הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הערכת ציטוטוקסיות של מטבוליטים של חומרי הדברה טריאזולים טיפוסיים בצמחים

1.5K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66048

⸱

22 בדצמבר 2023

 ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Microbial Control Technology for Industrial Pollution in Zhejiang Province, College of Environment, Zhejiang University of Technology, 2Research and Teaching Center of Agriculture, Zhejiang Open University, 3International Joint Research Center for Persistent Toxic Substances (IJRC-PTS), College of Environment, Zhejiang University of Technology

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול מתאר שיטה חדשה להערכת ציטוטוקסיות אינטגרלית של מטבוליטים של חומרי הדברה טריאזולים בצמחים.

תקציר

מזהמים אורגניים שונים שוחררו לסביבה בגלל פעילויות אנתרופוגניות. מזהמים אלה יכולים להיקלט על ידי צמחי יבול, ולגרום לאיומים פוטנציאליים על המערכת האקולוגית ובריאות האדם לאורך שרשרת המזון. הביוטרנספורמציה של מזהמים בצמחים מייצרת מספר מטבוליטים שעשויים להיות רעילים יותר מתרכובות האב שלהם, מה שמרמז שיש לקחת בחשבון את המטבוליטים במהלך הערכת הרעילות. עם זאת, מטבוליטים של מזהמים בצמחים הם מורכבים ביותר, מה שמקשה על קבלת מידע טוקסיקולוגי מקיף של כל המטבוליטים. מחקר זה הציע אסטרטגיה להערכת ציטוטוקסיות אינטגרלית של מטבוליטים מזהמים בצמחים על ידי התייחסות אליהם כמכלול במהלך בדיקות טוקסיקולוגיות. חומרי הדברה Triazole, סוג של קוטלי פטריות רחבי-טווח, יושמו באופן נרחב בייצור חקלאי. זיהום השאריות שלהם בשטחים חקלאיים משך תשומת לב הולכת וגוברת. לפיכך, ארבעה חומרי הדברה triazole, כולל flusilazole, diniconazole, tebuconazole, ו propiconazole, נבחרו כמזהמים שנבדקו. המטבוליטים נוצרו על ידי טיפול של יבלת גזר עם חומרי הדברה triazole נבדק. לאחר טיפול של 72 שעות, מטבוליטים של חומרי הדברה יבלת גזר חולצו, ואחריו בדיקות טוקסיקולוגיות באמצעות קו התאים Caco-2. התוצאות הראו כי מטבוליטים של חומרי הדברה שנבדקו ביבלת גזר לא עיכבו באופן משמעותי את הכדאיות של תאי Caco-2 (P>0.05), ולא הוכיחו ציטוטוקסיות של מטבוליטים של חומרי הדברה. שיטה מוצעת זו פותחת אפיק חדש להערכת ציטוטוקסיות של מטבוליטים מזהמים בצמחים, אשר צפוי לספק נתונים בעלי ערך להערכת רעילות מדויקת.

מבוא

צמחי יבול הגדלים בשטחים חקלאיים עלולים להיחשף למזהמים אורגניים שונים שמקורם בפעילות אנתרופוגנית 1,2. המזהמים יכולים להיקלט על ידי צמחים, מה שגורם לאיומים נוספים על המערכת האקולוגית ובריאות האדם באמצעות שרשראות מזון 3,4. הקסנוביוטיקה בצמחים עוברת ככל הנראה סדרה של ביוטרנספורמציה, כגון מטבוליזם שלב I ו-II5, ומייצרת מספר מטבוליטים. על פי תפיסת הכבד הירוק בצמחים, חילוף החומרים של צמחים יכול להפחית את הרעילות של קסנוביוטיקה 6,7. עם זאת, התגלה כי הרעילות של מטבוליטים מסוימים עשויה להיות גבוהה יותר מזו של הוריהם. לדוגמה, המוצר debrominated של tetrabromobisphenol A (TBBPA) ואת המוצר O-methylated של bisphenol A (BPA) הוכחו להיות הרבה יותר רעיל מאשר הוריהם 8,9, ואת debromination ו O-methylation מהווים את מסלולי חילוף החומרים שלב I העיקריים בצמחים. לפיכך, הערכת הרעילות המבוססת אך ורק על הורים מזהמים בצמחים אינה מדויקת, בעוד שיש לקחת בחשבון את המטבוליטים המתאימים.

