הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מודל מתח חברתי משולב מרובה להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות

1.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/67117

⸱

15 ביולי 2025

 ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical University, 2Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Application Technology, Xuzhou Medical University, 3NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Narcotic and Psychotropic Drugs, Xuzhou Medical University

במאמר זה

סיכום

על ידי שילוב ארבעה גורמי לחץ חברתיים יומיומיים, המחקר הנוכחי מתאר מודל לחץ חברתי משולב מרובה (MISS) להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות. לאחר עשרה ימים של חשיפה חוזרת ונשנית ל-MISS, העכברים פיתחו פנוטיפים דמויי דיכאון וחרדה, ובכך סיפקו מודל טבעי מבוסס אטיולוגיה לחקר הפרעות פסיכיאטריות אצל נבדקים.

תקציר

למרות שנשים מהוות את רוב האנשים הסובלים מהפרעות פסיכיאטריות, מחקרים פרה-קליניים התמקדו כמעט אך ורק בנבדקים גברים, בין היתר בשל היעדר פרדיגמות אידיאליות של בעלי חיים נשיים. פיתוח מודלים יעילים לחקר הפרעות פסיכיאטריות אצל נקבות חיות נותר אתגר מדעי ארוך שנים במדעי החיים. לאחרונה הוקם "מודל מתח חברתי משולב מרובה (MISS)" בעכברי C57BL/6J על ידי הדמיה ושילוב גורמי סיכון חברתיים התורמים להתפתחות הפרעות פסיכיאטריות. כדי לבסס את פרדיגמת ה-MISS הזו, נקבות עכברי C57BL/6J נחשפו באופן אקראי מדי יום, במשך עשרה ימים רצופים, לרצף של גורמי לחץ: כישלון תחרות חברתית במבחן המבחנה, מתח תבוסה חברתית עקיפה שונה, לחץ צפיפות בלתי נמנע ובידוד חברתי לאחר מכן. בהשוואה לעכברים נאיביים, עכברים שנחשפו ל-MISS הפגינו פנוטיפים דמויי דיכאון וחרדה, כפי שנמדד על ידי העדפת סוכרוז, מתלי זנב, שדה פתוח ומבחני מבוך מוגבהים פלוס. פרדיגמה זו מציעה כלי רב ערך לחקירת המנגנונים הנוירוביולוגיים העומדים בבסיס דיכאון וחרדה אצל נשים, במיוחד אלה עם אטיולוגיה מעורפלת וסימפטומטולוגיה מורכבת.

מבוא

מאות מיליוני אנשים חיים עם הפרעות פסיכיאטריות, כאשר הפרעות חרדה ודיכאון הן הנפוצות ביותר. על פי ארגון הבריאות העולמי, יותר מ -280 מיליון ו -301 מיליון אנשים ברחבי העולם חיו עם דיכאון וחרדה, בהתאמה, בשנת 20191. בשל מגיפת COVID-19, מספר האנשים שנפגעו מהפרעות חרדה ודיכאון גדל משמעותית - ב-26% ו-28%, בהתאמה - תוך שנה אחת בלבד. בקרב הנפגעים, השכיחות לכל החיים של הפרעות פסיכיאטריות בנשים גבוהה כמעט פי שניים מאשר אצל גברים2, כאשר נשים מציגות תסמינים חמורים יותר, ליקוי תפקודי גדול יותר, פנוטיפים דיכאוניים לא טיפוסיים, הישנות תכופות יותר והיענות נמוכה יותר לתרופות 3,4,5.

למרות שהבדלים בין המינים בהיבטים רבים של הפרעות פסיכיאטריות מתועדים היטב 6,7,8, רוב המחקר הפרה-קליני התמקד בעיקר בנבדקים גברים, בעיקר בשל היעדר מודלים מתאימים של בעלי חיים נקביים 9,10. כתוצאה מכך, הפתוגנזה של הפרעות אלה אצל נשים נותרה לא מובנת היטב. זה מדגיש את הצורך הדחוף בפיתוח מודלים של בעלי חיים הכוללים נבדקים נקבות, שיקלו על חקירת המנגנונים הנוירוביולוגיים העומדים בבסיס הפרעות פסיכיאטריות אצל נקבות.

מספר הולך וגדל של מודלים של לחץ חברתי עבור עכברים נקבות פותחו בהתבסס על פרדיגמת לחץ תבוסה חברתית חוזרת (RSDS) 11,12,13,14. לדוגמה, שני מודלים של RSDS שהוקמו לאחרונה בעכברים נקבות כללו שיפור מלאכותי של תוקפנות זכרית באמצעות יישום שתן זכרי על עכברים נקבות והפעלה כימוגנטית של תת-החלוקה הגחונית של ההיפותלמוס הגחוני בתוקפים זכרים 11,12,13. עם זאת, נטען כי התנהגויות תוקפניות אלה אינן מתרחשות באופן טבעי ועשויות שלא לייצג גורמי לחץ רלוונטיים עבור עכברים נקבות10. בנוסף, הריון הנובע מהתנהגות גוברת מסבך מחקרים מכניסטיים עוקבים.

מודל מותאם נוסף המבוסס על RSDS הוא פרדיגמת הלחץ של תבוסה חברתית עקיפה, שבה עכברים נקבות עדות חזותית לתבוסה חברתית בין-זכרית12. פרוטוקולי תבוסה חברתית של נקבה-נקבה פותחו גם בזני מכרסמים שונים 14,15,16. למרות חששות מסוימים, נראה כי גורמי הלחץ החברתיים המשמשים בשני המודלים האחרונים רלוונטיים יותר מבחינה אטיולוגית להפרעות פסיכיאטריות אנושיות14. מודל דיכאון אידיאלי דורש תוקף קונסטרוקטיבי (אטיולוגי), כלומר השיטות מעוררות הלחץ המשמשות במודל חייבות לשקף מקרוב את הגורמים האמיתיים להפרעה.

