מאמר שיטה

הקמת מודל עכברי ניסיוני של אנדומטריומה כדי לחקור את אי הפוריות הקשורה אליה

2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66240

⸱

5 באפריל 2024

 ,  ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynaecology, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 2Reproduction and Development, Li Ka Shing Institute of Health Sciences, The Chinese University of Hong Kong, 3School of Biomedical Sciences, Faculty of Medicine, The Chinese University of Hong Kong, 4Chinese University of Hong Kong-Sichuan University Joint Laboratory in Reproductive Medicine, The Chinese University of Hong Kong

במאמר זה

סיכום

מחקר זה מציג מודל עכבר חדש שתוכנן במיוחד כדי לדמות אנדומטריומה, תת-סוג משמעותי קלינית של אנדומטריוזיס. על ידי שימוש בעכברי C57BL/6J, המודל שואף להבהיר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה, ומציע כלי מעודן לגשר על פער הידע הנוכחי ברפואת הרבייה.

תקציר

אנדומטריומה (OMA), תת-סוג של אנדומטריוזיס המאופיינת בהיווצרות ציסטות אנדומטריוטיות בשחלות, משפיעה על 17-44% מהאנשים המאובחנים עם אנדומטריוזיס. נשים עם OMA חוות לעתים קרובות פוריות בסיכון, אך המנגנונים המדויקים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה ל-OMA נותרו לא ברורים. יש לציין כי מודלים קיימים של בעלי חיים מדמים אנדומטריוזיס צפקי שטחי (SUP) ואנדומטריוזיס חודרני עמוק (DIE), מה שמשאיר פער בולט במחקר המתמקד ב-OMA. בתגובה לפער הידע, מאמר זה מציג מודל עכבר חלוצי המדמה OMA ומספק תיאור מקיף של הטכניקות והנהלים המשמשים במודל. עם שיעור הצלחה גבוה של 83% וספציפיות לנגע בשחלות, מודל זה טומן בחובו הבטחה משמעותית לקידום ההבנה שלנו לגבי OMA, במיוחד בהקשר של אי פוריות. הוא מציע פלטפורמה רבת ערך לביצוע מחקר ממוקד באתגרי פוריות הקשורים ל-OMA, מה שעשוי לסלול את הדרך לאסטרטגיות אבחון וטיפול משופרות בתחום רפואת הרבייה.

מבוא

אנדומטריומה (OMA) היא תת-הסוג הנפוץ ביותר של אנדומטריוזיס, שנצפה בכ-17-44% מהאנשים המאובחנים עם אנדומטריוזיס 1,2. הוא מאופיין בהיווצרות ציסטות אנדומטריוטיות בתוך השחלות. ציסטות אלה, המכונות בשפה המדוברת "ציסטות שוקולד", שואבות את שמם מהעקביות החומה הייחודית שלהן, דמוית זפת3. בנוסף ל-OMA, אנדומטריוזיס יכולה להופיע גם כאנדומטריוזיס פריטונאלי שטחי (SUP) ואנדומטריוזיס חודרני עמוק (DIE). SUP מתייחס לנגעים על רירית הצפק, ואילו DIE מתייחס לנגעים החודרים יותר מ-5 מ"מ מתחת למשטח הצפק4. ההטרוגניות במיקום הנגע, במראה ובעומק בין תת-סוגים אלה של אנדומטריוזיס מביאה לתסמינים קליניים מגוונים וחומרת מחלה משתנה 5,6. OMA קשור במיוחד לשלבי אנדומטריוזיס חמורים יותר ומעורב באי פוריות, הידבקויות באגן וסיכון מוגבר לסרטן השחלות 1,7,8,9.

הקשר של אנדומטריוזיס, במיוחד OMA, עם אי פוריות הוא נושא קליני של דאגה חמורה. אנדומטריוזיס קיימת אצל 25-50% מהנשים העקרות, כאשר 30-50% מהנשים המאובחנות עם אנדומטריוזיס חוות אי פוריות 10,11,12,13,14. בעוד שמנגנוני הפוריות המדויקים הקשורים ל-OMA נותרו חמקמקים, הועלו כמה השערות. אחד מהם מציע שאנדומטריוזיס מוביל למצב דלקתי כרוני, שעלול לשבש את תפקוד השחלות התקין ולפגוע באיכות הביציות15,16. אחר מציע עומס יתר חריג של ברזל בנוזל הזקיקים של השחלות, אשר מאמינים כי הוא קשור להפרעת הבשלת ביציות14. מחקרים אחרים עוסקים בשיבושים בוויסות ההורמונלי17, באיכות הביציות18 ובהתפתחות העובר19.

מבחינה היסטורית, מודלים של מכרסמים מילאו תפקיד מכריע בהעמקת ההבנה שלנו לגבי אנדומטריוזיס, במיוחד בחקר הפתולוגיה שלה, השפעתה על הפוריות ומנגנוני הכאב 20,21,22,23. מכרסמים, במיוחד חולדות ועכברים, שימשו באופן נרחב כמודלים של בעלי חיים בחקר קשרי סיבה ותוצאה, מנגנונים בסיסיים, טכניקות אבחון פוטנציאליות והתערבויות טיפוליות למחלה זו 22,24,25,26. חשוב להכיר בכך שלכל המודלים של בעלי חיים יש את השימושים והמגבלות הספציפיים שלהם. הבחירה במודל מסוים תלויה בתוצאה או בהיבט הספציפי שנמדד או נחקר27. לדוגמה, מודל חולדה הראה כי מתח עלול להחמיר את ביטויי האנדומטריוזיס ולהשפיע על פרמטרים דלקתיים, ולספק תובנות לגבי הטריגרים הפוטנציאליים של המחלה28.

