פינוי אינסולין בכבד הוא קריטי לוויסות הומאוסטזיס של גלוקוז. מאמר זה מתאר הליך זלוף כבד ידידותי למשתמש להערכה ישירה של קצב פינוי האינסולין בכבד באתרו בעכברים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הערכת פינוי אינסולין בעכברים באמצעות זלוף כבד באתרו
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
פינוי אינסולין בכבד חיוני לשמירה על הומאוסטזיס גלוקוז וקשור קשר הדוק להפרעות מטבוליות כגון השמנת יתר, עמידות לאינסולין וסוכרת. מדידה מדויקת של פינוי האינסולין חיונית להבנת המנגנונים הבסיסיים של מצבים אלה. פרוטוקול זה מציג הליך זלוף כבד פשוט וידידותי למשתמש בעכברים, שתוכנן במיוחד כדי להעריך ישירות את קצב פינוי האינסולין בכבד. השיטה כוללת קנולציה מדויקת של וריד הפורטל והווריד הנבוב התחתון העל-הפטי כדי ליצור מערכת זלוף באתרה המחקה תנאים פיזיולוגיים. הפרוטוקול מנחה את החוקרים בכל שלב של ההליך, מהכנה כירורגית והקמת מערכת הזלוף ועד לאיסוף וניתוח דגימות. ניתנות הוראות מפורטות, יחד עם תוצאות מייצגות וטיפים חשובים לייעול ההליך. סרטון הדרכה מלווה את הפרוטוקול הכתוב, המציע הוראות ואיורים מעמיקים מבחינה ויזואלית, מה שהופך אותו להתייחסות נגישה ומקיפה למדענים החוקרים את המנגנונים המולקולריים מאחורי חילוף החומרים ופינוי האינסולין בכבד.
מבוא
גילוי האינסולין הפך לאחת מאבני הדרך של המאה הקודמת. הרבה ידוע על ויסות סינתזת האינסולין, הפרשת האינסולין ותפקודיו הפיזיולוגיים ברקמות מטבוליות. עם זאת, יש פחות התמקדות בפירוק האינסולין ובמנגנוני הרגולציה שלו. ניתן להבין את חילוף החומרים של אינסולין כיחסי הגומלין בין תפקוד תאי בטא, תנגודת לאינסולין (IR) או רגישות, ופינוי אינסולין. לצד הפרשת אינסולין, פינוי אינסולין בכבד ממלא תפקיד מכריע בשמירה על הרמה ההומאוסטטית של האינסולין הדרושה להגעה לרקמות היעד ההיקפיות ולהקלה על פעולת אינסולין תקינה1. מחקרים מרובים זיהו פגיעה בפינוי אינסולין כגורם מכריע בפתוגנזה של היפראינסולינמיה בתסמונת מטבולית, כמו גם במצבים אחריםכגון סוכרת מסוג 2,3, דלקת כבד לא אלכוהולית4 ותסמונת השחלות הפוליציסטיות5. לפיכך, היפראינסולינמיה משנית לפינוי מופחת עשויה לשחק תפקיד בפתוגנזה של מחלה מטבולית. לאסטרטגיות המשפרות את פינוי האינסולין יש פוטנציאל להפוך את ההשפעות השליליות של היפראינסולינמיה אצל אנשים אלה.
לאינסולין יש דפוס הפצה ייחודי. רמת האינסולין בפלזמה במחזור תלויה בשיווי המשקל בין הפרשת האינסולין להוצאתו. הלבלב מפריש אינסולין לווריד הפורטלי בצורה פועמת, ומכוון אותו אל הפטוציטים. כאיבר הראשון שנתקל בהפרשת אינסולין, הכבד מפרק את רוב האינסולין במהלך המעבר הראשון שלו, ומהווה 60%-70% מסך האינסולין6. האינסולין הנותר יוצא מהכבד דרך וריד הכבד, ונכנס למחזור הדם המערכתי, שם הוא מנוצל בחלקו על ידי רקמות היקפיות (בעיקר שריר, רקמת שומן וכליות) לפני שהוא מופק עוד על ידי הכבד במהלך המעבר השני שלו דרך עורק הכבד7.
