מאמר שיטה

הפרדה מהירה והצגה של חומרים פיברינוגנוליטיים פעילים ב- Sipunculus nudus באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פיברינוגן-פוליאקרילאמיד

DOI:

10.3791/66536

⸱

19 באפריל 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Laboratory Medicine, Quanzhou First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, 2Medicine School, Huaqiao University, 3Department of Laboratory Medicine, Hospital of Huaqiao University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן, אנו מציגים פרוטוקול אלקטרופורזה של ג'ל פיברינוגן-פוליאקרילאמיד (PAGE) כדי להפריד במהירות ולהציג את הסוכנים הפיברינוגנוליטיים של Sipunculus nudus.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חומרים פיברינוגנוליטיים שיכולים להמיס פיברינוגן ישירות נמצאים בשימוש נרחב בטיפול נוגד קרישה. באופן כללי, זיהוי סוכנים פיברינוגנוליטיים חדשים דורש תחילה הפרדה של כל רכיב ולאחר מכן בדיקת הפעילות הפיברינוגנוליטית שלהם. נכון לעכשיו, אלקטרופורזה ג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE) וכרומטוגרפיה משמשים בעיקר בשלב ההפרדה. בינתיים, בדיקת צלחת פיברינוגן ומוצרי תגובה מבוססי PAGE מאומצים בדרך כלל כדי להציג את הפעילות הפיברינוגנוליטית שלהם. עם זאת, בגלל ההפרדה המרחבית-זמנית של שני שלבים אלה, אי אפשר להפריד ולהציג את הסוכנים הפיברינוגנוליטיים הפעילים עם אותו ג'ל. כדי לפשט את תהליכי ההפרדה וההצגה של זיהוי סוכנים פיברינוגנוליטיים, בנינו שיטת פיברינוגן-PAGE חדשה כדי להפריד במהירות ולהציג את הסוכנים הפיברינוגנוליטיים של תולעי בוטנים (Sipunculus nudus) במחקר זה. שיטה זו כוללת הכנת פיברינוגן-PAGE, אלקטרופורזה, רנטורה, דגירה, צביעה ודה-קולוריזציה. הפעילות הפיברינוגנוליטית והמשקל המולקולרי של החלבון יכולים להיות מזוהים בו זמנית. על פי שיטה זו, זיהינו בהצלחה יותר מסוכן פיברינוגנוליטי פעיל אחד של תולעת בוטנים בתוך 6 שעות. יתר על כן, שיטת פיברינוגן-PAGE זו היא ידידותית לזמן ועלות. יתר על כן, שיטה זו יכולה לשמש לחקר סוכנים פיברינוגנוליטיים של אורגניזמים אחרים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בשנים האחרונות, בשל העלייה המתמשכת של מחלות טרומבוטיות, מחלות טרומבוטיות הפכו לבעיה בריאותית עולמית גדולה חדשה1. כיום, תרופות antithrombotic מסווגים לשלוש קבוצות: תרופות צבירה טסיות, נוגדי קרישה, ותרופות thrombolytic. ביניהם, תרופות thrombolytic, כגון urokinase (בריטניה), רקמות plasminogen activator (tPA), וכו ', הם התרופות היחידות בשימוש קליני שיכול hydrolyze פקקת2. בינתיים, תרופות תרומבוליטיות בטוחות ויעילות יותר מפותחות על ידי זיהוי של סוכנים טרומבוליטיים חדשים3.

