במאמר זה אנו מתארים כלי מתקדם המיועד לניטור ביוסינתזה של כלורופיל בשלבים המוקדמים של דה-אטיולציה של שתילי ארבידופסיס . המתודולוגיה החדשנית מספקת דימות פלואורסצנטי כלורופיל לא פולשני בזמן אמת ברזולוציה מרחבית וטמפורלית גבוהה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בדיקה לא פולשנית לביוסינתזה של כלורופיל קביעת קינטיקה בשלבים מוקדמים של דה-אטיולציה של ארבידופסיס
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
ביוסינתזה של כלורופיל היא סימן ההיכר של דה-אטיולציה, אחד השלבים הדרמטיים ביותר במחזור החיים של הצמח. התהליך המבוקר היטב והדינמי מאוד של ביוסינתזה של כלורופיל מופעל במהלך המעבר מהחושך לאור בצמחים פורחים. ברגע שבו שתילים אטיולטיביים נחשפים לעקבות הראשונים של אור השמש, המרה מהירה (בסדר שניות) של פרוטוכלורופיליד לכלורופיליד מתווכת על ידי קומפלקסים חלבוניים ייחודיים קולטי אור, המובילים באמצעות שלבים מטבוליים הבאים לייצור כלורופיל מתפקד במלואו. טכניקות סטנדרטיות לניתוח תכולת כלורופיל כוללות מיצוי פיגמנטים מרקמות צמחים מנותקות, שאינו חל על חקר תהליכים מהירים כאלה. כדי לחקור קינטיקה של כלורופיל in vivo בדיוק גבוה וברזולוציה מרחבית-זמנית בשעות הראשונות לאחר דה-אטיולציה הנגרמת על ידי אור, פותחו מכשיר ופרוטוקול. כאן, אנו מציגים הליך מפורט המיועד לכימות סטטיסטי חזק של כלורופיל בשלבים המוקדמים של ארבידופסיס דה-אטיולציה.
מבוא
דה-אטיולציה מייצגת את השלב הדרמטי ביותר במחזור החיים של הצמח, המאופיין במספר שינויים מורפולוגיים וארגון מחדש מלא של חילוף החומרים של הצמח (מהטרו-טרופי לאוטו-טרופי)1. ביוסינתזה של כלורופיל היא סימן היכר של דה-אטיולציה הנגרמת על ידי אור בצמחים ותהליך דינמי מאוד. היווצרות כלורופיל מקודמן פרוטוכלורופיליד המיוצר בייצור כהה חייבת להיות מתואמת היטב כדי למנוע נזק כתוצאה מתוצרי לוואי תגובתיים2. ההפחתה של פרוטוכלורופיליד לכלורופיליד מזרזת על ידי פרוטוכלורופיליד אוקסידורדוקטאז (PORs) תלויי אור, אנזימים ייחודיים המופעלים ישירות על ידי אור. התגובה מהירה מאוד, מתרחשת בסדר גודל של ms עד s3, מה שמוביל להצטברות כלורופיל מזוהה בתוך דקות לאחר הקרנת שתיל אטיולציה 4,5,6. נדרש זמן רב יותר (משעות עד ימים) לביוגנזה של כלורופלסט כדי להקים מנגנון פוטוסינתטי מתפקד במלואו3.
קיימות שיטות שונות לניתוח תכולת הכלורופיל, כולל כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) או ספקטרופוטומטריה. בדרך כלל, טכניקות אלה דורשות הרס של רקמת הצמח 4,5,6, ומגבילות את קביעת השינויים ברמות הכלורופיל לאורך זמן. שיטות המאפשרות ביסוס קינטיקה לא פולשנית של כלורופיל עשויות לפתוח נקודת מבט חדשה לגמרי לחקר צמחים בהיבטים מגוונים, החל משאלות מחקר בסיסיות, כגון ניתוח תהליך סינתזת הכלורופיל בזמן ובמרחב, וכלה ביישומים מעשיים יותר, כגון הערכת סבילות לעקה או השפעת ביוסטימולנטים על קינטיקה של כלורופיל. בהתחשב בכך, הצגנו מערכת לניטור היווצרות כלורופיל, iReenCAM7. הוא משלב מצלמת CCD, מסנני פליטה, מקורות אור וצינור לניתוח פלואורסצנטי אוטומטי (איור 1). התכונה העיקרית של המכשיר שפותח היא רזולוציה מרחבית וזמנית גבוהה, העולה על הביצועים בפרמטרים המשמשים בגישות הנוכחיות, ורגישות מספקת וספציפיות בהשוואה לשיטות אנליטיות סטנדרטיות7.
