הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

דגימת דם ומדידת הורמונים לקביעת השלב במחזור השחלה במרמוסטים

2.3K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/66691

⸱

5 ביולי 2024

 , 
1National Center for Child Health and Development

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר דגימת דם ושתן למדידת רמות פרוגסטרון/אסטרדיול וגונדוטרופין כוריוני כדי לקבוע את שלב מחזור השחלות. רמות ההורמונים משמשות לחיזוי וקביעת עיתוי הביוץ והורמונים מוזרקים כדי לווסת את מחזור השחלות ואת צמיחת הביציות.

תקציר

מרמוסטים נפוצים הם קופי עולם חדש קטנים. מאחר שרבים מהמנגנונים הביולוגיים שלהם דומים לאלה של בני אדם, מרמוסטים עשויים להיות שימושיים למחקר רפואי וביולוגי אנושי במגוון תחומים, כגון מדעי המוח, רפואה רגנרטיבית ופיתוח. עם זאת, חסרה ספרות המתארת שיטות לניסויים ונהלים בסיסיים רבים. כאן מתוארות שיטות מפורטות לקביעת רמות הורמוני המין (פרוגסטרון, אסטרדיול וגונדוטרופין כוריוני) במרמוסטים. המדידה של הורמונים אלה מאפשרת לחזות את השלב במחזור השחלות, שהוא בדרך כלל 26-30 יום במרמוסטים; קביעה מדויקת חיונית לקצירת ביציות/זיגוטות בנקודת הזמן הנכונה ולהכנת נקבות פונדקאיות ליצירת מרמוסטים מהונדסים גנטית.

בנוסף, מדידת רמות הורמוני המין שימושית לאנדוקרינולוגיה, אתולוגיה, התפתחות מוקדמת וביולוגיה של הרבייה. פרוטוקול זה מספק תיאור מפורט של השיטות לדגימת דם מווריד הירך, הפרדת פלזמה למדידת הורמונים, מדידת רמות גונדוטרופין כוריוני באמצעות שתן ופלזמה, איפוס מחזור השחלות באמצעות זריקות של אנלוגי פרוסטגלנדין F2α כדי לקצר ולסנכרן את המחזור, וקידום צמיחת זקיקים וביוץ על ידי הזרקת הורמון מגרה זקיק וגונדוטרופין כוריוני. באמצעות פרוטוקולים אלה, ניתן לקבוע את השלבים במחזור השחלתי לאיסוף בזמן של ביציות/זיגוטות.

מבוא

המרמוסט המצוי (Callithrix jacchus) הוא קוף עולם חדש קטן בעל מאפיינים רבים הדומים לאלה של בני אדם, ומשך מחזור השחלות שלו הוא 26-30 יום 1,2. מחקרים על התפתחות מוקדמת ויצירת מרמוסטים מהונדסים גנטית דורשים קצירת ביציות וזיגוטה בשלבים ספציפיים במחזור השחלות. לכן, קביעה מדויקת של השלב היא קריטית וניתן להעריך אותה על ידי מדידת רמות הדם של ההורמונים פרוגסטרון (P4) ואסטרדיול (E2)2,3. הורמונים אלה מקדמים צמיחה רירית הרחם, אשר הכרחי להשתלה. P4 מיוצר מקורפוס לוטאום, שנוצר בשחלות מיד לאחר הביוץ. E2 מופרש על ידי זקיקי השחלות בתגובה להורמון מגרה זקיקים (FSH) מקומפלקס ההיפותלמוס-יותרת המוח במוח. רמות E2 עולות ככל שהזקיק מתבגר, ומגיעות לשיא לפני הביוץ3. רמות E2 גבוהות גורמות לשחרור פועם של הורמון luteinizing (LH) דרך קומפלקס ההיפותלמוס-יותרת המוח בבני אדם; נחשול LH זה גורם לביוץ. עם זאת, במרמוסטים, הגן LH עבר ניוון במהלך האבולוציה, והביוץ נגרם במקום זאת על ידי שחרור גונדוטרופין כוריוני (CG), בעל מבנה דומה לזה של LH, מבלוטת יותרת המוח 4,5.

