מאמר שיטה

טכניקה שונה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים

2.2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66637

⸱

5 ביולי 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Obstetrics and Gynecology Hospital, Institute of Reproduction and Development, Fudan University, 2Women's Hospital, Key Laboratory of Reproductive Genetics (Ministry of Education), Zhejiang University School of Medicine, 3International Institutes of Medicine, the Fourth Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, 4Research Units of Embryo Original Diseases, Chinese Academy of Medical Sciences (No. 2019RU056), 5State Key Laboratory of Cardiology

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מציג טכניקה לגרימת מודלים של תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS) בעכברים באמצעות שחרור לטרוזול מבוקר באמצעות משאבות זעירות. תחת הרדמה מספקת, המשאבה הקטנה הושתלה תת עורית, ו- PCOS הושרה בהצלחה בעכברים לאחר תקופה מסוימת של שחרור המשאבה.

תקציר

תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS) היא אחד הגורמים המובילים לאי פוריות אצל נשים. מודלים של בעלי חיים נמצאים בשימוש נרחב כדי ללמוד את המנגנונים האטיולוגיים של PCOS ופיתוח תרופות הקשורות. מודלים עכבריים המושרים על ידי Letrozole משכפלים את הפנוטיפים המטבוליים והרבייה של חולים עם PCOS. השיטה המסורתית של טיפול letrozole בעכברים PCOS דורש מינון יומי על פני תקופה מסוימת, אשר יכול להיות אינטנסיבי עבודה ולגרום מתח משמעותי לעכברים. מחקר זה מתאר שיטה פשוטה ויעילה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים על ידי השתלת מיני-משאבה מבוקרת המשחררת לטרוזול. משאבה זעירה המסוגלת לשחרר באופן יציב ורציף כמות כמותית של לטרוזול יוצרה והושתלה תת עורית בעכברים תחת הרדמה. מחקר זה הראה כי מודל העכבר חיקה בהצלחה תכונות PCOS לאחר השתלת משאבת מיני letrozole. החומרים והציוד המשמשים במחקר זה זמינים בקלות לרוב המעבדות, ואינם דורשים התאמה אישית מיוחדת. באופן קולקטיבי, מאמר זה מספק שיטה ייחודית וקלה לביצוע לגרימת PCOS בעכברים.

מבוא

תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS) היא אחת המחלות השכיחות ביותר בקרב נשים בגילהפריון 1. זה משפיע על עד 18% מהנשים ברחבי העולם והוא הגורם המוביל לאי פוריות האישה ברחבי העולם 2,3. תסמונת השחלות הפוליציסטיות מאופיינת בסדרה של הפרעות במערכת הרבייה, כולל הפרשת גונדוטרופין מופרעת, אנובולציה כרונית, ייצור אנדרוגן מוגבר ומורפולוגיה של השחלות הפוליציסטיות4. בנוסף להפרעות גינקולוגיות, PCOS גם מגביר את הסיכון למחלות לב וכלי דם 5,6. למרות עשרות שנים של מחקר, האטיולוגיה של PCOS נותרה לא ברורה 7,8.

כדי לקבל תובנות טובות יותר על הפתוגנזה של PCOS ולפתח טיפולים חדשניים, יצירת מודלים של בעלי חיים המחקים באופן הדוק את הפיזיולוגיה האנושית היא בעלת חשיבות עצומה9. מודלים מכרסמים המדווחים כיום של PCOS כוללים אלה המושרים על ידי טיפולים עם טסטוסטרון, letrozole, ו estradiol valerate, בין היתר. טסטוסטרון גורם hyperandrogenemia והוא נפוץ יותר כמו PCOS משרה בחולדות10. DHEA שימש להשראת תסמונת השחלות הפוליציסטיות במכרסמים, להעלאת רמות הטסטוסטרון, ליחס LH/FSH (הורמון מחלוטיניזציה/הורמון מגרה זקיקים) ולגרימת מחזורי ייחום לא סדירים11. אסטרדיול ואלרט (EV) הוא אסטרוגן ארוך טווח, ומחקרים המשתמשים בשיטה זו מראים כי רמות הורמוני סטרואידים וגונדוטרופינים משתנות בהתאם למינון של EV המנוהל 12,13,14. Letrozole הוא מעכב ארומטאז nonsteroidal15. טיפול בלטרוזול משרה ייחום לא מחזורי, מעלה את משקל השחלות, משקל הגוף, מגדיל אדיפוציטים, ממקסם את התפתחות הזקיקים ומעלה את רמות הטסטוסטרון בחולדות16,17. עכברים שטופלו בלטרוזול מציגים מספר מוגבר של זקיקי סינוסים וציסטות דימומות, כמו גם ריכוזים גבוהים של LH, FSH, אסטרדיול ופרוגסטרון18,19.

