הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ויסות צמיחת תאי Schwann על ידי שדה חשמלי פועם ננו-שנייה להתחדשות עצבית היקפית במבחנה

1.8K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66097

⸱

3 במאי 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopedics, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University, 2College of Medicine, Zhejiang University, 3Department of Orthopedics, The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, 4Department of Orthopedic Physical Therapy, Faculty of Physical Therapy, Nahda University in Beni Suef, 5Plastic & Cosmetic Center, The First Affiliated Hospital, College of Medicine, Zhejiang University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להפעלת שדה חשמלי פולס ננו-שנייה (nsPEF) כדי לעורר תאי Schwann במבחנה. יכולת הסינתזה וההפרשה של גורמים רלוונטיים ושינויים בהתנהגות התא אימתו את הגירוי המוצלח באמצעות nsPEF. המחקר נותן מבט חיובי על שיטת התחדשות העצבים ההיקפית.

תקציר

תאי Schwann (SCs) הם תאים myelinating של מערכת העצבים ההיקפית, משחק תפקיד מכריע התחדשות עצב היקפי. שדה חשמלי דופק ננו-שנייה (nsPEF) היא שיטה מתפתחת הישימה בגירוי חשמלי עצבי שהוכחה כיעילה בהמרצת התרבות תאים ותהליכים ביולוגיים אחרים. במטרה להעריך אם SCs עוברים שינויים משמעותיים תחת nsPEF ולעזור לחקור את הפוטנציאל לשיטות חדשות להתחדשות עצבית היקפית, תאי RSC96 בתרבית היו נתונים לגירוי nsPEF ב 5 kV ו 10 kV, ולאחר מכן המשך גידול במשך 3-4 ימים. לאחר מכן, כמה גורמים רלוונטיים המבוטאים על ידי SCs הוערכו כדי להדגים את הגירוי המוצלח, כולל חלבון הסמן הספציפי, גורם נוירוטרופי, גורם שעתוק ומווסת מיאלינציה. התוצאות המייצגות הראו כי nsPEF שיפר באופן משמעותי את ההתרבות והנדידה של SCs ואת היכולת לסנתז גורמים רלוונטיים התורמים באופן חיובי להתחדשות העצבים ההיקפיים. במקביל, ביטוי נמוך יותר של GFAP הצביע על הפרוגנוזה השפירה של פגיעות עצביות היקפיות. כל התוצאות הללו מראות כי ל- nsPEF יש פוטנציאל גדול כשיטת טיפול יעילה לפגיעות עצביות היקפיות על ידי גירוי SCs.

מבוא

בכל שנה, מיליוני אנשים מושפעים מפגיעות עצביות המערבות הן את מערכת העצבים ההיקפית (PNS) והן את מערכת העצבים המרכזית (CNS)1. מחקרים הראו כי יכולת התיקון האקסונלית של מערכת העצבים המרכזית מוגבלת למדי לאחר פגיעות עצביות, בעוד שמערכת העצבים הפארא-סימפתטית מראה יכולת משופרת בשל הפלסטיות המשמעותית של SCs2. עם זאת, השגת התחדשות מלאה לאחר פגיעות עצביות היקפיות נותרה מפרכת וממשיכה להוות אתגר משמעותי לבריאות האדם 3,4. כיום, השתלות עצמיות נותרו טיפול שכיח למרות החסרונות של תחלואה באתר התורם וזמינות מוגבלת5. מצב זה הניע חוקרים לחקור טיפולים אלטרנטיביים, כולל חומרים6, גורמים מולקולריים7 וגירוי חשמלי (ES). כגורם המקדם צמיחה אקסונלית והתחדשות עצבית8, בחירת שיטה מתאימה של ES וחקירת הקשר בין ES ו- SCs הופכים חיוניים.