מחזור השחלות יכול להיות נשלט על ידי זריקות הורמונים. זריקות FSH, בבני אדם, פועלות על קולטני FSH בשחלות ומשמשות לקידום סינתזת אסטרוגן וצמיחת זקיקים6. הזרקת CG אנושי (hCG) כתחליף ל- LH בסוף השלב הפוליקולרי משמשת לגירוי ביוץ בבני אדם7. זריקות CG משמשות גם לטיפול באי פוריות אנושית מכיוון ש- CG מגרה את הקורפוס לוטאום בתחילת ההריון, וכתוצאה מכך ייצור P4 מוגבר. זריקות פרוסטגלנדין F2α (PGF2α) מאפסות את מחזור השחלות8. בבקר ביתי, הזרקת PGF2α משמשת לקיצור השלב הלוטאלי ולסנכרון מחזור הייחום לניהול הרבייה.

למרות שלמרמוסטים ולבני אדם יש מנגנונים ביולוגיים דומים, מה שהופך אותם לחיות מודל אידיאליות, חסרה ספרות המתארת שיטות בסיסיות לטכניקות רבות המשמשות לעתים קרובות. דגימת דם היא אחת הטכניקות הנפוצות ביותר 9,10,11,12. עם זאת, מתחילים לפעמים מתקשים למצוא את הווריד. לפיכך, מחקר זה ערך ניתוחים אנטומיים של אזור ורידים הירך. בהתבסס על תצפיות אנטומיות, פרוטוקול זה מציג את האזור הפרוקסימלי של משולש הירך כאתר קל לניקור.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל השיטות שכללו מרמוסטים השתמשו בסטנדרטים אתיים ורווחתיים גבוהים ואושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים במרכז הלאומי לבריאות והתפתחות הילד. בעלי החיים ששימשו כאן היו בעלי בתים בודדים או זוגיים (נקבה אחת וזכר אחד) עם 12 שעות אור ביום.