המטבוליטים של קסנוביוטיקה בצמחים מורכבים ביותר10,11, מה שמקשה על זיהוי מקיף והפרדתם. בנוסף, ניתן להשיג רק כמה סטנדרטים של מטבוליטים מזוהים. לפיכך, נתונים טוקסיקולוגיים של כל המטבוליטים אינם זמינים, מה שמעכב הערכת רעילות מקיפה. מחקר זה הציע אסטרטגיה להערכת הרעילות האינטגרלית של מטבוליטים מזהמים בצמחים על ידי התייחסות אליהם כמכלול במהלך בדיקות טוקסיקולוגיות, תוך מתן נתונים חדשים להערכת רעילות מדויקת של מזהמים בצמחים. המחקר הקודם שלנו גילה כי תרבית יבלות צמחיות פותחת אפיק פשוט ויעיל להשגת מטבוליטים של קסנוביוטיקה בצמחים12. בהתאם לכך, תרבית יבלות צמחיות שימשה במחקר זה ליצירת מטבוליטים של מזהמים בצמחים, ולאחר מכן מיצוי כימי ובדיקות טוקסיקולוגיות באמצעות קו תאים אנושי. מערכת העיכול היא אחד מאיברי המטרה הישירים של קסנוביוטיקה שנחשפו לבעלי חיים ולבני אדם. קו התאים Caco-2 הוכח כמודל הטוב ביותר לחקר התנהגויות המעי והרעילות של קסנוביוטיקה במבחנה 13,14,15. לפיכך, מודל התא Caco-2 נבחר במחקר זה.

חומרי הדברה Triazole, קבוצה של קוטלי פטריות רחבי טווח, יושמו באופן נרחב בייצור חקלאי16. זיהום השאריות שלהם בשטחים חקלאיים משך תשומת לב גוברת17,18. כאן, ארבעה חומרי הדברה נפוצים של טריאזול, כולל flusilazole, diniconazole, tebuconazole ו- propiconazole, נבחרו כמזהמים האופייניים. גזר נבחר במחקר זה כצמח המייצג של ירקות טריים ומוכנים לאכילה. יבלת גזר נחשפה בתחילה לחומרי ההדברה שנבדקו בריכוז של 100 מ"ג/ליטר. לאחר חשיפה של 72 שעות, המטבוליטים חולצו כדי להעריך את ציטוטוקסיות באמצעות קו תאים Caco-2. שיטה זו יכולה להיות מורחבת בקלות כדי להעריך את ציטוטוקסיות אינטגרלית של מטבוליטים של סוגים אחרים של מזהמים בצמחים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הבחנה של יבלת גזר

הערה: הפרוטוקול המפורט להבדלה של יבלת גזר תואר במחקר קודם12. הנה תיאור קצר.

  1. לעקר את פני השטח של זרעים vernalized עם אתנול 75% במשך 20 דקות ואחריו 20% H2O2 במשך 20 דקות. שטפו את המים במים מזוקקים לפחות 3 פעמים.
  2. זרעו את הזרעים על אגר-ג'ל נטול הורמונים (1% w/v) Murashige ו-Skoog (MS) בינוני (pH=5.8, autoclaved ב-121°C), ודגרו עליהם מתחת ל-16 שעות פוטו-תקופתיות (350 μmol/m2s) ב-26°C למשך 15 יום כדי ליצור את השתילים.
  3. קצרו את הצמחים על ידי חיתוך ההיפוקוטיל והקוטילדון של שתילים לחתיכות קטנות (0.5 ס"מ) ודגרו על הצמחים בתווך טרשת נפוצה המכיל אוקסימון של 1 מ"ג / ליטר 2,4-dichlorophenoxyacetic חומצה ופיטוקינין של 0.5 מ"ג / ליטר 6-benzylaminopurine ב 26 ° C בחושך במשך 3-4 שבועות כדי לגרום ליבלת.
  4. לאסוף את היבלת (סביב 1 ס"מ קוטר, קומפקטי) עם אזמלים ומלקחיים.