מאמינים שהאטיולוגיה של הפרעות פסיכיאטריות היא רב-גורמית, המערבת גורמים ביולוגיים, גנטיים, סביבתיים ופסיכו-סוציאליים. מניפולציה של גורמי סיכון אלה בחיות מעבדה חיונית לפיתוח מודלים רלוונטיים למחקר מכניסטי וסינון תרופות. מודלים חברתיים ולא חברתיים של בעלי חיים המדמים גורם לחץ אחד או יותר יכולים לשכפל תסמיני ליבה ושינויים נוירוביולוגיים הקשורים להפרעות פסיכיאטריות אנושיות. לדוגמה, מודל הלחץ הקל הכרוני (CMS) גורם לפנוטיפים התנהגותיים נוירופתולוגיים ודמויי דיכאון יציבים ויעילים על ידי שילובים מתחלפים באופן אקראי של גורמי לחץ פיזיים מרובים (למשל, מצעים רטובים, מתלי זנב, הידוק זנב, צום)17,18,19,20,21,22,23. ממצאים אלה מצביעים על כך שמודלים חוזרים ונשנים של גורמי סיכון מרובים הם אסטרטגיה בת קיימא לבניית פרדיגמות לחקר הפרעות פסיכיאטריות. מודל לחץ תבוסה חברתית כרונית (CSDS) הוא אחת הפרדיגמות הנפוצות ביותר לדיכאון המדמה גורמי לחץ חברתיים 24,25,26. למרות שמודל זה מוגבל לחיקוי סוג אחד של גורם לחץ, הרלוונטיות האטיולוגית שלו הובילה להתקדמות משמעותית במחקר התרגומי. לדוגמה, מחקרים מבוססי CSDS זיהו תעלות אשלגן (K+) על נוירונים דופמינרגיים באזור הגחון כמטרות מפתח המתווכות עמידות לדיכאון, והדגישו פותחי תעלות K+ מסוג KCNQ - כגון רטיגבין (אזוגבין) - כמועמדים נוגדי דיכאון מבטיחים הן בעכברים דמויי דיכאון והן בחולים עם דיכאון 27,28,29,30,31. כתוצאה מכך, מספר מחקרים מכוננים ניסו לשנות את פרדיגמת CSDS כדי להדגים דיכאון נשי על ידי גרימת תוקפנות מכוונת נשית11,12. הראיות לעיל תומכות ברעיון ששילוב גורמי לחץ חברתיים מרובים עם חשיפה חוזרת מייצג כיוון חשוב לפיתוח מודלים פסיכיאטריים בבעלי חיים נקבות.

בעכברי C57BL/6J נקבות, פותחה לאחרונה פרדיגמת מתח חברתי משולב מרובה (MISS) של 10 ימים כדי להדגים הפרעות פסיכיאטריות, והדגימה תוקף אטיולוגי, פנים, מבנה וחיזוי אמינים32. כדי לבסס את מודל ה-MISS, נקבות עכברי C57BL/6J נחשפו באופן אקראי מדי יום במשך 10 ימים רצופים לארבעה גורמי לחץ עוקבים: כישלון בתחרות חברתית (בדיקת צינורית), מתח תבוסה חברתית עקיפה שונה, מתח צפיפות בלתי נמנע ובידוד חברתי לאחר מכן32. מחקר זה מספק פרוטוקול מפורט למידול פרדיגמת ה-MISS.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הליכי הניסוי אושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית שוז'ו (אישור מס' 202207S127) ונערכו בהתאם להנחיות המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. עכברים נקבות C57BL/6J (בני 7-8 שבועות לעכברי נבדק; בני 10-14 שבועות למועמדים לזכייה), עכברים זכרים C57BL/6J (בני 7-8 שבועות לבדיקת CD1 אגרסיבית) ועכברי מגדלים בדימוס CD1 ששימשו בניסויים אלה התקבלו ממקור מסחרי. כל העכברים שוכנו במחזור אור/חושך של 12 שעות עם מזון ומים שסופקו עד גיל33. מדידות התנהגותיות בסיסיות נלקחו - אם כי לא בהכרח עבור כל קבוצה - לפני תחילת פרדיגמת ה-MISS, כדי להבטיח שהתוצאות ההתנהגותיות הבאות מיוחסות לחשיפה ללחץ ולא לשונות אינדיבידואלית. סקירה כללית של הפרוטוקול המלא מוצגת באיור 1, ומערכי הניסוי שהושלמו מוצגים באיור 2. פרטים על הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מסופקים בטבלת החומרים.

