך לתחום.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הסכמה מלאה מדעת בכתב ניתנה על ידי כל המשתתפים. אישור האתיקה לא היה ישים מכיוון שלא נכללו דגימות רקמות של בעלי חיים או בני אדם במחקר הנוכחי.

1. חקירת הדרישות של קהילת המשתמשים

  1. העבירו שאלונים לביולוגים/נסיינים העובדים על מבחני ריפוי פצעים בתאים. אסוף את השאלונים המלאים והשתמש בהם למחקר. לצורך מחקר זה, בין התאריכים 12 באוקטובר 2021 עד 3 בפברואר 2022, הועברו 100 שאלונים ל-100 ביולוגים. אחוז ההיענות עמד על 97%.
  2. בקשו מהמשיבים לענות על שאלות כמו, איזה מניסויי גירוד התאים הכי הפריע לכם? ואיזה כלי שימש לביצוע גירוד התא? עקוב אחר שאלות אלה עם שאלות משנה כדי לעקוב אחר הסיבות.
  3. לחקור את תפיסותיהם של הנסיינים לגבי כלים כגון קצוות פיפטה ותוספות תרבית תאים בניסויים לריפוי פצעי תאים. להבין ולאסוף את הסיבות שלהם לבחירת כלי אחד על פני אחר, באמצעות תיאוריית שרשרת הקצה של אמצעים המבוססת על טכניקות סולם בשאלונים סעיף14,15.
    הערה: שיטת הסולם נחלקת לשני סוגים: שיטת הסולם הרך עם ראיונות עומק ושיטת הסולם הקשיח עם שאלונים או חידוני נייר ועיפרון16. שיטת הסולם הקשה הייתה הטכניקה העיקרית בה נעשה שימוש במחקר זה. תיאוריית שרשרת הקצה מציעה כי הידע המפורש המוחזק על ידי משתמשי היעד הוא שטחי וקונקרטי, בעוד הידע שבשתיקה הוא עמוק ומופשט 17,18,19.

2. עיצוב ומידול תלת מימדי

  1. ציירו סקיצה מהתובנות שנאספו מסקר השאלונים הקודם והתחילו את תהליך העיצוב. השתמש בשרטוט ראשוני זה כתוכנית היסוד.
    1. פרט את הממדים והפריסה של כל רכיב על-ידי החלת הפונקציות Dim, DimRadius ו- DimDiameter בתוכנת המידול.
    2. בצע מדידות על ידי קליפר ורנייר בדיוק של 0.02 מ"מ על לוחות 6 בארות בפועל כדי לוודא את הממדים הסופיים של מגרד התא. אשרו שאורכם 42.1 מ"מ, רוחבם 42.1 מ"מ וגובהם 18.5 מ"מ. שימו לב לפרטים בשלב התכנון, במיוחד גובה המוצר והכושר בבאר, כדי לאפשר הרכבה חלקה יותר.
  2. לבנות מודל תלת מימדי ולעבד אותו.
    1. התחל עיצוב תלת מימד בתוכנה על ידי יצירת מודל בסיסי. לחץ על כפתורים כמו ExtrudeCrv למתיחה ולופט לעיצוב העיצוב. לטש את הדגם ולאחר מכן ללחוץ על FilletEdge לקבלת קצוות חלקים.
      הערה: לחצני פונקציה אחרים בשימוש כוללים, קווים - כדי לצייר קטעי קו ישר, Polylines - ליצירת קווים רציפים המורכבים ממקטעים מרובים, מלבנים - לצייר צורות מלבניות, עיגולים - לצייר צורות מעגליות, קשתות - לצייר צורות קשת או אליפטיות, נקודות - כדי למקם סמנים נקודתיים בודדים, טקסט - כדי להוסיף תוויות טקסט, מידות - כדי להוסיף מידות מדודות למודלים, מערך - ליצירת תבניות מועתקות של אובייקטים, סובב - כדי לסובב אובייקטים לזוויות רצויות, הזזה - כדי להעביר אובייקטים למיקומים חדשים, קנה מידה - כדי לשנות גודל של עצמים גדולים או קטנים יותר, חתוך/הרחב - כדי לחתוך או להרחיב אובייקטים כדי לעמוד בגיאומטריה אחרת, איחוד בוליאני/הפרש/הצטלבות - כדי לשלב, להחסיר או למצוא את ההצטלבות של אובייקטים, שכבות - כדי לארגן אובייקטים בשכבות שונות, רינדור - ליצירת תצוגות מעובדות עם חומרים ותאורה וייצוא - לייצוא גיאומטריית מודל לתבניות קובץ אחרות.
    2. ייבא את המודל לתוכנת עיבוד תלת-ממדית. החל חומרים כולל פלסטיק, ספוג ופלדה, ולאחר מכן התאם את התאורה לעיבוד מציאותי.
      הערה: רשימה כללית של לחצני פונקציות כוללת, גרור ושחרר - כדי להחיל חומרים ישירות על חלקים או דגמים על-ידי גרירת חומר מהספרייה ושחרורו על הרכיב הרצוי בתצוגה בזמן אמת, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני - בעת לחיצה ימנית על חומר בספריה, בדרך כלל תראה אפשרויות: החל על בחירה - החל את החומר על חלק נבחר בתצוגה בזמן אמת. עריכת חומר - התאמת תכונות החומר. תכונות חומר (לאחר בחירת חומר) - לגשת ולשנות תכונות ספציפיות של החומר, כגון צבע, חספוס, מקדם שבירה ותכונות אחרות. סרגל החיפוש - כדי למצוא במהירות חומר בספרייה על ידי הקלדת שמו או מילות מפתח משויכות. קטגוריות/תיקיות - כדי לנווט בין קטגוריות או תיקיות שונות של חומרים כמו מתכות, פלסטיק, זכוכית וכו'. הוסף למועדפים - כדי לסמן חומרים מסוימים כמועדפים לגישה קלה במהלך הפעלות עתידיות. מקשים ישירים - ניתן לגשת לפעולות מסוימות באמצעות מקשי קיצור. לדוגמה, M הוא בדרך כלל מקש הקיצור כדי להעלות במהירות את תכונות החומר של חלק נבחר.
    3. לבסוף, שפר את הניגודיות של התמונה (+56) ואת הרוויה (Vibrance +19, רוויה +7) בתוכנת צילום ועיצוב, והוסף רכיבי רקע (מידע טקסט וצבע מרקע הדרגתי לבן לאפור בהיר) להקשר כדי להבטיח ייצוג מוצר איכותי ומציאותי.
      1. השתמשו ב'התאמות > תמונה', 'בהירות/ניגודיות' להתאמת הניגודיות של תמונה. השתמשו בתמונה > גוון/רוויה לשינוי רמת הרוויה של התמונה. השתמש בכלי טקסט (סמל T) להוספת נתוני טקסט לתמונה .
        הערה: רשימה כללית של לחצני פונקציות כוללת את הכלי אליפסה (U) - כדי לצייר נקודות/עיגולים. הגדר את הכלי לציור צורה, בחר את צבע המילוי הרצוי ולאחר מכן לחץ וגרור (החזק את מקש Shift לשמירה על עיגול מושלם) ליצירת נקודה. הכלי קו (U) - כדי לצייר קווים ישרים על התמונה. בחר בכלי, הגדר את רוחב הקו הרצוי ולאחר מכן לחץ וגרור כדי לצייר קו. הכלי מברשת (B) - דרך חלופית לצייר נקודות וקווים. בחרו את גודל המברשת והצורה, ואחר כך לחצו (לנקודות) או לחצו וגררו (לקווים).
  3. לאחר השלמת המודל התלת מימדי, המשך לייצר את מגרד התא באמצעות שיטת השחזה והרכבה 20,21,22.