2. טיפול של יבלת גזר עם חומרי הדברה

  1. להמיס 10 מ"ג כל אחד של flusilazole, diniconazole, tebuconazole, ו propiconazole ב 100 מ"ל של MS בינוני סטרילי עם ריכוזים סופיים של 100 מ"ג / ליטר (pH של 5.6-7.0).
    הערה: ריכוז הטיפול בחומרי הדברה שנבדקו נבחר כריכוז מקסימלי של 50% עיכוב צמיחת תאים (IC50) לתא Caco-2.
  2. מערבבים 3 גרם יבלת גזר (משלב 1.4) עם 10 מ"ל של תמיסות הדברה מוכנות (משלב 2.1) בצלוחיות זכוכית בתנאים סטריליים.
  3. מערבבים 3 גרם של יבלת גזר (משלב 1.4) עם 10 מ"ל של מדיום MS אספטי בצלוחיות זכוכית בתנאים סטריליים.
    הערה: כל צלוחיות הזכוכית היו אוטומטיות.
  4. לדגור על יבלת הגזר (משלב 2.2 ו -2.3) ב 130 סל"ד ו 26 ° C בחושך במשך 72 שעות.
    הגדר את כל הטיפולים במשולש.
  5. אספו את יבלת הגזר מהמדיום על ידי סינון באמצעות מסנני סיבי זכוכית (0.45 מיקרומטר) לאחר דגירה של 72 שעות. לשטוף את היבלת עם מים טהורים 3x.
  6. יבשו את היבלות בהקפאה באמצעות מייבש הקפאה בטמפרטורה של -55°C, ולאחר מכן הפכו אותן להומוגניות באמצעות מטחנת רקמות בעלת תפוקה גבוהה ב-70 הרץ למשך 3 דקות.

3. מיצוי כימי של יבלת גזר

  1. מערבבים 0.2 גרם של אבקה טחונה של יבלת מיובשת בהקפאה עם 3 מ"ל של acetonitrile בצינור צנטריפוגה (10 מ"ל).
  2. סובבו את צינור הצנטריפוגה למשך 8 דקות, ולאחר מכן הפעילו אותו למשך 5 דקות (150 ואט, 40 קילוהרץ).
  3. אספו את הסופרנאטנטים על ידי צנטריפוגה לאחר צנטריפוגה בטמפרטורה של 8,000 x גרם ב-4°C למשך 10 דקות.
  4. חזור על הליכי השאיבה 3x ואגר את התמציות בצינור צנטריפוגה נקי (10 מ"ל).
  5. רכזו את התמציות המצטברות ליובש באמצעות רכז ניפוח חנקן בטמפרטורה של 40°C.
  6. להמיס מחדש את שאריות התמציות (משלב 3.5) עם 1 מ"ל של מדיום הנשר המעובד של דולבקו (DMEM) עם 0.3% דימתיל סולפוקסיד (DMSO).
    הערה: השאריות בשלב 3.6 התקבלו מתמציות של יבלות שטופלו בחומרי הדברה (משלב 2.2).
  7. להמיס מחדש את שאריות התמציות (משלב 3.5) עם 1 מ"ל של DMEM עם 0.3% DMSO, ולהמיס 1 מ"ג של flusilazole, diniconazole, tebuconazole, ו propiconazole ב 4 צינורות שונים, בהתאמה.
    הערה: השאריות בשלב 3.7 התקבלו מתמציות של יבלות ריקות (משלב 2.3).
    הערה: DMEM הוכן עם 10% נסיוב בקר עוברי (FBS) ואנטיביוטיקה 1% (פניצילין וסטרפטומיצין).