1. התרגלות

  1. התרגלות לסביבה
    1. ייעד חדר נפרד אך ורק לפרוטוקול MISS, תוך שמירה על טמפרטורה קבועה (23 מעלות צלזיוס ± 2 מעלות צלזיוס), לחות (50%-60%) ועוצמת אור (15-20 לוקס) במחזור אור-חושך של 12 שעות.
      הערה: אלא אם צוין אחרת, עכברי בית בחדר זה לאורך כל תקופת הדוגמנות.
    2. הכן כלובי עכבר סטנדרטיים (אורך × רוחב × גובה: 37 ס"מ × 16 ס"מ × 12 ס"מ) עם מכסי חוטי פלדה ומצעי קלחי תירס.
    3. השתמש בעכברים נקבות C57BL/6J בגילאי 7-8 שבועות כעכברים נבדקים. הקצו את העכברים באופן אקראי לקבוצות נאיביות ו-MISS, ושיכנו אותם בחמישה עכברים בכל כלוב.
      הערה: בחר עכברים נקבות עם גיל ומשקל גוף דומים לניסוי.
    4. השתמש בעכברים נקבות C57BL/6J בגילאי 10-14 שבועות כמועמדות לסינון מנצח30. אכלס את העכברים הללו בקבוצות של ארבעה בכל כלוב כדי לבסס מעמדות חברתיים יציבים.
    5. השתמש בעכברי מגדל CD1 זכרים בדימוס כמועמדים תוקפניים. בית עכברי CD1 בנפרד כדי לבסס טריטוריאליות ולמנוע לחימה. השתמש בעכברים זכרים C57BL/6J שגודלו בקבוצה (5 עכברים בכלוב, בגילאי 7-8 שבועות) כפולשים לבדיקת CD1 אגרסיבית.
    6. אפשרו לכל העכברים להתרגל ולהתאושש מלחץ הובלה במשך 7 ימים לאחר הרכישה (איור 1A1).
    7. אכלס את כל העכברים עם מזון ומים זמינים אד ליביטום.
  2. התרגלות לצינורות וטיפול
    1. הניחו צינור אקרילי קצר (איור 2A; אורך 10 ס"מ, קוטר פנימי של 26 מ"מ) בכל כלוב של עכברי נבדק ומועמדים מנצחים. אפשר לעכברים להתאקלם לצינורות וללמוד לעבור דרכם במשך 3 ימים.
      הערה: קוטר הצינור צריך להספיק בדיוק כדי לאפשר לעכבר בוגר אחד לעבור בצורה חלקה מבלי להסתובב.
    2. טפלו בעכברים נקבות ובמועמדים לזכייה במשך 1-2 דקות ביום במשך 3 ימים כדי להפחית את הסטרס שקשור לנסיינים לא מוכרים (איור 1A2).
    3. בתום תקופת ההתרגלות, סמנו את זנבו של כל עכבר בטוש אדום או שחור על בסיס שמן.
      הערה: בדוק את הסימונים באופן קבוע והחל מחדש במידת הצורך.

2. הכשרה לתחרות צינורות, סינון מנצחים וסינון תוקפן CD1

  1. אימונים לתחרות צינורות
    הערה: לפרטים על הליך זה, עיין בדוחות קודמים 32,34.
    1. הכינו עכברי נושא נקבות, מועמדות מנצחות, צינורות אקריליק שקופים (איור 2B; אורך 30 ס"מ, קוטר פנימי 26 מ"מ), מקלות פלסטיק, 75% אתנול ומגבות נייר. נקו את השולחן, הצינורות ומקלות הפלסטיק עם 75% אתנול כדי למנוע סימני ריח.
    2. אחוז בעדינות בזנב של כל עכבר נושא או מועמד מנצח והנח את העכבר על השולחן. אפשר לו לחקור בחופשיות במשך כדקה אחת לצורך התאקלמות סביבתית.
    3. החזק את העכבר בזנב והנח אותו בקצה אחד של הצינור.
      הערה: ודא שראש העכבר פונה לקצה הצינור, כאשר כפות רגליו הקדמיות נוגעות בשולחן, כדי למזער את הלחץ ולהקל על הכניסה.
    4. שחרר את הזנב ברגע שהעכבר נכנס לצינור ואפשר לו לעבור מרצון.
      הערה: השתמש במקל פלסטיק כדי לגעת בעדינות בזנב אם העכבר עוצר או מנסה לנסוע לאחור.
    5. הנח את העכבר בקצה הנגדי של הצינור וחזור על שלב 2.1.4. ספור את השלבים 2.1.3 - 2.1.5 כמחזור אחד.
    6. חזור על שלבים 2.1.3 ו-2.1.5 עבור שני מחזורים (איור 1B1).
    7. החזר את העכבר לכלוב הביתי שלו. נקה את הצינור עם 75% אתנול כדי להסיר ריחות, שתן וצואה.
      הערה: ודא שהצינור נקי, יבש וללא שאריות ריח אלכוהול לפני השימוש עם העכבר הבא.
    8. חזור על שלבים 2.1.2-2.1.7 עבור כל העכברים הנקבות במשך 3 ימים רצופים, וודא שכל עכבר יתרגל לעבור דרך הצינור.
  2. הקרנת הזוכים
    הערה: לפרטים על הליך זה, עיין בדוחות קודמים 32,34.
    1. הכינו מועמדות מנצחות, צינורות (30 ס"מ אורך, 26 מ"מ קוטר פנימי), מקלות פלסטיק, 75% אתנול, מגבות נייר וטיימר. נקה וייבש את הציוד כדי למזער אותות ריח.
    2. לפני ההקרנה, אמן מחדש כל עכבר לעבור דרך הצינור למשך מחזור אחד. צייר קו אמצעי גלוי על הצינור.
    3. החזיקו את שני העכברים בזנבותיהם והניחו אותם בקצוות מנוגדים של הצינור. אפשרו להם להיכנס ולהיפגש בנקודת האמצע, ואז שחררו אותם בו זמנית והפעילו את הטיימר.
      הערה: השתמש בעכברים מאותו כלוב לכל תחרות.
    4. זהה את ה"מנצח" כעכבר שדוחף את השני החוצה מהצינור; להעניק לו נקודה אחת. ה"מפסיד" מקבל 0 נקודות.
      הערה: השתמש במקל פלסטיק כדי למנוע מהמנצח לסגת. אם שני העכברים קופאים ולא נסוגים תוך דקה אחת, גע בעדינות בזנב של כל עכבר עם מקלות פלסטיק כדי להניע פעולה.
    5. הפכו את עמדות ההתחלה של העכברים וחזרו על שלבים 2.2.3-2.2.4, והשיגו שוב את התוצאה (איור 1B2).
    6. החזירו את שני העכברים לכלוב הביתי שלהם ונקו את הצינור ביסודיות עם 75% אתנול.
    7. השתמש בתבנית סיבוב כדי להתאים כל עכבר לכל שאר חברי הכלוב, וחזור על שלבים 2.2.3-2.2.5 עבור כל זוג.
      הערה: גישה זו מבטיחה דירוג מקיף והוגן.
    8. דרג עכברים על סמך הציונים הכוללים. בחר את העכבר בעל הניקוד הגבוה ביותר בכל כלוב כ"מנצח" לניסויים הבאים.
  3. סינון תוקפן CD1
    הערה: לפרטים על הליך זה, עיין בדוח הקודם35.
    1. הכן עכברי מגדל CD1 בדימוס, עכברים זכרים C57BL/6J (פולשים) וטיימר.
    2. הנח עכבר זכר C57BL/6J ישירות לתוך כלוב הבית של זכר CD1 (תוקפן תושב) למשך 3 דקות.
      הערה: הפורץ לא יכול להימלט במהלך ההפעלה.
    3. רשום את ההשהיה להתקפה הראשונה, את מספר ההתקפות ואת משך ההתנהגויות האגרסיביות בפרק הזמן של 3 דקות כאינדיקטורים לאגרסיביות.
    4. חזרו על שלבים 2.3.2-2.3.3 פעם ביום במשך 3 ימים רצופים באמצעות עכברים פולשים שונים בכל יום (איור 1B3).
    5. בחר עכברי CD1 כתוקפנים לניסויים נוספים על סמך שני קריטריונים: (1) הם חייבים לתקוף לפחות בשניים מתוך שלושת המפגשים, ו-(2) חביון ההתקפה שלהם חייב להיות פחות מדקה אחת בכל מפגש.

