הפרוטוקול מתאר את הפיתוח של שני מודלים של מכרסמים המחקים טיפולים הורמונליים מאשרים מגדר באמצעות מתן תת עורי של טסטוסטרון או אסטרדיול בתוספת ציפרוטרון אצטט (המשמש בטיפולים אנושיים לאנשים טרנסג'נדרים): קביעת המינונים, זיהוי סמנים ביולוגיים רלוונטיים והערכת ההשפעות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הקמת מודלים של חולדות המחקים טיפולים הורמונליים מאשרים מגדר
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
אנשים טרנסג'נדרים (TG) הם אנשים שזהותם המגדרית והמין שהוקצו להם בלידה אינם תואמים. לעתים קרובות הם עוברים טיפול הורמונלי מאשר מגדר (GAHT), התערבות רפואית המאפשרת רכישת מאפייני מין משניים התואמים יותר את זהותם המגדרית האינדיבידואלית, ומספקת תוצאות עקביות בשיפור משתנים סוציו-פסיכולוגיים רבים. עם זאת, GAHT מכוון למערכות גוף שונות, וכמה תופעות לוואי נרשמות, אם כי עדיין לא זוהו ואופיינו במלואן. לכן, אנשים TG העוברים GAHT עשויים להיחשב כתת-קבוצה רגישה של אוכלוסייה ויש להקדיש תשומת לב ספציפית במסגרת הערכת הסיכונים, למשל, באמצעות שימוש במודלים ממוקדים של בעלי חיים. העבודה הנוכחית מתארת את הנהלים שנקבעו ליישום שני מודלים של עכברושים המחקים GAHT: המודל להסרת גבריות-נשיות (dMF) המחקה את ה-GAHT עבור נשים TG ומודל ה-defeminizing-masculinizing (dFM) המחקה את ה-GAHT עבור גברים TG. המודלים יושמו באמצעות מתן אותם הורמונים המשמשים ל-GAHT אנושי, כלומר, β-אסטרדיול בתוספת ציפרוטרון אצטט ל-dMF וטסטוסטרון ל-dFM, באותם דרכי חשיפה לתקופה של שבועיים. חולדות נבדקות מדי יום במהלך הטיפול כדי להעריך את המצב הבריאותי והתנהגויות שעלולות להיות תוקפניות. בעת ההקרבה, דם ורקמות מטרה נדגמו ואוחסנו לניתוח ביוכימי, מולקולרי והיסטופתולוגי. כמו כן הוערכו פרמטרים ספציפיים למין, כלומר ספירת זרע ומידות הדגדגן. בנוסף, איזופורמים של CYP450, המתבטאים באופן בלעדי ו/או מועדף בכבד של חולדות זכרים ונקבות, מזוהים ומאופיינים כסמנים ביולוגיים חדשים כדי לאמת את הצלחת GAHT ולקבוע את המודל. מעורבות בלוטת התריס נחקרה גם כמטרה מרכזית במערכת האנדוקרינית.
מבוא
התפיסה הפסיכולוגית של הפרט לגבי היותו זכר, נקבה, אף אחד מהם, שניהם, או איפשהו בין1 נקראת זהות מגדרית. זה יכול להתאים למין הביולוגי (סיסג'נדר) או יכול להיות שונה (טרנסג'נדר - TG). גבר TG הוא אדם שנולד כנקבה אך מזהה את עצמו כגבר. אישה TG נולדת כזכר אך מזהה את עצמה כאישה2. ההערכה היא כי נכון לעכשיו, ישנם 25 מיליון TG ברחבי העולם3, רובם סובלים מדיספוריה מגדרית, מצב פסיכולוגי המאופיין בחוסר התאמה בין המגדר שלהם לזה שהוקצה להם בלידה4, מה שעלול לגרום לאפליה חברתית וקשיים בעבודה ובמשפחה, מה שמוביל לעתים קרובות לדיכאון, חרדה ומתח5....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
המחקרים מבוצעים בהתאם להנחיה 2010/63/EU, צו החקיקה האיטלקי מס' 26 מיום 4 במרץ 2014, ועקרונות ה-OECD לשיטות מעבדה טובות (GLP). פרוטוקול המחקר אושר על ידי משרד הבריאות האיטלקי (אישור מס' 806/2021-PR). כאן, 16 חולדות Sprague-Dawley צעירות בוגרות מינית משני המינים (304 ± 13 גרם חולדות זכרים ו-190 ± 7 גרם נקבות חולדות, בנות 8-9 שבועות) נרכשות ומאוחסנות בשני כלובים בתנאי מעבדה סטנדרטיים (22 ± 0.5 מעלות צלזיוס, 50%-60% לחות יחסית, 12 שעות של חילופי אור כהה עם 12-14 החלפות אוויר בשעה) עם מים ומזון זמינים אד ליביטום. בכל הכלובים, להעשרה הסביבתית של כל בעל חיים, הכניסו קוביות כרסום עץ והחליפו אותן מדי שבוע.