ההליך הלא פולשני המתואר כאן דורש ריאגנטים מינימליים וכולל צעדים פשוטים, המאפשרים לקבל פרופיל קינטיקה כלורופיל בשתילי ארבידופסיס חיים בשלבים מוקדמים מאוד של דה-אטיולציה. הפרוטוקול יכול להיות שימושי לחקר תהליך דינמי מאוד של סינתזת כלורופיל המושפע ממספר גורמים, הן אקסוגניים (מלח, בצורת, ביוסטימולנטים, מתכות כבדות וכו ') והן אנדוגניים (הקשורים בדרך כלל לשינויים בפעילות הגנים) במקור ללא צורך לנתק רקמת צמח כלשהי, ובכך להימנע מעקה נוספת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנה בינונית
- הכינו את מדיום הגידול על ידי ערבוב 0.75 גרם של חומר ג'לינג עם 50 מ"ל של מים סטריליים נטולי יונים, בבקבוק זכוכית כדי להשיג ריכוז של 1.5% (w/v) עבור צלחת פטרי אחת (120 x 120 x 17 מ"מ). נערו בעדינות את התערובת ולאחר מכן חממו אותה במיקרוגל עד לרתיחה כדי להמיס את חומר הג'לינג (התמיסה הופכת ברורה).
- אפשר למדיום להתקרר ל-58-60 מעלות צלזיוס לפני שתמשיך לשלבים הבאים. כל השלבים הבאים חייבים להתבצע בתנאים סטריליים בתוך מכסה מנוע זרימה למינרית כדי למנוע זיהום.
- השתמשו בלוחות פטרי עם קצוות אטומים לאור כדי למנוע השתקפות אור אקטיני מוגזמת ופלואורסצנטיות גבוהה ברקע במהלך המדידות. לשם כך, מרחו סרט הדבקה שחור (או אמצעים זמינים אחרים) כדי לכסות את כל הצדדים של צלחת פטרי הריקה (איור 2).
- בצע עיקור של הצלחת(ים) לאחר יישום סרט על ידי הקרנה עם מנורת UV germicide במשך 20-30 דקות.
- אם הניסוי כולל טיפול כימי (כלומר, גורמי עקה אביוטיים/ביוטיים, הורמונים צמחיים ו/או מווסתי גדילה וכו'), יש להוסיף את הכמות המתאימה של הכימיקל המתאים ישירות למדיום. שימו לב ליציבות כימית שנבחרה מתווספת למדיה (לדוגמה, אם החומר הכימי אינו תרמוס, הוסיפו למדיום כאשר הוא מקורר ממש לפני שאתם מוזגים אותו לצלחת). ערבבו היטב את המדיום על ידי ניעור כדי להבטיח פיזור אחיד של הכימיקל.
- הימנע מהארת לוחות לאור UV לאחר שפיכת המדיה (יוביל לייצור רדיקלי חמצן שעלול להפריע לניסוי).
- יוצקים את התווך המוכן לתוך צלחות הפטרי המרובעות ומניחים למדיום להתמצק בטמפרטורת החדר.
2. עיקור פני השטח של זרעים ותנאי גידול צמחים
- קבל את הכמות הנדרשת של זרעי Arabidopsis thaliana Col-0 מן balk מלאי (10-20 מ"ג) ולהוסיף אותו צינור microcentrifuge 2 מ"ל.
הערה: אין צורך בשינויים ספציפיים בעת עבודה עם קווי Arabidopsis שונים (ecotype/mutant lines). יש לבצע רביזיה של רשת הניסור ושלבי מדידה עבור מיני צמחים אחרים תוך התחשבות בהבדלים בגודל הזרעים, קצב הנביטה וגודל השתיל. - עיקור פני השטח של זרעי Arabidopsis על ידי הוספת 70% אתנול לצינור למשך 2 דקות. נערו בעדינות את הצינורות במהלך העיקור.
- הסר אתנול על ידי pipeting בזהירות, נזהר לא לאבד זרעים. שטפו את הזרעים על ידי הוספת מים סטריליים לצינור למשך 5 דקות כדי להסיר שאריות אתנול (נערו בעדינות את הצינורות במהלך תקופת הכביסה).
- תן לזרעים משקעים לתחתית הצינור על ידי כוח הכבידה, להסיר את המים הנותרים.