המדידה המדויקת של פינוי האינסולין היא קריטית. מדידה ישירה של פינוי אינסולין בכבד במחקרים בבני אדם היא מאתגרת מכיוון שקשה להשיג דגימות דם מהפורטל ומוורידי הכבד. שיטות ישירות ועקיפות משמשות להערכת פינוי אינסולין בבני אדם ובמודלים של בעלי חיים. כשלוש אסטרטגיות משמשות למדידת פינוי אינסולין בעקיפין. ההערכות הנפוצות ביותר בפרקטיקה הקלינית כוללות שיטות המבוססות על יחס C-פפטיד/אינסולין מולארי8. גישה זו מבוססת על הפרשת שיווי המשקל של שני הפפטידים והיעדר מיצוי פפטיד C על ידי הכבד9. קבוצת השיטות השנייה תלויה בניתוח מתמטי של עקומות דעיכת הפלזמה של אינסולין לאחר כניסה ידועה וספציפית של ההורמון למחזור הדם 2,10,11. השיטה השלישית מבוססת על העובדה שעירוי אינסולין בקצב קבוע מוביל לרמות יציבות של ההורמון בדם, כאשר קצב ההסרה תואם את קצב המתן12. שיטות עקיפות אלו משקפות בעיקר את פינוי האינסולין הכללי בגוף. בהתחשב בכך שהכבד הוא האתר העיקרי של פינוי אינסולין וממלא תפקיד מכריע בתהליך זה, חיוני להעריך ישירות את פינוי האינסולין בכבד.
מחקרים קודמים מדדו ישירות את מיצוי האינסולין בכבד בכלבים בריאים13,14. מחקרים השתמשו גם במודל כבד חולדה מבודד כדי להעריך את מיצוי האינסולין מהכבד15,16. בשל הזמינות הגבוהה של זנים מהונדסים גנטית, עכברים משמשים כמודלים חשובים לחקירת מסלולים מולקולריים. כמה מחקרים17 השתמשו בזילוף כבד כדי להעריך ישירות את פינוי האינסולין בכבד במודל עכבר. במחקרים אלה, פרפוזה המכילה אינסולין אנושי מוזרקת לווריד הפורטלי ונאספת מהווריד הנבוב התחתון. שיעור האינסולין הנספג בכבד מעיד על פינויו. טכניקת זלוף הכבד שומרת על הכבד בתנאים כמעט פיזיולוגיים על ידי זרימת פרפוזה חמה, מחומצנת ומועשרת בחומרים מזינים דרך כלי הדם של הכבד. עם זאת, אין מספיק הדרכה מעשית וטיפים חיוניים לקידום והפצה של טכניקה זו.
לפיכך, בעוד שפינוי אינסולין בכבד זכה לתשומת לב הולכת וגוברת, תפקידו בהפרעות, כמו גם המנגנונים המולקולריים שלו, נותר לא ברור18. לכן, יש צורך רב בטכניקות מתקדמות בתחום המחקר המדעי. פרוטוקול זה קובע הליך זלוף כבד מותאם מפורט בעכברים להערכת פינוי אינסולין בכבד. בנוסף, ניתן להשתמש בשיטה זו גם כדי לחקור את ההשפעות של תרופות על הכבד, כולל אפקט המעבר הראשון, תהליכי הובלת תרופות והיבטים שונים אחרים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית של נאנג'ינג (IACUC-2105018) ופעל בהתאם להנחיות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים. כל עכברי C57BL/6N נשמרו במחזור אור/חושך של 12 שעות עם גישה חופשית למזון ומים. עכברים בני שישה שבועות חולקו באופן אקראי לקבוצת דיאטת צ'או (CD) וקבוצת דיאטה עתירת שומן (HFD). קבוצת ה-HFD הוזנה בתזונה עתירת שומן של 60% והמשיכה בדיאטה זו עד גיל 10 שבועות. משקל הגוף הממוצע היה 28.55 גרם ±-1.2 גרם בקבוצת HFD ו-24.3 גרם ±-0.48 גרם בקבוצת הביקורת. פרטי הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.
1. הכנה
- בצע עיקור הכרחי של מכשירים כירורגיים וחומרים מתכלים באמצעות חיטוי.
- הניחו את מכשירי הניתוח, תפר משי 6-0, מוליך כותנה קטן וסטרילי, הזרקת נתרן כלורי (500 מ"ל), צמר גפן וספוגים כראוי על שולחן הניתוחים.
- יש להכין 30 מ"ל של תמיסת מלח הפרינית בריכוז סופי של 200 יחב"ל/מ"ל.
- הכן שני צינורות סיליקון בקוטר פנימי של 0.31 מ"מ וקוטר חיצוני של 0.64 מ"מ; האחד באורך 4 ס"מ לשימוש כקטטר וריד הפורטל, והשני באורך 10 ס"מ לשימוש כקטטר הווריד הנבוב התחתון.