בהקשר של מחקר אנדומטריוזיס, ישנם מודלים שונים של מכרסמים המופעלים. גישה נפוצה אחת היא המודל ההומולוגי, הכולל השתלת רקמת רחם של מכרסמים לתוך חלל הצפק או כלי הדם המזנטרי של אותו מין29. מודל זה מציע יתרונות מבחינת כשירות חיסונית והתאמה למחקרים ארוכי טווח30. עם זאת, מגבלות מתעוררות עקב הפער החלקי בין רקמת הרחם של העכבר החוץ רחמי המושתל לבין המאפיינים של נגעים אנדומטריוטיים אנושיים31. גישה נוספת היא המודל ההטרולוגי, שבו ביופסיה של רירית הרחם האנושית מושתלת בעכבר מדוכא חיסון32. מודל זה מאפשר שימוש ברירית הרחם האנושית כרקמה תורמת להתפתחות נגעים, ומספק תוקף קונסטרוקטיבי32. עם זאת, הוא מסתמך על עכברים מדוכאי חיסון כנמענים, מה שמפריע להערכה מקיפה של התגובות החיסוניות המעורבות באטיולוגיה של ההפרעה33. עם זאת, חשוב להכיר בכך שהמודלים הקיימים מתמקדים בעיקר בשיקוף המצב הכללי SUP, ואינם לוכדים כראוי את המאפיינים הייחודיים של OMA ו-DIE34. נכון לעכשיו, יש מחסור במודלים ספציפיים זמינים לחקר DIE, כאשר קיימים רק כמה מודלים, כולל מודל מכרסמים שפותח לאחרונה על ידי יאן ואחרים.35. מחסור זה מדגיש את הצורך במחקר נוסף ובפיתוח מודלים הלוכדים במדויק את המאפיינים הספציפיים של DIE. בנוסף, ההבנה שלנו לגבי OMA, במיוחד הקשר הניואנסי שלה לפוריות, נותרה מוגבלת26,36.

בהתמודדות עם האתגרים הקיימים, מאמר זה מציג מודל עכבר הומולוגי ניסיוני חדש שנועד לדמות באופן ספציפי OMA. הוא נועד לספק תובנות ייחודיות לגבי המנגנונים הפתולוגיים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה ל-OMA, ובכך לגשר על פער הידע בתחום חיוני זה של רפואת הרבייה. בקצרה, עכברי C57BL/6J שימשו לתכונות הרבייה דמויות האדם שלהם. לאחר סנכרון מחזור הייחום, רקמות הרחם מעכברים תורמים נטחנו והושתלו בבורסת השחלות של העכברים המקבלים ביחס של 1:2. לאחר מרווח של 4 שבועות, נערכו בדיקות מורפולוגיות והיסטולוגיות של הנגעים בשחלות כדי לאמת את נוכחות OMA ולהעריך כל אטרזיה זקיקית הקשורה אליה. עם שיעור הצלחה של 83%, מודל זה מציע לחוקרים פלטפורמה אמינה למחקרי OMA, תוך שימת דגש על התפתחות נגעים במיוחד בשחלות לחקירות ממוקדות.

פרוטוקול

כל הליכי הניסוי שנערכו במחקר זה אושרו והוסדרו תחת פרוטוקול מספר 21-203-MIS_[C] על ידי הוועדה האתית של האוניברסיטה הסינית של הונג קונג.