- שטפו את הזרעים שוב פעמיים במים סטריליים כמתואר בשלב 2.3 כדי להבטיח שהם נקיים מכל תכונות אתנול. תן לזרעים משקעים לתחתית הצינור על ידי כוח הכבידה, להסיר את המים הנותרים.
- הוסיפו נפח שווה של מים סטריליים לצינור המכיל את הזרעים כדי ליצור תרחיף של מי זרעים.
- השתמשו ברשת זריעה כדי לפזר באופן שווה את תרחיף מי הזרעים של הגנוטיפ הנתון באזורים שנבחרו בלוח הבינוני (איור 2 ואיור משלים 1). מפזרים את הזרעים (כ-30-40) בשורה בכל אזור בעזרת קצה פיפטה רחב.
- הניחו למים להתייבש באזורי הזרעים במשך כ-30 דקות, תוך שמירה על הצלחת(ות) פתוחות במכסה מנוע זרימה למינרית למניעת זיהום. אטמו את הצלחת בסרט מיקרו-נקבוביות ועטפו אותה ברדיד אלומיניום.
- ריבוד הזרעים במשך 3 ימים ב 4 ° C בחושך כדי (בהתאם לאקוטיפ בשימוש) להתגבר על תרדמת הזרעים ו / או לקדם נביטה אחידה.
- מעבירים את הצלחת עם זרעים מרובדים לאור לבן (150 μmol/m2/s) למשך שעה אחת כדי לגרום לנביטה (יש להסיר את עטיפת נייר הכסף רק לטיפול באור).
- לאחר הטיפול באור, לעטוף את הצלחת עם רדיד אלומיניום כדי להגן על הזרעים מפני אור ומניחים אותו במצב אנכי בתא צמיחה לטפח במשך 4 ימים בחושך ב 21 מעלות צלזיוס.
3. מדידה וניתוח פלואורסצנטי של כלורופיל
- הפעילו את מערכת iReenCAM וודאו שהמערכת מוכנה ומוגדרת כראוי בתוכנת שרת PS המופעלת באופן אוטומטי (למשל, אם יש מספיק מקום אחסון לנתוני הניסוי, אם מצלמת הפלואורסצנטיות מחוברת למחשב וכו').
- הפעל את תוכנת המתזמן כדי ליצור את תוכנית הניסוי עבור המדידה על-ידי לחיצה על ניסויים > ניסוי חדש. ספק שם תיאורי לניסוי ומלא את הפרטים (תיאור).
- הגדר את הפעולות הדרושות לניסוי על ידי לחיצה על הוסף פעולה שתוביל ללוח הזמנים של פעולות הניסוי.
הערה: המילה פעולה כאן פירושה ביצוע ניסוי שלם (כלומר, כולל כל השלבים הדרושים לביצוע מדידת לוח אחד). - ציין את התנאים למדידה עגולה אחת (כלומר, אורך תקופת האור/חושך).
- על-ידי לחיצה על צור רשימה , הגדר את מרווחי הזמן בין סבבי מדידה. בחר את הזמן שבו הסבב יתחיל ויסתיים (4 שעות בסך הכל) ואת המרווחים בין הסיבובים (במערך הנוכחי סבב אחד כל 2 דקות).
- לחץ על צור וודא שמסגרת הזמן והמרווחים בין דחפי האור נכונים על-ידי בדיקת הרשימה שנוצרה בצד שמאל של המסך.
- בחרו את פרוטוקול המדידה (איור משלים 2). שמור את כל השינויים במסד הנתונים לעיון עתידי.
- רגע לפני תחילת המדידה, השתמשו באור ירוק בעוצמה נמוכה (ראו טבלת חומרים) בתוך החדר החשוך והתאימו את מפלס המדף בתוך תא המדידה או בצעו שלבי הכנה אחרים לפני הסרת נייר הכסף מצלחת הפטרי. לאחר מכן כבו את האור והעבירו את הלוחות לתא המדידה בחושך מוחלט.
- הסירו בזהירות את רדיד האלומיניום המכסה את צלחת הפטרי המכילה את השתילים בני 4 הימים. הניחו את צלחת הפטרי אופקית בתוך תא המדידה של המכשיר. בתוך התא, לגרום פולסים אור אקטיני, ולבצע הדמיה על פי תוכנית הניסוי (פעולות) שנקבעו בשלבים 3.1-3.7.