- הכן את מאגר הזלוף Krebs-Henseleit (KRBH) המכיל 5.0 ממול/ליטר גלוקוז ו-0.25% BSA.
- הכן את מאגר הזלוף Krebs-Henseleit (KRBH) המכיל 5.0 מילימול/ליטר גלוקוז, 0.25% BSA ו-4.0 ננוגרם/מ"ל אינסולין אנושי.
- הגדר את מערכת הזלוף בכבד. איור 1 מציג את המרכיבים העיקריים של מערכת הזלוף בכבד.
2. צנתור כירורגי
- הכן את תערובת ההרדמה על ידי ביצוע השלבים הבאים:
- יש לדלל את Zoletil 50 (250 מ"ג/5 מ"ל) 10 פעמים עם תמיסת נתרן כלורי 0.9%.
- יש לדלל קסילזין הידרוכלוריד (200 מ"ג/2 מ"ל) 10 פעמים עם תמיסת נתרן כלורי 0.9%.
- מערבבים את תמיסת זולטיל 50 0.5% עם תמיסת 1% קסילזין הידרוכלוריד ביחס של 1:1.
- להרדים את העכברים.
- בדוק ורשום את משקל גופו של העכבר. יש לתת את תערובת ההרדמה באמצעות הזרקה תוך-צפקית במינון של 5 מ"ל/ק"ג משקל גוף (2.5 מ"ג/מ"ל זולטיל 50; 5 מ"ג/מ"ל קסילזין הידרוכלוריד). תחילת ההרדמה מתרחשת בדרך כלל תוך 5-10 דקות לאחר ההזרקה, מה שמסומן על ידי אובדן רפלקס היישור ותגובה מופחתת לגירויים חיצוניים.
- העבר את העכבר לטבלת הניתוחים. אבטח את הגפיים באמצעות סרט דבק. יש לתת 2.5 U/g heparin תוך צפקי כדי להשיג הפריניזציה.
- השתמש במכונת גילוח חשמלית כדי לקצץ את הפרווה על עור הבטן ולחטא את האזור בתמיסת פובידון-יוד.
- ביצוע צנתור וריד פורטל.
- בצע חתך אורכי של 4 ס"מ מהבטן התחתונה לכיוון תהליך ה-xiphoid לאורך קו אמצע הבטן. חותכים בזהירות את הצפק במספריים כדי למנוע פגיעה באיברים הקרביים. הכנס את מפסק הבטן של העכבר כדי לחשוף את שדה הניתוח.
- הזיזו את המעיים ימינה כדי לחשוף את וריד הפורטל, את הכליה הימנית ואת הווריד הנבוב התחתון (איור 2A). השתמש במלקחיים עורקיים כדי להדק את הווריד הנבוב בקצה העליון של הכליה.
- בודד את וריד הפורטל (איור 2A) וקשר את הקצה הדיסטלי עם תפר משי 6-0. קושרים באופן רופף תפר נוסף בקצה הפרוקסימלי של הכלי החשוף.
- בצע חתך ליד הקצה הקשור במספריים קפיציים והכנס את הקטטר. קדם את הקטטר דרך החתך עד לרמת התפצלות הפורטל.
- אבטח את שתי הקשרים סביב הצנתר ואשר דגימה נכונה על ידי חיבור הקצה החופשי של הצנתר למזרק דגימה. יש לשטוף עם מי מלח הפריניים ולהדק את הקטטר (איור 2C).
- הסר את מכשיר המתיחה ואפס את המעיים. מכסים את אזור הניתוח בגזה סטרילית ספוגה במי מלח או כותנה.
- בצע צנתור וריד נבוב תחתון סופרהפטי.
- בצע חתך לאורך עצם החזה מתהליך ה- xiphoid וחשוף את עצם החזה.
- חותכים אנכית את עצם החזה וחותכים את הסרעפת לאורך שולי הצלעות כדי לחשוף את חלל בית החזה.
- חשוף ובודד את הווריד הנבוב התחתון העל-הפטי (איור 2B). קשור בזהירות את הקצה הדיסטלי עם תפר משי 6-0. קושרים באופן רופף תפר נוסף בקצה הפרוקסימלי של הכלי.
- בצע חתך ממש מתחת לקצה הקשור עם מספריים קפיציים והכנס קטטר 10 ס"מ. קדם את הקטטר עד שקצה הצנתר קרוב לכבד וקשר את שתי הקשירה היטב. אשר דגימה נכונה והדק את הקצה החופשי של הצנתר (איור 2D).