1. התאקלמות ובחירת בעלי חיים

  1. הכנת עכברים
    1. השג 18 עכברי C57BL/6J (נקבות ראשוניות, בנות 8-9 שבועות: 6 תורמים, 12 מושתלים) מספק בעל מוניטין. אמת את אישורי התקינות.
    2. שמור על כל העכברים בסביבת דיור מבוקרת: 22-24 מעלות צלזיוס, רמות לחות בין 40% ל-60%, ועם מחזור אור/חושך של 12 שעות. השתמש באוויר מסונן HEPA, אם זמין.
    3. אפשר הסתגלות של 72 שעות לעכברים עם גישה רציפה למזון ומים, תוך מזעור האינטראקציה האנושית כדי להפחית את הלחץ.
  2. סנכרון מחזור אסטרוס
    1. אסוף מצעים המכילים פרומונים זכריים; הכירו אותו לכלובי נשים למשך 48 שעות.
  3. ציטולוגיה של הנרתיק
    1. בצע ציטולוגיה נרתיקית למחרת בבוקר.
      הערה: יש צורך לבצע מריחה בשעה קבועה ביום, בדרך כלל בשעה 9:00 בבוקר.
      1. הכינו מראש צמר גפן דו-ראשי, PBS חיטוי, צלחת פטרי 35 מ"מ ומגלשות זכוכית. מוציאים 10 מ"ל PBS בצלחת פטרי. טבלו קצה אחד של צמר גפן ב-PBS כדי לאפשר לו לספוג את הנוזל.
      2. הוציאו בעדינות עכבר אחד מהכלוב שלו והניחו אותו על מכסה של כלוב ריק.
      3. אחזו בזנב בעזרת האגודל והאצבע המורה ביד אחת, וביד השנייה קחו את צמר הגפן הרטוב והכניסו אותו בעדינות לנרתיק העכבר. הכנס בזהירות את קצה מקל הספוגית לעומק של כ-1.0 ס"מ לתוך הנרתיק של העכבר. סובבו את הספוגית בעדינות, תוך שמירה על זווית של כ-45 מעלות לציר הארוך של גוף החיה.
        הערה: סיבוב הספוגית לאט במהלך ההחדרה יכול להקל על הליך חלק יותר ולמזער את הגירוי הפוטנציאלי לצוואר הרחם.
      4. הסר בעדינות תאים מלומן הנרתיק ומדפנות הנרתיק על ידי סיבוב רציף של הספוגית, ולאחר מכן משוך בזהירות את הספוגית.
        הערה: במהלך תהליך זה, ודא שהמטוש מסתובב ברציפות תוך זהירות לא לבוא במגע עם השערות שמסביב. לאחר מכן, משוך בזהירות את הספוגית כדי למנוע זיהום פוטנציאלי.
      5. העבירו את התאים שנאספו על ידי גלגול עדין של קצה הספוגית על שקופית זכוכית נקייה עם תווית מראש.
        הערה: יש להשליך את מקל הספוגית לאחר העברת תאים למגלשות, ולהשתמש במקל חדש לכל בעל חיים.
      6. בדוק את השקופיות תחת מיקרוסקופ כדי לזהות תאי אפיתל מקורניים. חפש נוכחות אחידה של תאי אפיתל מקורניים בציטולוגיה של הנרתיק, מה שמעיד על שלב הייחום. צלם תמונות ותעד את התצפיות.
        הערה: עם המומחיות המתאימה, אין צורך בהכתמת מריחות נרתיקיות. עם זאת, אם נסיין לא יכול "לקרוא" את המריחות מבלי שהן יוכתמו, אז זה הכרחי.

2. הקמת מודל אנדומטריומה

הערה: בחר רק עכברים בשלב הייחום כעכברים תורמים ומקבלים במפעל המודל. בעת ביצוע ניסויים בעכבר אחד, ודא שהוא מחוץ לטווח הראייה של אחרים ושהוא לא יוכנס מחדש לחברת בעלי חיים אחרים עד להחלמתו המלאה. ניתן למצוא את התרשים של יצירת המודל באיור 1.

  1. הכנת רקמות תורם
    1. יש להרגיע את העכברים התורמים בשילוב של קטמין (75 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (10 מ"ג/ק"ג). המתת חסד של העכברים התורמים על ידי טרנסלוקציה של צוואר הרחם בהרדמה.
    2. חיטוי אזור הבטן בעזרת ספוגית אתנול של 70%.
    3. השתמש במספריים כירורגיים סטריליים כדי ליצור חתך (1 ס"מ) לאורך קו האמצע של הצפק כדי לחשוף את שכבת השריר. בחר זוג מספריים כירורגי נוסף כדי לחתוך את שכבת השריר ולחשוף את חלל האגן.
    4. סגור את קצות המלקחיים והרם בעדינות את המעיים באמצעות החלק המרכזי הבוטה.
    5. אתר את רקמות הרחם והשחלות. בצע דיסקציה סטרילית של כל קרן הרחם, כולל שתי קרני הרחם, וודא שהגודל המשוער של החתיכה המוסרת הוא באורך ~1.5 ס"מ. הניחו את הרקמות שנכרתו בצלחת פטרי המכילה PBS והסירו את כל רקמות השומן העודפות.
    6. מנתחים את הרקמות לחתיכות בגודל 1 מ"מ³ בעזרת אזמל מעוקר. שמור על לחות הרקמות על ידי הוספה מעת לעת של PBS.
  2. הליך השתלה
    1. יש להרדים את העכברים המקבלים בתערובת של קטמין (75 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (10 מ"ג/ק"ג).
    2. יש למרוח משחה עיניים למניעת יובש בעיניים במהלך הניתוח. הניחו את העכברים במצב שכיבה על לוח כירורגי סטרילי.
    3. קבע את אתר הניתוח על ידי מניפולציה עדינה של הרגליים האחוריות של העכבר, עם בליטה גרמית המורגשת מתחת לעור. נקודת בולטות זו, הנראית בבירור דרך העור, משמשת כסמן אנטומי אמין לשחלות של העכבר המקבל במהלך ההליך הכירורגי.
    4. לגלח את אתר הניתוח, ולוודא ש-150% מהשטח סביבו מנוקה מפרווה. לאחר מכן, יש לחטא את העור בסבבים לסירוגין של בטדין ו-70% אלכוהול לפחות 3 פעמים. השתמש בווילון כירורגי סטרילי כדי למנוע מגע בין רקמות, מכשירים סטריליים ותפרים עם כל הפרווה שנותרה. לבסוף, צור חתך רוחבי מדויק (3-5 מ"מ) באתר הניתוח שנקבע מראש.
    5. ייצב את השחלה בעזרת מלקחיים ידניים לא דומיננטיים. הזריק בעדינות 100 מיקרוליטר PBS לבורסת השחלות, תוך התבוננות בהפרדה הקלה.
    6. צור חריץ זעיר בבורסה. השתל את שברי רקמת הרחם (1 מ"מ³) באמצעות מיקרו מלקחיים.
      הערה: הימנע ממילוי יתר כדי למנוע לחץ על הרקמות שמסביב.
    7. עבור ניתוח דמה, שכפל את כל השלבים למעט שלב 2.2.6.
  3. טיפול לאחר הניתוח
    1. לתפור את שכבות השריר בתפרים נספגים (כלומר, 5-0 ויקריל) ובעור עם תפרים שאינם נספגים (כלומר, 5-0 ניילון).
    2. הנח עכבר על כרית חימום המכוונת ל-37 מעלות צלזיוס עד לחזרה להכרה מלאה. עקוב אחר הנשימה והמתן עד שהגפיים יהפכו לוורודות.
    3. יש לתת בופרנורפין (0.1 מ"ג/ק"ג, תת עורי) לכאבים כל 12 שעות למשך 48 שעות. בדוק אם יש סימני כאב, זיהום או מצוקה כל 8 שעות במשך 24 השעות הראשונות ולאחר מכן 3 פעמים ביום במשך 3 הימים הבאים.
      הערה: החיה לא נשארת ללא השגחה עד שהיא חוזרת להכרה מספקת כדי לשמור על שכיבה על החזה.

