הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל In Vitro לחקר התמיינות ושינויים של מולטי-אומיקה בתאי אפיתל של דרכי הנשימה של מורין המגורות באמצעות תמצית עשן סיגריות

2K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/67057

⸱

12 ביולי 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Immunology, School of Basic Medical Sciences, Capital Medical University, 2Department of Pulmonary and Critical Care Medicine, Center of Respiratory Medicine, China-Japan Friendship Hospital, 3National Center for Respiratory Medicine

במאמר זה

סיכום

במאמר זה אנו מתארים מודל במבחנה לבידוד והתמיינות של תאי אפיתל בדרכי הנשימה, תוך התמקדות בהתאקלמותם לתמצית עשן סיגריות כרונית (CSE). ניתן להשתמש במודל כדי לאפיין באופן מקיף את ההשפעה הרב-אומית של CSE, מה שעשוי לספק תובנות לגבי התגובות התאיות תחת חשיפה כרונית לעשן.

תקציר

מחלת ריאות חסימתית כרונית (COPD) מיוחסת במידה רבה לחשיפה לעשן טבק. חקירת האופן שבו תאי אפיתל בדרכי הנשימה מסתגלים באופן פונקציונלי לעשן טבק חיונית להבנת הפתוגנזה של COPD. המחקר הנוכחי נועד להקים מודל במבחנה המשתמש בתאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה כדי לחקות את ההשפעה בחיים האמיתיים של עשן טבק. שלא כמו קווי תאים מבוססים, תאים ראשוניים שומרים יותר על תכונות דמויות vivo, כולל דפוסי גדילה, הזדקנות והתמיינות. תאים אלה מפגינים תגובה דלקתית רגישה והתמיינות יעילה, ובכך מייצגים באופן הדוק מצבים פיזיולוגיים. במודל זה, תאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה של מורין גודלו בתרבית במשך 28 יום תחת ממשק אוויר-נוזל עם ריכוז אופטימלי של תמצית עשן סיגריות (CSE), מה שהוביל להפיכת שכבה אחת של תאים לא ממוינים לאפיתל עמודתי פסאודוסטרטי, המעיד על אקלום CSE. לאחר מכן יושמו ניתוחים מולטי-אומיים מקיפים כדי להבהיר את המנגנונים שבאמצעותם CSE משפיע על ההתמיינות של תאי דרכי הנשימה הבסיסיים. תובנות אלה מספקות הבנה עמוקה יותר של התהליכים התאיים העומדים בבסיס התקדמות COPD בתגובה לחשיפה לעשן טבק.

מבוא

מחלת ריאות חסימתית כרונית (COPD) היא מחלת ריאות הטרוגנית עם מאפיינים מורכבים, בעוד חולים עם COPD נוטים בהדרגה להיות צעיריםיותר 1. לעישון, גורם סיכון עיקרי ל- COPD2, יש השפעה עמוקה על תאי אפיתל בדרכי הנשימה, המשמשים כמחסום הראשוני מפני עשן טבק. למרות הקשר הידוע הזה, המנגנונים המפורטים שבאמצעותם עשן טבק גורם לשינויים בתאי אפיתל בדרכי הנשימה עדיין לא נחקרו כראוי. הבנה מעמיקה של שינויים מולקולריים אלה חיונית לזיהוי סמנים אבחוניים מוקדמים ומטרות טיפוליות ל- COPD.