3. דוגמנות

הערה: שלב זה כרוך בחשיפה אקראית לכישלון תחרות חברתית בבדיקת המבחנה, מתח תבוסה חברתית עקיפה ומתח צפיפות בלתי נמנע, ואחריו בידוד חברתי, במשך 10 ימים רצופים.

  1. כישלון התחרות החברתית
    הערה: לפרטים, עיין בדוחות קודמים32,34.
    1. הכינו עכברי נבדק, עכברים "מנצחים" מוקרנים, צינורות (30 ס"מ אורך, 26 מ"מ קוטר פנימי), מקלות פלסטיק, 75% אתנול, מגבות נייר וטיימר.
    2. לשכן מחדש עכברים נבדקים נקבות בנפרד (עכבר אחד לכל כלוב) ועכברים נאיביים בקבוצות (5 עכברים בכלוב).
      הערה: העבירו את העכברים התמימים לכלובים קבוצתיים חדשים בתחילת הדוגמנות. אין צורך במעבר לכלוב חדש במהלך תקופת הדוגמנות.
    3. נקו את השולחן, הצינורות ומקלות הפלסטיק עם 75% אתנול כדי למנוע סימני ריח.
    4. הסר בזהירות עכברים מכלובי הבית שלהם. מקם עכבר מיס ועכבר "מנצח" בקצוות מנוגדים של הצינור כך שהם ילכו קדימה ויפגשו בנקודת האמצע. עכבר ה-MISS יידחף החוצה מהצינור על ידי "המנצח".
      הערה: הגודל הגדול יותר, משקל הגוף הגבוה יותר והמעמד החברתי הדומיננטי של ה"מנצח" מבטיחים שעכבר ה-MISS הניסיוני כמעט תמיד יפסיד בתחרות הצינורות. אם העכברים נשארים ללא תנועה במשך יותר מ -30 שניות, גע בעדינות בזנב המנצח עם מקל פלסטיק כדי לעודד דחיפה.
    5. החלף את מיקומי שני העכברים וחזור על שלב 3.1.4. ספור את שלבים 3.1.4 ו- 3.1.5 כמחזור אחד.
    6. החזירו את העכברים ה"מנצחים" והעכברים "המנצחים" לכלובי הבית שלהם. נקה את השולחן, הצינור ומקל הפלסטיק כדי להסיר ריחות.
    7. הציגו עכבר מנצח חדש וחזרו על שלבים 3.1.4-3.1.5 עם אותו עכבר מיס. לכן כל עכבר MISS עובר שני מחזורים רצופים של תחרות שפופרת כושלת (איור 1C1, איור 2E).
    8. חזור על שלבים 3.1.4-3.1.7 עבור כל עכברי MISS במשך 10 ימים רצופים.
  2. מתח תבוסה חברתית עקיפה שונה
    1. הכינו עכברי מגדלים אגרסיביים CD1 שיצאו לגמלאות (בבתים בודדים), עכברי C57BL/6J זכרים, עכברי MISS נקבות וכיסויים אקריליים מחוררים (איור 2C; אורך × רוחב × גובה: 8 ס"מ × 8 ס"מ × 5.5 ס"מ) עם חורים (5 × 5 בלוח העליון, 3 × 5 בדפנות; כל חור בקוטר 0.5 ס"מ).
    2. הנח עכבר מיס נקבה בתוך כלוב של תוקף CD1, כלוא מתחת לכיסוי אקרילי מחורר, כדי לאפשר התבוננות עקיפה באינטראקציות אגרסיביות.
      הערה: עקוב אחר הטיה פוטנציאלית של הכיסוי האקרילי על ידי עכבר CD1 או MISS. הפחתת מצעי קלחי התירס בכלובי CD1 מסייעת במניעת התהפכות.
    3. הכניסו לכלוב עכבר פולש זכר C57BL/6J כדי להיות מותקף פיזית על ידי עכבר CD1 למשך 10 דקות. נקבת עכבר ה-MISS צופה באינטראקציה דרך הכיסוי המחורר (איור 1C2, איור 2F).
      הערה: אם העכבר הפולש נפצע קשה, סיים מיד את ההפעלה וטפל בחיה. שימוש בכדורי קלחי תירס קטנים משפר את החוויה הסוחפת עבור עכבר MISS על ידי הגברת תזוזה של המצעים במהלך קרבות.
    4. לאחר 10 דקות, הסר את הפולש הזכר ואפשר לעכבר ה-MISS הנקבה 5 דקות נוספות של חשיפה חושית לעכבר CD1.
    5. חזור על שלבים 3.2.3-3.2.4 פעמיים נוספות עם פולשים זכרים שונים.
    6. החזר את עכבר ה-MISS לכלוב הביתי שלו. עקוב וטפל בכל פציעה אצל הפולשים הגברים.
    7. נקו את כיסויי האקריליק המחוררים וטאטאו את כל המצעים שנשפכו.
    8. חזור על שלבים 3.2.2-3.2.5 באמצעות מגדל CD1 חדש שפרש במשך 10 ימים רצופים.
  3. לחץ צפיפות בלתי נמנע
    1. הכינו נקבות עכברי MISS, שרוול אטום לבן (איור 2D; אורך × רוחב × גובה: 14 ס"מ × 10 ס"מ × 20 ס"מ), כלובי עכבר סטנדרטיים עם מצעי קלחי תירס, 75% אתנול, מגבות נייר וטיימר.
    2. הניחו את השרוול האטום בתוך כלוב רגיל עם מצעים.
    3. הכניסו 12-15 עכברים נקבות (כל עכברי MISS או מעורבבים עם נקבות אחרות) לשרוול למשך 30 דקות ביום (איור 1C3, איור 2G).
      הערה: התאם את מספר העכברים בהתאם לגודלם כדי להבטיח צפיפות ללא דריסה. מנע בריחה על ידי כיסוי השרוול במכסה מחורר שקוף במידת הצורך.
    4. החזירו את העכברים לכלובים הביתיים שלהם ונקו את השרוול עם 75% אתנול.
    5. חזור על שלב 3.3.3 במשך 10 ימים רצופים.
  4. בידוד חברתי
    1. הכינו עכברי MISS נקבות וכלובי עכברים סטנדרטיים עם מצעי קלחי תירס.
    2. עכברי MISS ביתיים בנפרד כשהם לא חווים כישלון בתחרות חברתית, לחץ תבוסה עקיפה או לחץ צפיפות, למשך שארית תקופת המידול של 10 ימים (איור 1C4, איור 2H).
      הערה: עכברים נאיביים מועברים בעדינות על ידי הזנב לכלוב זמני, ואז מוחזרים לכלוב הביתי שלהם ללא כל חשיפה ללחץ. ספקו מזון ומים אד ליביטום, כמו עם עכברי מיס.