....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כפי שהודגם על ידי Tassinari et al.14 ועל ידי Tammaro et al.33, התוצאות הבאות הראו את ההצלחה של GAHT על חולדות ואת ההתאמה של המודלים.
לא נרשמו תמותה או התנהגות חריגה, כגון תוקפנות, ולא נצפים סימנים קליניים של רעילות או סבל (למשל, ירידה בפעילות, פילוזקציה ומראה לא מטופח)14.
ריכוזי T בפלזמה בחולדות זכרים בוגרים ובחולדות נקבות במהלך ייחום ופרואסטרוס הם 5.71 ± 0.84 ננוגרם/מ"ל ו-1.24 ±-0.29 ו-0.80 ±-0.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
יישום מודלים של מכרסמים המחקים GAHT הוא חיוני לחקר הרגישות והפגיעות הספציפית הפוטנציאלית של אנשים TG והתוצאות ארוכות הטווח של הטיפולים, הנמשכים בדרך כלל כל חייהם.
בהתחשב במספר המועט של מחקרים דומים בספרות, הנקודה הקריטית של ניסוי זה היא בחירת המינונים לקביעת המודלים; מינונים כאלה צריכים להיות נמוכים מספיק כדי להתאים למתן ארוך טווח בבעלי חיים מבלי לגרום לתופעות לוואי, רעילות ו/או מוות. נקודה קריטית נוספת היא דרך הניהול הטובה ביותר לאימוץ, תוך התחשבות במסלול המו.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים כי המחקר נערך ללא קשרים מסחריים או פיננסיים שעלולים ליצור ניגוד עניינים.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| איזון אנליטי ABJ 320-4NM | קרן | Z741091 | |
| Bouin | Biooptica | 05-M01008 | |
| צנטריפוגה 5415 R | Eppendorf | לאפנדרף | |
| Cyproterone אצטט | סיגמא-אולדריץ' | C3412 | |
| D-MEM בינוני | Gibco | ||
| ExcelTaq 2X מהיר Q-PCR מאסטר מיקס (SYBR, ROX), 200 RXN | סמוביו | TQ1210 | |
| תמיסת פורמלין, מאגר ניטרלי, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| תוכנת GraphPad Prism גרסה 5.0 עבור תוכנת | GraphPad | ||
| Hematoxylin | Biooptica | 05-06002/L | |
| Heosin | Biooptica | 05-10007/L | |
| תוכנת הדמיה | Nikon | NIS-BR | |
| תוכנה סטטיסטית JMP 10 | מכון SAS | ||
| מיקרום | תרמו מדעי | HM 325 | |
| מיקרוסקופיה | ניקון מיקרופוט FX | ||
| עכבר/חולדה טסטוסטרון ELISA | Biovendor | RTC001R | 96T |
| NanoDrop 1000 ספקטרופוטומטר | תרמו מדעי | ND-1000 | |
| פרפינה | ביואופטיקה | 087910 | |
| מאזנים ניידים SCOUT STX2202 | OHAUS | 30253064 | |
| פריימרים | טכנולוגיות | שתוכננו על ידי PrimerBlast | |
| Rat Estradiol ELISA | Biovendor | RTC009R | 96T |
| Rat TSH (הורמון מגרה בלוטת התריס) ELISA Kit | ELK Biotechnology | ELK2283 | 96T |
| Rat TSH (הורמון מגרה בלוטת התריס) ELISA Kit | ELK Biotechnology | ELK2283 | 96 ט |
| ערכת סינתזה SensiFASTcDNA | Bioline | BIO-65053 | 50 תגובה |
| שמן Sesam | ACROS | AC241000010 | |
| חולדות Sprague Dawley זכר ונקבה | Envigo | 8/9 דיאטות סטנדרטיות בנות | |
| שבועות | Mucedola | 4RF18 | |
| T4 (תירוקסין) ELISA Kit | ELK ביוטכנולוגיה | ELK8716 | 96T |
| טסטוסטרון אננטאט | Sigma-Aldrich | T3006 | |
| Thermal Cycler LineGene 9600 Plus | Bioer Aurogene | ||
| מעבד רקמות | Shandon Excelsior ES, Thermo Scientific) | ||
| ערכת טיהור RNA כוללת | Norgen | 17200 | 50 עמודות |
| Victor 3 Multilabel Reader | פרקין אלמר | ||
| &בטא;-אסטרדיול 17-ואלרט | סיגמא-אולדריץ' | E1631 |
מקורות
- Rokach, A., Patel, K. Human sexuality: Function, dysfunction, paraphilias, and relationships. , Academic Press. (2021).
- American Psychological Association. Guidelines for psychological practice with transgender and gender nonconforming people. Am Psychol. 70 (9), 832-864 (2015).
- Ammari, T., Sluiter, E. C., Gast, K., Kuzon, W. M.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