כדי להתמודד עם הפער הזה, פיתחנו מודל חדשני במבחנה באמצעות תאי אפיתל של דרכי הנשימה. תאים אלה היו נתונים לגירוי ארוך טווח באמצעות תמצית עשן סיגריות (CSE), מה שאיפשר לנו לעקוב אחר שינויים תאיים דינמיים ולחקור את השינויים בתאי אפיתל בדרכי הנשימה תחת גירוי טבק ארוך טווח והמנגנון הבסיסי. במודל זה, Transwell שימש כדי לספק את ממשק אוויר-נוזל של תאי אפיתל דרכי הנשימה, ותמצית עשן סיגריות היה מגורה בשלב המוקדם של התמיינות תאי אפיתל עד סוף התמיינות לאחר 28 ימים. מחקרים קודמים בדקו רק התמיינות וגירוי לטווח קצר של תאי אפיתל בדרכי הנשימה (דומיננטיות קו התא). הם הוגבלו למסלול רגולטורי יחיד 3,4,5,6. עם זאת, הפרוטוקול המוצג כאן משתמש בתאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה של עכברים ומייעל את תהליך מיצוי התאים לפעילות תאים טובה יותר מאשר שיטות קודמות של תרבית תאי אפיתל בדרכי הנשימה. מודל זה מתמקד בשינויים בהתמיינות התא לצד אנליזות שעתוק מקיפות, פרוטאומיות, מטבוליות ואפיגנומיות. תוך שימוש באימונופלואורסנציה ובטכניקות מולטי-אומיקה מתקדמות, מטרתנו הייתה להבהיר את התגובות התאיות של תאי אפיתל בדרכי הנשימה לחשיפה כרונית לעשן טבק, ובכך לתרום להבנה עמוקה יותר של פתוגנזה של COPD. מודל זה יכול לשמש לחקר השינויים בדפוס התמיינות תאי אפיתל בדרכי הנשימה והמנגנון שלו הנגרם על ידי גירוי ארוך טווח של מזהמים שונים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הפרוטוקול הכולל דורש 44 ימים, כולל יום אחד להכנת תאי אפיתל בדרכי הנשימה שבודדו מקנה הנשימה של מורין, 15 יום להתרבות תאים, ו-28 ימים לגירוי CSE בממשק אוויר-נוזל. כל חיות הניסוי שוכנות בחדר בעלי החיים SPF Barrier של מרכז הניסויים בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית קפיטל ונבדקו ואושרו על ידי ועדת האתיקה לניסויים בבעלי חיים וחיות מעבדה של האוניברסיטה הרפואית קפיטל (AEEI-2020-100) כדי לעמוד בדרישות הנחיות ARRIVE7.

1. בידוד תאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה של מורין מקנה הנשימה של מורין