נכון לעכשיו, השיטות העיקריות עבור מודלים PCOS המושרה letrozole כוללים מתן דרך הפה הזרקה תת עורית, שניהם דורשים מינון יומי חוזר 20,21,22. שיטות אלה גוזלות זמן רב ודורשות עבודה, וסביר להניח שמתן חוזר ונשנה גורם ללחץ משמעותי לבעלי החיים23 . למרות כמה מחקרים להשתמש כדורי letrozole24,25, מוצרים אלה צריכים להיות מותאמים אישית והם יקרים. דוח זה מתאר טכניקה לגרימת PCOS בעכברים באמצעות משאבות זעירות. שיטה זו פשוטה, חוסכת זמן ומשתמשת בכלים ובציוד כירורגי הזמינים ברוב המעבדות.

פרוטוקול

כל הפרוטוקולים לניסויים בבעלי חיים במחקר זה אושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת פודאן. נקבות עכברי C57BL/6J, בנות 4 שבועות, שימשו כאן. פרטי בעלי החיים, הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנת משאבת המיני

  1. קח את אבקת letrozole (50 מ"ג) מאוחסן בבקבוק האריזה המקורי, צנטריפואת אבקת letrozole בבקבוק ב 300 x גרם במשך 5 s (בטמפרטורת החדר), ולאחר מכן לפתוח את הפקק.
  2. להוסיף לאט 625 μL של DMSO אבקת letrozole עם פיפטה ולערבב היטב כדי לקבל פתרון מלאי בריכוז של 8 מ"ג / 100 μL, בסך הכל 625 μL.
    הערה: אם אתה משתמש בגודל אריזה שונה של אבקת letrozole, חשב מראש את הנפח הנדרש של DMSO כדי להגדיר את פתרון המלאי. אבקת letrozole, DMSO, ותרכובות קשורות אחרות חייב להיות ברמה סטרילית. קצות הפיפטה, הצינורות ופריטים קשורים אחרים צריכים להיות סטריליים או מעוקרים לפני השימוש.
  3. ספור את מספר העכברים הדרושים בהתאם לתכנון הניסוי.
  4. צייר את הכמות הכוללת של תמיסת מלאי letrozole הנדרשת עם פיפטה, בהתאם למספר העכברים הנדרש, והזריק אותו לתוך צינור הצנטריפוגה לאט.
    הערה: עכברים בני 4 שבועות לחשיפה של 8 שבועות נבחרו כדי לגרום למודל עכברי PCOS. המינון הכולל של letrozole הוא 8 מ"ג עבור כל עכבר, אשר דורש שתי משאבות רצופות להשתיל (משאבה אחת משתחררת במשך 4 שבועות), כלומר, 4 מ"ג / 4 שבועות לכל משאבה. כפי שהוזכר בשלב 1.2, הריכוז של תמיסת מלאי letrozole הוא 8 מ"ג / 100 μL. כדי להכין את המשאבות, 50 מיקרוליטר של תמיסת מלאי נדרשת עבור כל משאבה כפי שמחושב להלן: סך של 4 מ"ג letrozole חלקי 8 מ"ג / 100 μL.
  5. ציירו כמות שווה של PEG300, הוסיפו אותו לתמיסת הלטרוזול, וערבבו היטב (ניתן לערבל אותו כראוי).
  6. הכן את פתרון רכב הבקרה עבור קבוצת הבקרה (50 μL של DMSO + 50 μL של PEG300 עבור כל משאבה ללא letrozole).
  7. להכין מספר נאות של צינורות צנטריפוגות סטריליות בהתאם למספר המשאבות הנדרשות; צינור צנטריפוגה אחד של 15 מ"ל צריך להיות מוכן לכל משאבה.
  8. צייר מלוחים עם מזרק ולהוסיף 5 מ"ל של מלוחים לכל צינור צנטריפוגה. לאחר מכן, סגרו את צינורות הצנטריפוגות והניחו אותם על מדף צינורות לשימוש נוסף.
  9. לבשו זוג חדש של כפפות סטריליות, הוציאו את המשאבות הקטנות בכמות הרצויה והניחו אותן על משטח או מיכל נקי וסטרילי.
  10. צבטו בעדינות את המכסה המתאים לגוף המשאבה עם האגודל והאצבע, והחזיקו את גוף המשאבה ביד השנייה.
  11. חיטטו באיטיות בפתח המילוי של המשאבה מספר פעמים עם הצינור הדק המחובר למכסה (איור 1B).
    הערה: אם לא סתום, ייתכן שהנוזל לא יזרום בחופשיות בצינור לאחר המילוי.
  12. קח את המחט המתאימה למשאבה מזרק סטרילי 1 מ"ל. חברו את המחט למזרק והפכו אותו להדוק (איור 1C).
  13. ציירו בזהירות ובאיטיות את הפתרון הסופי של letrozole שהוגדר לעיל עם המזרק החדש שהורכב (איור 1D).
    הערה: השאיפה של פתרון letrozole צריך להיעשות לאט ובאופן שווה. שאיפה מהירה עלולה ליצור בועות אוויר, אשר עשויות להשפיע על הזרקת תמיסת התרופה לאחר מכן.
  14. הזריקו את תמיסת הלטרוזול לתוך המיני-משאבה.
    1. צבטו בזהירות משאבה קטנה ביד אחת כך שתעמוד זקופה, וביד השנייה החזיקו את מזרק 1 מ"ל שהוזכר לעיל והכניסו אותו באיטיות לתחתית המשאבה (איור 1E).
      הערה: אם המחט אינה מוחדרת לתחתית המשאבה, הנוזל במשאבה יכול בקלות לבעבע במהלך ההזרקה, מה שישפיע על שחרור התרופה לאחר מכן על ידי המשאבה.
    2. לאחר מכן להזריק לאט את הפתרון המוגדר; ניתן להבחין בהזרקה כאשר פתיחת המשאבה מבעבעת מעט.
    3. יש להזריק לאט יותר כאשר נפח ההזרקה מתקרב ל-90 מיקרוליטר. לאחר שהמשאבה מלאה במלואה (כ-100 מיקרוליטר), משכו את המזרק.
    4. בזהירות להכניס את המכסה לתוך גוף המשאבה ולעשות אותו הדוק; בשלב זה, כמות קטנה של פתרון תישפך החוצה. נגבו אותו בזהירות.
  15. קחו את המשאבה עמוסה בתרופה, כשהשקע פונה כלפי מעלה (הקצה עם הפקק), קחו את צינור הצנטריפוגה שהוכן קודם לכן, וטבלו את המשאבה במלח סטרילי (איור 1F). לאחר מכן, סגרו את צינור הצנטריפוגה והניחו אותו על מדף הצינורות.
    הערה: יש להקפיד להימנע מזיהום המשאבה לאורך כל התהליך.
  16. לאחר כל משאבות מיני נעשים, מניחים את כל צינורות הצנטריפוגה בתרמוסטט 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות.