4. מבחני התנהגות

הערה: ניסויים התנהגותיים נערכים תוך שבוע לאחר המודלים כדי להעריך התנהגויות דמויות דיכאון וחרדה בעכברים. לפני כל בדיקה, עכברים נקבות מועברות לחדר הבדיקות ההתנהגותיות (תאורת 15-20 לוקס) למשך שעה אחת של התרגלות. לאחר כל בדיקה, העכברים מוחזרים למתקן הדיור המקורי שלהם.

  1. מבחן העדפת סוכרוז
    הערה: לפרטים, עיין בדוחות קודמים 36,37,38.
    1. הכינו עכברי נבדק, בקבוקי שתייה (50 מ"ל) עם צינורות כדוריים, כלובי עכבר סטנדרטיים עם צמרות חוטי פלדה, סוכרוז, משקל אלקטרוני, גליל מדורג, מוט ערבוב, נייר שקילה, מים, מחברת ועט.
    2. אכלס את כל העכברים הנבדקים (עכברים נאיביים ומיס עכברים) בנפרד.
    3. מלאו את הבקבוקים במי שתייה (~2/3 מהנפח).
      הערה: ודא שאין דליפה מהבקבוקים לפני תחילת הניסוי.
    4. ספק לכל עכבר שני בקבוקים מלאים במים המונחים זה לצד זה למשך יומיים של התרגלות.
    5. הכינו 1% מי סוכרוז (1 גרם סוכרוז לכל 99 מ"ל מים).
    6. בתחילת הבדיקה יש להחליף את המים בבקבוק אחד בתמיסת סוכרוז 1%. רשום את המשקלים הראשוניים של שני הבקבוקים.
    7. לאחר 12 שעות, רשום שוב את משקולות הבקבוק והחלף את מיקומי הבקבוקים כדי למנוע הטיית מיקום.
    8. לאחר 24 שעות, רשום את המשקולות הסופיות וחשב את העדפת הסוכרוז כ: העדפת סוכרוז (%) = (צריכת סוכרוז / צריכת נוזלים כוללת) × 100
    9. בסיום הבדיקה מחזירים את העכברים לכלובים הביתיים שלהם עם בקבוקי מים רגילים.
    10. נקו היטב את כל הבקבוקים והצינורות הכדוריים במים.
  2. מבחן מתלי זנב
    הערה: בדיקהזו 32 עשויה להתבצע על אותה קבוצה או קבוצה נפרדת של עכברים בהתאם לתכנון הניסוי. במחקר זה הוא בוצע 3 ימים לאחר בדיקת העדפת הסוכרוז.
    1. הכינו עכברי נבדק, קופסת בדיקה לתליית זנב (גובה 55 ס"מ × רוחב 60 ס"מ × עומק 12 ס"מ), סרט דבק, שעון עצר, 75% אלכוהול ומגבות נייר.
    2. הגדר את מערכת מעקב הווידאו39. הגדר אזור פעיל והתחל הקלטה.
    3. נקה את קופסת הבדיקה עם 75% אתנול.
    4. הדביקו בעדינות את העכבר ~2 ס"מ מקצה הזנב ותלו אותו הפוך, וודאו שראשו נמצא ~25 ס"מ מתחתית הקופסה.
      הערה: צמצם את הנדנדה והימנע ממתח מיותר.
    5. הקלט התנהגות באמצעות תוכנת המעקב35 6 דקות. השתמש בזמן חוסר תנועה מ-4 הדקות האחרונות לניתוח.
      הערה: חוסר תנועה מוגדר כהיעדר תנועה כשהגוף תלוי באופן פסיבי. אל תכלול נתונים אם העכבר נופל או מטפס למעלה.
    6. נתק בזהירות את הקלטת והחזיר את העכבר לכלוב הביתי שלו.
  3. מבחן שדה פתוח
    הערה: לפרטים, עיין בדוחות קודמים40,41.
    1. הכינו עכברי נבדק, קופסת בדיקה בשדה פתוח (40 ס"מ × 40 ס"מ × 40 ס"מ), 75% אתנול ומגבות נייר.
    2. הגדר את מערכת מעקב הווידאו. חלקו למעשה את הזירה ל-4 ×-4 תת-אזורים; הגדר את 4 היחידות המרכזיות כאזור המרכזי, ואת השאר כאזור ההיקפי.
    3. נקה את קופסת הבדיקה עם 75% אתנול.
    4. הנח את עכבר הנושא בעדינות במרכז הקופסה, כשראשו פונה לאותו כיוון. אפשר לו לחקור במשך 5 דקות.
      הערה: השתמש במשטח להעברה כדי להפחית את לחץ הטיפול.
    5. רשום את המרחק הכולל שנסעת והזמן שבילה באזור המרכזי באמצעות מערכת מעקב הווידאו.
    6. בסיום הבדיקה יש להחזיר את העכבר לכלוב הביתי שלו ולנקות את המכשיר.
  4. מבחן מבוך מוגבה פלוס
    הערה: לפרטים, עיין בדוח הקודם32.
    1. הכינו עכברי נושא נקבות, מבוך פלוס מוגבה, 75% אתנול ומגבות נייר.
      הערה: המבוך מורכב משני מסלולי המראה ניצבים (50 ס"מ מעל הרצפה), כל אחד עם שתי זרועות (30 ס"מ אורך × 5 ס"מ רוחב). סט אחד כולל קירות בגובה 15 ס"מ (זרועות סגורות), ואילו הסט השני פתוח. השטח המרכזי הוא 5 ס"מ × 5 ס"מ.
    2. הגדר את מערכת מעקב הווידאו והגדר את הזרועות הפתוחות, הזרועות הסגורות והאזור המרכזי.
    3. נקו את המבוך עם 75% אתנול.
    4. הנח בעדינות את העכבר במרכז המבוך, מול זרוע פתוחה. אפשר חקירה חופשית למשך 5 דקות.
      הערה: השתמש במזרן כדי למזער את הלחץ במהלך המיקום.
    5. רשום את זמן השהות בכל זרוע באמצעות מערכת המעקב.
      הערה: אם עכבר נופל מהמבוך, אל תכלול את הנתונים שלו.
    6. החזירו את העכבר לכלוב הביתי שלו ונקו את המבוך ביסודיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

כדי לחקור אם חשיפה ל-MISS גורמת לשינויים התנהגותיים דמויי דיכאון, עכברי C57BL/6J נקבות (n = 16 לקבוצה; גודל המדגם נקבע באמצעות ניתוח כוח, ראה קובץ משלים 1 וקובץ משלים 2) שנחשפו לפרדיגמת MISS הוערכו באמצעות מבחני העדפת סוכרוז ותרחיף זנב, המעריכים תסמיני ליבה של דיכאון-אנהדוניה וייאוש התנהגותי, בהתאמה (איור 3A-F). בהשוואה לעכברי ביקורת נאיביים, עכברים שנחשפו ל-MISS הראו ירידה משמעותית בהעדפת סוכרוז, ללא שינוי מקביל בצ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מספר הולך וגדל של מחקרים התמקדו בפיתוח מודלים ספציפיים לנשים להפרעות פסיכיאטריות באמצעות פרדיגמות מתח תבוסה חברתית כרונית (CSDS) 11,13,14. לדוגמה, בשני מודלים של CSDS נשיים שהוקמו לאחרונה, תוקפנות זכרית כלפי עכברים נקבות הושרה באופן מלאכותי על ידי ציפוי עכברים נקבות בשתן זכר או על ידי הפעלה כימוגנטית של תת-החלוקה הגחונית של ההיפותלמוס הגחוני בתוקפים זכרים11,13<...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