3. הפקה

  1. השתמש בתיאוריית הצבע, החומרים, הגימור (CMF) במחקר הנוכחי כדי לתכנן את אבות הטיפוס של מגרד התא. תורת CMF משמשת כמתודולוגיית תכנון במחקר מדעי. זה משפר את שימושיות המוצר, מעצב את תפיסת המשתמש, ומכוון את הבחירה של חומרים 23,24,25.
    1. בחר את הצבעים שישמשו במגרד התא ממערכת צבעים סטנדרטית, כולל שחור 6 C, אפור קריר 6 C ו- 11-0601TPG26,27.
    2. כדי לבנות את מגרד התאים העומד בתקני המעבדה, בחר חומרים מתאימים כולל פוליפרופילן (PP), ספוג ופלדה עתירת פחמן. לייצור אבי טיפוס פיזיים, התחל על ידי שימוש במדפסת תלת ממד כדי לייצר את המסגרת המבנית. לאחר מכן, השתמש במחברים או חומרי דבק כדי להשלים את הרכבת המגרט.
      הערה: כדי להכין את המוצר הפיזי של מגרד התא, לטחון ולהרכיב את החומרים הדרושים. יש להקפיד על פרוטוקולי בטיחות לאורך כל התהליך כדי להבטיח מוצר סופי בטוח ויעיל.
    3. עברו לתהליך הגימור, שעשוי לכלול חיתוך, השחזה, ליטוש, הטבעה או טכניקות אחרות. התחילו בשיוף הדגם באמצעות נייר זכוכית בעל חריץ בינוני של 120 גריט כדי להסיר קצוות גסים.
    4. לאחר מכן יש להשתמש בנייר זכוכית דק במשקל 220 חצץ לקבלת משטח חלק.
    5. לאחר שיוף כדי להחליק את המשטחים, להבטיח התאמה נכונה של התוסף או המחברים המובנים.
    6. חבר את שקופיות I ו- II בבטחה באמצעות המחברים (מוטות קבועים) כדי להבטיח הרכבה חזקה ועמידה של מגרד התא. השג את הצורה הסופית הקבועה של מגרד התא באמצעות שילוב של הידוק מכני והדבקה. השתמש במחברים, במיוחד מבנה מורטיס וטנון, כדי לאבטח חלקים יחד באמצעות כוח מכני. בנוסף, כדי לשפר את חוזק ההרכבה, יש למרוח דבק (דבק) כדי לחבר את הרכיבים עוד יותר.
    7. בצע Autoclave המגרד ב 121.3 ° C במשך 30 דקות כדי להבטיח שהוא שומר על צורתו המקורית ואת המאפיינים הפיזיים שלו.

4. תרבית תאים

  1. לגדל תאי HOS במדיום חיוני מינימלי בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-1% פניצילין-סטרפטומיצין. תרבית אותם ב 37 ° C עם 5% CO2.
  2. שנה את מדיום התרבות כל יומיים.
  3. כאשר צמיחת התאים עולה על 80% מפגש, להוסיף 1 מ"ל של טריפסין עם 0.25% EDTA ולעכל במשך 60 שניות. לאחר מכן, צנטריפוגה את התאים ב 300 x גרם במשך 5 דקות עבור תת תרבית. מוציאים supernatant ומוסיפים מדיום תרבית כדי לקבל ריכוז סופי של 5 x 104 תאים לכל באר. השתמש במונה תאים אוטומטי לספירת תאים.

5. הערכת פוטנציאל פציעת התא של מגרד התא ושיטה מבוססת טיפים

  1. להכין את כל החומרים לפציעה ולעקר אותם עם קרינה אולטרה סגולה על ידי חשיפה במשך 30 דקות.
  2. לאחר העיקור, פצעו 100% תאי HOS מתמזגים בצלחות 6 בארות בריכוז של 5 x 104 תאים לכל באר באמצעות שיטת מגרד התאים או השיטה מבוססת הקצות.
    1. לשיטה מבוססת הקצה, השתמש בקצה של 100 μL וגרור אותו לאורך התא המכיל מדיום עם קו אחד בכיוון האופקי והשני בכיוון האנכי.
    2. לשיטת מגרד התא, הניחו את אב הטיפוס של המגרד באחת הבארות ובעזרת הפינצטה לחצו בעדינות פעם אחת. החוליות פצועות. בצע כל ניסוי פציעה במשולש.
  3. נתח את כל פצעי התא באמצעות מערכת מיקרוסקופ דיגיטלית ותוכנת הדמיה.