4. החייאה של תא Caco-2

הערה: כל הריאגנטים והחומרים המעורבים בבדיקות תאי Caco-2 עברו אוטוקלאבינג במשך 20 דקות ועוקרו תחת אור אולטרה סגול למשך שעתיים.

  1. הסר את צינור ההקפאה (אחסון תאים קפואים) ממיכל חנקן נוזלי והעבר אותו במהירות לאמבט מים ב -37 מעלות צלזיוס. יש לנער אותו ללא הרף כדי להפשיר את התמיסה הקפואה.
    הערה: יש להימנע מזרימת מים על כיסוי צינור ההקפאה בעת טלטול.
  2. יש לחטא את פני השטח של צינור ההקפאה באלכוהול 75% לאחר הפשרת התמיסה הקפואה. העבר במהירות את תמיסת התא לצינור צנטריפוגה סטרילי על ידי צנרת.
  3. הסר את הסופרנאטנטים בצינור שימור בהקפאה לאחר צנטריפוגה ב 1,000 x גרם ב 4 ° C למשך 3 דקות. הוסף 1 מ"ל של DMEM והשהה את התאים על ידי הקשה עדינה וניעור.
  4. מעבירים את מתלה התא (משלב 4.3) לתוך בקבוק זכוכית על ידי פיפטינג. הוסף 5 מ"ל DMEM בבקבוק הזכוכית, ונער בעדינות את בקבוק הזכוכית כדי להפיץ את התאים באופן אחיד.
  5. לדגור על התאים באינקובטור ב 37 ° C עם 5% CO2.
    הערה: שלבים 4.2-4.4 בוצעו בספסל נקי במיוחד.

5. מעבר של תא Caco-2

  1. מוציאים את בקבוק הזכוכית מהאינקובטור ומשליכים את מדיום התרבית כאשר צפיפות התא מגיעה ליותר מ-80%. שטפו את התאים עם PBS 3x.
  2. הוסף 1 מ"ל של תמיסת טריפסין-EDTA ופזר אותו באופן אחיד כדי להבטיח מגע מלא עם תאים.
  3. הסר את תמיסת העיכול כאשר התאים מתכווצים מצורה דבקה לנקודה עגולה קטנה ולא תלויים תחת התצפית במיקרוסקופ (הגדלה פי 100). הקש בעדינות על דופן הבקבוק כדי לגרום להסרת תאים.
  4. הוסף 2 מ"ל DMEM, שטיפה חוזרת של דופן הבקבוק 10x, טפח בעדינות על דופן הבקבוק והעבר 1 מ"ל של תרחיף התא לצלוחית זכוכית אחרת.
  5. הוסף 5 מ"ל של DMEM לצלוחיות זכוכית. הקש בעדינות על דופן הבקבוק כדי לפזר את התאים באופן אחיד.
  6. לדגור על התאים באינקובטור ב 37 ° C עם 5% CO2. החלף את מדיום התרבית עם DMEM טרי כל 24 שעות עד צפיפות התא מגיע מעל 80%.
  7. חזור על הליכי מעבר התא עד שיהיו מספיק תאים (בערך 2 x 106) שנקטפו עבור בדיקות החשיפה הבאות.
    הערה: שלבים 5.1-5.5 בוצעו בספסל הסופר נקי. מספר התאים נקבע על ידי המוציטומטר19.