המחקר הנוכחי נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (31970937 ו-82271255), תוכנית צוות החדשנות והיזמות של מחוז ג'יאנגסו, פרויקט הפיתוח החברתי של תוכנית המו"פ המרכזית של מחוז ג'יאנגסו (BE2023690), ותוכנית החדשנות למחקר ופרקטיקה לתארים מתקדמים של מחוז ג'יאנגסו (KYCX22_2932, KYCX23_2952).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
75% אלכוהולאלאדיןA171299-500 מ"למשמש לעיקור וניקוי ציוד ומכשירי מעבדה
בקבוק עם פיית רולרבולבהתאמה אישית(50 מ"ל) עם פקק גומי עם פיה כדורית למבחן העדפת סוכרוז
C57BL/6J עכברים נקבות  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd219C57BL/6J עכברים נקבות בגילאי 7-8 שבועות משמשים כעכברי נושא, ועכברים בגילאי 10-14 שבועות משמשים כמועמדים לזכייה
C57BL/6J עכברים זכרים עכברים נקבות C57BL/6J בגילאי 7-8 שבועות משמשים כעכברי נושא, ועכברים בגילאי 10-14 שבועות משמשים כמועמדים לזכייה219עכברים זכרים C57BL/6J בגיל 8-16 שבועות כפולשים לבדיקת CD1 אגרסיבית.
מבוך מוגבה פלוסבהתאמה אישית-מבוך הפלוס המוגבה מורכב מניצבים, מצטלבים עם מסלולי המראה מוגבהים (50 ס"מ מעל הרצפה). לכל מסלול שתי זרועות מנוגדות (30 ס"מ אורך ו-5 ס"מ רוחב). באחד המסלולים יש קירות גבוהים (15 ס"מ גובה, זרועות סגורות), ובשני אין קירות גבוהים (זרועות פתוחות). אזור ההצטלבות נקרא האזור המרכזי (5 ס"מ ופעמים; 5 ס"מ)
זכר CD-1 עכברי מגדל בדימוס  בייג'ינג ויטל ריבר מעבדה לבעלי חיים טכנולוגיה ושות', בע"מ201זכר CD-1 עכברי מגדל בדימוס בגילאי 4-6 חודשים כמועמדים תוקפנים
קופסת בדיקה בשדה פתוחבהתאמה אישית(L & times; W & Times; גובה: 40 ס"מ ופעמים; 40 ס"מ וזמנים נוספים; 40 ס"מ) לבדיקת השטח הפתוח
כיסוי מחוררבהתאמה אישית-שקוף(L וזמנים; W & Times; גובה: 8 ס"מ ופעמים; 8 ס"מ וזמנים ; 5.5 ס"מ) להגנה על נקבות ממגע פיזי ישיר עם עכברי CD1 (עם 5 & פעמים; 5 חורים בתקרה העליונה ו-3 & פעמים; 5 חורים בדפנות, לכל חור יש קוטר 0.5 ס"מ)
שרוולבהתאמה אישית-לאשקוף (L & times; W & Times; גובה: 14 ס"מ ופעמים; 10 ס"מ וזמנים ; 20 ס"מ) להחזקת עכברים בחשיפה לצפיפות
כלוב עכבר סטנדרטי עם חלק עליון של חוט פלדהSuzhou Fengshi Laboratory Equipment Co., Ltd.FS-SAGIVC-X30כלוב עכבר סטנדרטי (L וזמנים; W & Times; גובה: 37 ס"מ ופעמים; 16 ס"מ ופעמים; 12 ס"מ) עם משטח עליון מחוטי פלדה 
סוכרוזסיגמאV900116משמש להכנת תמיסת סוכרוז 1% במבחן העדפת סוכרוז
קופסת מתלה זנבבהתאמה אישית(H & times; W & Times; עומק: 55 ס"מ וזמנים ; 60 ס"מ ופעמים; 12 ס"מ) למבחן מתלי הזנב   
צינורות אקריליק שקופיםצינורות אקריליק שקופים בהתאמה אישית בקוטר פנימי של 26 מ"מ: אורך 30 מ"מ לתחרות צינורות, אורך 10 מ"מ להתאמת צינורות.
מערכת מעקב וידאו (SMART V3.0)Panlab76-0695משמשת למעקב, הקלטה וניתוח מסלולי הפעילות ומשכי הזמן של תנועות העכברים
בקבוק מי שתייה קופסה פתוחה אקרילית לבנה פלסטיק קופסת אקריליק לבנה