6. מדידת כדאיות התא והתפשטות התא

  1. בצע את כל בדיקות כדאיות התא בהתאם לפרוטוקול שסופק בערכת CCK-8.
  2. דגור על התאים עם תמיסת CCK-8 במשך שעתיים ב-37°C, ולאחר מכן מדוד את ספיגתם ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-צלחות כדי לכמת את כדאיות התא.
  3. תכנן את בדיקת השילוב 5-ethynyl-20-deoxyuridine (EdU) כדי לכמת במדויק את שכפול ה- DNA ולכמת ישירות את יחס התפשטות התא. לקבוע את ההשפעה של שיטות שונות ליצירת פצעים בתאים על התפשטות תאים באמצעות מבחן EdU, בהתאם לפרוטוקול שתואר בפרסום קודם28.
  4. לצבוע את התאים ולצלם אותם באמצעות מערכת מיקרוסקופ דיגיטלי. ודא שכל ניסוי מתבצע במשולש.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ניתוח דרישות המשתמשים לכלים ליצירת פצעים בתאים
השיטה הניסיונית הנוכחית ליצירת פצעים בתאים דורשת שיפור נוסף כדי לטפל בבעיות רבות הפוגעות ביכולת השחזור הביולוגי, החוסן, הצריכה הכלכלית וחוויית המשתמש של בדיקת ריפוי פצעי תאים. השתמשנו בשיטת הסולם הקשיח כדי לנתח את הדרישות של משתמשים שהשתתפו בניסויים ביולוגיים באמצעות שאלונים29 (איור 1A). המידע המעורב בשאלון, כגון שמות, עבר אנונימיזציה כדי להגן על פרטיותם. פרטי השאלון מוצגים בטבלה 1. במהלך 6 שבועות של סקר עבור 100 אנשים, התקבלו 97 שאלונים מלאים במלואם, 3 שאלונים חשודים ולא תקפים לא נכללו; שיעור ההיענות עמד על 97.00%.

התוצאות מראות כי הבעיות המטרידות ביותר בבדיקת ריפוי פצעים בתאים היו קצה משונן (לא ישר) ורוחב או אזורים לא יציבים של פצעים, המהווים 55.67% ו -29.90%, בהתאמה. אלה היו גבוהים משמעותית מאלה של קצב גדילת תאים נמוך יותר, זיהום תאים ואפשרויות אחרות עם 3.09%, 5.15% ו- 6.19%, בהתאמה (p < 0.001, איור 1B). באשר לבחירת כלים ליצירת פצעים, השימוש בקצות פיפטה היה נפוץ הרבה יותר מאשר תוספות תרבית תאים (איור 1C). היא יוחסה בעיקר לעובדה שתוספות תרבית תאים הן יקרות למדי ואינן ניתנות לשימוש חוזר (איור 1D), בעוד שקצות פיפטה הן זולות, ומראות יכולת שחזור ניסיונית (6.59%) ויכולת קיום של תאים (20.88%, איור 1E). חשוב לציין כי עד 69.23% מהמשתמשים טענו כי המחיר של תוספות תרבית תאים היה מעל התקציב שלהם (תרשים 1D). לעומת זאת, רק 6 נבדקים בחרו בתוספות תרבית תאים, שבהן רק 16.67% חשבו שמחירן מקובל (תרשים 1F). לבסוף, באשר לכלי החדשני ליצירת פצעים תאיים, 86.60% מהם היו אופטימיים, בעוד שרק פחות משתמשים לא רצו (4.12%, איור 1G).

לאחר מכן, תכונות המוצר שמשתמשים היו זקוקים להן בדחיפות נותחו 30,31,32. תכונות אלה כללו פצעים ישרים, רוחב ושטח יציבים של פצעים, יכולת שחזור גבוהה ומחיר מקובל. בהתאם לכך, בוצעו פעילויות העיצוב הבאות.

החלטה לתכנן אלמנטים וחומרים המשמשים לפיתוח מגרד תאים
הנתונים לעיל מראים כי אספקת מעבדה המיושמת במחקר ביולוגי שגרתי חייבת להיות סטרילית לחלוטין כדי למנוע זיהום תאים33. לכן, מגרד התא המוצע צריך להיות סטרילי. למרות שכלים חד פעמיים יכולים להיות מעוקרים על ידי אתילן אוקסיד, עלות הניסוי תגדל באופן בלתי נמנע 34,35,36. לכן, במקום חומרים חד פעמיים, אנו מציעים לעצב את מגרד התא עם חומר רב פעמי עם סובלנות רבה עיקור קיטור בלחץ גבוה (121.3 מעלות צלזיוס), כדי להפחית את העלות ולהגדיל את הגמישות כאשר מיושם במקרים שונים37. כדי לעמוד בדרישות אלה, החומר המשמש לבניית מגרד התא חייב להיות בעל תכונות פיזיקליות וכימיות מסוימות, כולל עמידות בפני חום, לחץ גבוה וקורוזיה של אדי מים.

לשימוש המיועד של מגרד התא, בנוסף לעמידה בפונקציות הבסיסיות כגון ביצוע פצעים ישרים קצה, זה צריך להיות גם עיצוב מושך וצבע. במונחים של דוגמנות, בהתחשב בשדות היעד והיישום, הסגנון הכללי צריך להיות נוח עבור המעבדות. המראה לא צריך להיות ראוותני מדי כדי להפריע לאנשי הצוות מלצפות בהתקדמות הניסוי. יתר על כן, גודלו צריך להיות מתאים צלחות שש באר, ואת פני השטח צריך להיות בליטה עבור פינצטה להרים אותו ביציבות.