2. הכנה לפעולה והרדמה

  1. הכינו ועיקרו את כל המכשירים הנדרשים ביום הניתוח, כולל מלקחיים, המוסטטים, מספריים כירורגיים, מחזיקי מחטים ותפרים כירורגיים נספגים 4-0.
  2. לפני השימוש במכשיר ההרדמה איזופלורן (איור 2B), בדקו היטב אם חיבור הצינור תקין וודאו שהצינור שלם ואינו דולף.
  3. פתחו את פקק האיטום של המילוי במאייד של מכונת ההרדמה, ולאחר מכן הוסיפו לאט את חומר ההרדמה.
  4. שמור על רמת ההרדמה בין הגבול העליון לגבול התחתון המסומן על מכונת ההרדמה.
  5. המר את מתג השסתום התלת-כיווני כדי להבטיח שזרימת האוויר מהמאייד של מכונת ההרדמה מחוברת לקופסת השראת ההרדמה.
  6. פתחו את משאבת האוויר ואת המאייד, ולאחר מכן התאימו את ריכוז האיזופלורן להשראת הרדמה (בדרך כלל 3%-4%).
  7. המתן כדקה עד שההרדמה תמלא את קופסת הזירוז, ואז הכנס את העכבר לקופסת האינדוקציה והמתן עד להרדמה מלאה (תהליך זה לוקח בערך 2-3 דקות).
  8. בדקו שהעכברים מורדמים כראוי על ידי הטייה עדינה של הקופסה. אם העכברים מתהפכים ואינם מראים סימני חזרה למצב שכיבה, מתבצעת הרדמה.