- שטפו את אזור הניתוח בתמיסת מלח. מכסים את המשטח בגזה סטרילית ספוגה במי מלח.
3. זלוף כבד
- המתת חסד של העכבר על ידי שימוש במנת יתר של חומרי הרדמה וכריתת בית החזה בהתאם להנחיות המוסדיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים, תוך הבטחה שכל ההליכים מבוצעים באופן שממזער את הסבל.
- הגדר את מערכת הזלוף בכבד, הכוללת מחמצן, מכשיר אפנון טמפרטורה, משאבת עירוי וצינורות עירוי, כפי שמוצג באיור 1.
- ספק זרימת גז רציפה של 95% חמצן ו-5% פחמן דו חמצני לחמצן.
- הפעל את אמבט המים וחמם את תא האיברים ל -37 מעלות צלזיוס.
- הכן את מאגר הזלוף KRBH עם ובלי אינסולין. יש להניח את מערכת הצינורות עם מאגר הזלוף המודגר באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
הערה: ה-KRBH נקי מ-BSA וגלוקוז. מאגר הזלוף KRBH ללא אינסולין אנושי מכיל 5.0 מילימול לליטר גלוקוז ו-0.25% BSA, בעוד שמאגר הזלוף KRBH עם אינסולין אנושי מכיל 5.0 מילימול לליטר גלוקוז, 0.25% BSA ו-4.0 ננוגרם/מ"ל אינסולין אנושי. - הנח את העכבר במיכל כאשר טמפרטורת הסביבה נשמרת על כ-37 מעלות צלזיוס. השתמש בכרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף על 37 מעלות צלזיוס.
- החדירו את מאגר ה-KRBH דרך צנתר וריד הפורטל. הגדר את קצב העירוי על 0.2 מ"ל/דקה באמצעות משאבה מיני.
- שימו לב שהכבד מחוויר תוך שניות, מה שמצביע על כך שמאגר הזלוף זורם דרך הכבד. כדי לשטוף יותר תאי דם שנותרו בכבד, השהה את העירוי למשך דקה אחת בנקודות הזמן של 4 דקות ו-8 דקות, והתחל את התזמון בתחילת הזלוף.
- החדרת הכבד עם מאגר KRBH למשך 10 דקות בסך הכל (לא כולל שתי הפסקות של דקה), המייצגות את תקופת שיווי המשקל. אסוף את דגימת הבסיס מצנתר הווריד הנבוב התחתון.
- יש לטפטף את הכבד באותה תמיסה מועשרת באינסולין (4.0 ננוגרם/מ"ל אינסולין אנושי) למשך 30 דקות נוספות.
- אסוף את כל הדגימות מצינור הווריד הנבוב התחתון כל 2 דקות.
- רשום את משקל הכבד לאחר הזלוף. אוספים דגימות כבד מאונות שונות, מקפיאים אותן מיד בחנקן נוזלי ואז מעבירים ל-80 מעלות צלזיוס לאחסון.
- כל הצנטריפוגות אספו דגימות זלוף ב-~1,000 x g למשך 10 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. אוספים את הסופרנטנטים ומעבירים אותם ל-80 מעלות צלזיוס לאחסון.
הערה: ריכוז האינסולין בדגימות זלוף נמדד באמצעות ערכות בדיקת אימונוסורבנט מקושר לאנזים אינסולין אנושי (ELISA). - לאחר ההליך, ודא שכל הפסולת הביולוגית מסולקת בהתאם לתקנות הבטיחות.
4. ניתוח נתונים
- הצג את הנתונים בגרפים XY המציגים את תפוקת ריכוז האינסולין לאורך זמן.