CMF בעיצוב הוא היבט קריטי בעיצוב המוצר המשפיע על אסתטיקה וחווית משתמש. בחירת הצבעים משפיעה על התגובה הרגשית, בחירת החומרים משפיעה על פונקציונליות וקיימות, והגימור קובע את תחושת המישוש והמשיכה החזותית. מעצבי CMF יוצרים הרמוניה בין אלמנטים אלה, בהתחשב במגמות השוק ובזהות המותג, כדי ליצור מוצרים שמדברים למשתמשים.

על פי תיאוריית CMF, שלושה גורמים קריטיים, כולל צבע, חומר ותהליך גימור, נלקחו בחשבון כדי לקבוע את השפעתם על תפקוד ואפקט חזותי24. בחירת הצבעים נערכה תחילה. בהקשר זה, צבע מתייחס לצבע הפנימי, שהוא הצבע האינהרנטי של אובייקט או חומר בתנאי תאורה סטנדרטיים, ללא השפעה של מקורות אור חיצוניים או השתקפויות. בהתחשב בכך צלחת שש בארות עשוי PP עם משטח שקוף, אפור כהה נבחר כצבע הפנימי. בחירה זו נעשתה לצורך זיהוי ותפעול קלים, שכן אפור כהה מספק ניגודיות ונראות אופטימליות כאשר הוא מכוסה בצבעים אחרים. חוץ מזה, אפור כהה פחות סביר לגרום לעיוות צבע בשילוב עם צבעים אחרים, וזה גם חיוני לתצפית. רכיבים פונקציונליים חיוניים הובחנו עוד יותר על ידי שחור (איור 2A).

מערכת התאמת הצבעים המסחרית נבחרה כסטנדרט לבחירת צבעים בשל קבלתה הנרחבת והשימוש בה בתעשיות שונות. בהסתמך על יכולתה של החברה להפיק צבעים עקביים במדיומים שונים, היא נבחרה למחקר מכיוון שזה חיוני כדי להבטיח ייצוג צבעים מדויק ועקבי.

בחירת החומר בוצעה על סמך תוצאות השאלונים הנ"ל. המעטפת והרכיבים של המגרד יוצרו מפלסטיק עמיד בחום, פוליפרופילן (PP), כדי לענות על הדרישה של עיקור באמצעות אוטוקלאבינג כדוגמה שמוצגת באיור 2B. פלדה עתירת פחמן מתאימה לקפיצים, מכיוון שהיא יציבה נגד סביבות מעבדה עמידות בפני קורוזיה בטמפרטורה גבוהה ונמוכה. ספוגים בצפיפות גבוהה שימשו לחציצה והונחו בקצה המגלשה.

לבסוף פותח תהליך הגמר. מכיוון שמגרד התא משמש לעתים קרובות ומזוהם בקלות ואיכות פני השטח משפיעה על העיקור, משטח חלק ומבריק עדיף למגרד התא מכיוון שהוא מסייע למשתמש לזהות במהירות את מקור הזיהום ולהתמודד איתו, מה שנותן תחושה של ניקיון. הקצוות עוברים שיוף חלקי כדי למנוע נזק לתחתית צלחת התרבית, שיכול להשפיע על סביבת התרבית ולגרום להגבלת התפשטות התאים38.

עיצוב ואב טיפוס של מגרד התא
שלושה אבות טיפוס של מגרד תאים תוכננו בהתבסס על התוצאות שהוזכרו לעיל (איור 3A). מחקרים מראים כי פצעי התאים הנפוצים ביותר בתוך לוחות תרבית תאים היו בצורת צלב39, שהיא שונה למדי מאב הטיפוס I שהשתמש בפצעים מלבניים; לכן ויתרו על אב טיפוס (איור 3A). אף על פי שאב-טיפוס II ו-III יכלו שניהם ליצור אזורים נטולי תאים בצורת צלב, מסילת השקופיות של אב טיפוס II הייתה קשה לתיקון בדיסקי תרביות תאים, והתשתית שלה הייתה מסובכת למדי (איור 3A). לאחר דיונים זהירים, אב טיפוס III הובחן כמודל הסופי לייצור מגרד תאים.

יש לציין כי בהתחשב בכך שצורת הקצוות יכולה להשפיע ישירות על האזור נטול התאים במונחים של קצוות וגדלים, שלוש סקיצות תוכננו לבחירה. הסקיצה הייתה לי חלק עליון חד, שיכול היה לספק קצוות ישרים מאוד; אולם ממשק התרבית המאפשר התרבות תאים עלול להיפגע אם הקצוות חדים מדי (איור 3B). סקיצה II הציעה משטח עליון מרובע, שעשוי למנוע פגיעה בלוחות תרבית התא. אולם מאחר שמשטח המגע בין הקצה לתחתית לוח התרבית הוא מרובע, הוא אינו יציב כשמשתמשים בו (איור 3B). סקיצה III סיפקה קצה מעוגל קהה, ובכך נמנעה ביעילות מהבעיות לעיל (איור 3C). לכן, הוא נבחר כעיצוב הסופי.

העיצוב עבר אופטימיזציה בשלושה היבטים: שיטת קיבוע המתקן, ספוג הכרית המובנה וקלות האחיזה, בהתאמה. ראשית, שיטות תיקון המוצר הצפויות כללו אבזם40, מורטיס וטנון41, וסיבוב42. בהתחשב בעלות הייצור בפועל ואת יכולת ההפעלה, טופר תוכנן מתחת למתקן בצורת צלב כדי להקל על הידוק קצה הבאר. בנוסף, בבדיקת ריפוי שריטות התא, ראינו שהקצוות קפצו לאחור לאחר שנגעו בקיר קרוב לקצה בגלל האורך והקשיות הקבועים של המגלשות, מה שהשפיע על מצב השריטה. לכן, הוספנו ספוג ריפוד לסוף המגלשה כדי לייצב את תנועת הקצות. (איור 3A,C). לבסוף, נוסף שקע פני השטח לבליטה כדי להקל על אחיזת הפינצטה.