3. אימות מודל

  1. ולידציה ברוטו
    1. לאחר 4 שבועות, יש להרדים את העכברים המקבלים באמצעות שילוב של קטמין (75 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (10 מ"ג/ק"ג). לאחר מכן, בהרדמה עמוקה, המתת חסד של העכברים על ידי ביצוע טרנסלוקציה של צוואר הרחם.
    2. בצע חתך בקו האמצע וחשוף את חלל הבטן לבדיקת איברים.
    3. חלץ את השחלות עם נגעים גלויים וצלם תמונות.
    4. בדוק היטב אם יש נגעים אנדומטריוטיים זרים.
  2. תיקוף היסטולוגי
    הערה: בשל נוכחותם של ממיסים ריחניים שעלולים לגרות בניסויים ההיסטולוגיים, יש לבצע אותו במכסה אדים.
    1. תקן את השחלות יחד עם נגעים בפורמלין 10% ניטרלי.
    2. עבד את הרקמות לפי אותם הליכים שתוארו על ידי Adeniran et al.37, כולל הקצאת רקמות, קיבוע והטמעה.
    3. חתכו רקמות באופן סדרתי בעובי של 4-5 מיקרומטר, צפו באמבט מים בטמפרטורה של 45 מעלות צלזיוס והרכיבו על מגלשות זכוכית. סמן בבירור את השקופיות עם מספר העכבר, צד השחלה ומספר המקטע. יבש למשך הלילה ב-37 מעלות צלזיוס.
    4. צביעת PAS-המטוקסילין
      1. דה-פרפיניזציה: הניחו את השקופיות בקסילן או בתחליף קסילן כדי להסיר את הפרפין.
        הערה: ייתכן שתצטרך לבצע שלב זה כמה פעמים.
      2. החזרת נוזלים: החזר בהדרגה את חלקי הרקמה על ידי הנחת השקופיות בסדרה של ירידה בריכוזי אתנול (100%, 95%, 80%, 70%).
      3. טיפול תקופתי בחומצה: מכסים את חלקי הרקמה בתמיסת חומצה תקופתית של 1% ומניחים להם לשבת 5-10 דקות בטמפרטורת החדר.
        הערה: שלב זה מחמצן את קבוצות הגליקול של הרקמה לקבוצות אלדהיד, ומאפשר תגובה עם מגיב שיף והיווצרות כתם סגול-ורוד המציין את מבני השחלות.
      4. שוטפים היטב את השקופיות במים מזוקקים כדי להסיר חומצה תקופתית שנותרה.
      5. צבעו את חלקי הרקמה בתמיסת שיף למשך 15 דקות.
      6. שטפו את השקופיות תחילה במי ברז זורמים חמים כדי להסיר כתמים עודפים, ולאחר מכן במים מזוקקים.
      7. צבעו את החלקים עם 1 גרם/ליטר של המטוקסילין של מאייר למשך 2-3 דקות.
      8. יש לשטוף את המגלשות במי ברז זורמים למשך 2-3 דקות.
      9. החל מגיב כחול למשך 30 שניות.
      10. שוטפים את השקופיות במים מזוקקים.
      11. ייבשו את החלקים בהדרגה על ידי טבילתם בריכוזי אתנול הולכים וגדלים (70%, 80%, 95% ו-100%).
      12. טבלו את החלקים בחומר סליקה (למשל, קסילן) כדי להפוך אותם לשקופים.
      13. מרחו אמצעי הרכבה על החלקים בשקופיות והניחו בעדינות כיסוי על החלקים, וודאו שאין בועות אוויר. הניחו למגלשות להתייבש באוויר במכסה המנוע כדי להקל על התמצקות אמצעי ההרכבה.
    5. בדוק תחת מיקרוסקופ אור. תעד נוכחות של בלוטות רירית הרחם, סטרומה וציסטות דימומיות המאשרות אנדומטריוזיס בשחלה.