הערה: חשוב להימנע מכל הארה של הלוחות עם שתילים אטיולטיים לפני הכנסתם לתא המדידה. המניפולציה עם הצלחת עם שתילים אטיולטיים חייבת להתבצע בחדר/חדר חשוך (למערך ניסויי אפשרי ראו איור משלים 3).
4. חילוץ וניתוח נתונים
- לאחר השלמת המדידה, פתח את הניסוי המתאים בתוכנת הנתח.
- כדי לנתח את הפלואורסצנטיות של השתילים, צרו שני סוגים של מסכות- מסכה גסה (מגש) המכסה את האזור בו נמצאים השתילים, ומסכה מדויקת (צמחית) המכסה רק את הרקמה המעניינת (בדרך כלל קוטילדונים).
- צור מסיכת מגש על-ידי לחיצה על האפשרות צור סוג מגש חדש . הקצו את שמות הגנוטיפים המתאימים לאזורים המתאימים בתמונת הלוחות.
- להקצאת גנוטיפ, בחר מספר תמונה בעגול ולאחר מכן לחץ על טען תמונה בחלק העליון של המסך. תמונת הצלחת תוצג על המסך. על ידי לחיצה על כל אחד מסט הכפתורים המייצגים כלי ציור של צורות שונות (איור משלים 4), הזן מצב צורה חדשה המאפשר לצייר את אזור העניין בתמונת הצלחת. בחר את האזורים הדרושים (למשל, גנוטיפים שונים על הצלחת) וספק את השמות המתאימים להם.
- לחץ על Esc כדי לצאת ממצב הצורה. שמור את מסיכת המגש שנוצרה (לאחר שתספק שם עבורה) על-ידי לחיצה על סוג מגש חנות.
- חזור שלב אחורה והחל את המסיכה שנוצרה בשלבים קודמים על-ידי בחירת שמה מהאפשרות שנה לפי סוג מגש .
- ליצירת מסיכת צמחים בדיוק גבוה, השתמשו בתמונה שהתקבלה לאחר 180 דקות מדידה (סבב 91) כדי להגדיר את ערך הסף המינימלי לעוצמת אות פלואורסצנטי, ולאפשר חיסור רעשי רקע. לשם כך, הסר את הסימון מהסף האוטומטי והגדר סף ידני על 0 (איור משלים 4).
- לחצו על 'תצוגה מקדימה' כדי לוודא שמסיכת המגש מכסה את כל האזורים הדרושים (גנוטיפים) בתמונת הלוח. לשם כך, בחר סיבוב 91 ולחץ על רענן תצוגה מקדימה.
- היכנס לתפריט הפעלה על-ידי לחיצה על הפעל. הפעל את הניתוח באופן בלעדי עבור סיבוב 91 על ידי הצבת סמן רק בסיבוב 91. לאחר מכן בחר את נתיב הפלט ולחץ על התחל ניתוח.
- לאחר סיום הניתוח, תפריט סיום ייפתח באופן אוטומטי. בחר את הסבב המבוצע (הוא יהיה היחיד) מתוך ניסויים ולחץ על החלף מנתח לנתונים מנותחים כדי לייצא את הנתונים עבור נקודת זמן ספציפית זו (סבב 91).
- חלץ את קובץ ה- .xsel מהארכיון המיוצא, מכיוון שקובץ זה מכיל את המידע החיוני על מסיכת הצמח על-ידי לחיצה על סמל פתח ייצוא חלק .
- פתח מחדש את הניסוי על-ידי לחיצה על סמל פתח חלק ניתוח מקומי . היכנסו שוב לתפריט 'בונה מסיכות ', לחצו על 'טען תמונה', בחרו 'עיגול 1' ולאחר מכן ' טען מקובץ ' בפינה השמאלית העליונה של המסך וטענו את קובץ ה- .xsel שחולץ בעבר. תמונת הצלחת תוצג עם מסיכת המגש מוחלת.
- שמור את המסיכה על-ידי לחיצה על סוג מגש חנות והחל אותה על-ידי בחירת שמה באפשרות שנה לפי סוג מגש .
- צור את מסיכת הצמח על-ידי התאמת סף עוצמת האות הפלואורסצנטי. הגדל את הערך של סף ידני עד שהמסיכה שנוצרת בתפריט התצוגה המקדימה תתאים באופן מושלם להחזר ההשקעה (לדוגמה, cotyledons) בכל אחד מהגנוטיפים (איור משלים 4). בדקו אם המסיכה מתאימה לכל סבבי המידות באמצעות גלילה לאורך כל הסיבובים (בדיקת מיקום המסיכה הנכון בעיגולים 1, 61 ו-121 אמורה להספיק) בתפריט 'תצוגה מקדימה '.