SCs הם תאי הגליה העיקריים של מערכת העצבים הפארא-סימפת-ארצית, והם ממלאים תפקיד מכריע בהתחדשות מערכת העצבים הפארא-סימפתטית 9,10. בעקבות פגיעות עצביות היקפיות, SCs עוברים הפעלה מהירה, תכנות מחדש נרחב2, ומעבר ממצב יצירת מיאלין למורפולוגיה תומכת צמיחה כדי לבצע את התחדשות העצב2. התפשטות משמעותית של SCs מתרחשת בקצה הדיסטלי של העצב הפגוע, בעוד SCs של הגדם הדיסטלי עוברים התפשטות והתארכות כדי ליצור את הרצועה של באנגנר, אשר נחוצים כדי להנחות אקסונים לגדול לעבר איבר המטרה11. יתר על כן, SCs מגדמי העצבים הפרוקסימליים והדיסטליים נודדים לתוך גשר העצבים ויוצרים מיתרי SC המקדמים התחדשות אקסונים12. יתר על כן, מחקרים קודמים הראו כי הסינתזה וההפרשה של גורמים רלוונטיים הקשורים ל- SCs משתנים במקרים של התחדשות עצבית היקפית, כולל גורמי שעתוק13, גורמים נוירוטרופיים14 ומווסתי מיאלינציה13. זה גם מספק אינדיקטורים להערכת הפעילות של SCs. בהתבסס על אלה, קידום התפשטות SC, נדידה, סינתזה והפרשת גורמים רלוונטיים נחקרו בהרחבה לשיפור התחדשות עצבית היקפית15.

מחקרים קודמים הדגימו את האפשרות להשתמש ב-ES להתחדשות עצבית1. הסבר מקובל הוא כי ES יכול לגרום לדפולריזציה של קרום התא, לשנות את פוטנציאל הממברנה, ולהשפיע על תפקודי חלבון הממברנה על ידי שינוי התפלגות המטען על ביומולקולות אלה1. עם זאת, יישום נרחב PEF אינטנסיבי עלול לגרום לכאב חמור, התכווצויות שרירים לא רצוניות ופרפור לב8. הוא גם מגביר את פעילות קריאטין קינאז (CK), מפחית את כוח השרירים וגורם להתפתחות של כאבי שרירים מאוחרים (DOMS)16. nsPEF היא טכניקה מתפתחת המגרה נבדקים עם שדות חשמליים במתח גבוה בתוך משך פעימה של ננו-שנייה, והיא משמשת בהדרגה במחקר ברמת התא17,18. מחקרים קודמים דיווחו כי הרציונל האפשרי של nsPEF המקדם התפשטות תאים ופעילות אברונים הוא היווצרות ננו-נקבוביות ממברנות והפעלת תעלות יוניות, מה שמוביל לעלייה בריכוז Ca2+ ציטופלזמי19. nsPEF משתמשת בטכנולוגיית כוח פולסים כדי לטעון את קרום התא, ומייצרת פולסים המאופיינים במשך קצר, זמן עלייה מהיר, הספק גבוה וצפיפות אנרגיה נמוכה20. מאפיינים אלה מצביעים על כך ש- nsPEF עשוי להיות מצב מועדף עם תופעות לוואי מינימליות לגירוי8. יתר על כן, nsPEF מציע יתרונות כגון הליכים זעיר פולשניים, הפיכות, יכולת התאמה ואי-הרס לרקמות עצביות בהשוואה להתערבויות כירורגיות. כיוון מחקר מרכזי אחד של nsPEF בתחום הביו-רפואי הוא היישום שלו עבור אבלציה של רקמת הגידול באמצעות גירוי שדה חשמליבאנרגיה גבוהה 21,22,23. חלק מתוצאות המחקר מצביעות על כך ש-12-nsPEF יכול לגרות עצבים היקפיים מבלי לגרום נזק24. עם זאת, כיום, יש ראיות מוגבלות לגבי היישום של nsPEF בתחום התחדשות עצבית. יתר על כן, גירוי SCs באמצעות nsPEF הוא ניסיון חלוצי, התורם למחקר נוסף in vivo וקליני. מחקר זה בוחן האם גירוי nsPEF של SCs יכול לקדם התחדשות עצבית ולספק בסיס אמין למחקר מעמיק ושיטתי לאחר מכן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

1. הפשרת תאי RSC96 שמורים בהקפאה

  1. הפשיר את cryovial המכיל 1 מ"ל של תרחיף התא על ידי טלטול מהיר אותו באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן להוסיף אותו צינור צנטריפוגה המכיל 4-6 מ"ל של מדיום תרבית שלם ולערבב היטב.
  2. צנטריפוגה ב 1000 x גרם במשך 3-5 דקות, להשליך את supernatant ו resuspend את התאים ב 3 מ"ל של מדיום תרבית שלם.
  3. הוסיפו את תרחיף התאים לבקבוק תרבית (או צלחת) המכיל 6-8 מ"ל של מדיום תרבית שלם ודגרו בטמפרטורה של 37°C למשך הלילה.
  4. למחרת, התבוננו בצמיחת התאים ובצפיפותם תחת מיקרוסקופ.