מודל תלת מימדי נבנה בהמשך באמצעות תוכנת העיצוב התלת-ממדית. העיבוד שלו מוצג באיור 4A. עלילת חומר הנפץ מפרטת את המבנים הפנימיים המפורטים של מגרד התא, מה שמראה את המאפיינים ההכרחיים שנדונו לעיל (איור 4B). בנוסף, כדי להשיג את המטרה של החלקה חלקה של הקצוות והקצוות הישרים, מבנה העברת הכוח המכני הפנימי מאומץ. כל היחידה התפקודית של מגרד התא מורכבת מחלק הבקרה. בעבודה בפועל, ידית ההצמדה בתוך מגרד התא מחוברת לכפתור העליון, והקצה נע כלפי מטה לאחר הפעלת לחץ כדי להפוך את אבזם הקצה. הקפיץ בתוך המגלשה משתחרר כדי לדחוף את הקצוות לזוז. לבסוף, הוא נעצר בספוג עם חריץ צר כדי לסיים את הגירוד, ואז עובר לאיפוס כאשר משתמשים בו שוב (איור 5A). יתר על כן, קלות הלמידה והפעולה הנוחה הם הקריטריונים לביולוג למדוד את איכות המוצר. לכן, עבור עיצוב המראה של המוצר, פריסת פני השטח פעלה על פי עקרון הסימטריה והניקיון43,44, תוך הבחנה והדגשה של רכיבים שונים באמצעות גוונים שונים של צבעי שחור, לבן ואפור (איור 5A).

מגרד תאים עדיף על שיטת גירוד טיפים בשימוש מעשי
התוצר הפיזי של מגרד התאים הוכן בשיטת השחזה והרכבה (איור 5B). כצפוי, מגרד התא השתלב מצוין עם הצלחת בעלת שש הקידוחים, כאשר המחזיק העליון בצורת צלב מתאים היטב לקצה הצלחת, ומספק קיבוע חזק (איור 5C). יתר על כן, הקצוות התאימו בדיוק לתחתית צלחת שש בארות, מה שמקל על יצירה חלקה של אזורים נטולי תאים. לבסוף, מגרד התא עבר אוטוקלאבינג כדי לבדוק אם ניתן להשתמש בו לשימוש חוזר. כפי שניתן לראות באיור 5D, מגרד התאים הנוכחי שמר על הצורה המקורית ועל הביצועים הפיזיים אפילו לאחר אוטוקלאבינג מתחת ל-121.3°C במשך 30 דקות.

מגרד התאים השיג ביצועים טובים יותר משיטת יצירת פצעי התא הקיימת במבחן הבנצ'מרק. לאחר בדיקות חוזרות ונשנות, מגרד התא הראה יציבות גבוהה ויכולת שחזור בהכנת הפצע, הציג תנודה נמוכה באזור של כל פצע וקצוות כמעט ישרים, עם סטיית תקן של שטח ללא תאים של 483.73 וסטייה לקצה ישר של 5041.33 ± 2420.00. לעומת זאת, השטח של כל פצע שהוכן על ידי קצות פיפטה הראה תנודה גבוהה יותר, עם סטיית תקן של שטח ללא תאים של 3905.80 וסטייה לקצה ישר של 19562.33 ± 1068.39 (איור 6A-C).

לבסוף, ההשפעה על כדאיות התא לאחר פצעים בתאים הוערכה (איור 6D). התוצאות הראו כי 12 שעות לאחר השלמת פצע התא, כדאיות התא הייתה מעט אך משמעותית גבוהה יותר בקבוצת מגרד התאים מאשר בקבוצת הקצה. בדיקת EdU נערכה כדי לאשר תוצאות אלה עוד יותר ולהבהיר את ההשפעה של שיטות שונות להכנת פצעי תאים על התפשטות תאים, כלומר, שכפול DNA. תוצאות בדיקת EdU הראו כי אחוז התאים המתרבים בקבוצת מגרד התאים (24.41% ± 0.48) היה גבוה משמעותית מזה שבשיטת TIPS (18.79% ± 1.46) לאחר 12 שעות (איור 6E,F).

נתונים אלה העידו בחוזקה כי מחולל פצעי התא הנוכחי השיג ביצועים טובים יותר מהשיטה הנוכחית ליצירת פצעי תאים במונחים של יציבות ויכולת שחזור ביולוגית. הייתה לו השפעה נמוכה על כדאיות התאים והתפשטותם. כל היתרונות המדהימים הללו של מחולל פצעי התא אישרו את הפוטנציאל שלו לשפר את מבחני פצעי התא הנוכחיים על ידי הבטחת האמינות והחזרתיות של הנתונים המתקבלים.

figure-results-1
איור 1: ניתוחי דרישות המשתמש. (A) עלילת סנקי מציגה את זרימת העבודה של חקירה מבוססת שאלונים עבור נסיינים. (ב) עד (ז) להציג את תוצאות השאלונים, לרבות שאלות 1 עד 6. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: עיצוב מוצר עם צבעים וחומרים בשימוש. (A) בחירת צבעים. (B) אוטוקלאבה המשמשת בניסויים ביולוגיים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: תכנון מוצר של מבנים מפורטים. (A) שלושה מועמדים לאב-טיפוס של מגרד תאים. (B) שלוש סקיצות של עיצוב טיפים. (ג) שרטוט תלת תצוגות של אב טיפוס נבחר III המציג את עיצובו הכולל ואת הפרמטרים הפיזיים והמרחביים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4: תצוגה של מודל תלת-ממדי ומבנים פנימיים. (A) עיבוד של מודל תלת-ממדי. (B) חלקת נפץ המדגימה את המבנים הפנימיים של מגרד התא המוצע. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-5
איור 5: מנגנוני עבודה של מגרד תאים. (A) השרטוטים מראים כיצד פועל מגרד תאים. (B) תוצר פיזי של מגרד תאים. (C) מגרד התא מתאים לצלחת בעלת 6 בארות. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-6
איור 6: אימות ניסיוני של מגרד תאים. (A) פצעי תאים שנוצרו בשיטות שונות ותוצאות ההשוואה המקובצות שלהם הוצגו ב-(B) ו-(C), סרגל קנה המידה הוא 100 מיקרומטר. (D) תוצאות כדאיות התא. (E) ו-(F) תוצאות בדיקת Edu, סרגל קנה המידה הוא 50 מיקרומטר. לצורך ההערכה הסטטיסטית, נערך מבחן t להשוואה מקובצת, וערך ה-p המקורי הותאם על ידי מבחן הולם-בונפרוני כדי למנוע תוצאות חיוביות כוזבות. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

