מאמר שיטה

איתור נוגדנים עצמיים נגד MDA5 באמצעות תאי HeLa ואימונוציטוכימיה במיקרוסקופ אור

DOI:

10.3791/67575

⸱

31 באוקטובר 2025

 ,  ,  ,  , 
1Graduate Institute of Biomedical Sciences, China Medical University, 2College of Medicine, China Medical University, 3Rheumatology and Immunology Center, China Medical University Hospital, 4Rheumatic Diseases Research Center, China Medical University Hospital, 5Drug Development Center, China Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מספקים מתודולוגיה אימונוציטוכימית שלב אחר שלב (ICC) לזיהוי אנטי-MDA5. גישה זו כוללת קיבוע תאים, חדירה, דגירה של נוגדנים וטכניקות הדמיה, המאפשרות זיהוי מדויק של נוגדנים עצמיים נגד MDA5, המסייעים באבחון מחלת ריאות אינטרסטיציאלית המתקדמת במהירות בחולי מיוזיטיס.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

נוגדנים עצמיים נגד MDA5 הם סמנים ביולוגיים קריטיים לדרמטומיוזיטיס (DM), דרמטומיוזיטיס אמיופתית (CADM) ופולימיוזיטיס (PM), במיוחד בזיהוי חולים בסיכון למחלת ריאות אינטרסטיציאלית מתקדמת במהירות (RP-ILD). גילוי מוקדם של נוגדנים עצמיים אלה חיוני לשיפור תוצאות המטופלים, שכן אבחון מאוחר מוביל לעתים קרובות לפרוגנוזה גרועה. נכון לעכשיו, בדיקה רדיואימונולוגית היא תקן הזהב לגילוי אנטי-MDA5, אך השימוש בה מוגבל על ידי עלויות גבוהות, הליכים ארוכים והצורך במומחיות מיוחדת. בנוסף, בדיקת הכתם, כלי קליני בשימוש נרחב, מציגה שיעור חיובי כוזב גבוה לנוגדנים עצמיים MDA5, מה שעלול לפגוע בדיוק האבחון. כדי להתמודד עם מגבלות אלה, אנו מציעים שיטת בדיקה מאשרת לא רדיואקטיבית, רגישה מאוד וסטנדרטית באמצעות אימונוציטוכימיה (ICC). פרוטוקול זה כולל טיפול בתאי HeLa עם מבנה MDA5, חדירה לתאים עם Triton X-100 כדי להקל על קשירת נוגדנים עצמיים ראשוניים נגד MDA5, וזיהוי נוגדנים קשורים באמצעות נוגדנים משניים מצומדים לאנזים (למשל, חזרת פרוקסידאז) עם כרומוגן DAB להדמיית מיקרוסקופיה. ICC מציע גישה מעשית, חסכונית ובעלת רגישות גבוהה להדמיית נוגדנים עצמיים נגד MDA5 בתוך מבנים תאיים. על ידי שילוב ICC כהליך אישור משלים, מחקר זה נועד לשפר את האמינות של זיהוי אנטי-MDA5, ובכך לשפר את אסטרטגיות האבחון והפרוגנוסטיקה של RP-ILD בחולי DM, CADM ו-PM.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מיופתיות דלקתיות אידיופטיות (IIM), המכונה בדרך כלל מיוזיטיס, הן קבוצה הטרוגנית של הפרעות אוטואימוניות המאופיינות בדלקת שרירים כרונית, ביטויים קליניים משתנים ותוצאות טיפוליות מגוונות. תסמינים נפוצים כוללים חולשת שרירים, סיבולת מופחתת ומיאלגיה1. תת-הסוגים העיקריים של IIM כוללים פולימיוזיטיס (PM) ודרמטומיוזיטיס (DM), בעוד שדרמטומיוזיטיס אמיופתית קלינית (CADM) נבדלת על ידי פריחות עור אופייניות הדומות לאלו הנראות בסוכרת אך עם מעורבות שרירים מינימלית או ללא מעורבות שרירים. סיבוך עיקרי ב-PM, DM ו-CADM הוא מחלת ריאות אינטרסטיציאלית (ILD), המשפיעה על כ-40% מהחולים וקשורה לתמותה מוגברת2.

המהלך הקליני והפרוגנוזה של ILD ב-IIM משתנים מאוד. ILD הקשור ל-DM ו-CADM (DM-/CADM-ILD) נוטה להיות עמיד יותר לטיפול ונושא פרוגנוזה גרועה יותר בהשוואה ל-ILD הקשור ל-PM. מבין אלה, ILD חריפה או תת-חריפה, המתקדמת במהירות תוך שלושה חודשים3, חמורה במיוחד, עם שיעור הישרדות מדווח של 5 שנים בלבד של 52%, לעומת 87% ב-ILD כרוני, המתקדם לאט או נשאר יציב. ILD מתקדם במהירות (RP-ILD), תת-סוג של ILD חריף/תת-חריף, מאופיין בהופעה מהירה של קוצר נשימה ונזק מכתשית נרחב הנראה בהדמיית חזה. RP-ILD הוא מצב מסכן חיים עם פרוגנוזה גרועה, מה שמדגיש את הצורך הדחוף באבחון מוקדם והתערבות מהירה לשיפור תוצאות המטופלים 4,5,6.