3. השתלת משאבת מיני letrozole

  1. שימו מסכה כירורגית וכפפות סטריליות.
  2. הסר את העכברים שהורדמו מראש מקופסת האינדוקציה ומרח את קרם ההידור על גב העכברים, ולאחר מכן המתן דקה אחת. נגבו בעדינות את קרם ההידור והשיער עם גזה רטובה.
  3. במקביל, החליפו את מתג השסתום התלת-כיווני כדי לוודא שזרימת האוויר מהמאייד של מכונת ההרדמה מחוברת למסיכת ההרדמה והתאימו את ריכוז התחזוקה (בדרך כלל 2%).
  4. לאחר הסרת השיער, החזיקו את העכבר ביד הדומיננטית והכניסו את ראשו/אפו לתוך מסכת ההרדמה.
  5. בדוק את עומק ההרדמה על ידי בדיקת רפלקס הגמילה מהדוושה.
    הערה: כל ההליכים הכרוכים בהרדמה חייבים להתבצע באמצעות מסנני גז המצוידים בטבליות פחם פעיל, וההליך צריך להתבצע במכסה אדים.
  6. אבטח את העכבר במצב נוטה על לוח הניתוח ומרח חומר סיכה לעיניים על שתי העיניים.
  7. מרחו מקלוני פובידון-יוד שלוש פעמים על העור החשוף (איור 2C). לאחר מכן, להזריק meloxicam תת עורית במינון של 2 מ"ג / ק"ג.
  8. אשר שוב את עומק ההרדמה באמצעות צביטת בוהן. לאחר מכן, בקו האמצע של החלק האחורי של הצוואר, העדיפו את העור בצד חסר השיער, הרימו את העור עם מלקחיים ובצעו חתך של כ-0.5 ס"מ לרוחב בעזרת אזמל או מספריים כירורגיים (איור 2D).
  9. לאחר מכן פתחו את האפידרמיס שמתחת לחתך וגשו אליו עם המוסטאט או מחזיק מחט כדי לשחרר את העור, ופנו מקום למיני-משאבה (במרחק של כ-2 ס"מ מהחתך) (איור 2E).
  10. הוציאו את המשאבה מהמלח בצינור הצנטריפוגה בעזרת מלקחיים סטריליים, כשהקצה הפתוח של המשאבה פונה כלפי מטה, והיו מוכנים להחדיר את המשאבה באופן תת-עורי לעכברים (איור 2F).
  11. הדקו צד אחד של חתך העור במלקחיים ודחפו את המשאבה לחלל התת עורי. לא אמורה להיות התנגדות בעת הכניסה למשאבה. ברגע שאתם בפנים, השתמשו באצבעות כדי ללחוץ מעט ובעדינות את המשאבה פנימה ככל האפשר (איור 1G).
  12. תפרו את מקום החתך בזהירות באמצעות 4-0 תפרים כירורגיים (איור 2H).
    הערה: יש להקפיד שלא לפגוע בגוף המשאבה התת עורית בעת התפירה.
  13. לאחר התפירה, לחטא את העור באתר הניתוח פעמיים עם מקלוני יודופור.

4. התאוששות בעלי חיים

  1. לאחר הניתוח, העבירו בעדינות את העכברים מהמזרן המשמש במהלך ההרדמה למזרן יבש ונקי. ודאו שהעכברים נמצאים בסביבה חמה ושקטה.
  2. עקוב מקרוב אחר תנאי העכברים, כגון עומק ותדירות נשימותיהם.
  3. שימו לב להתנהגות העכברים כאשר הניידות שלהם מתחילה לחזור. לבסוף, ודא שהם יכולים לעמוד וללכת ללא התנהגויות חריגות ברורות כגון סחרחורת או תנועות לא מתואמות.
  4. לאחר שהעכברים התאוששו, העבירו אותם בעדינות לכלובים מוכנים מראש. הניחו ג'לי סטרילי ומזון בתחתית הכלוב כדי שהעכברים יוכלו להיזון ממנו.
    הערה: מתיחה של אתר הניתוח עשויה למנוע מהעכברים לשתות ולאכול בקלות בתקופה המוקדמת שלאחר הניתוח, לכן יש להניח ג'לי ומזון בתחתית הכלוב.
  5. יש להזריק מלוקסיקם תת עורית במינון של 2 מ"ג/ק"ג (כל 24 שעות במשך 3 הימים הראשונים לאחר הניתוח). לאחר 8 שבועות של טיפול בלטרוזול (כלומר, שתי השתלות מיני-משאבה רצופות), בדקו את דגמי העכברים.