עם זאת, הזיהוי של חומרים טרומבוליטיים חדשים הוא גוזל זמן ודורש עבודה, הכוללת בעיקר את שלבי ההפרדה/טיהור ואפיון/בדיקה. הראשון הוא להפריד כל רכיב, והשני הוא להציג את הפעילות הפיברינו(גנו) הליטית שלהם 4,5. במחקרים קודמים, למרות העובדה שבודדנו בהצלחה אנזים פיברינו (גנו) ליטי (sFE) מתולעת בוטנים (Sipunculus nudus) על ידי כרומטוגרפיית זיקה ובדיקת צלחת פיברין (עוגן) 6,7,8, תהליכים אלה גוזלים זמן ועבודה. ראשית, יש לקבוע אם לתולעי בוטנים יש פעילות פיברינו (גנו) ליטי על ידי שיטת צלחת פיברין (עוגן) ותוצרי תגובה בהתבסס על עמוד9. לאחר מכן, סדרה של כרומטוגרפיה, כגון כרומטוגרפיית חילופי יונים, כרומטוגרפיית סינון ג'ל, כרומטוגרפיית זיקה ושיטות אחרות, צריכה להתבצע לצורך הפרדה וטיהור10,11. לאחר מכן, בדיקת צלחת פיברין מבוצעת שוב כדי לבדוק את הפעילות הפיברינוגנוליטית של כל רכיב מופרד. לבסוף, native-PAGE ונתרן דודציל סולפט (SDS)-PAGE מבוצעים כדי לקבוע את המשקל המולקולרי של סוכנים פיברינוגנוליטיים פעילים12. לכן, זה קריטי להפריד במהירות ולהציג את החומרים fibrinogenolytic פעיל.

כדי להפריד ולהציג במהירות את החומרים הפיברינוגנוליטיים הפעילים בהומוגנאטים של תולעי בוטנים, פותחה שיטת פיברינוגן-PAGE חדשה על ידי שילוב שיטות לוחות PAGE ופיברינוגן, כלומר, הסובסטרטים של חומרים פיברינוגנוליטיים פיברינוגן נוספו לג'ל הילידים-PAGE. לאחר native-PAGE, הרכיבים הופרדו על ידי משקלם המולקולרי. בינתיים, כל רכיב פיברינוגנוליטי פעיל יכול להיות מוצג על ידי צביעה. בשיטה זו, זיהינו בהצלחה יותר מסוכן פיברינוגנוליטי פעיל אחד של הומוגנט תולעי בוטנים בתוך 6 שעות. יתר על כן, שיטת פיברינוגן-PAGE זו היא ידידותית לזמן ועלות. יתר על כן, שיטה זו יכולה לשמש לחקר סוכנים פיברינוגנוליטיים של אורגניזמים אחרים.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנת תולעי בוטנים הומוגנט

  1. הוסף 50 גרם של תולעי בוטנים ו 150 מ"ל של תמיסת מלח לתוך homogenizer.
  2. הומוגניזציה ב 24000 סל"ד במשך 60 שניות.
    הערה: חזור על הפעולה 3 פעמים.
  3. צנטריפוגה הומוגנאט ב 9710 x גרם במשך 30 דקות ב 4 °C (75 °F).
  4. אספו את הסופרנאטנט כתולעת בוטנים הומוגנית למחקר נוסף.