תוצאות

הקמתה המוצלחת של OMA
מתוך 12 העכברים שעברו את פרוטוקול ההשתלה, 10 הראו נגעי OMA אופייניים, הן ברמה האנטומית והן ברמה ההיסטולוגית, המתורגמים לשיעור הצלחה של 83%. בדיקה גסה גילתה נגעים מלאים בנוזל הנצמדים לשחלות, המזכירים מצגים קליניים של OMA (איור 2). בדיקה היסטופתולוגית, כפי שמוצג באיור 3, אישרה את ההשתלה המוצלחת של רקמת רירית הרחם החוץ רחמית. יתר על כן, חדירת נגעים אנדומטריוטיים גרמה לאטרזיה מסיבית של זקיקים ליד השתלים, מה שמעיד על הפרעתו לסביבה השחלתית.

ספציפיות הדגם
קריטי לתוקף המודל היה הספציפיות שלו לאנדומטריוזיס בשחלות. לאחר בדיקה יסודית, לא זוהו שתלים אנדומטריוטיים זרים באף איבר אחר באגן או בבטן, מה שמדגיש את הדיוק של המודל ואת הפוטנציאל שלו ככלי חזק לחקירת אנדומטריומה ואי פוריות הקשורה אליה.

figure-results-1
איור 1: יצירת מודל אנדומטריומה. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: אנטומיה גסה של אנדומטריומה. בהשוואה לקבוצת הביקורת הדמה, גידול ציסטי של רירית הרחם החוץ רחמית נראה בקשר למורפולוגיה השחלתית 4 שבועות לאחר ההשתלה בקבוצת OMA במורפולוגיה. קווי מתאר מקווקו כחולים: נגע אנדומטריוטי. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: קטע מוכתם היסטולוגי של נגע רירית הרחם ממודל העכבר. בהשוואה לקבוצת הביקורת הדמה, גידול ציסטי של רירית הרחם החוץ רחמית נראה בקשר עם השחלה 4 שבועות לאחר ההשתלה בקבוצת OMA בהיסטולוגיה. חיצים שחורים מצביעים על זקיקים אטרטיים. פסי קנה מידה = 0.5 מ"מ. קיצור: OMA = אנדומטריומה. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

דיון

השכיחות של OMA באוכלוסיית הנשים העולמית מדגישה דאגה בריאותית קריטית38. מעבר לתסמינים הכלליים של אנדומטריוזיס, OMA מביא אתגרים נוספים לפוריות, כולל כאבי אגן עזים, פוטנציאל לפיתול שחלתי והשלכות בולטות אחרות39,40. בעוד שההבנה של פתוגנזה והתקדמות OMA אפופה במידה רבה במסתורין, ואקום הידע לא רק מעכב את גיבוש אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות אלא גם אומר שנשים רבות ממשיכות לסבול מטיפולים לא אופטימליים ותסמינים חוזרים. החלטתן של נשים מודרניות רבות לדחות את הלידה מגבירה עוד יותר את חששות הפוריות הקשורים ל-OMA, מה שהופך את זה להכרחי עוד יותר להבין ולטפל בפתופיזיולוגיה שלה באופן מקיף.

מבחינה היסטורית, אחד המחסומים המשמעותיים ביותר לקידום הבנתנו את OMA היה היעדר מודל בעלי חיים נחוש ומדויק. בעוד שמספר מודלים נחקרו בעבר, לעתים קרובות הם נכשלו בשחזור הספציפיות של OMA או הכנסת משתנים מבלבלים נוספים עקב ביטוי נגעים באיברים אחרים מלבד השחלות41. פיתחנו מודל עכבר כדי לשכפל OMA ולשפר את ההבנה שלנו את המחלה. הטכניקה הכירורגית שלנו כללה השתלת רקמות רחם טחונות בבורסה של השחלות של עכברים כדי להבטיח התפתחות של נגעים אנדומטריוטיים בשחלות. מעקב צמוד לאחר הניתוח אפשר לנו להעריך את התקדמות OMA ולהבטיח את רווחת העכברים. כדי לשפר את הרלוונטיות של הדגם, שמרנו על בורסת השחלות שלמה במקום להסיר אותה. שינוי זה נועד למנוע דליפת שתלים לאיברים אחרים ולהבטיח לוקליזציה ספציפית של נגעים בשחלות. בנוסף, התייחסנו לסיבוכים פוטנציאליים, כגון דימום או זיהום, במהלך ההליך. במחקר זה, נעשה שימוש בצביעת PAS לאיתור נוכחות ריר, מה שנעשה בדרך כלל כדי להעריך את ההיסטולוגיה של זקיקי השחלות42,43. זיהוי זקיקים אטרטיים בחלקי שחלות הסמוכים לנגע האנדומטריוטי הוא עדות מכרעת לאופן שבו אנדומטריוזיס משפיעה לרעה על התפתחות הזקיקים 43,44,45. לממצא זה יש חשיבות משמעותית למחקרים נוספים על אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה, כפי שנתמך על ידי המודל שלנו. שילוב אימות היסטולוגי איפשר הבנה מקיפה של השינויים הפתולוגיים הקשורים לאנדומטריוזיס במודל שלנו. הכללה זו מחזקת את האמינות והרלוונטיות של הממצאים שלנו ומסייעת בביסוס הקשר בין אנדומטריוזיס לתפקוד לקוי של השחלות. חשוב גם להכיר במגבלות הטכניקה שלנו. בעוד שמודל זה שכפל בהצלחה נגעים בשחלות הקשורים ל-OMA, ייתכן שהוא לא יתפוס במלואו את המורכבות של אנדומטריוזיס. לתרגום ממצאים ממודלים של בעלי חיים לבני אדם יש מגבלות מובנות עקב הבדלים בין מינים.