  1. הכנה
    1. הכן מדיום הרחבה מלא על ידי שילוב של 1 מ"ל של תוסף 50x ו- 0.05 מ"ל של מלאי הידרוקורטיזון עם מדיום בסיס הרחבה של 48.95 מ"ל. יש לאחסן בטמפרטורה של 4°C ולהשתמש תוך 4 שבועות.
    2. להמיס 7.5 מ"ג של פרוטאינאז ו 5 מ"ג של deoxyribonuclease I ב 5 מ"ל של F-12 של Ham כדי להכין פתרון proteinase. יש לסנן אותו כדי לעקר ולאחסן בטמפרטורה של 4°C ולהשתמש תוך 4 שבועות.
    3. הכינו תמיסות אנטיביוטיות על ידי הוספת 0.05 מ"ל של 100x פניצילין/סטרפטומיצין ו-0.01 מ"ל של 500x גנטמיצין/אמפוטריצין ל-5 מ"ל של תמיסת התפשטות מלאה, PBS ופרוטאינאז (100 U/mL פניצילין, 100 U/mL סטרפטומיצין, 10 מיקרוגרם/מ"ל גנטמיצין ו-0.25 מיקרוגרם/מ"ל אמפוטריצין B). יש לאחסן בטמפרטורה של 4°C ולהשתמש תוך 4 שבועות.
    4. לעקר מכשירי ניתוח ולהכין את ארון הבטיחות הביולוגי לבידוד תאים. במקביל, ודא שהציוד הסטנדרטי לתרביות תאים מוכן לשימוש.
    5. הכינו כלים מצופים קולגן בזנב חולדה על ידי הוספת קולגן זנב חולדה (100 מיקרוגרם/מ"ל ב-0.02 N חומצה אצטית) לצלחות תרבית בקוטר 100 מ"מ ולטרנסוולים בקוטר 24 מ"מ (0.05 מ"ל/ס"מ2). יש להשאיר פתוח למשך הלילה תחת אור UV לצורך עיקור.
  2. בידוד תאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה
    1. יש להשתמש בעכברי C57BL/6 (בני 6-8 שבועות, זכרים, בעלי SPF) לבידוד תאי אפיתל קנה הנשימה. המתת חסד עם מנת יתר של תמיסת נתרן פנטוברביטלית 1% (כ-200 מ"ג/ק"ג). השתמש בחמישה עכברים לתפוקת תאים מספקת.
    2. לעקר את העכבר על ידי טבילה בתמיסת אתנול 75%, לא לטבול את האף והפה באלכוהול כדי למנוע אלכוהול לזרום לתוך קנה הנשימה.
    3. נתח את העכבר.
      1. השתמש להבים כירורגיים ומלקחיים, קבוצה אחת של מכשירים לחיתוך ופתיחת האפידרמיס מהלסת התחתונה לחלל הבטן של העכבר.
      2. השתמש קבוצה נוספת של כלי ניתוח כדי לקרוע את בלוטות התריס משני הצדדים ולהסיר את הקשרים בין קנה הנשימה, רקמת השריר שמסביב, ואת הוושט.
      3. לאחר מכן, בזהירות לחתוך לתוך החזה, להשתמש מלקחיים להתעמק לתוך חלל החזה, להוציא את הריאה כולה, ולמצוא את קצה קנה הנשימה.
    4. לעבד את קנה הנשימה.
      1. חותכים את קנה הנשימה מסחוס בלוטת התריס לענף קנה הנשימה-סימפונות ומכניסים אותו למדיום הרחבה טרום קר המכיל ארבע אנטיביוטיקה.
      2. נער את הצינור כדי לשטוף כמה שיותר דם מפני השטח של קנה הנשימה, לשמור אותו על קרח, ולאחר מכן להתחיל את הניתוח עבור העכבר הבא.
    5. העבירו את כל קנה הנשימה שנאספו למאגר PBS טרום קר המכיל ארבע תרופות אנטיביוטיות (200 U/mL פניצילין, 200 U/mL סטרפטומיצין, 20 מיקרוגרם/מ"ל גנטמיצין ו-0.5 מיקרוגרם/מ"ל אמפוטריצין B) לטיפול מקדים לפני העיכול.
    6. השתמש קבוצה של כלי ניתוח כדי להסיר קרישי דם ורקמות אחרות מן פני השטח של קנה הנשימה, ולאחר מכן לחתוך אותם לתוך 1 ס"מ2 גודל.
    7. לדגור על רקמת קנה הנשימה בתמיסת פרוטאינאז בטמפרטורה של 37°C למשך 40 דקות.
    8. לאחר 40 דקות, נענעו את הצינור מספר פעמים והשתמשו במסננת תאים של 40 מיקרומטר כדי להסיר את הרקמות הנותרות. שוטפים את קנה הנשימה הקצוץ על מסננת עם 5 מ"ל של תווך הרחבה, צנטריפוגות את תרחיף התא ב 400 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C, ומשליכים את supernatant.
    9. להשעות מחדש את התאים המתקבלים ב 8 מ"ל של מדיום הרחבה.
    10. ספור את התאים קיימא באמצעות כחול טריפאן המוציטומטר.
    11. תרחיף תאי צלחת P0 על צלחות 100 מ"מ (1 x 104 תאים חיים / ס"מ2) מצופה מראש בקולגן זנב חולדה, ותרבית את התאים באינקובטור ב 37 ° C, 5% CO2.

2. תרבית הרחבה ומעבר של תאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה

  1. החלף את המדיום עבור תרבית תאי P0 כל 3 ימים עד שהתאים מגיעים למפגש של 70%-80%, בדרך כלל תוך 6 ימים. בנקודה זו, תאי אפיתל קנה הנשימה יכולים ליצור שכבה חד-שכבתית שלמה עם מראה מרוצף אבן (איור 1A-D).
  2. חימום מראש של נפחים מספיקים של PBS, מדיום הרחבה מלא וערכת דיסוציאציה של תאים ללא רכיבים מן החי (ACF) ל-37°C.
  3. לשטוף בעדינות את התאים עם 3 מ"ל של PBS.
  4. בצע דיסוציאציה אנזימטית.
    1. הוסיפו 3 מ"ל של תמיסת דיסוציאציה אנזימטית ACF לצלחת ודגרו בטמפרטורה של 37°C למשך 5 דקות. לאחר הפיפט, יש לעקור את התאים בעדינות ולהעביר את תרחיף התא ל-3 מ"ל של תמיסת עיכוב אנזים ACF.
    2. חזור על תוספת של 3 מ"ל של תמיסת דיסוציאציה אנזימטית ACF ודגור שוב במשך 5 דקות כדי להבטיח ניתוק תאים מרבי.
  5. סובב את מתלה התא ב 400 x גרם במשך 5 דקות ב 4 ° C. השליכו את הסופרנטנט.
  6. להשעות את התאים ב 1 מ"ל של מדיום הרחבה.
  7. ספור את התאים קיימא באמצעות כחול טריפאן המוציטומטר.
  8. לוח P1 תרחיף תאים על מספר צלחות 100 מ"מ (5 x 104 תאים חיים / ס"מ2) מצופה מראש בקולגן זנב חולדה, ותרבית את התאים באינקובטור ב 37 ° C, 5% CO2.