1. דגימת דם של וריד הירך

  1. הכינו מזרק 1 מ"ל (הסוג הקצר קל לשימוש) עם מחט 25 גרם המחוברת לצד הלהב כלפי מעלה. כדי למנוע סתימת דם, heparinize את המזרק על ידי משיכת 200 μL של תמיסת נתרן הפרין לא מדולל לתוך המזרק. מצפים את החלק הפנימי של המזרק באופן שווה על ידי משיכת אותו למעלה ולמטה מספר פעמים; לאחר מכן, לגרש את תמיסת הפרין מן המזרק.
    הערה: מכיוון שלעתים קרובות יש צורך בהחלפה למזרק חדש, הכינו מספר מזרקים נוספים.
  2. הכינו צמר גפן סופג ומקלוני אלכוהול. הדליקו מנורה מתכווננת שתאיר את האזור בו יוצב המרמוסט לדגימת דם.
  3. הכן את התקן הריסון (420 x 85 x 85 מ"מ, איור 1A), הזמין מסחרית (ראה טבלת חומרים לפרטים). כדי להכניס מרמוסט להתקן, פתח את חלק השמירה באמצעות חגורת הספוג, המאבטחת מרמוסטים. הכנס את המרמוסט להתקן הריסון כשפניו כלפי מעלה.
    הערה: מרמוסטים בדרך כלל רגועים במכשירי ריסון אשר עשויים לשלול את הצורך בהתאקלמות או אימון ריסון.
  4. ללכוד את marmoset; להכניס את המרמוסט לחלק הגלילי; ולאבטח אותו על ידי לחיצה על חגורת הספוג. הניחו את הרגל שממנה יש לאסוף דם על גבי הרגל השנייה (איור 1A). להחזיק את הרגליים באמצעות היד הלא דומיננטית; הניחו את האצבע האמצעית ואת הקמיצה בתוך כל רגל כדי להדק אותן ואת האצבעות האחרות מחוץ לכל רגל כדי לתקן אותן.
    הערה: כפפות נשיכה מומלצות בעת לכידת מרמוסטים. אם אין מכשיר ריסון, יש לבצע איסוף דם בהרדמה או עם אדם אחר המרסן.
  5. בדוק אם וריד הירך גלוי ליד בסיס הירך. אם לא, מישוש כדי למצוא את העורק הפועם והשתמש בו כנקודת ציון כדי לבדוק שהוריד עובר בתוכו (איור 1B-D).
    הערה: תאורה שולחנית וגילוח שיער מומלצים לשיפור הראות. ניתן לשפר את הראות גם על ידי שפשוף עם מקלוני אלכוהול. בלוטות הלימפה במשולש ממוקמות לעתים קרובות קרוב לווריד ומראות צבע כחול כהה כווריד. כיצד להבחין ביניהם מתואר בסעיף תוצאות מייצגות.
  6. יש לחטא את אתר הניקוב באמצעות ספוגית אלכוהול. הכנס את להב המחט כלפי מעלה בזווית של 15°-20°. כדי למנוע מהמחט להחליק מכלי הדם במהלך איסוף הדם, ייצבו את היד האוחזת במזרק, למשל, על ידי הנחתו מצד שני.
  7. משכו בעדינות את הבוכנה לאחור כדי להפעיל לחץ שלילי (איור 1E). דחפו את קצה המחט קדימה. לאחר כניסת הדם למזרק, שמרו על מיקום קצה המחט עד לאיסוף הנפח הנדרש (500-700 מיקרוליטר).
    1. כאשר הדם אינו נכנס מזרק, לשנות את האתר של לנקב. אם הדם יוצא בעת שליפת המחט, להפסיק את הדימום על ידי הפעלת לחץ על אתר לנקב במשך 3 דקות. לאחר עצירת הדימום, הפעל מחדש את הניקוב.
    2. אם הדם הנשאב לתוך המזרק מפסיק לזרום במהלך תהליך הציור, לדחוף לאט את קצה המחט קדימה ולאחר מכן למשוך אותו בחזרה כדי למצוא את כלי הדם. זה עשוי לשחזר את זרימת הדם לתוך המזרק. אם לא, לשלוף את המחט ולבצע ניקור באמצעות מזרק חדש.
      הערה: השתמש בירך ברגל השנייה כאשר קשה לאסוף דם מאותו צד.
  8. בזהירות למשוך את המחט תוך לחיצה קלה על אתר הניקוב באמצעות האצבע הקטנה. לאחר מכן, באמצעות צמר גפן סופג, מיד להפעיל לחץ על אתר לנקב במשך 3 דקות כדי לעצור את הדימום. הפוך את המזרק כדי לערבב דם והפרין.
    הערה: יש להפעיל לחץ למשך זמן רב יותר (5 דקות) בזמן קירור בעת שאיבת דם עורקי, ולאשר בזהירות את הפסקת הדימום כדי למנוע היווצרות המטומה, שלעיתים עלולה לגרום לתוצאה קטלנית.
  9. לאחר שווידאתם שהדימום פסק, הסירו את חגורת הספוג, אחזו במותניו של בעל החיים ביד אחת, וסובבו את בעל החיים כך שניתן יהיה להחזיק את בית השחי של בעל החיים ביד נוספת מהישבן.
  10. החזירו את המרמוסט לכלוב שלו. כדי להפחית את הלחץ ולהקל על דגימות דם חוזרות, ספקו למרמוסט את המזון האהוב עליו (למשל, ביסקוויטים, מרשמלו או עוגת ספוג). בדוק את התרחשות המטומה מדי פעם.
    הערה: כאשר המטומה נמצאת בשלב מוקדם, להחיל תחבושת לחץ כדי למנוע את התקדמות המטומה. כאשר הוא נמצא לאחר זמן רב, הסרה כירורגית של hematoma עם קשירה של עורק הירך עירוי דם עשוי להיות נחוץ 9,13.
  11. נתקו את המחט מהמזרק כדי למנוע המוליזה. לאחר מכן, לגרש לאט את הדם שנאסף לאורך הקיר הפנימי של microtube 1.5 מ"ל.
    הערה: הדם שנאסף יכול להיות מאוחסן ב 4 oC עד 24 שעות לפני הפרדת פלזמה למדידת רמות P4 / E2.