2. מעבר תאים:

הערה: אם צפיפות התא מגיעה ל-80%-90%, היא מוכנה למעבר.

  1. יש להשליך את מדיום התרבית ולשטוף את התאים 1-2 פעמים במי מלח חוצצי פוספט (PBS) ללא יוני סידן ומגנזיום.
  2. הוסיפו 0.25% (עם v/v) טריפסין-0.53 mM EDTA לבקבוק התרבית (1-2 מ"ל לצלוחית T25, 2-3 מ"ל לצלוחית T75) ודגרו ב-37°C למשך 1-2 דקות.
  3. התבוננו בניתוק התא תחת מיקרוסקופ. אם רוב התאים הופכים עגולים ומתנתקים, החזירו במהירות את הבקבוק לאזור העבודה, טפחו על הבקבוק בעדינות והוסיפו 3-4 מ"ל של מדיום תרבית המכיל 10% FBS כדי לעצור את העיכול.
  4. מערבבים את התכולה, שואפים את התמיסה וצנטריפוגה ב 1000 x גרם במשך 5 דקות. לאחר מכן, השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את התאים על ידי הוספת 1-2 מ"ל של מדיום תרבית טרי ופיפטינג בעדינות.
  5. מעבירים את מתלה התא לבקבוק T25 חדש ביחס של 1:2 ומוסיפים 7 מ"ל של מדיום תרבית.

3. הפעלת מכשיר nsPEF

  1. להשעות מחדש את תאי RSC96 ב 1 מ"ל של מדיום תרבית DMEM ולהעביר אותם צלחות colorimetric עם אלקטרודות משני הצדדים.
  2. הפעל את מתג ההפעלה.
  3. התאם את הפרמטרים על ידי סיבוב הידית במכשיר כדי לשנות את עוצמת השדה החשמלי. העוצמות שנקבעו במחקר זה הן 5 kV/cm, 10 kV/cm, 20 kV/cm ו-40 kV/cm.
  4. סובבו בזהירות את האלקטרודות עד להופעת ניצוצות, מה שמאפשר לתאים לקבל 5 פולסים של nsPEF בהתאם לעוצמות חוזק השדה שנקבעו מראש לפני הפרדה מיידית בין שתי האלקטרודות. לאחר טיפול זה, קח את תאי קבוצת הניסוי שטופלו ב- nsPEF ואת תאי קבוצת הביקורת שלא טופלו לביצוע סעיפים 4-6, בהתאמה, לאחר תקופה מסוימת של תרבית תאים (יום אחד בניסוי זה).

4. בדיקת ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8)

  1. הכינו תרחיף תאים בריכוז מסוים מתאי RSC96 המעוררים באמצעות גירוי חשמלי. הוסף 100 μL של תרחיף התא לכל באר של צלחת תרבית תאים 96 בארות. בהתחשב בדרישות של מבחן CCK-8, לשלוט במספר הכולל של תאים בערכת מגיב בין 1 x 103 ו 1 x 106.
  2. קח 10 μL של תמיסת CCK-8 מהערכה והוסף אותה לצלחת תרבית תאים של 96 בארות. יש לדגור באינקובטור CO2 בטמפרטורה של 37°C למשך 30 דקות עד 4 שעות נוספות.
  3. מדדו את הספיגה. השתמש במדידת אורך גל כפול עם אורך גל גילוי של 430-490 ננומטר ואורך גל ייחוס של 600-650 ננומטר.
  4. לקבוע את עוצמת עוצמת השדה עבור ניסויים הבאים בהתבסס על תוצאות הניסוי של התפשטות תאים. בחר תאים עם שגשוג טוב לניסויים הבאים.

5. בדיקת שריטה בתא

  1. בכל באר של צלחת שש בארות, זרע 3 x 105 תאים עם נפח כולל של 2 מ"ל לכל באר. כעבור כ-72 שעות, התאים יכסו את הבאר. בצע את הבדיקה על הניסוי ועל קבוצת הביקורת בנפרד.
  2. השתמש בקצה פיפטה כדי לצייר קו אופקי בתחתית התרבית היטב. ודאו שקצה הפיפטה מוחזק אנכית ונסו להימנע מהטיה שלו.
  3. שאפו את מדיה התרבות ושטפו עם PBS 2-3 פעמים.
  4. הוסיפו 2 מ"ל של מדיום ללא סרום לכל באר.
  5. מניחים את הצלחת באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס. צלמו תמונות תחת הגדלה של פי ארבעה של המיקרוסקופ ההפוך ב-0 שעות ו-24 שעות כדי לצפות בשינויים בנדידת תאים.