- חשב את שיעור פינוי האינסולין הממוצע בכבד (HICRAVE) באמצעות הנוסחה הבאה:
HICRAVE = (1−Cf/Ci) × 100%
כאשר Ci = ריכוז אינסולין ראשוני של מאגר העירוי, Cf = ריכוז האינסולין הממוצע הסופי ב-10 הדקות האחרונות מהווריד הנבוב התחתון העל-הפטי.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
פרוטוקול זה מתאר את ההליך לעירוי כבד לחישוב פינוי אינסולין בכבד ישירות. דגם זה אמין וניתן לשחזור. דוגמה לתוצאות שהתקבלו מניסוי מוצגת באיור 3. לאחר תקופת שיווי משקל של 10 דקות, מאגר KRBH בתוספת אינסולין אנושי של 4.0 ננוגרם/מ"ל הוזרם דרך וריד הפורטל למשך 30 דקות. נוזל הזלוף נאסף מהצנתר בווריד הנבוב התחתון העל-הפטי במרווחים של 2 דקות, ונמדד ריכוז האינסולין האנושי בנוזל הזלוף. התוצאות מוצגות כאן כממוצע ± SEM. דוגמה לניסוי זלוף כבד שמשווה עכברים בדיאטת ביקורת (CD) לעכברים בדיאטת עתירת שומן (HFD) ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שלבים קריטיים בפרוטוקול
יש לבצע את ההליכים הכירורגיים שתוארו לעיל בזהירות עדינה כדי למנוע היווצרות נגעים בכבד. יתר על כן, המבנה השברירי של דופן כלי הדם של וריד הכבד הופך אותו לפגיע לניקוב ולדימום שלאחר מכן אם לא מטפלים בו בזהירות במהלך הקנולציה. צינורות סיליקון רכים יותר משמשים בפרוטוקול זה כדי למזער את הנזק לכלי הדם. מומלץ לבצע צנתור על ידי מנתח מנוסה שצריך להתאמן בתדירות גבוהה כדי להגדיל את אחוזי ההצלחה של האינטובציה ולמזער את משך ההליך.
...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
לא הוכרזו ניגודי עניינים.
תודות
העבודה הזו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82200948, 82270921 82170882).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 60% דיאטה עתירת שומן | דיאטות מחקר, ארה"ב | D12492 | |
| ערכת בדיקת אלנין אמינוטרנספראז | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה | C009-2-1 | |
| גלוקוז נטול מים | סנגון ביוטק | 50-99-7 | 500 גרם |
| ערכת בדיקת אספרטט אמינוטרנספראז | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה | C010-2-1 | |
| סרום בקר אלבומין | GeminiBio | 700-107P | ללא חומצות שומן |
| TS מד גלוקוז בדם | Bayer | PH220800019 | |
| Contour TS רצועות בדיקת גלוקוז בדם | Bayer | DP38M3F05A | |
| Heparin נתרן | צ'אנגג'ואו צ'יאן הונג ביו-פארמה | H32022088 | 12500 U / 2 מ"ל |
| אינסולין אנושי | נובו נורדיסק | S20191007 | 300 U / 3 מ"ל |
| ערכת בדיקת חיסון אינסולין אנושי | Ezastest ביוטכנולוגיה | HM200 | |
| KRBH מאגר (סוכר, ללא BSA) | coolaber | SL65501 | 500 מ"ל |
| מחמצן ממברנה | שיאן שיג'ינג מכשיר רפואי | 5 | |
| מספריים מיקרוסקופיים | שנחאי Jinzhong | YBC020 | |
| מהדק מיקרו-serrefine | Ningbo מחט רפואית | 180709 | |
| מלקחיים מיקרו-כירורגיים | שנחאי Jinzhong | WA3010, WA3020 | |
| מסנן מסוג מחט | N-buliv | LG05-133-2 | |
| תמיסת פובידון-יוד | שנחאי likang חומר חיטוי היי-טק | 20231016J | |
| משאבה 11 מכשיר עלית | הרווארד | PC5 70-4500 | |
| Retractor | Globalebio (בייג'ינג) טכנולוגיה | GEKK-10 מ"מ | 10 מ"מ |
| צינורות סיליקון | סחורות מדעיות | #BB518-12 | 0.31 מ"מ ופעמים; 0.64 מ"מ |
| צינורות סיליקון | פישר מדעי | # 11-189-15A | מזהה 0.5 מ"מ |
| הזרקת נתרן | כלורי בקסטר | S2402023 | 4.5 גרם/500 מ"ל |
| תפר | משי כירורגייאנגג'ואו Huanyu ציוד רפואי | 6-0 | |
| אפנון טמפרטורה | שיאן שיג'ינג מכשיר רפואי | 6 | |
| אמבט מים תרמוסטטי | Jiaxing Junsi אלקטרוניקה | HIH-1 | 220 V 50 הרץ |
| תלת כיווני משותף | YISAI | AQTCY1.6 | מזהה 0.4 מ"מ |
| קסילזין הידרוכלוריד הזרקת | ShengXin | 20240106 | 200 מ"ג/2 מ"ל |
| Zoletil 50 | Virbac | WK001 | 250 מ"ג/5 מ"ל |
מקורות
- Najjar, S. M., Perdomo, G. Hepatic insulin clearance: Mechanism and physiology. Physiology (Bethesda). 34 (3), 198-215 (2019).