- בצע את הניתוח עבור כל סבבי המדידה וייצוא הנתונים.
הערה: קובץ הפלט כולל ערכים פלואורסצנטיים של כלורופיל של גנוטיפ נתון עבור כל נקודת זמן, מה שמאפשר בניית תרשימים לפי בחירה ומקל על הערכה סטטיסטית נוספת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
התפוקה האופיינית המתקבלת באמצעות ההליך החדש שפותח בשתילי Arabidopsis בני 4 ימים ללא אטיולציה של סוג בר (WT), אקוטיפ קולומביה-0 (Col-0) מוצגת באיור 3. בתנאי בקרה (מדיה של טרשת נפוצה בתוספת DMSO), העקומה הביוסינתטית של הכלורופיל מתחילה בפרץ ראשוני של סינתזת הכלורופיל, שבו מאגר הפרוטוכלורפיליד המסונתז במהלך השלב הסקוטומורפוגני של הגידול, מומר במהירות לכלורופיל הודות ל-PORs 7,8,9 המושרים באור. ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שלבים קריטיים של הפרוטוקול ופתרון בעיות - אין אור ודואגים למסכה
כפי שמודגש ישירות בתיאור הפרוטוקול לעיל, הימנעות אפילו מכמויות זעירות של אור הן במהלך גידול שתילי צמחים שעברו אטיולציה והן ממש לפני תחילת הפרוטוקול היא בעלת חשיבות קריטית11. במערך שלנו, אנו משתמשים בתא חשוך ייעודי הממוקם בפיטרון ומופרד משאר הפיטוטרון באמצעות דלת מסתובבת אטומה לאור (איור משלים 3). התא מצויד בחלל גידול צמחים ושולחן עבודה המאפשר להכיל את המכשיר יחד עם מחשב בקרה ומכסה מנוע. זה מאפשר לנ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
ז.ב. וק.פ. הם עובדי PSI ומרטין טרטילק הוא המנכ"ל והבעלים של חברת PSI המייצרת את iReenCAM. כל המחברים הללו היו מעורבים בפיתוח הכלי כמתואר לעיל7.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן האירופית לפיתוח אזורי-פרויקט SINGING PLANT (No. CZ.02.1.01/0.0/0.0/16_026/0008446). פרויקט זה קיבל מימון באמצעות פרויקט MSCA4Ukraine (ID 1233580), הממומן על ידי האיחוד האירופי. אנו אסירי תודה ללנקה סוצ'ורקובה על העיצוב הגרפי של איור 1.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 6-benzylaminopurine | Duchefa Biochemie | B0904.0001 | |
| רדיד אלומיניום | Merck | Z691577 | |
| Arabidopsis thaliana Col-0 זרעים | NASC אוסף | N1092 | |
| תא טיפוח | PSI | בהתאמה אישית | |
| Dimethilsulfoxid | Thermo Fisher Scientific | 042780.AK | |
| Eppendorf חד-ערוצי, משתנה (100-1000 μ L) | Merck | EP3123000063 | |
| Gelrite | Duchefa Biochemie | G1101 | |
| iReenCAM מכשיר | PSI | בהתאמה אישית/אב טיפוס | |
| בקבוקי מעבדה, עם מכסים (דוראן), 100 מ"ל | Merck | Z305170-10EA | |
| קופסת זרימה למינרית | UniGreenScheme | ITEM-31156 | |
| סרט שחבור גומי ללא תוחם, רוחב 19 מ"מ, שחור, | מדע סקוטי 3M. מיושם על Life | 7000006085 | |
| צינור מיקרוצנטריפוגה, 2 מ"ל עם מכסה, PPT, מותג | Merck | BR780546-500EA | |
| קלטת מיקרופור | 3M Science. מיושם על Life | 7100225115 | |
| צלחות פטרי ירוקות L18w/66 | Ovalamp | 200008833 | |
| כלי גריינר, מרובעים, 120 x 120 x17 מ"מ, מאווררים | Merck | Z617679-240EA | |
| קצות פיפט, 1000 μ L, Axygen | Merck | AXYT1000B | |
| תוכנת מנתח נתוני מסך הצמח | PSI | המסופקת כחלק מ- iReenCAM |
מקורות
- Arsovski, A. A., Galstyan, A., Guseman, J. M., Nemhauser, J. L. Photomorphogenesis. Arabidopsis Book. 10, e0147(2012).