6. חשיפה של תא Caco-2

  1. הסר את צלוחיות הזכוכית (משלב 5.7) מהאינקובטור וחזור על שלבים 5.1-5.4 כדי לאסוף את התאים.
  2. הקש בעדינות על דופן הבקבוק כדי לפזר את התאים באופן אחיד ולהעביר את מתלי התא לצינור צנטריפוגה (15 מ"ל).
  3. לדלל את תרחיף התא (משלב 6.2) עם DMEM בשילוב עם ציטומטריה כדי להגיע לצפיפות תאים של כ 1 x 105 תאים / מ"ל. הקש בעדינות על דופן הבקבוק כדי לפזר את התאים באופן אחיד.
  4. הוסף 100 μL של PBS בבארות החיצוניות של צלחת 96 בארות כדי למנוע אידוי של מדיום התרבות עקב אפקט הקצה.
    הערה: הקש ברציפות על דופן צינור הצנטריפוגה כדי לשמור על מתלה התא אחיד.
  5. הוסף 100 μL של השעיית תאים (משלב 6.3) בבארות השמאלית של צלחת 96 בארות, ולאפשר לנוח במשך 10 דקות.
  6. לדגור את התאים באינקובטור ב 37 ° C עם 5% CO2 במשך 48 שעות.
  7. מוציאים את צלחת 96 הקידוחים מהאינקובטור לאחר דגירה של 48 שעות ומשליכים את מדיום התרבית.
  8. הגדר קבוצת מטבוליטים של חומרי הדברה על ידי הוספת 100 מיקרוליטר של תמיסות (משלב 3.6) בכל באר.
    הערה: בכל באר בשלב 6.8 נמצאו מטבוליטים של חומרי הדברה שנוצרו מהורים במינון 0.1 מ"ג.
  9. הגדר קבוצת הורים להדברה על ידי הוספת 100 מיקרוליטר תמיסות (משלב 3.7) בכל באר לצורך השוואה.
    הערה: בכל באר בשלב 6.9 היו 0.1 מ"ג הורים להדברה.
  10. הגדר פקד ריק על-ידי הוספת 100 μL של DMEM עם 0.3% DMSO בכל באר. השתמש בשש בארות לכל קבוצה (שלב 6.8-6.9).
  11. לדגור על התאים באינקובטור ב 37 ° C עם 5% CO2 במשך 24 שעות.
    הערה: שלבים 6.1-6.5 ו-6.7-6.10 בוצעו בספסל הסופר נקי.

7. הערכת כדאיות התא

  1. מוציאים את צלחת 96 הקידוחים (מ-6.11) מהאינקובטור ומשליכים את מדיום התרבית לאחר חשיפה של 24 שעות. שטפו את התאים עם PBS 2x.
  2. הוסף 100 μL של DMEM בכל באר, ולאחר מכן הוסף 10 μL של ריאגנטים CCK-8. נערו בעדינות את הצלחת כדי לפזר את התאים באופן אחיד.
  3. לדגור את התאים באינקובטור ב 37 ° C עם 5% CO2 במשך 4 שעות.
  4. הסר את צלחת 96 הקידוחים מהאינקובטור לאחר דגירה של 4 שעות ומדוד את הספיגה האופטית (OD) ב 450 ננומטר על ידי ספקטרופוטומטר פלואורסצנטי.
  5. חשב את כדאיות התא לפי המשוואה הבאה:
    כדאיות התא (%) = (קבוצת ניסוי OD - ODDMEM) / (בקרת OD - ODDMEM)×100%.
    הערה: שלבים 7.1-7.2 בוצעו בספסל הסופר נקי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