2. הכנת ג'ל פיברינוגן-PAGE

  1. שוקלים 0.01 גרם פיברינוגן לתוך זכוכית 50 מ"ל.
  2. הוסף 1.9 מ"ל של DDH2O, 1.3 מ"ל של Tris-HCl (1.5 M, pH 8.8) ו- 0.05 מ"ל של SDS (10%, w/v) לתוך הכד; מערבבים היטב על ידי pipetting.
  3. מניחים את הכד על 37°C למשך 30 דקות.
    הערה: שלב זה הוא להמיס את הפיברינוגן.
  4. הוסף 1.7 מ"ל של אקרילאמיד (30%, w / v), 0.05 מ"ל של אמוניום פרסולפט (APS; 10%, w / v), 0.002 מ"ל של TEMED; מערבבים היטב על ידי pipetting.
    הערה: זהו ג'ל הפרדה.
  5. יוצקים את ג'ל ההפרדה לתוך תבנית ג'ל 10 בארות.
  6. הוסף 2 מ"ל של DDH2O לתוך תבנית ג'ל; המתן 30 דקות.
  7. מוציאים את המים ביסודיות על ידי הפיכת התבנית.
  8. הוסף 1.4 מ"ל של DDH2O, 0.25 מ"ל של Tris-HCl (1.0 M, pH 6.8), 0.02 מ"ל של SDS (10%, w / v), 0.33 מ"ל של אקרילאמיד (30%, w / v), 0.02 מ"ל של APS (10%, w / v), 0.002 מ"ל של tetramethylethylenediamine (TEMED) לתוך הכד; מערבבים היטב על ידי pipetting.
    הערה: זהו ג'ל טעינה.
  9. יוצקים את ג'ל ההעמסה לאותה תבנית ג'ל כמו שלב 2.5; הכנס את המסרק מיד.
    הערה: ג'ל הפיברינוגן-PAGE המשמש כאן הורכב מהפיברינוגן (0.2%) המכיל ג'ל הפרדה וג'ל העמסה. ניתן לכוונן את ריכוז הפיברינוגן לפי הצורך.

3. אלקטרופורזה

  1. מניחים את ג'ל הפיברינוגן-PAGE המוכן יחד עם תבנית הדבק למיכל האלקטרופורזה; לשפוך 1300 מ"ל של תמיסת אלקטרופורזה (1.963 גרם של טריס, 12.22 גרם של גליצין, 0.65 גרם של SDS, ו 1300 מ"ל של DDH2O) לתוך המיכל; מוציאים את המסרק.
  2. הוסף 5 μL של 5x מאגר העמסה non-denaturing ל 20 μL של sFE ו 20 μL של הומוגנט תולעי בוטנים; מערבבים היטב על ידי pipetting; טען אותם לתוך ג'ל פיברינוגן-PAGE מוכן.
    הערה: אין להרתיח את התערובת. sFE הוא אנזים פיברינו (גנו) ליטי שזוהה בעבר 6,7,8 ומשמש כבקרה חיובית במחקר זה. הומוגנאט תולעי בוטנים הוא הדגימה שיש לזהות. מאגר העמסה ללא דנטורציה ללא ברומופנול כחול, β-מרקפטואתנול ו-SDS בהשוואה למאגר הטעינה SDS-PAGE. כל נתיב דגימה מופרד באמצעות מאגר טעינה 1x SDS-PAGE כדי לזהות בבירור את תנועת החלבון.
  3. בצע אלקטרופורזה במתח של 80 וולט למשך 30 דקות, או 120 וולט למשך 20 דקות.
  4. מוציאים את ג'ל הפיברינוגן-PAGE מתבנית הדבק.

4. רנטורציה

  1. מעבירים את ג'ל הפיברינוגן-PAGE לקופסת פלסטיק.
  2. הוסף 100 מ"ל של Tris-HCl (0.05 M, pH 7.4) ו- 2 מ"ל של Triton X-100 לתוך הקופסה. הניחו אותו על שייקר במהירות 60-70 סל"ד למשך 10 דקות.
  3. הסירו את חיץ הכביסה על ידי פיפט.
    הערה: חזור על הפעולה שלוש פעמים.

5. אינקובציה

  1. הוסף 50 מ"ל של Tris-HCl (0.05 M, pH 7.4) לתוך קופסת הפלסטיק.
  2. לדגור ב 37 ° C במשך 4 שעות.
    הערה: ניתן לכוונן את זמן הדגירה בהתאם לעוצמת הפעילות הפיברינוגנוליטית.

6. צביעה

  1. הסר את מאגר הדגירה על ידי פיפטציה.
  2. מוסיפים 50 מ"ל של תמיסת צביעה כחולה מבריקה של קומאסי לקופסה ומניחים את הקופסה על שייקר במהירות 60-70 סל"ד למשך 30 דקות.