2. הפרדת פלזמה וקביעת רמות הורמונליות

  1. צנטריפוגה את הדם בצינור 1.5 מ"ל ב 1,100 × גרם במשך 5 דקות ב 4 oC.
  2. העבר את הפלזמה המופרדת (supernatant) מצינור 1.5 מ"ל לצינור / חדשה, בזהירות הימנעות מהכללת תאי דם (משקעים).
  3. מדוד את רמות P4 ו- E2 באמצעות ערכת ELISA או מנתח אוטומטי. אם כמות הפלזמה אינה מספיקה למנתח האוטומטי, השתמש בתמיסת דילול דגימה.
    הערה: עבור מדידה באמצעות אנלייזר אוטומטי, >175 μL של פלזמה נדרש לקביעת רמת P4 בלבד, ו >250 μL של פלזמה נדרש לקביעת P4 ו- E2.

3. מדידת CG בשתן לזיהוי ביוץ והריון

הערה: ניתן למדוד את רמות ה-CG במרמוסטים באמצעות בדיקת ערכה אימונוכרומטוגרפית הן לביוץ והן להריון. במקרה של ביוץ, תוצאה חיובית ניתן לקבל 0-2 ימים לפני הביוץ. במקרה של הריון, תוצאה חיובית מזוהה בין ימים 15-20 עד בערך יום 100 של ההריון. הבדיקה דורשת כמות קטנה (90 μL) של שתן (טיפה אחת של שתן היא ~ 30 μL).

  1. שיטת מגש: אם יותר משני בעלי חיים נמצאים באותו כלוב, העבירו את מרמוסט המטרה (או את החיות האחרות) לכלוב אחר יום קודם. הניחו מגש נקי בתחתית הכלוב בלילה שלפני או לפני ההדלקה. השתן אינו מנוקז משלפוחית השתן במהלך הלילה. לכן, השתן משתחרר בדרך כלל משלפוחית השתן זמן קצר לאחר התאורה.
    הערה: כניסה לחדר בבוקר לפני התאורה עלולה לשבש את מחזור השינה של הקבוצה. בדרך כלל ניתן לאסוף שתן תוך כ-30 דקות לאחר ההדלקה.
  2. שיטת סחיטה: מכינים את המגשים השטופים לאיסוף שתן. לאחר איתור שלפוחית השתן של המרמוסט, סחטו אותה בזהירות מקדימה ומשני הצדדים לכל אורך האצבעות (איור 1F). אספו שתן רגע לפני שאתם מאירים את החדר בבוקר.
    הערה: אם איסוף השתן אינו מצליח עקב היעדר שתן בשלפוחית השתן, המתן זמן מה ונסה שוב. היזהר לא להשתמש בכוח מופרז כי זה יפצע את החיה.
  3. מיד לאחר האיסוף, מניחים את דגימת השתן בבאר של ערכת הבדיקה האימונוכרומטוגרפית. קרא את התוצאה לאחר 10 דקות בהתאם להוראות היצרן.