6. Immunofluorescence

  1. חדירת תאים:
    1. לאחר החדרה עדינה של מתלי תאים לצלחות תרבית, ציירו עיגולים בעזרת עט היסטולוגיה במקומות שבהם התאים מפוזרים באופן שווה על הכיסוי. יש להתייחס בנפרד לקבוצת הביקורת ולקבוצות הניסוי השונות.
    2. הוסף 50-100 μL של פתרון עבודה permeabilization (0.25-0.5% Triton X-100) ודגור בטמפרטורת החדר (RT) במשך 20 דקות. שטפו שלוש פעמים עם PBS במשך 5 דקות בכל פעם.
  2. חסימת סרום: יש להוסיף 3% BSA בתוך העיגולים כדי לכסות את הרקמה באופן אחיד. יש לדגור ב-RT למשך 30 דקות.
  3. דגירה ראשונית של נוגדנים: הסר בעדינות את התמיסה החוסמת והוסף את הנוגדן הראשוני המדולל כראוי (מופק מעכבר, מדולל בשעה 1:300) לבארות התא. מניחים את צלחת תרבית התאים בקופסה לחה ודגרים למשך הלילה ב -4 מעלות צלזיוס.
  4. דגירה משנית של נוגדנים: הניחו את צלחת התא על שייקר ושטפו אותה שלוש פעמים במשך 5 דקות בכל פעם. מוסיפים את הנוגדן המשני המתאים (IgG נגד עכבר עז המסומן ב-CY3, מדולל ב-1:300) ודגרים ב-RT למשך 50 דקות.
  5. צביעה גרעינית של DAPI:
    1. הניחו את הכיסוי ב-PBS (pH 7.4) על שייקר וכבסו שלוש פעמים במשך 5 דקות בכל פעם.
    2. לאחר ייבוש עדין של המגלשה, יש להוסיף תמיסת צביעה DAPI (2 מיקרוגרם/מ"ל, 0.5 מ"ל לכל עיגול) בתוך העיגולים ולדגור ב-RT למשך 10 דקות בחדר חשוך.
  6. הרכבה: הניחו את הכיסוי ב-PBS (pH 7.4) על שייקר וכבסו שלוש פעמים במשך 5 דקות בכל פעם. לאחר ייבוש עדין של המגלשה, אטמו את הכיסוי באמצעי הרכבה נגד דהייה לקבלת פלואורסצנטיות.
  7. רכישת תמונה: לעורר DAPI באורך גל של 330-380 ננומטר ולזהות פליטה ב 420 ננומטר; לעורר ב 465-495 ננומטר ולזהות פליטה ב 515-555 ננומטר עבור AF488; לעורר ב 510-560 ננומטר ולזהות פליטה ב 590 ננומטר עבור CY3; לעורר ב 608-648 ננומטר ולזהות פליטה ב 672-712 ננומטר עבור CY5.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

פולסים חשמליים בעוצמה נמוכה מעודדים את התפשטות התאים
על פי בדיקת CCK-8, קצב ההתרבות של RSC96 בקבוצת 5 kV/cm היה מהיר משמעותית מזה של תאי קבוצת הביקורת. עם זאת, ככל שהפרמטרים גדלו (20 קילו-וולט/ס"מ ו-40 קילו-וולט/ס"מ), קצב ההתפשטות לא היה יציב, אפילו נמוך מזה של קבוצת הביקורת. קצב התרבות התאים של תאי RSC96 בקבוצת 40 kV/cm היה נמוך משמעותית מקבוצת הביקורת וקבוצות 5 kV/cm, והראה הבדל סטטיסטי משמעותי (P < 0.05). מאחר שלא עמדו בדרישות הניסוי של התפשטות תאים, קבוצות 20 kV/cm ו-40 kV/cm לא נכללו בניסויים ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