מקורות

  1. Mental disorders. , WHO. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/mental-disorders (2025).
  2. Huang, Y., et al. Prevalence of mental disorders in China: A cross-sectional epidemiological study. Lancet Psychiatry. 6 (3), 211-224 (2019).
  3. Kulkarni, J. Why depression in women is so misunderstood. Nature. 608 (7924), S54(2022).
  4. Labonté, B., et al. Sex-specific transcriptional signatures in human depression. Nat Med. 23 (9), 1102-1111 (2017).
  5. Bangasser, D. A., Cuarenta, A. Sex differences in anxiety and depression: Circuits and mechanisms. Nat rev neurosci. 22 (11), 674-684 (2021).
  6. Najt, P., Fusar-Poli, P., Brambilla, P. Co-occurring mental and substance abuse disorders: A review on the potential predictors and clinical outcomes. Psychiatry Res. 186 (2-3), 159-164 (2011).
  7. Marcus, S. M., et al. Sex differences in depression symptoms in treatment-seeking adults: Confirmatory analyses from the sequenced treatment alternatives to relieve depression study. Compr Psychiatry. 49 (3), 238-246 (2008).
  8. Khan, A., Brodhead, A. E., Schwartz, K. A., Kolts, R. L., Brown, W. A. Sex differences in antidepressant response in recent antidepressant clinical trials. J Clin Psychopharmacol. 25 (4), 318-324 (2005).
  9. Beery, A. K., Zucker, I. Sex bias in neuroscience and biomedical research. Neurosci Biobehav Rev. 35 (3), 565-572 (2011).
  10. Lopez, J., Bagot, R. C. Defining valid chronic stress models for depression with female rodents. Biol Psychiatry. 90 (4), 226-235 (2021).
  11. Harris, A. Z., et al. A novel method for chronic social defeat stress in female mice. Neuropsychopharmacology. 43 (6), 1276-1283 (2018).
  12. Iniguez, S. D., et al. Vicarious social defeat stress induces depression-related outcomes in female mice. Biol Psychiatry. 83 (1), 9-17 (2018).
  13. Takahashi, A., et al. Establishment of a repeated social defeat stress model in female mice. Sci Rep. 7 (1), 12838(2017).
  14. Newman, E. L., et al. Fighting females: Neural and behavioral consequences of social defeat stress in female mice. Biol Psychiatry. 86 (9), 657-668 (2019).
  15. Trainor, B. C., et al. Sex differences in social interaction behavior following social defeat stress in the monogamous California mouse (Peromyscus californicus). PLoS One. 6 (2), 17405(2011).
  16. Logan, R. W. Adapting social defeat stress for female mice using species-typical interfemale aggression. Biol Psychiatry. 86 (9), e31-e32 (2019).
  17. Chai, H., et al. Antidepressant effects of rhodomyrtone in mice with chronic unpredictable mild stress-induced depression. Int J Neuropsychopharmacol. 22 (2), 157-164 (2019).
  18. Baker, S., Bielajew, C. Influence of housing on the consequences of chronic mild stress in female rats. Stress. 10 (3), 283-293 (2007).
  19. Ayuob, N. N., Firgany, A. E. L., El-Mansy, A. A., Ali, S. Can ocimum basilicum relieve chronic unpredictable mild stress-induced depression in mice. Exp Mol Pathol. 103, 153-161 (2017).
  20. Cavigelli, S. A., et al. Timing matters: The interval between acute stressors within chronic mild stress modifies behavioral and physiologic stress responses in male rats. Stress. 21 (5), 453-463 (2018).
  21. D'aquila, P. S., Brain, P., Willner, P. Effects of chronic mild stress on performance in behavioural tests relevant to anxiety and depression. Physiol Behav. 56 (5), 861-867 (1994).
  22. Erburu, M., et al. Chronic mild stress and imipramine treatment elicit opposite changes in behavior and in gene expression in the mouse prefrontal cortex. Pharmacol Biochem Behav. 135, 227-236 (2015).
  23. Grippo, A. J., Moffitt, J. A., Johnson, A. K. Evaluation of baroreceptor reflex function in the chronic mild stress rodent model of depression. Psychosom Med. 70 (4), 435-443 (2008).
  24. Becker, C., et al. Repeated social defeat-induced depression-like behavioral and biological alterations in rats: Involvement of cholecystokinin. Mol Psychiatry. 13 (12), 1079-1092 (2008).