תוצאות

פרוטוקול הניסוי וכמה שלבים קריטיים מוצגים באיור 1 ובאיור 2. רמות טסטוסטרון בסרום מוצגות באיור 3A. עכברי Letrozole שטופלו במיני משאבה (להלן עכברי LTZ) הפגינו רמות טסטוסטרון גבוהות משמעותית בסרום בהשוואה לעכברי ביקורת נקבות. בינתיים, ניתוח היסטולוגי של השחלות הראה כי עכברות LTZ הראו שחלות פוליציסטיות עם ירידה משמעותית במספר הקורפורה לוטאה (איור 3B,C), מה שמצביע על חדשנות. יתר על כן, עכברי LTZ הפגינו אציקליות ייחום משמעותית בהשוואה לנקבות עכברי ביקורת (איור 3D). הערכת משקל הגוף גילתה שעכברי LTZ היו כבדים יותר מעכברי ביקורת (איור 3E). תוצאות בדיקות סבילות לגלוקוז וחישובי AUC הראו שעכברי LTZ פיתחו אי-סבילות לגלוקוז בהשוואה לעכברי ביקורת (איור 3F,G). בדיקת שומנים בסרום הצביעה על כך שעכברי LTZ הציגו שינוי בפרופיל השומנים בסרום בהשוואה לעכברי ביקורת (איור 3H).

figure-results-1
איור 1: חומרים ושלבים קריטיים להכנת המשאבה. (A) איור סכמטי המראה את הכנת משאבות המיני letrozole. (B) המיני-משאבה נפתחה על ידי צינור דק המחובר לפקק. (ג) מחט התואמת את המשאבה חוברה לקצה המחט של מזרק בנפח 1 מ"ל. (D) תמיסת Letrozole נשאפה לאט בלי לבעבע. (E) תמיסת Letrozole הוזרקה באיטיות מתחתית המשאבה. (F) המשאבות שמולאו כוסו ואוחסנו במי מלח כשקצה הפקק מכוון כלפי מעלה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: חומרים ושלבים קריטיים של השתלת משאבות בעכברים לצורך השראת PCOS. (A) איור סכמטי המראה השתלה של משאבות זעירות letrozole. (ב) ציוד הרדמה: משאבת אוויר, מכונת הרדמה, קופסת אינדוקציה ומסנני גז. (C) עכברים מורדמים תוקנו ועוקרו. (D) חתך של 0.5 ס"מ ליד קו האמצע הגבי. (E) העור התפנה כדי לפנות מקום להחדרת משאבה זעירה. (ו) מיני-משאבה נחתכה מהמלח בעזרת מלקחיים נקיים וסטריליים. (G) המיני-משאבה הושתלה מתחת לעור ששוחרר קודם לכן. (H) העור נסגר ב-4-0 תפרים. (I) העכבר המושתל הורשה להתאושש. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: אפיון פנוטיפים רבייתיים ומטבוליים במודלים של עכברים מושתלי משאבת זעיר letrozole. (A) רמות טסטוסטרון בפלזמה בעכברים שטופלו ב-LTZ היו גבוהות משמעותית מאלה שבעכברי הביקורת (n = 9 חיות לקבוצה). (B) ניתוח היסטולוגי של השחלות. החץ מציין corpora lutea. סרגל קנה מידה: 1 מ"מ. (C) מספר corpora lutea בקבוצות שצוינו (n = 9 בעלי חיים לקבוצה). (D) עכברי LTZ הראו אציקליות בהשוואה לעכברות ביקורת. (E) משקל הגוף בקבוצות שצוינו (n = 10 בעלי חיים לקבוצה). (ו,ז) תוצאות בדיקת סבילות לגלוקוז בקבוצות שצוינו (n = 8 בעלי חיים לקבוצה). (H) רמות שומנים בסרום בקבוצות שצוינו (n = 8 בעלי חיים לקבוצה). הנתונים מבוטאים כממוצע ± SEM. AUC מציין שטח מתחת לעקומה; E, שלב הייחום; LDL-C, כולסטרול ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה; HDL-C, כולסטרול ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה; P, שלב proestrus; M/D, שלב מטסטרוס / דיסטרוס; TC, כולסטרול כולל; ו-TG, טריגליצרידים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