7. דה-קולוריזציה

  1. הסר את תמיסת הצביעה על ידי פיפט.
  2. הוסף 50 מ"ל של DDH2O לקופסה.
  3. מניחים את הקופסה על שייקר במהירות 60-70 סל"ד למשך 30 דקות.
    הערה: DD H2O שימש כפתרון העיכוב כאן. ניתן לכוונן את זמן הרעידה בהתאם לעוצמת הפעילות הפיברינוגנוליטית.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאחר אלקטרופורזה, כל הפסים של הסמן הוצגו בבירור. נתיבי הטעינה 1x SDS-PAGE הראו רק 10 רצועות kDa (ברומופנול כחול). דגימות sFE ותולעי בוטנים לא הראו פסים נצפים (איור 1). למרות שהרצועות של הדגימות אינן נראות לעין, הביצועים של הסמן והברומופנול הכחול הצביעו על כך שהאלקטרופורזה הצליחה, והדגימות הופרדו על פי משקלן המולקולרי.

למרות שכל הג'ל הפך כחול בגלל הכתם, שינוי הצבע הפך את האזור שבו פיברינוגן היה מפורק על ידי סוכנים פיברינוגנוליטיים שקוף. בהשוואה לסמן, sFE הצביע על פס פיברינוגנוליטי פעיל ליד 25 kDa. תולעי הבוטנים הציגו הומוגנט של 25 kDa, 33 kDa, 43 kDa, וסדרה של רצועות גדולות מ-70 kDa (איור 2). התוצאות הצביעו על כך ש-sFE הכיל רק מרכיב פיברינוגנוליטי של 25 kDa , אך תולעת הבוטנים הומוגנט הכילה רכיבי sFE וחומרים פיברינוגנוליטיים אחרים. איור משלים 1 הוא דוגמה לתמונת ג'ל שמראה את הסמן בכחול עמוק ואת דגימות המטרה כפסים בהירים.

figure-results-1
איור 1: ג'ל אחרי אלקטרופורזה. M: מרקר; נתיב 1: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 2: sFE; נתיב 3: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 4: תולעת בוטנים הומוגנית; נתיב 5: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: ג'ל לאחר הסרת צבע. M: מרקר; נתיב 1: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 2: sFE; נתיב 3: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 4: תולעת בוטנים הומוגנית; נתיב 5: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

איור משלים 1: תמונת ג'ל המציגה את הסמן בכחול עמוק ואת דגימות המטרה כפסים בהירים. M: מרקר; נתיב 1: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 2: sFE; נתיב 3: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד; נתיב 4: תולעת בוטנים הומוגנית; נתיב 5: מאגר טעינת SDS-PAGE אחד. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

sFE הוא אנזים פיברינו (גנו) ליטי חדשני שבודד מתולעי בוטנים על ידי הצוות שלנו בעבר 3,6,8,13. עם זאת, תהליכי הזיהוי של sFE היו גוזלים זמן ועבודה, וכללו זיהוי פעילות פיברינוגנוליטית, הפרדת רכיבי חלבונים ושלבי אישור פעילות. כשיטה פשוטה, בדיקת צלחת פיברינוגן משמשת בעיקר בשלב הסינון הראשוני כדי לבדוק את הפעילות הפיברינוגנוליטית של הדגימות. עם זאת, שיטת בדיקת צלחת פיברינוגן אינה יכולה להפריד איזה רכיב פעיל. לכן, יש להשתמש בכרומטוגרפיה וב- native/SDS-PAGE כדי להפריד את רכיביהם לאחר זיהוי הפעילות. לאחר מכן, תוצרי התגובה נפתרים שוב על ידי SDS-PAGE כדי לאשר את השפלת פיברינוגן המצע. בעבודה זו, פיברינוגן המצע נוסף לג'ל PAGE כדי לזהות את הסוכן fibrinogenolytic. לאחר אלקטרופורזה, רנטורה, דגירה, צביעה ודה-קולוריזציה, המשקל המולקולרי והפעילות הפיברינוגנוליטית של הסוכנים הפיברינוגנוליטיים הפעילים הוצגו בבירור עם אותו ג'ל. בשיטה זו, זיהינו בהצלחה יותר מסוכן פיברינוגנוליטי פעיל אחד מהומוגנט תולעי בוטנים תוך 6 שעות.