  25. Bondar, N., et al. Molecular adaptations to social defeat stress and induced depression in mice. Mol Neurobiol. 55 (4), 3394-3407 (2018).
  26. Golden, S. A., Covington, H. E., Berton, O., Russo, S. J. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nat Protoc. 6 (8), 1183-1191 (2011).
  27. Costi, S., Han, M. H., Murrough, J. W. The potential of KCNQ potassium channel openers as novel antidepressants. CNS Drugs. 36 (3), 207-216 (2022).
  28. Costi, S., et al. Impact of the KCNQ2/3 channel opener ezogabine on reward circuit activity and clinical symptoms in depression: Results from a randomized controlled trial. Am J Psychiatry. 178 (5), 437-446 (2021).
  29. Friedman, A. K., et al. KCNQ channel openers reverse depressive symptoms via an active resilience mechanism. Nat Commun. 7, 11671(2016).
  30. Tan, A., et al. Effects of the KCNQ channel opener ezogabine on functional connectivity of the ventral striatum and clinical symptoms in patients with major depressive disorder. Mol Psychiatry. 25 (6), 1323-1333 (2020).
  31. Wang, H. R., et al. Kcnq channels in the mesolimbic reward circuit regulate nociception in chronic pain in mice. Neurosci Bull. 37 (5), 597-610 (2021).
  32. Zhai, X., et al. Multiple integrated social stressnduces depressive-like behavioral and neural adaptations in female C57bl/6j mice. Neurobiol Dis. 190, 106374(2024).
  33. Zhang, G., et al. Neural and molecular investigation into the paraventricular thalamic-nucleus accumbens circuit for pain sensation and non-opioid analgesia. Pharmacol Res. 191, 106776(2023).
  34. Fan, Z., et al. Using the tube test to measure social hierarchy in mice. Nat Protoc. 14 (3), 819-831 (2019).
  35. Zhang, H., et al. Alpha1- and beta3-adrenergic receptor-mediated mesolimbic homeostatic plasticity confers resilience to social stress in susceptible mice. Biol Psychiatry. 85 (3), 226-236 (2019).
  36. Krishnan, V., et al. Molecular adaptations underlying susceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131 (2), 391-404 (2007).
  37. Vialou, V., et al. Serum response factor promotes resilience to chronic social stress through the induction of deltafosb. J Neurosci. 30 (43), 14585-14592 (2010).
  38. Yohn, C. N., et al. Chronic non-discriminatory social defeat is an effective chronic stress paradigm for both male and female mice. Neuropsychopharmacol. 44 (13), 2220-2229 (2019).
  39. SMART VIDEO TRACKING Software. , https://www.Panlab.Com/en/products/smart-video-tracking-software-panlab (2025).
  40. Cho, J. R., et al. Dorsal raphe dopamine neurons modulate arousal and promote wakefulness by salient stimuli. Neuron. 94 (6), 1205-1219.e8 (2017).
  41. Liu, Y., et al. Protective effects of luteolin on cognitive impairments induced by psychological stress in mice. Exp Biol Med (Maywood). 238 (4), 418-425 (2013).
  42. Senst, L., Baimoukhametova, D., Sterley, T. L., Bains, J. S. Sexually dimorphic neuronal responses to social isolation. Elife. 5, e18726(2016).
  43. Gh, W. Comparative psychology monographs. Hunter, W. S. 2, 1-27 (1923).
  44. Burke, A. W., Broadhurst, P. L. Behavioural correlates of the oestrous cycle in the rat. Nature. 209 (5019), 223-224 (1966).
  45. Van Doeselaar, L., et al. Chronic social defeat stress in female mice leads to sex-specific behavioral and neuroendocrine effects. Stress. 24 (2), 168-180 (2021).
  46. Zhao, W., et al. Behaviors related to psychiatric disorders and pain perception in c57bl/6j mice during different phases of estrous cycle. Front Neurosci. 15, 650793(2021).
  47. Becker, J. B., Prendergast, B. J., Liang, J. W. Female rats are not more variable than male rats: A meta-analysis of neuroscience studies. Biol Sex Differ. 7, 34(2016).
  48. Prendergast, B. J., Onishi, K. G., Zucker, I. Female mice liberated for inclusion in neuroscience and biomedical research. Neurosci Biobehav Rev. 40, 1-5 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל מתח חברתי משולב מרובה להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.