דיון

דו"ח זה מדגים פרוטוקול פשוט לגרימת PCOS בעכברים באמצעות חומרים נגישים בקלות. מודל PCOS עכבר חיוני לחקר מנגנוני PCOS ותרופות סינון26. מבין השיטות הזמינות להשראת מודלים PCOS בעכברים, השראת letrozole היא אחת הנפוצות ביותר. השימוש letrozole יכול לפתח ולתחזק מצב hyperandrogenic על ידי עיכוב ההמרה של טסטוסטרון לאסטרדיול או על ידי הגדלת סינתזת טסטוסטרון27. מודל העכבר המושרה letrozole מראה דמיון מטבולי רבייה לחולים עם PCOS28. עם זאת, טכניקות קונבנציונליות של טיפול letrozole במודל PCOS עכבר דורשים הזנה אוראלית יומית או הזרקה של תרופה letrozole לעכברים במשך 21 ימים או יותר29,30. הקצאת תרופות מתמשכת לטווח ארוך עם מינון מתוזמן של הזנה או הזרקה גוזלת זמן רב ודורשת עבודה, ומתן חוזר ונשנה של תרופות יכול להיות מלחיץ לשמצה עבור עכברים, הצגת גורמים לא ניסיוניים המשפיעים על תוצאות המודל23,31. למרות שחלק ממחקרי ה- PCOS של חולדות ועכבר משתמשים בכדורי letrozole מושתלים28,32, המוצרים המשמשים צריכים להיות מותאמים אישית וייתכן שלא יהיו זמינים בזמן. המחקר הנוכחי מציע טכניקה של השתלת משאבות זעירות letrozole כדי לגרום PCOS בעכברים. השיטה פשוטה, חוסכת זמן ומשתמשת בכלים ובציוד כירורגי הזמינים ברוב המעבדות.

שלבים קריטיים ופתרון בעיות
חשוב לציין כמה צעדים מרכזיים כדי להשיג תוצאות אופטימליות בעת תרגול שיטה זו. ראשית, פתחו את סתימת המשאבה באמצעות הצינור הדק המחובר למכסה התואם לפני השימוש. ניסיון קודם מצביע על כך שמשאבה סתומה עלולה לשבש את הטעינה והשחרור של תרופות. בנוסף, כל שלב בהגדרת הפתרון letrozole חייב להתבצע בזהירות כדי להבטיח את הפתרון הסופי הוא בדיוק בריכוז הרצוי. לאורך כל תהליך הרכבת המשאבה, יש לשים לב למניעת זיהום. יתר על כן, נדרשות התאמות זהירות לפני ההרדמה ובמהלכה כדי להבטיח הרדמה נאותה לעכברי הניסוי ולמזער את ההשפעות השליליות של ההרדמה על העכברים המנותחים.

יתרונות ומגבלות
השיטה המתוארת במחקר זה מציעה מספר יתרונות: (1) היא חוסכת זמן ומאפשרת שחרור לטרוזול רציף לאחר השתלת משאבה; (2) הוא מונע את הלחץ של מתן תרופות חוזר ונשנה על חיות ניסוי וממזער את ההשפעה של גורמים שאינם ניסויים על תוצאות המידול; (3) החומרים, כלי הניתוח והציוד הדרושים זמינים בדרך כלל ברוב המעבדות; (4) השיטה גורמת ביעילות לפנוטיפים של PCOS בעכברים. עם זאת, לשיטה זו יש גם מגבלות: (1) ההרדמה וההליך הכירורגי הנדרשים להשתלת משאבה זעירה עלולים לגרום לגירוי לעכברים, ונוכחות המשאבה הקטנה מתחת לעור עלולה להפריע לפעילותם; (2) יעילותה של שיטת מידול זו עשויה להיות מושפעת מזיהום או נזק לגוף המשאבה במהלך התהליך. בהתבסס על ניסיונם של המחברים, ביצוע קפדני של שלבי הפרוטוקול יכול להוביל לאחוזי הצלחה גבוהים ביצירת מודל עכבר PCOS.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

המחקר נתמך על ידי התוכנית הלאומית למחקר ופיתוח מפתח של סין (מענקים 2021YFC2700701), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענקים 82088102, 82071731, 82171613, 8227034, 81601238), האקדמיה הסינית למדעי הרפואה קרן חדשנות למדעי הרפואה (מענק 2019-I2M-5-064), ועדת המדע והטכנולוגיה של עיריית שנחאי (מענקים 21Y11907600), הוועדה העירונית של שנגחאי לבריאות ותכנון המשפחה (מענק 20215Y0216), תוכנית חדשנות שיתופית של ועדת הבריאות העירונית של שנחאי (מענק 2020CXJQ01), תוכנית המחקר הקליני של מרכז הפיתוח של בית החולים בשנחאי (מענק SHDC2020CR1008A), מרכז המחקר הקליני של שנגחאי למחלות גינקולוגיות (מענק 22MC1940200), מרכז המחקר למחלות מערכת האורגניטל בשנגחאי (מענק 2022ZZ01012), בסיס המחקר המדעי של שנחאי פרונטירז לרבייה ופיתוח, ועדת המדע והטכנולוגיה של עיריית קוזו (מענק 2022K54), פרויקט הקרן הפתוחה של מעבדת מפתח לגנטיקה של הרבייה, משרד החינוך, אוניברסיטת ג'ג'יאנג (מענק KY2022035), ופרויקט הקרן הפתוחה של האקדמיה למדעי הרפואה של גואנגדונג (מענק YKY-KF202202).