3. התמיינות וגירוי CSE של תאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה בממשק אוויר-נוזל

  1. אשר את סוג התא.
    1. אמת את מקור האפיתל של תאים מבודדים באמצעות בדיקת immunofluorescence (IFA) עם נוגדנים נגד cytokeratins. תאי זרעים על שקופיות זכוכית המצופים בקולגן זנב חולדה ומשתמשים בפרפורמלדהיד כדי לקבע אותם לפחות 12 שעות לאחר שהתאים מגיעים למפגש של 80%.
    2. שטפו שקופיות 3 פעמים עם תמיסת PBS למשך 5 דקות ודגרו עליהן עם 3% BSA ו-0.1% טריטון X-100 בתמיסת PBS בטמפרטורת החדר (RT) למשך שעה אחת.
    3. יש לדגור על מגלשות לילה בטמפרטורה של 4°C עם נוגדן מסחרי נגד פאן ציטוקרטין בדילול של 1:500.
    4. למחרת, שטפו מחליקים 3 פעמים עם תמיסת PBS למשך 5 דקות ודגרו עליהם עם חיץ נוגדנים משני בדילול של 1:1000 ב- RT למשך שעתיים בחושך.
    5. לאחר הדגירה, יש לשטוף את המגלשות 3 פעמים עם PBS (5 דקות לכל כביסה), ולהוסיף להן DAPI בדילול של 1:1000. לאחר הדגירה ב-RT במשך 15 דקות, שטפו את המגלשות פעם אחת עם PBS למשך 5 דקות.
    6. צפו בשקופיות תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי והשוו דפוסי ביטוי לבקרה חיובית (קו תאים A549) ולבקרה שלילית (קו תאים Raw264.7) (איור 2).
  2. זרעו את התאים להתמיינות.
    1. נתק וצנטריפוגה תאי P2 כפי שתואר קודם לכן, והשהה מחדש את כדורית התא בנפח מתאים של אמצעי התפשטות כדי להקל על ציפוי של 1 x 104 תאים חיים / ס"מ2.
    2. פיפטה 1 מ"ל של תרחיף התא על התא האפי של קרום פוליקרבונט transwell להחדיר. לתא הבסיסי של הטרנסוול, הוסף 1.5 מ"ל של אמצעי התפשטות.
  3. יש לדגור על התאים בטמפרטורה של 37°C ולשנות באופן מלא את כל התווך בתאי הבסיס והאפיק כל 3 ימים באמצעות מדיום התפשטות עד למפגש ביניהם. פעולה זו נמשכת בדרך כלל 3-6 ימים.
  4. הכינו 50 מ"ל של מדיום בידול מלא על ידי הוספת 5 מ"ל של תוסף ALI 10x, 500 מיקרוליטר של תוסף תחזוקה ALI, 100 מיקרוליטר של תמיסת הפרין ו-250 מיקרוליטר של תמיסת מלאי הידרוקורטיזון ל-44.15 מ"ל של מדיום בסיסי ALI.
  5. הכינו CSE.
    1. מבעבעים סיגריה אחת דרך 12.5 מ"ל של מדיום בידול ולאחר מכן מסננים אותה דרך מסנן נקבוביות 0.22 מיקרומטר כדי להכין CSE. כדי להבטיח סטנדרטיזציה בין ניסויים ואצוות של CSE, למדוד את הספיגה ב 320 ננומטר על ספקטרופוטומטר ולהגדיר צפיפות אופטית (OD) של 1 כמו 100%8.
  6. השתמש במדיום התמיינות המכיל ריכוז מתאים של CSE כדי לעורר תאי אפיתל ראשוניים של דרכי הנשימה כדי לזהות השפעות על התמיינות התאים.
  7. לאפשר לתאים להתמיין במשך 28 ימים, שבמהלכם משתנה המדיה התאית הבסיסית, והצד האפי נשטף פעמיים בשבוע על ידי הסרת המדיה התאית האפיקלית והחלפת המדיה התאית הבסיסית במדיום ההתמיינות המכיל את הריכוז המתאים של CSE.
  8. נתח את התאים לאחר החשיפה.
    1. לאחר חשיפה למדיום התמיינות המכיל CSE, יש לקצור את התאים ואת הסופרנאטנטים של התרבית בכל נקודת זמן (כלומר, 0-28 ימים) לגילוי שינויים מורפולוגיים (כלומר, בדיקת אימונופלואורסנציה (IFA) או צביעת המטוקסילין-אאוסין (HE) או עבור הליכים אנליטיים ביואינפורמטיים (כלומר, תעתוק, פרוטאומיקה, מטבולומיקה וכו ').