לעומת זאת, מחקר זה מתבסס על מחקר קודם על מודלים של עכברי אנדומטריוזיס בשחלות, שם בוצע הליך דומה של השתלת קרני רחם בשחלות46. עם זאת, ישנם הבדלים בולטים בין שיטה זו לדגמים קודמים. ראשית, מודל זה יוצר אך ורק נגעים בשחלות, בעוד שהמודל הקודם הראה נגעים אנדומטריוטיים גם באיברים אחרים, ולא רק בשחלות. הבחנה זו גורמת למודל שלהם לחקות את תת-הסוגים המשולבים של אנדומטריוזיס במקום להיות ספציפי ל-OMA. הביטוי הממוקד שלנו מאפשר לחוקרים להתרכז באופן ספציפי בניואנסים של OMA ללא ההשפעה המבלבלת של נגעים באיברים אחרים. על ידי התגברות על מגבלות אלה, המודל שלנו מספק ייצוג מדויק יותר של OMA ומשמש פלטפורמה חזקה לחקירות עתידיות. שנית, מודל זה מדגים שיעור הצלחה ראוי לשבח של 83% בשיקוף OMA, מה שמבטיח נאמנות גבוהה בשחזור המחלה.

ראוי לציין כי הישנות OMA היא דאגה משמעותית, שכן נשים רבות חוות תסמינים חוזרים גם לאחר התערבויות טיפוליות ראשוניות. מספר מחקרים העריכו הישנות אנדומטריוזיס ובדיקות אבחון בהקשר זה. לדוגמה, ילדיז ועמיתיו דנו בשימוש באולטרסאונד טרנס-ווגינלי ככלי אבחון לאיתור סמני אולטרסאונד ודפוסים ספציפיים לאבחון מדויק וניטור הישנות47. מחקר אחר התמקד במעקב ארוך טווח של נשים עם אנדומטריוזיס והעריך את שיעור ההישנות לאחר טיפול כירורגי48. מחקר זה מדגיש את החשיבות של אסטרטגיות טיפול פרטניות המבוססות על מאפייני המחלה וגורמי המטופל כדי למזער את הסיכון להישנות. יתר על כן, כמה חוקרים בחנו את הפוטנציאל של סמנים ביולוגיים במחזור לחיזוי הישנות אנדומטריוזיס49. המחקר בוחן סמנים מולקולריים ספציפיים והקשר שלהם להישנות המחלה, ומספק תובנות לגבי פיתוח בדיקות אבחון לא פולשניות וגישות ניהול מותאמות אישית. מחקרים אלה מדגישים את המאמצים המתמשכים להבין ולטפל בהישנות אנדומטריוזיס ופיתוח בדיקות אבחון לשיפור תוצאות המטופלים. שילוב ידע ממחקרים אלה במחקר מודל העכברים OMA שלנו יכול לתרום להבנה מקיפה של המחלה, דפוסי הישנות ואסטרטגיות אבחון פוטנציאליות לניטור וניהול OMA.

לסיכום, הקמת מודל עכבר OMA ספציפי זה משמשת אבן פינה לעידן חדש של מחקר בתחום האנדומטריוזיס. על ידי טיפול בפער ארוך שנים, הוא מבטיח מפל של תובנות ופריצות דרך שיכולות לחולל מהפכה באופן שבו אנו מבינים, מטפלים ואולי מונעים אנדומטריומה, מה שיוביל לתוצאות קליניות משופרות ואיכות חיים משופרת לנשים מושפעות. חשוב לציין, על ידי השוואת שיטה זו למודלים קודמים של OMA ושילוב ממצאים ממחקרים על הישנות אנדומטריוזיס ובדיקות אבחון, אנו יכולים לשפר עוד יותר את הרלוונטיות והישימות של המחקר שלנו בהקשר הרחב יותר של מחקר אנדומטריוזיס וטיפול בחולים.