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מזרקBofeng BiotechBD3008411 מ"ל (סטרילי)
צינור צנטריפוגהBiological Hope1850-K15ML (סטרילי)
פיפטהאפנדורף3123000268-A100μ L-1000μ L (סטרילי)
PipetteTopPette701010100810μ L-100μ L (סטרילי)
אבקת לטרוזולSigmaL6545-50MGתרופות בפעולה ראשונית (סטרילית)
PEG(פולי(אתילן גליקול)))SolarbioP8250משמש לפירוק (סטרילי)
תמיסת מלח פיזיולוגית סטריליתBiosharpBL158Aאחסון מיני משאבה
משאבות אוסמוטיותALZET1004אחסון לטרוזול ושחרור מושהה (סטרילי)
דימתיל סולפוקסידBiosharpBS087משמש לפירוק (סטרילי)
מכונת הרדמה לבעלי חיים קטניםRWD R500IPמשמש להרדמה
איזופלורן RWD20071302משמש להרדמה
המוסטטיםBiosharpBS-HF-S-125מכשיר כירורגי
מספרייםBiosharpBS-SOR-S-100Pכירורגי
מחזיק מחטShangHaiJZJ32010מכשיר כירורגי
מלקחייםRWD F12028מכשיר כירורגי
מחט ותפר נספג 4-0JINGHUANCR413מכשיר כירורגי
ספוגיות פובידון-יודSingleLadyGB26368-2010חיטוי עור
ZIKER BIOTECHNOLOGYZK-L2701 חומר אפילציה לחיות מעבדה
כפפות ניטרילBiosharpBC040-Lמשמש לפעולה אספטית
גזה סטריליתZHENDEBA69087משמש לניגוב נוזלים
C57BL / 6J עכברישנחאי מודל אורגניזמים מרכזN/Aגיל: 4 שבועות
חומר סיכה לעין לחיות מחמדBAITESHF021153משמש לחומר סיכה לעין עכבר
הזרקת מלוקסיקםMEIDAJIAR21064-21משמש לשיכוך כאבים בעכברים (סטרילי)
מכשיר קרם