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בידול
תאי אפיתל של דרכי הנשימה התמינו בהצלחה לאחר תרבית בממשק אוויר-נוזל עם מדיום התמיינות במשך 28 ימים. נוכחותם של תאי ריסון וגביע הודגמה על ידי בדיקת אימונופלואורסנציה של סמן ריסונים אצטילאט α-טובולין (ירוק; איור 3A) וסמן תא הגביע Mucin5AC, בהתאמה6 (אדום; איור 3B).

קביעת ריכוז CSE להתמיינות תאים
לעורר את תאי אפיתל מבודדים עם ריכוזים שונים של CSE במשך 24 שעות. התוצאות הראו כי יכולת הקיום של תאי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

COPD היא מחלה דלקתית כרונית נפוצה בדרכי הנשימה. חשיפה לעשן טבק מובילה לדלקת כרונית בדרכי הנשימה, לעיצוב מחדש של דרכי הנשימה ולהרס מבני של הריאות, שהוא תוצאה של אינטראקציה בין תאים מבניים שונים לבין תאי מערכת החיסון10. כקו הקדמי של מערכת החיסון המולדת בריאה, תאי אפיתל בדרכי הנשימה ממלאים תפקיד חשוב מאוד במהלך התפתחות המחלה11. מנקודת מבט זו, הבהרת האופן שבו תאי אפיתל משתנים ומווסתים את התאים במורד הזרם תחת גירוי של חומרים מזיקים היא בעיה מדעית שיש לפתור בדחיפות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82090013).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תמיסת פניצילין/סטרפטומיצין 100xGibco15140122
24 מ"מ Transwell עם 0.4 ומיקרו; m נקבוביות פוליאסטר קרום מוסיףBIOFILTCS016012
40 ומיקרו; מסננת תאיםm Falcon352340
500x Gentamicin/Amphotericin SolutionGibcoR01510
אצטילציה α-טובוליןCST#5335
אצטיל-ואלפא;-טובולין (Lys40) (D20G3)XP ארנב mAb cellsignal#5335
ערכת דיסוציאציה של תאים חופשיים מרכיבים מן החיתא גזע05426
נוגדן ציטוקרטין נגד פאןabcamab7753
סיגריהמרלבורו
קלאודין3אימונווייYT0949
דאוקסיריבונוקלאז I מלבלב בקרסיגמא-אולדריץ'DN25
דאוקסיריבונוקלאז I מלבלב בקרסיגמאDN25
חזיר' s F-12Sigma-AldrichN6658
Heparin Solution Stemcell07980
Hydrocortisone Stock SolutionStemcell 07925
Mucin 5ACabcamab212636
Occludinproteintech27260-1-AP
PBSCytosciCBS004S-BR500
תמיסת פניצילין-סטרפטומיציןGibco15140122
PneumaCult-ALI
תאי גזע בינוניים בזאליים		05002 
PneumaCult-ALI 10x תוסףתאי גזע05003 
PneumaCult-ALI תוסף תחזוקהתא גזע05006
PneumaCult-Ex Plus 50x תוסףגזע תא גזע05042
PneumaCult-Ex Plusתאי גזע בינוניים בסיסיים05041
Pronase ESigma-AldrichP5147
קולגן זנב עכברושקורנינג354236
טריפן כחולתא גזע07050 
, סטרילי