4. בקרה וקביעה של שלב מחזור השחלות לאיסוף ביציות, זיגוטות ועוברים

  1. שלפוחית נבט (GV) איסוף ביציות מהשחלות
    1. מתן זריקה תוך שרירית של 3 μL של 0.263 מ"ג/מ"ל cloprostenol (אנלוג PGF2α סינתטי) מדולל ב 150 μL של מלוחים14 (איור 2) כדי לאפס את מחזור השחלות בסוף השלב הלוטאלי (כלומר, ≥10 ימים לאחר תחילת השלב הלוטאלי).
      הערה: ביצוע התמיסה המדוללת בנפח גדול יותר עשוי להיות נוח מכיוון שהקלופרוסטנול המדולל נשאר יציב, לפחות, מספר שבועות ב +4 ° C.
    2. למחרת (יום 1), אשר את התחלת השלב הפוליקולרי על ידי בדיקה שרמת P4 ירדה.
      הערה: הזרקת Cloprostenol דווח להפחית באופן דרמטי את רמות P4 (בדרך כלל <10 ng / mL) בתוך 24 שעות3.
    3. מהיום הראשון, יש להזריק FSH (25 IU, תוך שרירי) אחת ליומיים ובסך הכל 5x (ימים 1, 3, 5, 7 ו-9). ביום 10, הזריקו hCG (75 IU, תוך שרירי) אחר הצהריים.
    4. לאסוף GVs מן השחלות ביום 11 על ידי שאיפת זקיקים תחת הרדמה על פי הספרות15,16.
      הערה: לפעמים, הביוץ מתרחש מוקדם מהצפוי. לכן, מומלץ לבדוק את רמות CG מהיום 8. אם בדיקת CG חיובית, בצע איסוף GV ביום זה.
  2. אוסף של ביציות, זיגוטות ועוברים מוקדמים מסוג metaphase II (MII)
    1. אפס את מחזור השחלות באמצעות cloprostenol כמתואר בשלב 4.1.1.
    2. למחרת (יום 1), אשר את התחלת השלב הפוליקולרי על ידי בדיקה שרמת P4 ירדה.
    3. לאיסוף הזיגוטה והעוברים, אכלסו מרמוסטים נקבות יחד עם מרמוסטים זכרים להזדווגות מהיום השישי.
    4. מהיום השביעי, בדקו את רמות P4/E2 בדם ואת רמות CG השתן של הנקבות. גילוי CG הוא אינדיקציה לביוץ תוך מספר ימים (בדרך כלל למחרת). ביום שבו רמות P4 עולות ורמות E2 יורדות בהשוואה ליום הקודם, אספו ביציות MII או זיגוטות עובריות ביום 0 (E0) מהאובידוקט17,18.
    5. לאיסוף עוברים, כמתואר בספרות, יש לבצע שטיפה מהאובידוקט (E1-E3, 1-8 תאים)17,18 או מהרחם (E5-E10, 8 תאים-בלסטוציסט)19,20,21,22 בנקודת הזמן המתאימה, בהתאם לשלב היעד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

פרטים הקשורים לבעלי החיים ששימשו במחקר זה מפורטים בטבלה 1.

ניתוחים אנטומיים של וריד הירך
ניתוחים אנטומיים של וריד הירך בוצעו באמצעות מרמוסט מצוי זכר בן שנתיים (I 7713M) שעבר המתת חסד. ורידי הירך והעורקים ממוקמים במשולש הירך. משולש הירך נוצר בגבולות שבין דופן הבטן לשרירי הירך (איור 1B-D). בבסיס הירך, וריד גדול עובר במרכז המשולש ההפוך, ועורק עובר במקביל מחוץ לווריד. באזור התחתון, הוורידים והעורקי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

איתור הווריד הוא השלב הקריטי ביותר באיסוף הדם. בהתבסס על תצפיות אנטומיות, פרוטוקול זה מציג את האזור הפרוקסימלי במשולש הירך כאתר קל לאיסוף דם במרמוסטים. באמצעות אזור זה, דגימת דם מווריד גדול ניתן לבצע בקלות. עם זאת, גם באמצעות פרוטוקול זה, פגיעה בעורק מתרחשת לפעמים. כאשר פוגעים בעורק, עצירה מוחלטת של הדימום על ידי הפעלת לחץ במשך >5 דקות מוצע למנוע המטומה. בנוסף, בעת הפעלת לחץ, קירור אתר ניקוב באמצעות קוביית קרח הוא גם יעיל. ניתן לטפל בהמטומות באמצעות הפרין (למשל, Tensolvet 5.000 I.E. gel)...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