מקורות

  1. Dapas, M., Dunaif, A. Deconstructing a syndrome: Genomic insights into PCOS causal mechanisms and classification. Endocr Rev. 43 (6), 927-965 (2022).
  2. Teede, H., et al. Anti-müllerian hormone in PCOS: A review informing international guidelines. Trends Endocrinol Metab. 30 (7), 467-478 (2019).
  3. Joham, A. E., et al. Polycystic ovary syndrome. Lancet Diabetes Endocrinol. 10 (9), 668-680 (2022).
  4. Pan, J. X., et al. Aberrant expression and DNA methylation of lipid metabolism genes in PCOS: A new insight into its pathogenesis. Clin Epigenetics. 10, 6(2018).
  5. Gao, L., et al. Calcitriol attenuates cardiac remodeling and dysfunction in a murine model of polycystic ovary syndrome. Endocrine. 52 (2), 363-373 (2016).
  6. Gao, L., et al. Polycystic ovary syndrome fuels cardiovascular inflammation and aggravates ischemic cardiac injury. Circulation. 148 (24), 1958-1973 (2023).
  7. Rosenfield, R. L., Ehrmann, D. A. The pathogenesis of polycystic ovary syndrome (PCOS): The hypothesis of PCOS as functional ovarian hyperandrogenism revisited. Endocr Rev. 37 (5), 467-520 (2016).
  8. Wang, F., et al. Alternative splicing of the androgen receptor in polycystic ovary syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (15), 4743-4748 (2015).
  9. Noroozzadeh, M., Behboudi-Gandevani, S., Zadeh-Vakili, A., Ramezani Tehrani, F. Hormone-induced rat model of polycystic ovary syndrome: A systematic review. Life Sci. 191, 259-272 (2017).
  10. Tyndall, V., et al. Effect of androgen treatment during foetal and/or neonatal life on ovarian function in prepubertal and adult rats. Reproduction. 143 (1), 21-33 (2012).
  11. Jang, M., et al. Oriental medicine Kyung-ok-ko prevents and alleviates dehydroepiandrosterone-induced polycystic ovarian syndrome in rats. PLoS One. 9 (2), e87623(2014).
  12. Brawer, J. R., Munoz, M., Farookhi, R. Development of the polycystic ovarian condition (PCO) in the estradiol valerate-treated rat. Biol Reprod. 35 (3), 647-655 (1986).
  13. Mirabolghasemi, G., Kamyab, Z. Changes of the uterine tissue in rats with polycystic ovary syndrome induced by estradiol valerate. Int J Fertil Steril. 11 (1), 47-55 (2017).
  14. Li, X., et al. Amitriptyline plays important roles in modifying the ovarian morphology and improving its functions in rats with estradiol valerate-induced polycystic ovary. Arch Pharm Res. 42 (4), 344-358 (2019).
  15. Mamounas, E. P., et al. Use of letrozole after aromatase inhibitor-based therapy in postmenopausal breast cancer (NRG oncology/NSABP B-42): A randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet Oncol. 20 (1), 88-99 (2019).
  16. Deveci, H. S., et al. Histological evaluation of rat larynx in experimental polycystic ovary syndrome model. Eur Arch Otorhinolaryngol. 269 (8), 1945-1950 (2012).
  17. Du, D. F., Li, X. L., Fang, F., Du, M. R. Expression of anti-müllerian hormone in letrozole rat model of polycystic ovary syndrome. Gynecol Endocrinol. 30 (12), 885-889 (2014).
  18. Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. The gut microbiome is altered in a letrozole-induced mouse model of polycystic ovary syndrome. PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).
  19. Arroyo, P., Ho, B. S., Sau, L., Kelley, S. T., Thackray, V. G. Letrozole treatment of pubertal female mice results in activational effects on reproduction, metabolism and the gut microbiome. PLoS One. 14 (9), e0223274(2019).
  20. Pyun, B. J., et al. Tetragonia tetragonioides (pall.) Kuntze regulates androgen production in a letrozole-induced polycystic ovary syndrome model. Molecules. 23 (5), 1173(2018).
  21. Patel, R., Shah, G. Insulin sensitizers modulate GNRH receptor expression in PCOS rats. Arch Med Res. 49 (3), 154-163 (2018).
  22. Chaudhari, N., Dawalbhakta, M., Nampoothiri, L. GNRH dysregulation in polycystic ovarian syndrome (PCOS) is a manifestation of an altered neurotransmitter profile. Reprod Biol Endocrinol. 16 (1), 37(2018).
  23. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: Routes of administration and factors to consider. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).
  24. Lee, Y. H., et al. Welsh onion root (Allium fistulosum) restores ovarian functions from letrozole induced-polycystic ovary syndrome. Nutrients. 10 (10), 1430(2018).
  25. Yang, H., et al. Traditional medicine (mahuang-tang) improves ovarian dysfunction and the regulation of steroidogenic genes in letrozole-induced PCOS rats. J Ethnopharmacol. 248, 112300(2020).
  26. Corrie, L., et al. Recent updates on animal models for understanding the etiopathogenesis of polycystic ovarian syndrome. Life Sci. 280, 119753(2021).
  27. Corbin, C. J., Trant, J. M., Walters, K. W., Conley, A. J. Changes in testosterone metabolism associated with the evolution of placental and gonadal isozymes of porcine aromatase cytochrome p450. Endocrinology. 140 (11), 5202-5210 (1999).
  28. Ryan, G. E., Malik, S., Mellon, P. L. Antiandrogen treatment ameliorates reproductive and metabolic phenotypes in the letrozole-induced mouse model of PCOS. Endocrinology. 159 (4), 1734-1747 (2018).
  29. Bhattarai, P., Rijal, S., Bhattarai, J. P., Cho, D. H., Han, S. K. Suppression of neurotransmission on gonadotropin-releasing hormone neurons in letrozole-induced polycystic ovary syndrome: A mouse model. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 1059255(2022).
  30. Annie, L., Gurusubramanian, G., Roy, V. K. Inhibition of visfatin by fk866 mitigates pathogenesis of cystic ovary in letrozole-induced hyperandrogenised mice. Life Sci. 276, 119409(2021).
  31. Mcdonald, L. T., et al. Early blood profile of C57BL/6 mice exposed to chronic unpredictable stress. Front Psychiatry. 10, 230(2019).
  32. Torres, P. J., et al. Exposure to a healthy gut microbiome protects against reproductive and metabolic dysregulation in a PCOS mouse model. Endocrinology. 160 (5), 1193-1204 (2019).

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל עכברים ל-PCOSמיני-משאבה ללטרוזולשחרור תרופה מבוקרהשתלה תת-עוריתטסטוסטרון בנסיובחוסר סבילות לגלוקוזהיסטולוגיה של השחלההפרעות מטבוליותמחלות קרדיו-וסקולריות
טכניקה שונה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.