- Reinbothe, S., Reinbothe, C., Apel, K., Lebedev, N. Evolution of chlorophyll biosynthesis--the challenge to survive photooxidation. Cell. 86 (5), 703-705 (1996).
- Heyes, D. J., et al. Photocatalysis as the 'master switch' of photomorphogenesis in early plant development. Nat Plants. 7 (3), 268-276 (2021).
- Hu, X. Y., Tanaka, A., Tanaka, R. Simple extraction methods that prevent the artifactual conversion of chlorophyll to chlorophyllide during pigment isolation from leaf samples. Plant Methods. 9 (1), 19(2013).
- Chazaux, M., Schiphorst, C., Lazzari, G., Caffarri, S. Precise estimation of chlorophyll a, b and carotenoid content by deconvolution of the absorption spectrum and new simultaneous equations for chl determination. Plant J. 109 (6), 1630-1648 (2022).
- Marr, I. L., Suryana, N., Lukulay, P., Marr, M. I. Determination of chlorophyll-a and chlorophyll-b by simultaneous multicomponent spectrophotometry. Fresenius J Anal Chem. 352 (5), 456-460 (1995).
- Balakhonova, V., et al. Ireencam: Automated imaging system for kinetic analysis of photosynthetic pigment biosynthesis at high spatiotemporal resolution during early deetiolation. Front Plant Sci. 14, 1093292(2023).
- Virgin, H. I., Kahn, A., Vonwettstein, D. The physiology of chlorophyll formation in relation to structural changes in chloroplasts. Photochem Photobiol. 2 (2), 83-91 (1963).
- Reinbothe, C., et al. Chlorophyll biosynthesis: Spotlight on protochlorophyllide reduction. Trends Plant Sci. 15 (11), 614-624 (2010).
- Kobayashi, K., Masuda, T. Transcriptional regulation of tetrapyrrole biosynthesis in arabidopsis thaliana. Front Plant Sci. 7, 1811(2016).
- Wang, Y., Folta, K. M. Contributions of green light to plant growth and development. Am J Bot. 100 (1), 70-78 (2013).
- Brzezowski, P., Richter, A. S., Grimm, B. Regulation and function of tetrapyrrole biosynthesis in plants and algae. Biochim Biophys Acta. 1847 (9), 968-985 (2015).
- Pipitone, R., et al. A multifaceted analysis reveals two distinct phases of chloroplast biogenesis during de-etiolation in arabidopsis. eLife. 10, e62709(2021).
- Stirbet, A. G. On the relation between the kautsky effect (chlorophyll a fluorescence induction) and photosystem ii: Basics and applications of the ojip fluorescence transient. J Photochem Photobiol B-Biol. 104 (1-2), 236-257 (2011).
- Kupper, H., et al. Analysis of ojip chlorophyll fluorescence kinetics and q(a) reoxidation kinetics by direct fast imaging. Plant Physiol. 179 (2), 369-381 (2019).
- Avin-Wittenberg, T., et al. Global analysis of the role of autophagy in cellular metabolism and energy homeostasis in arabidopsis seedlings under carbon starvation. Plant Cell. 27 (2), 306-322 (2015).
- Kósa, A., Preininger, É, Böddi, B. Nitrogen deficiency hinders etioplast development in stems of dark-grown pea (pisum sativum) shoot cultures. Physiol Plant. 155 (3), 330-337 (2015).
- Liang, Y., et al. A nondestructive method to estimate the chlorophyll content of arabidopsis seedlings. Plant Met. 13 (1), 26(2017).
- Pérez-Patricio, M., et al. Optical method for estimating the chlorophyll contents in plant leaves. Sensors. 18 (2), 650(2018).
- Spyroglou, I., et al. Mixed models as a tool for comparing groups of time series in plant sciences. Plants (Basel). 10 (2), (2021).
- Tanaka, R., Kobayashi, K., Masuda, T. Tetrapyrrole metabolism in arabidopsis thaliana. The Arabidopsis book / Am Soc Plant Biol. 9. 9, e0145(2011).
- De Wit, M., Galvao, V. C., Fankhauser, C. Light-mediated hormonal regulation of plant growth and development. Annu Rev Plant Biol. 67, 513-537 (2016).
- Liu, X., Li, Y., Zhong, S. Interplay between light and plant hormones in the control of arabidopsis seedling chlorophyll biosynthesis. Front Plant Sci. 8, 1433(2017).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