גילויים

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

מחקר זה ממומן על ידי תוכנית המחקר מבוססת הנושא שהוענקה על ידי מועצת מענקי המחקר של ממשלת הונג קונג של האזור המנהלי המיוחד (T13-602/21-N).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרק 1 סמ"ק עם מחט 25 גרםBD Biosciences301320
צלחת תרבית רקמה 10 מ"מבז353001
10% פורמלין חומציפישר סיינטיפיקSF100-4
10x חוצץ מי מלח פוספט (PBS)פישר סיינטיפיקAM9625
מחט 30 גרםBD Biosciences305107
5-0 תפר משי קלוע שחור שאינו נספגאתיקון בע"מW500H
70% אתנול
שקופיות מיקרוסקופ דבקמרינפלד810401
הזרקת בופרנורפין מד-וטרינר בינלאומיRXBUPRENOR5
צמר גפן דו-ראשיסניו ושות', בע"מHUBY-340
מלקחיים עדיניםכלים מדעיים עדינים11254-20
קטמיןאלפסן אינטרנשיונל b.v2203095-08
מיקרו-צינורותקורנינג MCT-150-C
מחזיק מחטתאגיד אקסלטהברקוד 2827-NH-35-SE-ND
משחה עינייםתרופות עיקריות10033691
ערכת כתמי חומצה תקופתית שיף (PAS) אבקםאביב150680
כפפות סטריליות ללא אבקהפישר סיינטיפיק19020558
עיבוד/הטמעה של קלטותפישר סיינטיפיק15-197-700א
אזמל מידה 3פישר סיינטיפיק22-079-657
מלקחיים משוננים קטנים ומעוקלים למחצהרובוז מכשירים כירורגיים ושות'RS-5135
מספריים כירורגיים קטניםרובוז מכשירים כירורגיים ושות'RS-5850
מיקרוסקופ אור סטנדרטילהערכת מריחות ציטולוגיה בנרתיק וניתוח היסטולוגי.
להבי אזמל פלדה #10ב.בראוןBB510
גזה סטריליתמדיקוםHMWS 077
צלחות פטרי מזכוכית פיירקס מעוקרותקורנינג70160-101
פד חשמלי מווסת חום 
VICRYL RAPIDE (פוליגלקטין 910) תפר נספגאתיקון בע"מW9918
קסילזין אלפסן אינטרנשיונל b.v2110333-10