כדי להשיג את התוצאות האופטימליות, יש להקדיש תשומת לב רבה יותר להכנת ג'ל פיברינוגן-PAGE, רנטורה ודגירה. באופן כללי, ככל שריכוז הפיברינוגן נמוך יותר, כך האזור הפיברינוגנוליטי חסר צבע יותר, המצביע על פעילות פיברינוגנוליטית של הסוכנים. עם זאת, ככל שריכוז הפיברינוגן נמוך יותר, כך הרקע חסר צבע יותר, וקשה יותר להבחין בין האזור הפיברינוגנוליטי לבין הרקע. זמן הרנטורציה ישפיע על הפעילות הפיברינוגנוליטית של רכיבים באופן משמעותי. אם זמן זה קצר מדי כדי לשטוף את SDS בג'ל PAGE, הפעילות הפיברינוגנוליטית של רכיבים תעוכב על ידי SDS remanent. באופן דומה, אם זמן הדגירה קצר מדי, התגובה הפיברינוגנוליטית אינה יסודית. בעוד זמן הדגירה ארוך מדי, הסמן המשמש לציון המשקל המולקולרי יישטף. במחקר זה, למרות שתנאים אלה עברו אופטימיזציה, תנאים אלה נקבעו להפריד ולהציג את החומרים הפיברינוגנוליטיים מתולעי בוטנים. לכן, תנאים מותאמים אישית של צעדים קריטיים אלה צריכים להיות מוגדרים על פי סוכנים פיברינוגנוליטיים ספציפיים.

חשוב לציין כי פיברינוגן-PAGE זה מתאים רק לבדיקת חומרים פיברינוגנוליטיים בעלי פעילות ליטית פיברינוגן, אך לא לסוכנים בעלי פעילות ליטית פיברינוגן או פעילות הפעלת פלסמינוגן. אם אנחנו רוצים להציג את הפעילויות האלה, השיטה יכולה להיות אופטימלית על ידי החלפת פיברינוגן עם פיברין או פלסמינוגן. נקודה נוספת שראוי לציין היא שהסוכנים הפיברינוגנוליטיים הפעילים שנבדקו במחקר זה היו מונומרים, שלא הושפעו במצב אלקטרופורזה SDS. לכן, אם החומרים שנבדקו הם פולימרים, שיטה זו צריכה להיות מותאמת למצב native-PAGE שאינו יכול להציג את המשקל המולקולרי. לכן, שיטת פיברינוגן-PAGE שהוצגה כאן הייתה רק גרסה בסיסית כללית, אשר ניתן לייעל כדי לסנן את הסוכנים פיברינוגנוליטיים אחרים במהירות.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מומן על ידי לשכת המדע והטכנולוגיה של העיר שיאמן (מס '3502Z20227197), לשכת המדע והטכנולוגיה של מחוז פוג'יאן (מס '2019J01070; No. 2022J01311), ופרויקט חדשנות ויזמות של כישרונות ברמה גבוהה של תוכנית המדע והטכנולוגיה של Quanzhou (מס '2022C015R). אנו מודים לפוקאי וואנג (אוניברסיטת Huaqiao) ולליי טונג (אוניברסיטת Huaqiao) על עזרתם הטכנית.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1  M Tris-HCl (pH 6.8)SolarbioT1020
1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)SolarbioT1010
30% אקרילאמיד/ביס-אקרילאמידBiosharpBL513B
אמוניום פרסולפטXiLONG SCIENTIFIC7727-54-0
PYREX2-9425-02
צינור צנטריפוגה (1.5 מ"ל)BiosharpBS-15-M
חממה בטמפרטורה קבועהJINGHONGJHS-400
Coomas Brillant תמיסת מכתים כחולהBeyotimeP0017F
איזון אנליטי אלקטרוניDENVERTP-213
פיברינוגןSolarbioF8051
קצות פיפטה לטעינת ג'ל, בתפזורתBiosharpBS-200-GTB
הומוגנייזרAHSATS-1500
מתנד סיבוב אופקיNuoMiNMSP-600
Milli-Q התייחסותMilliporeZ00QSV0CN
Mini-PROTEAN Tetra CellBIO-RAD165-8000~165-8007
N,N,N',N'-TetramethylethylenediamineSigmaT9281
קצה פיפטה (1 מ"ל)T-1000XT-C
(10 ומיקרו; L)AxygeneT-10XT-C
קצה פיפטה (200 ומיקרו; L)AxygeneT-200XT-C
פיפטור (1 מ"ל)Thermo Fisher ScientificZY18723
Pipettor (10µ L)Thermo Fisher ScientificZX98775
Pipettor (200 ומיקרו; L)Thermo Fisher ScientificZY20280
פיפטור (50 ומיקרו; L)Thermo Fisher ScientificZY15331
צנטריפוגה מקוררתH1650R
נתרן דודציל סולפטסיגמא-אולדריץ'V900859
TrisSolarbioT8060
Tris-HClSolarbioT8230
Triton X-100SolarbioT8200
קצה פיפטה Axygene