מקורות

  1. Ritchie, A. I., Martinez, F. J. The challenges of defining early chronic obstructive pulmonary disease in the general population. Am J Respir Crit Care Med. 203 (10), 1209-1210 (2021).
  2. Caramori, G., Kirkham, P., Barczyk, A., Di Stefano, A., Adcock, I. Molecular pathogenesis of cigarette smoking-induced stable COPD. Ann N Y Acad Sci. 1340, 55-64 (2015).
  3. Leino, M. S., et al. Barrier disrupting effects of alternaria alternata extract on bronchial epithelium from asthmatic donors. PLoS One. 8 (8), e71278(2013).
  4. Benediktsdóttir, B. E., Arason, A. J., Halldórsson, S., Gudjónsson, T., Másson, M., Baldursson, Ó Drug delivery characteristics of the progenitor bronchial epithelial cell line VA10. Pharm Res. 30 (3), 781-791 (2013).
  5. Walters, M. S., et al. Generation of a human airway epithelium derived basal cell line with multipotent differentiation capacity. Respir Res. 14 (1), 135(2013).
  6. Prytherch, Z., Job, C., Marshall, H., Oreffo, V., Foster, M., BéruBé, K. Tissue-specific stem cell differentiation in an in vitro airway model. Macromol Biosc. 11 (11), 1467-1477 (2011).
  7. Kilkenny, C., Browne, W., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Animal research: Reporting in vivo experiments: The ARRIVE guidelines. Br J Pharmacol. 160 (7), 1577-1579 (2010).
  8. Brekman, A., Walters, M. S., Tilley, A. E., Crystal, R. G. FOXJ1 prevents cilia growth inhibition by cigarette smoke in human airway epithelium in vitro. Am J Respir Cell Mol Biol. 51 (5), 688-700 (2014).
  9. Bajic, M., Maher, K. A., Deal, R. B. Identification of open chromatin regions in plant genomes using ATAC-seq. Methods Mol Biol. 1675, 183-201 (2018).
  10. Shaykhiev, R., Crystal, R. G. Early events in the pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease. Smoking-induced reprogramming of airway epithelial basal progenitor cells. Ann Am Thorac Soc. 11, Suppl 5 (Suppl 5) S252-S258 (2014).
  11. Raby, K. L., Michaeloudes, C., Tonkin, J., Chung, K. F., Bhavsar, P. K. Mechanisms of airway epithelial injury and abnormal repair in asthma and COPD. Front Immunol. 14, 1201658(2023).
  12. Zhou, J. -S., et al. Cigarette smoke-initiated autoimmunity facilitates sensitisation to elastin-induced COPD-like pathologies in mice. Eur Respir J. 56 (3), 2000404(2020).
  13. Lam, H. C., Choi, A. M. K., Ryter, S. W. Isolation of mouse respiratory epithelial cells and exposure to experimental cigarette smoke at air-liquid interface. J Vis Exp. (48), e2513(2011).
  14. You, Y., Brody, S. L. Culture and differentiation of mouse tracheal epithelial cells. Methods Mol Biol. 945, 123-143 (2012).
  15. Wandalsen, G. F., Lanza, F. deC., Nogueira, M. C. P., Solé, D. Efficacy and safety of chloral hydrate sedation in infants for pulmonary function tests. Rev Paul Pediatr. 34 (4), 408-411 (2016).
  16. Jiang, D., Schaefer, N., Chu, H. W. Air-liquid interface culture of human and mouse airway epithelial cells. Methods Mol Biol. 1809, 91-109 (2018).
  17. Takagi, R., et al. How to prevent contamination with Candida albicans during the fabrication of transplantable oral mucosal epithelial cell sheets. Regen Ther. 1, 1-4 (2015).
  18. Culp, D. J., Latchney, L. R. Mucinlike glycoproteins from cat tracheal gland cells in primary culture. Am J Physiol. 265 (3), Pt 1 L260-L269 (1993).
  19. Cao, X., et al. Invited review: human air-liquid-interface organotypic airway tissue models derived from primary tracheobronchial epithelial cells-overview and perspectives. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 57 (2), 104-132 (2021).
  20. Bebök, Z., Tousson, A., Schwiebert, L. M., Venglarik, C. J. Improved oxygenation promotes CFTR maturation and trafficking in MDCK monolayers. Am J Physiol Cell Physiol. 280 (1), C135-C145 (2001).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

תאי דרכי נשימה של עכבריםממשק אוויר-נוזלובידול תאיםאנליזת מולטי-אומיקסחשיפה כרונית לעשןבדיקת אימונופלואורסצנציהפתוגנזה של COPD
מודל In Vitro לחקר התמיינות ושינויים של מולטי-אומיקה בתאי אפיתל של דרכי הנשימה של מורין המגורות באמצעות תמצית עשן סיגריות
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.