נוגדנים עצמיים ספציפיים למיוזיטיס (MSAs) התגלו כסמנים ביולוגיים קריטיים ב-ILD הקשור למיוזיטיס, כאשר נוגדנים עצמיים נגד MDA5 ממלאים תפקיד משמעותי במיוחד. נוגדנים עצמיים אלה מתגלים לעתים קרובות בחולים עם PM-/DM-/CADM-ILD ומשמשים כאינדיקטורים פרוגנוסטיים חשובים ל-RP-ILD 7,8,9. MDA5 (גן 5 הקשור להתמיינות מלנומה) הוא קולטן לזיהוי דפוסים ציטוזולי המקודד על ידי גן המושרה על ידי אינטרפרון המזהה RNA דו-גדילי ויראלי ומיטוכונדריאלי ומתחיל תגובות חיסוניות בתיווך אינטרפרון10. למרות שהמנגנונים הפתוגניים המדויקים עדיין לא ברורים, מאמינים כי נוגדנים עצמיים נגד MDA5 משבשים את תפקוד MDA5, ובכך תורמים לפתוגנזה אוטואימונית.

זיהוי בזמן של נוגדנים עצמיים נגד MDA5 חיוני לזיהוי וניהול מוקדם של RP-ILD. באופן מסורתי, משקעים חיסוניים (IP) עם תווית רדיו באמצעות 35תמציות תאי K562 המסומנים ב-S-methionine נחשבים לתקן הזהב לזיהוי נוגדנים עצמיים נגד MDA511. עם זאת, שיטה זו אינה מעשית לשימוש קליני שגרתי בשל עלותה הגבוהה, התלות בציוד מיוחד ובכוח אדם מיומן, תקנות מחמירות לסילוק פסולת רדיואקטיבית וחיי המדף המוגבלים של ריאגנטים עם תוויות רדיו. בפרקטיקה הקלינית, בדיקות כתמים משמשות בדרך כלל כחלופות; עם זאת, הם קשורים לשיעור חיובי כוזב גבוה עבור נוגדנים עצמיים נגד MDA5 12,13, מה שמעלה חששות לגבי דיוק האבחון. כתוצאה מכך, יש צורך דחוף בבדיקה מאשרת אמינה ולא רדיואקטיבית כדי לאמת תוצאות חיוביות ולשפר את הביטחון האבחנתי.

כדי להתמודד עם פער זה, אנו מציעים להשתמש באימונוציטוכימיה (ICC) כבדיקת אישור משלימה לנוגדנים עצמיים נגד MDA5. גישה זו כוללת טרנספקציה של תאי HeLa עם מבנה MDA5, דגירה של התאים עם פלזמת המטופל וזיהוי נוגדנים עצמיים קשורים נגד MDA5 באמצעות נוגדנים משניים מצומדים לאנזים (למשל, פרוקסידאז חזרת) בשילוב עם מצע כרומוגני להדמיה במיקרוסקופ אור. ICC מספק פלטפורמה לא רדיואקטיבית, רגישה מאוד וסטנדרטית להדמיית נוגדנים עצמיים נגד MDA5 בתוך תאים תאיים. על ידי שילוב ICC עם בדיקת הכתמים, שיטה זו שואפת להפחית את שיעורי החיוביים השגויים, לשפר את דיוק האבחון, ובסופו של דבר לשפר את הניהול הקליני והתוצאות עבור המטופלים.

מטרת מחקר זה היא לבסס פרוטוקול חזק ולא רדיואקטיבי לזיהוי נוגדנים עצמיים נגד MDA5, תוך התייחסות למגבלות שיטות הגילוי הנוכחיות ולהציע לרופאים כלי מעשי ואמין לאבחון מוקדם של RP-ILD בחולים עם PM, DM ו-CADM. בקריינות הווידיאו הנלווית, מהלך מסכן חיים זה מתואר בשפה המדוברת כ'מוות מהיר'; מבחינה מדעית, זה תואם ל-ILD (RP-ILD) המתקדם במהירות. עבודה זו מתבססת על ראיות קיימות ויש לה פוטנציאל לשפר משמעותית את ההערכה הפרוגנוסטית וקבלת ההחלטות הטיפוליות בפרקטיקה הקלינית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. תרבית תאים וטרנספקציה