בשנים האחרונות, היישום של nsPEF חווה הגברת הצמיחה, כפי שדווח. nsPEF יש השפעה ממוקדת מאוד רק על האזור הרצוי, מתן מספיק אנרגיה לטיפול מבלי לגרום נזק תרמי נוסף, מה שהופך אותו בטוח יותר עבור גוף האדם28. מאפיינים אלה מעניקים לו סיכויים תרגומיים מבטיחים בטיפול בגידולים ובהתחדשות עצבית. עם זאת, כמה מחקרים הציעו כמה מגבלות של nsPEF. בהשוואה למחקר חומרים, ES מוגבל על ידי מקורות כוח חיצוניים וחוטים29. יתר על כן, מחקר שנערך לאחרונה הוכיח כי הממשל של לידוקאין perioperative כמו משכך כאב...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו מומנה על ידי הפרויקט הלאומי לפיתוח מכשירים מדעיים וציוד (NO.82027803).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Antifade הרכבה בינוניתWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdG1401
Anti-GFAP עכבר mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdGB12100-100
Anti-Neurofilament כבד פוליפפטיד עכבר mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LtdGB12144-100
Anti-S100 beta Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB14146-100
BSAווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מGC305010
Coverslipג'יאנגסו שיטאי ציוד ניסיוני ושות', בע"מ10212432C
CY3 תווית עז אנטי עכבר IgGווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מGB21302
DAPI מכתים ריאגנטווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מG1012
שייקרהסרת צבעווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מDS-2S100
ספק כוח מתח גבוה עבור nsPEFMatsusada Precision Inc.AU-60P1.6-L
היסטוכימיה עטווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מG6100
ממברנה שבירת נוזלווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מG1204
מיקרוסקופ שקופיתווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מG6012
צנטריפוגה דקליםווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מMS6000
PBS אבקהווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מG0002
פיפטהווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ
מיקרוסקופ פלואורסצנטי חיוביניקון, יפןNIKON ECLIPSE C1
ארנב אנטי-SOX10 / AF488 נוגדן מצומדבייג'ינג ביוס ביוטכנולוגיה ושות', בע"מBS-20563R-AF488
RSC96 תאי שוואןווהאן חאווייר ביוטכנולוגיה ושות', בע"מSTCC30007G-1
scanister3DHISTECHPannoramic MIDI
כבל מיוחד עבור nsPEFTimes מערכות מיקרוגלM17 / 78-RG217
מערבל טורבינהווהאן Xavier ביוטכנולוגיה ושות', בע"מMV-100