איור 1 מייצג את הסכמה של השיטה המוצעת ליצירה, מיצוי והערכת ציטוטוקסיות של מטבוליטים של חומרי הדברה ביבלת גזר. באיור 2, עקומות הקינטיקה של ספיגה ומטבוליזם של חומרי הדברה שנבדקו, שמהן אנו יכולים למצוא שריכוזי חומרי ההדברה באמצעי התרבית ירדו באופן אקספוננציאלי, בעוד שריכוזי יבלת הגזר החלו לעלות, והגיעו לשיא של 4 או 8 שעות, ולאחר מכן חלה ירידה הדרגתית. תוצאות אלה הצביעו על כך שחומרי הדברה יכולים להילקח במהירות ולהשתנות על ידי יבלת גזר. ההתאוששות הטמפורלית של חומרי ה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה פותח כדי להעריך את ציטוטוקסיות אינטגרלית של מטבוליטים של חומרי הדברה triazole בצמחים על ידי שילוב של יבלות צמחיות ומודלים של תאים אנושיים. השלבים הקריטיים לפרוטוקול המוצע הזה הם תרבית של יבלת צמחית ותא Caco-2. החלק הקשה ביותר והעצות היחסיות לתרבית יבלות צמחים ניתנו במחקר הקודם שלנו12. כאן, יש לציין כי תחזוקת תאים היא החלק הקשה ביותר עבור תרבית תאים Caco-2, כי התאים נגועים בקלות. כתוצאה מכך, חשוב לוודא כי כל הריאגנטים והחומרים המעורבים בבדיקות התא צריכי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (21976160) ופרויקט מחקר יישומי טכנולוגיית רווחה ציבורית במחוז ג'ג'יאנג (LGF21B070006).

     

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2,4-דיכלורופנוקסיצטית חומצהWAKO1 מ"ג/ליטר
20% H2O2Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10011218-500 מ"ל
6-benzylaminopurineWAKO0.5 מ"ג/ליטר
75% אתנולSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.1269101-500 מ"ל
96 בארות צלחתתרמו פישר
אצטוניטרילסיגמא-אולדריץ'
חממת אקלים מלאכותיתNingbo DongNan מעבדה ציוד ושות', בע"מRDN-1000A-4
אוטוקלאביםSTIKMJ-סדרת
Caco-2 תאיNuoyang ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ
ריאגנטים CCK8נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה, סיןG021-1-3
צנטריפוגהתרמו פישר
CO2 חממהLabtripHWJ-3-160
דימתיל סולפוקסידSolarbio Life SciencesD8371
Diniconazole, 98.7%J& K Scientific83657-24-3
Dulbecco's Eagle's MediumSolarbio Life Sciences11965-500 מ"ל
איזון אלקטרוניShanghai Precision Instrument Co., LtdFA1004B
סרום בקר עוברי
פלואורסצנטיTecanInfinite M200
Flusilazole, 98.5%J& קיי סיינטיפיק85509-19-9   
מייבש הקפאהSCIENTZ
מטחנת רקמות בתפוקה גבוההSCIENTZ
מיקרוסקופ הפוךLeica BiosystemsDMi1
Milli-Q מערכתMilliporeMS1922801-4L
Murashige & Skoog בינוניHOPEBIOHB8469-7
רכז ניפוח חנקןAOSHENGMD200-2
PBSSolarbio Life SciencesP1022-500 מ"ל
פניצילין-סטרפטומיצין נוזליSolarbio Life SciencesP1400-100 מ"ל
פרופיקונזול, 100%J& קיי סיינטיפיק60207-90-1 
מחקר פלוסEppendorf10-1000 μ L
זרעים של גזר אצבע קטנה (Daucus carota var. sativus)Shouguang זרעי תעשיה ושות', בע"מ
רעידת חממותשנחאי bluepard מכשירים ושות', בע"מTHZ-98AB
Tebuconazole, 100%J& K Scientific107534-96-3
תמיסת טריפסין-EDTASolarbio Life SciencesT1300-100 מ"ל
מכונת אולטרסאונדZKIUC-6
ספסל סופר נקי מעוקר UVAIRTECH
מכשיר מערבולתוושי Laipu ציוד ושות', בע"מBV-1010
ספקטרופוטומטר