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bikdeli, B., et al. COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up. J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).
  2. Tsivgoulis, G., et al. Thrombolysis for acute ischaemic stroke: current status and future perspectives. Lancet Neurol. 22 (5), 418-429 (2023).
  3. Tang, M., Hu, C., Lin, H., Yan, H. Fibrinolytic drugs induced hemorrhage: mechanisms and solutions. Blood Coagul Fibrinolysis. 34 (5), 263-271 (2023).
  4. Lu, M., et al. Purification, characterization, and chemical modification of Bacillus velezensis SN-14 fibrinolytic enzyme. Int J Biol Macromol. 177, 601-609 (2021).
  5. Abu-Tahon, M. A., Abdel-Majeed, A. M., Ghareib, M., Housseiny, M. M., Abdallah, W. E. Thrombolytic and anticoagulant efficiencies of purified fibrinolytic enzyme produced from Cochliobolus hawaiiensis under solid-state fermentation. Biotechnol Appl Biochem. 70 (6), 1954-1971 (2023).
  6. Lin, W., Lin, H., Xin, P., Yan, H., Kang, B., Tang, M. A Comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots. J Vis Exp. (197), e65791(2023).
  7. Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus. J Vis Exp. (196), e65631(2023).
  8. Tang, M., Lin, H., Huang, Y., Xu, R., Cui, X., Yan, H. Plasmin affinity purification method based on agarose gel and plasmin and application thereof. , Available from: https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470 (2023).
  9. Walton, P. L. An improved fibrin plate method for the assay of plasminogen activators. Clinica Chimica Acta. 13 (5), 680-684 (1966).
  10. Ngere, J. B., Ebrahimi, K. H., Williams, R., Pires, E., Walsby-Tickle, J., McCullagh, J. S. O. Ion-exchange chromatography coupled to mass spectrometry in life science, environmental, and medical research. Anal Chem. 95 (1), 152-166 (2023).
  11. Kato, S., Takeuchi, K., Iwaki, M., Miyazaki, K., Honda, K., Hayashi, T. Chitin- and streptavidin-mediated affinity purification systems: A screening platform for enzyme discovery. Angew Chem Int Ed Engl. 62 (31), e202303764(2023).
  12. Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution. International Dairy Journal. 114, 104920(2021).
  13. Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , Available from: https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en (2019).

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Fibrinogen PAGE

מאמרים קשורים