- Fu, Z., et al. Impaired insulin clearance as the initial regulator of obesity-associated hyperinsulinemia: Novel insight into the underlying mechanism based on serum bile acid profiles. Diabetes Care. 45 (2), 425-435 (2022).
- Koh, H. E., Cao, C., Mittendorfer, B. Insulin clearance in obesity and type 2 diabetes. Int J Mol Sci. 23 (2), 596(2022).
- Bril, F., et al. Relationship between disease severity, hyperinsulinemia, and impaired insulin clearance in patients with nonalcoholic steatohepatitis. Hepatology. 59 (6), 2178-2187 (2014).
- Herman, R., Sikonja, J., Jensterle, M., Janez, A., Dolzan, V. Insulin metabolism in polycystic ovary syndrome: Secretion, signaling, and clearance. Int J Mol Sci. 24 (4), 3140(2023).
- Najjar, S. M., Caprio, S., Gastaldelli, A. Insulin clearance in health and disease. Annu Rev Physiol. 85, 363-381 (2023).
- Polidori, D. C., Bergman, R. N., Chung, S. T., Sumner, A. E. Hepatic and extrahepatic insulin clearance are differentially regulated: Results from a novel model-based analysis of intravenous glucose tolerance data. Diabetes. 65 (6), 1556-1564 (2016).
- Castillo, M. J., Scheen, A. J., Letiexhe, M. R., Lefebvre, P. J. How to measure insulin clearance. Diabetes Metab Rev. 10 (2), 119-150 (1994).
- Rubenstein, A. H., Pottenger, L. A., Mako, M., Getz, G. S., Steiner, D. F. The metabolism of proinsulin and insulin by the liver. J Clin Invest. 51 (4), 912-921 (1972).
- Terris, S., Steiner, D. F. Binding and degradation of 125i-insulin by rat hepatocytes. J Biol Chem. 250 (21), 8389-8398 (1975).
- Ooms, H. A., Arnould, Y., Rosa, U., Pennisi, G. F., Franckson, J. R. Total metabolic clearance of crystalline insulin and radio-iodide substitued insulin. Pathol Biol. 16 (5), 241-245 (1968).
- Defronzo, R. A., Tobin, J. D., Andres, R. Glucose clamp technique: A method for quantifying insulin secretion and resistance. Am J Physiol. 237 (3), E214-E223 (1979).
- Asare-Bediako, I., et al. Assessment of hepatic insulin extraction from in vivo surrogate methods of insulin clearance measurement. Am J Physiol Endocrinol Metab. 315 (4), E605-E612 (2018).
- Kim, S. P., Ellmerer, M., Kirkman, E. L., Bergman, R. N. Beta-cell "rest" accompanies reduced first-pass hepatic insulin extraction in the insulin-resistant, fat-fed canine model. Am J Physiol Endocrinol Metab. 292 (6), E1581-E1589 (2007).
- Kotsis, T., et al. Insulin metabolism and assessment of hepatic insulin extraction during liver regeneration. A study in a rat model. J Invest Surg. 33 (1), 69-76 (2020).
- Mondon, C. E., Olefsky, J. M., Dolkas, C. B., Reaven, G. M. Removal of insulin by perfused rat liver: Effect of concentration. Metabolism. 24 (2), 153-160 (1975).
- Tamaki, M., et al. The diabetes-susceptible gene SLC30A8/ZnT8 regulates hepatic insulin clearance. J Clin Invest. 123 (10), 4513-4524 (2013).
- Ghadieh, H. E., Gastaldelli, A., Najjar, S. M. Role of insulin clearance in insulin action and metabolic diseases. Int J Mol Sci. 24 (8), 7156(2023).
- Winther-Sorensen, M., Kemp, I. M., Bisgaard, H. C., Holst, J. J., Wewer Albrechtsen, N. J. Hepatic glucose production, ureagenesis, and lipolysis quantified using the perfused mouse liver model. J Vis Exp. 200, e65596(2023).
- Rydell-Tormanen, K., Johnson, J. R. The applicability of mouse models to the study of human disease. Methods Mol Biol. 1940, 3-22 (2019).
- Zaidi, S., et al. Loss of ceacam1 in hepatocytes causes hepatic fibrosis. Eur J Clin Invest. 54 (7), e14177(2024).
- Piccinini, F., Bergman, R. N. The measurement of insulin clearance. Diabetes Care. 43 (9), 2296-2302 (2020).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