מקורות

  1. Fan, Y., et al. Uptake of halogenated organic compounds (HOCs) into peanut and corn during the whole life cycle grown in an agricultural field. Environ Pollut. 263, 114400(2020).
  2. Wu, Q., et al. Trace metals in e-waste lead to serious health risk through consumption of rice growing near an abandoned e-waste recycling site: Comparisons with PBDEs and AHFRs. Environ Pollut. 247, 46-54 (2019).
  3. Liu, A. F., et al. Tetrabromobisphenol-A/S and nine novel analogs in biological samples from the Chinese Bohai Sea: Implications for trophic transfer. Environ Sci Technol. 50 (8), 4203-4211 (2016).
  4. Awasthi, A. K., Zeng, X., Li, J. Environmental pollution of electronic waste recycling in India: A critical review. Environ Pollut. 211, 259-270 (2016).
  5. Zhang, Q., et al. Plant accumulation and transformation of brominated and organophosphate flame retardants: A review. Environ Pollut. 288, 117742(2021).
  6. Sandermann, H. Higher plant metabolism of xenobiotics: the 'green liver' concept. Pharmacogenetics. 4, 225-241 (1994).
  7. Zhang, J. J., Yang, H. Metabolism and detoxification of pesticides in plants. Sci Total Environ. 790, 148034(2021).
  8. Debenest, T., et al. Ecotoxicity of a brominated flame retardant (tetrabromobisphenol A) and its derivatives to aquatic organisms. Comp Biochem Phys C. 152 (4), 407-412 (2010).
  9. McCormick, J. M., Van Es, T., Cooper, K. R., White, L. A., Haggblom, M. M. Microbially mediated O-methylation of bisphenol A results in metabolites with increased toxicity to the developing zebrafish (Danio rerio) embryo. Environ Sci Technol. 45 (15), 6567-6574 (2011).
  10. Zhang, Q., et al. Multiple metabolic pathways of 2,4,6-tribromophenol in rice plants. Environ Sci Technol. 53 (13), 7473-7482 (2019).
  11. Hou, X., et al. Glycosylation of tetrabromobisphenol A in pumpkin. Environ Sci Technol. 53 (15), 8805-8812 (2019).
  12. Wu, J., et al. Elucidating the metabolism of 2,4-Dibromophenol in plants. J Vis Exp. (192), e65089(2023).
  13. Zucco, F., et al. An Inter-laboratory study to evaluate the effects of medium composition on the differentiation and barrier function of Caco-2 cell lines. Atla-Altern Lab Anim. 33, 603-618 (2005).
  14. Eisenbrand, G., et al. Methods of in vitro toxicology. Food Chem Toxicol. 40, 193-236 (2002).
  15. Sambuy, Y., et al. The Caco-2 cell line as a model of the intestinal barrier: influence of cell and culture-related factors on Caco-2 cell functional characteristics. Cell Biol Toxicol. 21, 1-26 (2005).
  16. Li, H., et al. Uptake, translocation, and subcellular distribution of three triazole pesticides in rice. Environ Sci Pollut Res. 29 (17), 25581-25590 (2022).
  17. Satapute, P., Kamble, M. V., Adhikari, S. S., Jogaiah, S. Influence of triazole pesticides on tillage soil microbial populations and metabolic changes. Sci Total Environ. 651, 2334-2344 (2019).
  18. Xu, Y., et al. A possible but unrecognized risk of acceptable daily intake dose triazole pesticides exposure-bile acid disturbance induced pharmacokinetic changes of oral medication. Chemosphere. 322, 138209(2023).
  19. Louis, K. S., Siegel, A. C. Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods. Methods Mol Biol. 740, 7-12 (2011).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

מטבוליטים של קוטליסאגיד טריאזולהערכת ציטוטוקסיותתרבית קלוס של צמחיםביוטרנספורמציה של קוטליסאגידשורת תאי Caco-2ניתוח שאריות קוטליסאגידבדיקות טוקסיקולוגיותמיצוי קלוס מגזרבדיקת חיוניות תאיםריאגנט CCK8
הערכת ציטוטוקסיות של מטבוליטים של חומרי הדברה טריאזולים טיפוסיים בצמחים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.