תודות

ברצוננו להודות לצ'ונשן שן, הירוקו אקוטסו, פומיו סוגיקי, יונה האשימוטו, הינה נריטומי, יוקי סאקאמוטו ומימיקו הוריגום על תמיכתם בביסוס פרוטוקול זה ובטיפול היומיומי במרמוסטים; Takayuki Mineshige להערות על כתב היד; יוקיקו אבה וחברי מעבדת Aiba לשיתוף טכניקות איסוף זיגוטות; CIEA על שיתוף המידע על דיור מרמוסטים וניסויים שהם טיפחו במשך 40 שנה. מחקר זה נתמך על ידי AMED, JST ו-KAKENHI במסגרת המענק מס' JP19gm6310010, JP20gm6310010, JP21gm6310010 ו-JP22gm6310010 (AMED), JPMJPR228B (JST), 20H05764, 20H03177 ו-22K18356 (KAKENHI).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
AIA-360Tosoh Corporation0019945מדידת הורמונים (P4/E2)
תרכיז מדלל AAIA-PACKTosoh Corporation0020956מדידת הורמונים (P4/E2)
AIA-PACK SUBSTRATE SET IITosoh Corporation0020968מדידת הורמונים (P4/E2)
תרכיז כביסה AIA-PACKTosoh Corporation0020955מדידת הורמונים (P4/ E2)
CMS-1CLEA יפןמרמוסט מזון
אסטרומטMSD בריאותPGF2alpha אנלוגי (קלופרוסטנול)
Gonal-f הזרקה תת עורית 150Merck Biopharma Co., Ltd.FSH
Gonatropin להזרקה תוך שרירית 1000ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.872413hCG
Heparin תמיסת הזרקת נתרן 5,000 יחידות/5 מ"לMochida Pharmaceutical Co., Ltd.
224122458 ערכת בדיקה אימונוכרומטוגרפית לאיסוף דם לאיתור גונדוטרופין כוריוני מרמוסט נפוץ (בודק כפול)CLEA Japan, Inc.קביעת רמת CG
תאורת מיקרוסקופ כפולה בפרופיל נמוך LPF-SDSHIOKAZE GIKENמנורת שולחן לאיסוף דם
מכשיר ריסון לאיסוף דם מרמוסטJIC יפן JM-1006איסוף דם
http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html
דוא"ל: vi@jic-japan.jp
Metacam 0.05%Boehringer Ingelheim בריאות בעלי חיים יפן ושות', בע"מ.לדוגמא לטיפול בהמטומה
, 3 מ"ל, PS, עבור Tosoh 360 ו-AIA-600 II, 1000/שקיתגלובוס 110913מדעי מדידת הורמונים (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2Tosoh Corporation0025224מדידת הורמונים (P4/E2)
סט כיול ST AIA-PACK iE2Tosoh Corporation0025324מדידת הורמונים (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 תמיסת דילול מדגםTosoh Corporation0025524מדידת הורמונים (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIIITosoh Corporation0025240מדידת הורמונים (P4/E2)
סט כיול ST AIA-PACK PROGIIITosoh Corporation0025340מדידת הורמונים (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII תמיסת דילול מדגםTosoh Corporation  0025540מדידת הורמונים (P4/E2)
מזרק עם מחט 25 גרם (0.50 x 25 מ"מ)TERUMOSS-01T2525איסוף דם
Tensolvet 5.000 כלומר ג'ל.Dechra Pharmaceuticals14033492טיפול בהמטומה
TOSOH MULTI-CONTROL SET0015965Tosoh Corporationמדידת הורמונים (P4/E2)
בעלי חיים