מקורות

  1. Khan, K. N., et al. Pelvic pain in women with ovarian endometrioma is mostly associated with coexisting peritoneal lesions. Hum Reprod. 28 (1), 109-118 (2013).
  2. Gałczyński, K., Jóźwik, M., Lewkowicz, D., Semczuk-Sikora, A., Semczuk, A. Ovarian endometrioma - a possible finding in adolescent girls and young women: A mini-review. J Ovarian Res. 12 (1), 104(2019).
  3. Tan, Z., et al. Impacts of endometrioma on ovarian aging from basic science to clinical management. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1073261(2022).
  4. Khan, K. S., et al. Mri versus laparoscopy to diagnose the main causes of chronic pelvic pain in women: A test-accuracy study and economic evaluation. Health Technol Assess. 22 (40), 1-92 (2018).
  5. Nisenblat, V., et al. Blood biomarkers for the non-invasive diagnosis of endometriosis. Cochrane Database Syst Rev. 2016 (5), 012179(2016).
  6. Harirchian, P., et al. Lesion kinetics in a non-human primate model of endometriosis. Hum Reprod. 27 (8), 2341-2351 (2012).
  7. Santulli, P., et al. Endometriosis-related infertility: Ovarian endometrioma per se is not associated with presentation for infertility. Hum Reprod. 31 (8), 1765-1775 (2016).
  8. Dai, Y., Li, X., Shi, J., Leng, J. A review of the risk factors, genetics and treatment of endometriosis in chinese women: A comparative update. Reprod Health. 15 (1), 82(2018).
  9. Younis, J. S. Endometriosis-associated ovarian cancer: What are the implications for women with intact endometrioma planning for a future pregnancy? A reproductive clinical outlook. Biomolecules. 12 (11), 1721(2022).
  10. Bonavina, G., Taylor, H. S. Endometriosis-associated infertility: From pathophysiology to tailored treatment. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1020827(2022).
  11. Filip, L., et al. Endometriosis associated infertility: A critical review and analysis on etiopathogenesis and therapeutic approaches. Medicina (Kaunas). 56 (9), 460(2020).
  12. Tanbo, T., Fedorcsak, P. Endometriosis-associated infertility: Aspects of pathophysiological mechanisms and treatment options. Acta Obstet Gynecol Scand. 96 (6), 659-667 (2017).
  13. Bulletti, C., Coccia, M. E., Battistoni, S., Borini, A. Endometriosis and infertility. J Assist Reprod Genet. 27 (8), 441-447 (2010).
  14. Ni, Z., et al. Iron-overloaded follicular fluid increases the risk of endometriosis-related infertility by triggering granulosa cell ferroptosis and oocyte dysmaturity. Cell Death Dis. 13 (7), 579(2022).
  15. Mohammed Rasheed, H. A., Hamid, P. Inflammation to infertility: Panoramic view on endometriosis. Cureus. 12 (11), e11516(2020).
  16. Jing, X., et al. Systemic inflammatory response markers associated with infertility and endometrioma or uterine leiomyoma in endometriosis. Ther Clin Risk Manag. 16, 403-412 (2020).
  17. Marcellin, L., et al. Serum antimullerian hormone concentration increases with ovarian endometrioma size. Fertil Steril. 111 (5), 944-952 (2019).
  18. Deng, Y., et al. Does current ovarian endometrioma increase the time for dor patients to reach live birth in ivf. BMC Pregnancy Childbirth. 22 (1), 324(2022).
  19. Dongye, H., Tian, Y., Qi, D., Du, Y., Yan, L. The impact of endometrioma on embryo quality in in vitro fertilization: A retrospective cohort study. J Clin Med. 12 (6), 2416(2023).
  20. He, Y., et al. Re-evaluation of mouse models of endometriosis for pathological and immunological research. Front Immunol. 13, 986202(2022).
  21. Kanellopoulos, D., et al. The interplay between endometriosis and fertility in rats: A systematic review. J Med Life. 15 (6), 742-746 (2022).
  22. Tejada, M. A., et al. Rodent animal models of endometriosis-associated pain: Unmet needs and resources available for improving translational research in endometriosis. Int J Mol Sci. 24 (3), 2422(2023).
  23. Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: Identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Curr Womens Health Rev. 14 (2), 173-188 (2018).
  24. Buigues, A., et al. Evaluation of pai-1 in endometriosis using a homologous immunocompetent mouse model. Biol Reprod. 99 (2), 326-335 (2018).
  25. Tirado-Gonzalez, I., et al. Endometriosis research: Animal models for the study of a complex disease. J Reprod Immunol. 86 (2), 141-147 (2010).
  26. Lagana, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: A long and windy road. Ann Transl Med. 6 (22), 431(2018).
  27. Mukherjee, P., Roy, S., Ghosh, D., Nandi, S. K. Role of animal models in biomedical research: A review. Lab Anim Res. 38 (1), 18(2022).
  28. Cuevas, M., et al. Stress exacerbates endometriosis manifestations and inflammatory parameters in an animal model. Reprod Sci. 19 (8), 851-862 (2012).
  29. Nunez-Badinez, P., et al. Preclinical models of endometriosis and interstitial cystitis/bladder pain syndrome: An innovative medicines initiative-paincare initiative to improve their value for translational research in pelvic pain. Pain. 162 (9), 2349-2365 (2021).
  30. Umezawa, M., et al. Expression profile of extracellular matrix and adhesion molecules in the development of endometriosis in a mouse model. Reprod Sci. 19 (12), 1365-1372 (2012).
  31. Grummer, R. Animal models in endometriosis research. Hum Reprod Update. 12 (5), 641-649 (2006).
  32. Tejada, M. A., et al. Identification of altered evoked and non-evoked responses in a heterologous mouse model of endometriosis-associated pain. Biomedicines. 10 (2), 501(2022).
  33. Bruner-Tran, K. L., Carvalho-Macedo, A. C., Duleba, A. J., Crispens, M. A., Osteen, K. G. Experimental endometriosis in immunocompromised mice after adoptive transfer of human leukocytes. Fertil Steril. 93 (8), 2519-2524 (2010).
  34. Malvezzi, H., Marengo, E. B., Podgaec, S., Piccinato, C. A. Endometriosis: Current challenges in modeling a multifactorial disease of unknown etiology. J Transl Med. 18 (1), 311(2020).
  35. Yan, D., Liu, X., Guo, S. -W. The establishment of a mouse model of deep endometriosis. Human Reproduction. 34 (2), 235-247 (2018).
  36. Santulli, P., et al. Protein oxidative stress markers in peritoneal fluids of women with deep infiltrating endometriosis are increased. Hum Reprod. 30 (1), 49-60 (2015).
  37. Adeniran, B. V., Bjarkadottir, B. D., Appeltant, R., Lane, S., Williams, S. A. Improved preservation of ovarian tissue morphology that is compatible with antigen detection using a fixative mixture of formalin and acetic acid. Hum Reprod. 36 (7), 1871-1890 (2021).
  38. Sima, R. M., et al. Novel diagnosis of mesenteric endometrioma: Case report. Medicine (Baltimore). 98 (29), e16432(2019).
  39. Eskenazi, B., Warner, M. L. Epidemiology of endometriosis). Obstet Gynecol Clin North Am. 24 (2), 235-258 (1997).
  40. Laufer, M. R., Goitein, L., Bush, M., Cramer, D. W., Emans, S. J. Prevalence of endometriosis in adolescent girls with chronic pelvic pain not responding to conventional therapy. J Pediatr Adolesc Gynecol. 10 (4), 199-202 (1997).
  41. Tan, Z., et al. What we have learned from animal models to understand the etiology and pathology of endometrioma-related infertility. Biomedicines. 10 (7), 1483(2022).
  42. Meyerholz, D. K., et al. Glycogen depletion can increase the specificity of mucin detection in airway tissues. BMC Research Notes. 11 (1), 763(2018).
  43. Fang, E., et al. Cpeb3 deficiency in mice affect ovarian follicle development and causes premature ovarian insufficiency. Cell Death Dis. 13 (1), 21(2021).
  44. Zhou, J., Peng, X., Mei, S. Autophagy in ovarian follicular development and atresia. Int J Biol Sci. 15 (4), 726-737 (2019).
  45. Kitajima, M., et al. Enhanced follicular recruitment and atresia in cortex derived from ovaries with endometriomas. Fertil Steril. 101 (4), 1031-1037 (2014).
  46. Hayashi, S., et al. Novel ovarian endometriosis model causes infertility via iron-mediated oxidative stress in mice. Redox Biol. 37, 101726(2020).
  47. Yildiz, S., et al. The pain symptoms and mass recurrence rates after ovarian cystectomy or uni/bilateral oophorectomy procedures in patients over 40 years old with endometriosis. Ginekol Pol. 91 (6), 295-300 (2020).
  48. Guney, G., et al. Neutrophil gelatinase-associated lipocalin serum level: A potential noninvasive biomarker of endometriosis. Medicine (Baltimore). 102 (41), e35539(2023).
  49. Kaya, C., et al. The role of serum caspase 3 levels in prediction of endometriosis severity. Gynecol Obstet Invest. 83 (6), 576-585 (2018).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

OMAOMA

מאמרים קשורים