מקורות

  1. Jing, W., et al. Study of electrical stimulation with different electric-field intensities in the regulation of the differentiation of PC12 cells. ACS Chem Neurosci. 10 (1), 348-357 (2018).
  2. Nocera, G., Jacob, C. Mechanisms of Schwann cell plasticity involved in peripheral nerve repair after injury. Cell Mol Life Sci. 77, 3977-3989 (2020).
  3. Aguilar, Z. Nanomaterials for Medical Applications. , Newnes. (2012).
  4. Xie, S., et al. Efficient generation of functional Schwann cells from adipose-derived stem cells in defined conditions. Cell Cycle. 16 (9), 841-851 (2017).
  5. Rosenbalm, T. N., Levi, N. H., Morykwas, M. J., Wagner, W. D. Electrical stimulation via repeated biphasic conducting materials for peripheral nerve regeneration. J Mater Sci Mater Med. 34 (11), 1-18 (2023).
  6. Daly, W. T., et al. Comparison and characterization of multiple biomaterial conduits for peripheral nerve repair. Biomaterials. 34 (34), 8630-8639 (2013).
  7. Lee, B. -K., et al. End-to-side neurorrhaphy using an electrospun PCL/collagen nerve conduit for complex peripheral motor nerve regeneration. Biomaterials. 33 (35), 9027-9036 (2012).
  8. Kim, V., Gudvangen, E., Kondratiev, O., Redondo, L., Xiao, S., Pakhomov, A. G. Peculiarities of neurostimulation by intense nanosecond pulsed electric fields: how to avoid firing in peripheral nerve fibers. Int J Mol Sci. 22 (13), 7051(2021).
  9. Assinck, P., Duncan, G. J., Hilton, B. J., Plemel, J. R., Tetzlaff, W. Cell transplantation therapy for spinal cord injury. Nat Neurosci. 20 (5), 637-647 (2017).
  10. Chen, Y. Y., McDonald, D., Cheng, C., Magnowski, B., Durand, J., Zochodne, D. W. Axon and Schwann cell partnership during nerve regrowth. J Neuropathol Exp Neurol. 64 (7), 613-622 (2005).
  11. Yi, S., et al. Tau modulates Schwann cell proliferation, migration and differentiation following peripheral nerve injury. J Cell Sci. 132 (6), (2019).
  12. Min, Q., Parkinson, D. B., Dun, X. Migrating Schwann cells direct axon regeneration within the peripheral nerve bridge. Glia. 69 (2), 235-254 (2021).
  13. Zhang, Y., Zhao, Q., Chen, Q., Xu, L., Yi, S. Transcriptional control of peripheral nerve regeneration. Mol Neurobiol. 60 (1), 329-341 (2023).
  14. Nishi, M., Kawata, M., Azmitia, E. C. Trophic interactions between brain-derived neurotrophic factor and S100β on cultured serotonergic neurons. Brain Res. 868 (1), 113-118 (2000).
  15. Gu, Y., et al. miR-sc8 inhibits Schwann cell proliferation and migration by targeting EGFR. PLoS One. 10 (12), e0145185(2015).
  16. Dong, H. -L., et al. AMPK regulates mitochondrial oxidative stress in C2C12 myotubes induced by electrical stimulations of different intensities. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 38 (6), 742-747 (2018).
  17. Beebe, S. J., Blackmore, P. F., White, J., Joshi, R. P., Schoenbach, K. H. Nanosecond pulsed electric fields modulate cell function through intracellular signal transduction mechanisms. Physiol Meas. 25 (4), 1077(2004).
  18. Haberkorn, I., Siegenthaler, L., Buchmann, L., Neutsch, L., Mathys, A. Enhancing single-cell bioconversion efficiency by harnessing nanosecond pulsed electric field processing. Biotechnol Adv. 53, 107780(2021).
  19. Ruiz-Fernández, A. R., Campos, L., Gutierrez-Maldonado, S. E., Núñez, G., Villanelo, F., Perez-Acle, T. Nanosecond pulsed electric field (nsPEF): Opening the biotechnological Pandora's box. Int J Mol Sci. 23 (11), 6158(2022).
  20. Nuccitelli, R., et al. First-in-human trial of nanoelectroablation therapy for basal cell carcinoma: proof of method. Exp Dermatol. 23 (2), 135-137 (2014).
  21. Nuccitelli, R., et al. Non-thermal nanoelectroablation of UV-induced murine melanomas stimulates an immune response. Pigment Cell Melanoma Res. 25 (5), 618-629 (2012).
  22. Carr, L., et al. A nanosecond pulsed electric field (nsPEF) can affect membrane permeabilization and cellular viability in a 3D spheroids tumor model. Bioelectrochemistry. 141, 107839(2021).
  23. Hornef, J., Edelblute, C. M., Schoenbach, K. H., Heller, R., Guo, S., Jiang, C. Thermal analysis of infrared irradiation-assisted nanosecond-pulsed tumor ablation. Sci Rep. 10 (1), 5122(2020).
  24. Zuo, K. J., Gordon, T., Chan, K. M., Borschel, G. H. Electrical stimulation to enhance peripheral nerve regeneration: Update in molecular investigations and clinical translation. Exp Neurol. 332, 113397(2020).
  25. Juckett, L., Saffari, T. M., Ormseth, B., Senger, J. -L., Moore, A. M. The effect of electrical stimulation on nerve regeneration following peripheral nerve injury. Biomolecules. 12 (12), 1856(2022).
  26. Jessen, K. R., Mirsky, R. Negative regulation of myelination: relevance for development, injury, and demyelinating disease. Glia. 56 (14), 1552-1565 (2008).
  27. Chen, Z. -L., Yu, W. -M., Strickland, S. Peripheral regeneration. Annu Rev Neurosci. 30, 209-233 (2007).
  28. Yin, D., et al. Cutaneous papilloma and squamous cell carcinoma therapy utilizing nanosecond pulsed electric fields (nsPEF). PloS One. 7 (8), e43891(2012).
  29. Qi, F., et al. Photoexcited wireless electrical stimulation elevates nerve cell growth. Colloids Surf B Biointerfaces. 220, 112890(2022).
  30. Mi, Y., Liu, Q., Li, P., Xu, J., Yang, Q., Tang, J. Targeted gold nanorods combined with low-intensity nsPEFs enhance antimelanoma efficacy in vitro. Nanotechnology. 31 (35), 355102(2020).
  31. Ho, T. -C., et al. Hydrogels: Properties and applications in biomedicine. Molecules. 27 (9), 2902(2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

תאי RSC96התרבות תאיםנדידת תאיםמבחן CCK-8מבחן שריטהביטוי S100-Betaביטוי Sox10
ויסות צמיחת תאי Schwann על ידי שדה חשמלי פועם ננו-שנייה להתחדשות עצבית היקפית במבחנה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.