I) איזה מהדברים הבאים הוא הנושא המטריד ביותר עבורך בניסוי גירוד התא?
א) אין קצוות ישרים
ב) רוחב לא יציב
ג) התפשטות איטית
ד) זיהום תאים
ה) אחר
II) באילו כלים אתה משתמש ליצירת פצעים בתאים
א) טיפים פיפטה (פנה לשאלה III)
ב) תוספות תרבית תאים (פנה לשאלה IV-V)
ג. מדוע אינכם בוחרים בתוספות תרבית תאים?
א) כדאיות התא
ב) לא ניתן לשימוש חוזר
ג) עלות
ד) אחר
IV) מדוע בחרת בתוספות תרבית תאים?
א) עלות
ב) חזרתיות
ג) אחר
V) מהן לדעתך הבעיות החמורות ביותר עם תוספות תרבית תאים?
א) מצב תא
ב) לא ניתן לשימוש חוזר
ג) יקר
ד) אחר
ה) מרוצה
VI) אם היה כלי גירוד זול, רב פעמי (ניתן לשחזור אוטומטי), עד כמה היית מוכן לקנות אותו ולהשתמש בו?
א) מוכן מאוד
ב) רצון
ג) לא בטוח
ד) לא מוכן

טבלה 1: השאלון המשמש במחקר זה כולל שש שאלות שנועדו להבין מצבים שביולוגים נתקלים בהם במהלך בדיקות ריפוי פצעים תאיים.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר הנוכחי נועד לפתח כלי ממוכן אוטומטי לבדיקת ריפוי פצעים בתאים. למיטב ידיעתנו, הוא מייצג את הניסיון הראשון ליישם מבנה מונע ממוכן כדי ליצור פצעים בתאים באופן אוטומטי בקליק אחד. באמצעות זה, אנו שואפים לטפל בחסרונות של השיטה המסורתית המבוססת על טיפים, כגון יכולת שחזור נמוכה ומצב שריטה לא יציב. מהתוצאות החיוביות והמשוב המעודד מקהילת המשתמשים, מגרד התאים צפוי לספק לנסיינים חלופה יעילה ויציבה ליצירת פצעים תאיים, ובכך לשפר משמעותית את רמת הביטחון של תוצאות ניתוח הניסוי.

לשימוש במגרד התאים הנוכחי, על המשתמש 1) להכין תאים הממתינים ליצירת מרווח ללא תאים בדומה לשיטות מסורתיות כמו שיטה מבוססת טיפ, כלומר, זריעת תאים על צלחת שש בארות בצפיפות נתונה; 2) להמתין ששיעור ההתכנסות הסלולרית יגיע ל-90% >; 3) שימו את מגרד התאים הסטריליים בבאר של צלחת, לחצו על הכפתור כפי שמודגם באיור 5, והמרווח נטול התאים ייווצר אוטומטית תוך 1-2 שניות.

בדיקת ריפוי פצעי תאים נמצאת בשימוש נרחב כדי למדוד את יכולת נדידת התאים. בדרך כלל, נסיינים משתמשים בקצות פיפטה כדי ליצור פצעים בתאים. לדוגמה, Tariq et al. השתמשו בקצה פיפטה כדי ליצור פצעים בתאים כדי להעריך את יכולת נדידת התאים45; לא במקרה, רחימי ואחרים השתמשו בקצה פיפטה בבדיקה כדי לבחון את יכולת הנדידה של תאי PC346; בבדיקת נדידת תאים מזנכימליים בעכבר Cormier et al. השתמשו גם באקדח פיפטה47; בהדגמת השפעת הארסן על נדידת תאי העור, השתמשו פינטו ועמיתיו בקצה פיפטה לגירוד אנכי48, בין היתר.

עם זאת, כאמור, לשימוש בחוד ליצירת פצעים תאיים יש מספר בעיות, כגון שטח משתנה ללא תאים, קצוות משוננים ותלות בכוח המפעיל ובזווית השריטה, וכתוצאה מכך יכולת שחזור נמוכה49. התוצאות הנוכחיות של השאלונים הוכיחו גם כי לשיטה מבוססת הקצה יש יתרונות ברורים יותר על פני תוספות תרבית תאים, במיוחד במונחים של מחיר, שיעור הישרדות תאים ושימוש חוזר בכלים. לחלופין, תוספות תאים יקרות מדי וקשה לעשות בהן שימוש חוזר, בעוד שלכל אחד מהכלים יש פגמים. לכן, קהילת המשתמשים בדרך כלל אופטימית ומוכנה לנסות כלים חדשניים. מחקר זה תכנן ופיתח כלי חדש להכנת אזור ללא תאים כדי להקל ולייצב יצירת פצעים בתאים.