מקורות

  1. Kholkute, S. D. Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus). Primates. 25 (1), 123-126 (1984).
  2. Harding, R. D., Hulme, M. J., Lunn, S. F., Henderson, C., Aitken, R. J. Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus). J Med Primatol. 11 (1), 43-51 (1982).
  3. Gilchrist, R. B., Wicherek, M., Heistermann, M., Nayudu, P. L., Hodges, J. K. Changes in follicle-stimulating hormone and follicle populations during the ovarian cycle of the common marmoset. Biol Reprod. 64 (1), 127-135 (2001).
  4. Gromoll, J., et al. A new subclass of the luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor lacking exon 10 messenger RNA in the New World monkey (Platyrrhini) lineage. Biol Reprod. 69 (1), 75-80 (2003).
  5. Müller, T., et al. Chorionic gonadotrophin beta subunit mRNA but not luteinising hormone beta subunit mRNA is expressed in the pituitary of the common marmoset (Callithrix jacchus). J Mol Endocrinol. 32 (1), 115-128 (2004).
  6. Pacchiarotti, A., et al. Ovarian stimulation protocol in IVF: an up-to-date review of the literature. Curr Pharm Biotechnol. 17 (4), 303-315 (2016).
  7. Ezcurra, D., Humaidan, P. A review of luteinising hormone and human chorionic gonadotropin when used in assisted reproductive technology. Reprod Biol Endocrinol. 12, 95(2014).
  8. Lopez-Gatius, F. Ovarian response to prostaglandin F(2alpha) in lactating dairy cows: A clinical update. J Reprod Dev. 68 (2), 104-109 (2022).
  9. Marini, R. P., Wachtman, L. M., Tardif, S. D., Mansfield, K., Fox, J. G. The Common Marmoset in Captivity and Biomedical Research. , Elsevier Science. (2018).
  10. Schultz-Darken, N. J. Sample collection and restraint techniques used for common marmosets (Callithrix jacchus). Comp Med. 53 (4), 360-363 (2003).
  11. Hopper, J. Common marmosets. Handbook of Exotic Pet. Kubik, M. , 27-42 (2020).
  12. Harlow, C. R., Hearn, J. P., Hodges, J. K. Ovulation in the marmoset monkey: endocrinology, prediction and detection. J Endocrinol. 103 (1), 17-24 (1984).
  13. Ludlage, E., Mansfield, K. Clinical care and diseases of the common marmoset (Callithrix jacchus). Comp Med. 53 (4), 369-382 (2003).
  14. Summers, P. M., Wennink, C. J., Hodges, J. K. Cloprostenol-induced luteolysis in the marmoset monkey (Callithrix jacchus). J Reprod Fertil. 73 (1), 133-138 (1985).
  15. Takahashi, T., et al. Birth of healthy offspring following ICSI in in vitro-matured common marmoset (Callithrix jacchus) oocytes. PLoS One. 9 (4), e95560(2014).
  16. Tomioka, I., Takahashi, T., Shimada, A., Yoshioka, K., Sasaki, E. Birth of common marmoset (Callithrix jacchus) offspring derived from in vitro-matured oocytes in chemically defined medium. Theriogenology. 78 (7), 1487-1493 (2012).
  17. Abe, Y., et al. Efficient marmoset genome engineering by autologous embryo transfer and CRISPR/Cas9 technology. Sci Rep. 11 (1), 20234(2021).
  18. Summers, P. M., Shephard, A. M., Taylor, C. T., Hearn, J. P. The effects of cryopreservation and transfer on embryonic development in the common marmoset monkey, Callithrix jacchus. J Reprod Fertil. 79 (1), 241-250 (1987).
  19. Thomson, J. A., Kalishman, J., Hearn, J. P. Nonsurgical uterine stage preimplantation embryo collection from the common marmoset. J Med Primatol. 23 (6), 333-336 (1994).
  20. Hanazawa, K., et al. Minimally invasive transabdominal collection of preimplantation embryos from the common marmoset monkey (Callithrix jacchus). Theriogenology. 78 (4), 811-816 (2012).
  21. Ishibashi, H., et al. Efficient embryo transfer in the common marmoset monkey (Callithrix jacchus) with a reduced transfer volume: a non-surgical approach with cryopreserved late-stage embryos. Biol Reprod. 88 (5), 115(2013).
  22. Kishimoto, K., et al. Establishment of novel common marmoset embryonic stem cell lines under various conditions. Stem Cell Res. 53, 102252(2021).
  23. Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
  24. Daskalaki, M., Drummer, C., Behr, R., Heistermann, M. The use of alfaxalone for short-term anesthesia can confound serum progesterone measurements in the common marmoset: a case report. Primate Biol. 9 (2), 23-28 (2022).
  25. Hodges, J. K., Cottingham, P. G., Summers, P. M., Liang, Y. N. Controlled ovulation in the marmoset monkey (Callithrix jacchus) with human chorionic gonadotropin following prostaglandin-induced luteal regression. Fertil Steril. 48 (2), 299-305 (1987).
  26. Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. Extension of reproductive suppression by pheromonal cues in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus. J Reprod Fertil. 90 (2), 411-418 (1990).
  27. Barrett, J., Abbott, D. H., George, L. M. Sensory cues and the suppression of reproduction in subordinate female marmoset monkeys, Callithrix jacchus. J Reprod Fertil. 97 (1), 301-310 (1993).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

רבייה של מרמוזטרמות הורמוני מיןמדידת פרוגסטרוןמדידת אסטרדיולגונדוטרופין כוריאונידגימה מווריד הפמורלימרמוזטים מהונדסים גנטית
דגימת דם ומדידת הורמונים לקביעת השלב במחזור השחלה במרמוסטים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.