התרומה החשובה ביותר של המחקר הנוכחי טמונה בפיתוח ותיקוף ניסיוני של מגרד תאים. בהשוואה למחקרים קודמים, השיפורים של מגרד התאים הנוכחי כוללים את שלוש הנקודות העיקריות הבאות. 1) ייצור יציב ונוח של פצעי תאים. מחקר זה הראה כי בהשוואה לשיטה המסורתית המבוססת על טיפים, פצעי התא המיוצרים על ידי מגרד התאים הנוכחי היו בעלי קצוות ישרים ויכלו ליצור פצעים דומים בניסויים חוזרים, מה ששיפר מאוד את יכולת השחזור והאמינות של ניסויי ריפוי פצעי התא. 2) למגרד התאים הנוכחי הייתה פחות השפעה על מצב התא. זה לא השפיע על כדאיות התא והתפשטותו (הגברת DNA), שהייתה טובה משמעותית מהשיטה מבוססת החוד. לכן, מגרד תאים זה צפוי להפחית עוד יותר את השפעת הגורמים החיצוניים על בדיקת ריפוי פצעי התא בניסויים שגרתיים. 3) מגרד תאים זה תואם היטב את הדרישות של קהילת המשתמשים. תוצאות סקר השאלונים הקודם הראו כי דרישות המשתמשים לכלי החדש לפצעי תאים כוללות בעיקר רוחב שבץ אחיד, יכולת שחזור גבוהה, הליך ניתוח פשוט ומחיר מתון, שהושגו במגרד התאים הנוכחי. בנוסף, מגרד התאים מעוצב בצבעים ניטרליים כדי להעביר את הרעיון העיצובי הפשוט והפרקטי של מוצר זה. יחד עם זאת, הניגודיות השחורה והלבנה החזקה מדגישה ביעילות את האזורים הפונקציונליים שלה. הסגנון הכללי הוא צורת צלב הנוצרת על ידי הביטוי המעוגל של המשטח המעוקל, תוך התייחסות לצורת הפצע הקונבנציונלית, ומרמזת על תפקיד המוצר. רמת הקושי של הפעולה מופחתת על ידי פישוט הפעולה ופונקציית האיפוס הידנית. לסיכום, התוצאות מצביעות על כלי חלופי מבטיח לנסיינים להכין שריטות תאים בקליק אחד, אוטומטי וחזק, ובכך לשפר את יכולת השחזור של תוצאות מדעיות.

יש להכיר במגבלותיו של מחקר זה. גודל המדגם של המרואיינים בשאלון מגביל את יכולת ההכללה של מחקר זה; לכן, נרחיב עוד יותר את גודל המדגם במחקר המשך כדי לשפר את מגרד התא. שנית, יש לכלול את מגרד התא במחקר מתוכנן היטב עם אוכלוסייה גדולה יותר של משתמשים, כך שניתן יהיה להעריך את הביצועים של מגרד תאים זה בצורה מקיפה יותר.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי אין להם ניגוד עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך על ידי המענק של הקרן הלאומית למדעי החברה (22FYSB023), קרן המחקר של מרכז העיצוב התעשייתי חוביי (08hqt201412046), והקרן למדעי הרוח והחברה של מחלקת החינוך המחוזית של חוביי (15Y054).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת CCK-8חברת Beyotime, סיןC0037
OlympusIX81
סרום בקר עובריGibco, ארה"ב16000044
HOS פרוסל מדעי החיים & טכנולוגיה ושות', בע"מCL-0360
Image-Pro PlusMedia Cyberneticsגרסה 6.0
KeyShotLuxionגרסה 11.0תוכנת עיבוד תלת מימד
קורא מיקרו-פלטותBioTek, גרמניתELX808
מינימום חיוניבינוני Gibco, ארה"ב11095080
מערכת התאמתPantone Pantoneהתאמת צבעים מסחרית
פניצילין-סטרפטומיציןחברת Beyotime, סיןST488
פוטושופתוכנת צילום ועיצובAdobe
Rhinoceros 3Dרוברט מקניל & Associatesגרסה 7.0תוכנת עיצוב תלת מימד
TC20 מונה תאים אוטומטיBio-RadTC20
TrypsinCytiva  HyClone, ארצות הבריתSH30042.01
מערכת מיקרוסקופ דיגיטלי

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. Cell migration. Compr Physiol. 2 (4), 2369-2392 (2012).
  2. Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: a review. Crit Rev Oncol Hematol. 92 (2), 133-142 (2014).
  3. Verbeek, B. S., Adriaansen-Slot, S. S., Vroom, T. M., Beckers, T., Rijksen, G. J. F. I. Overexpression of EGFR and c-erbB2 causes enhanced cell migration in human breast cancer cells and NIH3T3 fibroblasts. FEBS Lett. 425 (1), 145-150 (1998).
  4. Vaideeswar, P., Aswani, Y., Damani, S., Singaravel, S. Pulmonary microvascular metastases in cervical carcinoma: A case series. J Postgrad Med. 66 (3), 155-158 (2020).
  5. Liang, Y., Zhang, H., Song, X., Yang, Q. Metastatic heterogeneity of breast cancer: Molecular mechanism and potential therapeutic targets. Semin Cancer Biol. 60, 14-27 (2020).
  6. Sasaki, R., Osaki, M., Okada, F. MicroRNA-based diagnosis and treatment of metastatic human osteosarcoma. Cancers (Basel). 11 (4), 553(2019).
  7. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene Ther. 15 (10), 730-738 (2008).
  8. Zhang, M., Li, H., Ma, H., Qin, J. A simple microfluidic strategy for cell migration assay in an in vitro wound-healing model. Wound Repair Regen. 21 (6), 897-903 (2013).
  9. Yue, P. Y., Leung, E. P., Mak, N., Wong, R. N. A simplified method for quantifying cell migration/wound healing in 96-well plates. J Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).
  10. Roch, T., et al. Immunological evaluation of polystyrene and poly (ether imide) cell culture inserts with different roughness. Clin Hemorheol Microcirc. 52 (2-4), 375-389 (2012).
  11. Jonkman, J. E., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adh Migr. 8 (5), 440-451 (2014).
  12. Freshney, R. I. Culture of animal cells: a manual of basic technique and specialized applications. , John Wiley & Sons, Inc. (2015).
  13. Kato, T., et al. Reuse of cell culture inserts for in vitro human primary airway epithelial cell studies. Am J Respir Cell. 64 (6), 760-764 (2021).
  14. Veludo-de-Oliveira, T. M., Ikeda, A. A., Campomar, M. C. Discussing laddering application by the means-end chain theory. Qualit Rep. 11 (4), 626-642 (2006).
  15. Yang, T., Yang, F., Men, J. Recommendation content matters! Exploring the impact of the recommendation content on consumer decisions from the means-end chain perspective. Int J Info Manage. 68, 102589(2023).
  16. Sadeghlou, S., Emami, A. Residential preferences and satisfaction: a qualitative study using means-end chain theory. J Housing Built Env. 38, 1711-1734 (2023).
  17. Pieters, R., Baumgartner, H., Allen, D. A means-end chain approach to consumer goal structures. Int J Res Market. 12 (3), 227-244 (1995).
  18. Valette-Florence, P., Rapacchi, B. J. J. Improvements in means-end chain analysis: using graph theory and correspondence analysis. J Advert Res. 31, 30-45 (1991).
  19. Nunkoo, R., Ramkissoon, H. Applying the means-end chain theory and the laddering technique to the study of host attitudes to tourism. J Sustain Tourism. 17 (3), 337-355 (2009).
  20. Development of an automatic mold polishing system. Tsai, M. J., Chang, J. L., Haung, J. F. IEEE Int Conf Robot Auto, 3, 3517-3522 (2005).
  21. Altan, T., et al. Advanced techniques for die and mold manufacturing. CIRP Annals. 42 (2), 707-716 (1993).
  22. Kalt, E., Monfared, R., Jackson, M. Towards an automated polishing system: Capturing manual polishing operations. Int J Res Eng Tech. 5 (7), 182-192 (2016).
  23. Becerra, L. CMF design: the fundamental principles of colour, material and finish design. , Frame Publishers, UK. (2016).
  24. Pan, C., et al. Next-generation immuno-oncology agents: current momentum shifts in cancer immunotherapy. J Hematol Oncol. 13 (1), 29(2020).
  25. Kim, S., Nah, K. The development direction of emotional materials by increasing sensorial experiences-Focusing on the case study of CMF design. Arch Des Res. 27 (2), 121-135 (2014).
  26. Eiseman, L. The complete color harmony, pantone edition: expert color information for professional results. , Rockport Publishers. (2017).
  27. Eiseman, L., Recker, K. Pantone: The twentieth century in color:(coffee table books, design books, best books about color). , Chronicle Books. (2011).
  28. Deng, P., Jin, W., Liu, Z., Gao, M., Zhou, J. Novel multifunctional adenine-modified chitosan dressings for promoting wound healing. Carbohydr Polym. 260, 117767(2021).
  29. Ares, G., Giménez, A., Gámbaro, A. Understanding consumers' perception of conventional and functional yogurts using word association and hard laddering. Food Quality Prefer. 19 (7), 636-643 (2008).
  30. Lee, W. J. A study on word cloud techniques for analysis of unstructured text data. J Converg Culture Tech. 6 (4), 715-720 (2020).
  31. Word Cloud Explorer: Text Analytics Based on Word Clouds. Heimerl, F., Lohmann, S., Lange, S., Ertl, T. 47th Hawaii international conference on system sciences, , IEEE. (2014).
  32. Kulevicz, R. A., et al. Influence of sustainability reports on social and environmental issues: bibliometric analysis and the word cloud approach. Env Rev. 28 (4), 380-386 (2020).
  33. Rubbo, S. D., Gardner, J. F. A review of sterilization and disinfection. Lloyd-Luke. , (1965).
  34. Kelsey, J. C. Sterilization by ethylene oxide. J Clin Pathol. 14 (1), 59-61 (1961).
  35. Shintani, H. Ethylene oxide gas sterilization of medical devices. Biocontrol Sci. 22 (1), 1-16 (2017).
  36. Rutala, W. A., Gergen, M. F., Weber, D. J. Comparative evaluation of the sporicidal activity of new low-temperature sterilization technologies: ethylene oxide, 2 plasma sterilization systems, and liquid peracetic acid. Am J Infect Control. 26 (4), 393-398 (1998).
  37. Dion, M., Parker, W. Steam sterilization principles. Pharm Eng. 33 (6), 1-8 (2013).
  38. Környei, Z., et al. Cell sorting in a Petri dish controlled by computer vision. Sci Rep. 3, 1088(2013).
  39. Hsu, J. T., et al. Chronic wound assessment and infection detection method. BMC Med Inform Decis Mak. 19 (1), 99(2019).
  40. Katoh, M. Test-retest reliability of isometric ankle plantar flexion strength measurement performed by a hand-held dynamometer considering fixation: examination of healthy young participants. J Phys Ther Sci. 34 (6), 463-466 (2022).
  41. Li, X., Zhao, J., Ma, G., Huang, S. Experimental study on the traditional timber mortise-tenon joints. Adv Str Eng. 18 (12), 2089-2102 (2016).
  42. Cottle, R. W. The principal pivoting method revisited. Mathematical Prog. 48, 369-385 (1990).
  43. Cross, N. Engineering design methods: strategies for product design. , John Wiley & Sons. (2021).
  44. Otto, K., Wood, K. Product design: techniques in reverse engineering and new product development. , Pearson. (2001).
  45. Tariq, M., et al. Gefitinib inhibits M2-like polarization of tumor-associated macrophages in Lewis lung cancer by targeting the STAT6 signaling pathway. Acta Pharmacol Sin. 38 (11), 1501-1511 (2017).
  46. Rahimi, S., et al. CRISPR/Cas9-mediated knockout of Lcn2 effectively enhanced CDDP-induced apoptosis and reduced cell migration capacity of PC3 cells. Life Sci. 231, 116586(2019).
  47. Cormier, N., Yeo, A., Fiorentino, E., Paxson, J. Optimization of the wound scratch assay to detect changes in murine mesenchymal stromal cell migration after damage by soluble cigarette smoke extract. J Vis Exp. (106), e53414(2015).
  48. Pinto, B. I., Cruz, N. D., Lujan, O. R., Propper, C. R., Kellar, R. S. In vitro scratch assay to demonstrate effects of arsenic on skin cell migration. J Vis Exp. (144), e58838(2019).
  49. Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. Wound healing assay. Methods Mol Biol. 294, 23-29 (2005).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

EdU

מאמרים קשורים