  1. שמרו על תאי HeLa עם מדיום הנשר המותאם של Dulbecco המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-1% אנטיביוטיקה-אנטי-פטריית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה של 5% CO2 .
  2. מעבר התאים כל 2-3 ימים או כאשר התאים מגיעים למפגש של 90%-100%.
  3. זרע 7 × 104 תאי HeLa בכל באר של צלחת של 24 בארות (1.9 ס"מ2/באר) 24 שעות לפני הטרנספקציה כדי לאפשר לתאים להגיע לכ-90% מפגש.
  4. לדלל 500 ננוגרם של פלסמיד (pENTER-MDA5) ו-1.5 מיקרוליטר של מגיב טרנספקציה כל אחד ב-25 מיקרוליטר של מדיום סרום מופחת.
  5. הוסף DNA מדולל למגיב טרנספקציה מדולל (יחס של 1:1). מערבבים היטב ודוגרים למשך 5 דקות.
  6. הוסיפו את התערובת לתאים שנזרעו יום קודם לכן וערבבו כדי לערבב מיד את קומפלקס ה-DNA-ליפיד. ודא שהתאים מתכנסים 80%-90%.
  7. דגרו את התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה של 5% CO2 למשך 24 שעות והמשיכו לבצע ICC.
    הערה: השתמשנו בווקטור זמין מסחרית (pEnter-MDA5); מידע נוסף ניתן למצוא בטבלת החומרים. יעילות הטרנספקציה היא ~50%.
    ניתן לקבוע את הצלחת הטרנספקציה והביטוי של חלבון המטרה על ידי העברת התאים עם פלסמיד המבטא חלבון פלואורסצנטי וביצוע כתם מערבי כדי להמחיש את ביטוי חלבון המטרה.

2. קיבוע תאים

  1. לאחר הדגירה, שטפו את התאים פעמיים עם PBS כדי להסיר את כל המדיה שנותרה.
    הערה: ניתן לבצע כביסה על ידי ניעור הצלחת על שייקר מסלול.
  2. תקן את התאים ב-4% פרפורמלדהיד ב-PBS. השאירו את התאים למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.
    זהירות: פרפורמלדהיד רעיל. השתמש בהנחיות טיפול מתאימות.
  3. שאפו את המגיב המקבע והשתמשו ב-PBS כדי לשטוף את התאים פי 2.

3. חדירות תאים

  1. הוסף מגיב Triton X-100 (0.3% ב-PBS) ותן לתאים לשבת במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
  2. לאחר 10 דקות, השלך את חומר הניקוי.
  3. הוסף PBS כדי לשטוף את התאים פעם אחת.

4. חסימת תאים

  1. בצע חסימה עם 10% סרום בקר עוברי ב-PBS (1x) ודגירה על התאים למשך שעה בטמפרטורת החדר.
  2. הסר את המגיב החוסם, ולאחר מכן הוסף PBS כדי לשטוף את התאים פעם אחת.

5. הכלאה של הנוגדנים של המטופל

  1. הוסף את פלזמת המטופל המדולל לתאים. הקפד לדלל את דגימת המטופל (דילול של 1:5,000 ב-PBS) ב-PBS לפני השימוש.
    הערה: כוונן את הדילול כדי לשפר את האות או להקטין את הרקע לפי הצורך. כדי להבטיח תוצאות בלתי מוטות, לצוות שערך את הבדיקות לא היה ידע אילו דגימות שייכות למטופלים ואילו היו מאנשים בריאים.
  2. דגרו את הדגימה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 12-16 שעות (לילה).
  3. לאחר תקופת הדגירה, הסר את דגימת המטופל ושטוף את התאים פי 3 עם PBS.

6. הכלאה של נוגדנים משניים

  1. טפל בתאים עם IgG אנטי-אנושי מצומד חזרת פרוקסידאז מדולל (דילול 1:250 ב-PBS), והשאיר את התאים למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר.
  2. שעה לאחר מכן, השלך את הנוגדנים המשניים.
  3. יש לשטוף עם PBS 3x.

7. צביעת תאים

  1. לאחר שטיפת התאים, יש לצבוע את התאים ב-300 מיקרוליטר של תמיסת עבודה/באר DAB.
    הערה: תמיסה זו הוכנה על ידי ערבוב תרכיז כרומוגן DAB ומדלל DAB בהתאם להוראות היצרן.
  2. לאחר צביעת התאים למשך 5 דקות, הסר את הצבע, שטוף במים מזוקקים דה-יונים ונער במשך 5 דקות.

8. צביעת נגד תאים

  1. מכתים את גרעין התא עם המטוקסילין מדולל.
    הערה: אנו משתמשים בהמטוקסילין גיל II בדילול פי 10 ומחכים 5 דקות לתהליך הצביעה.
  2. לאחר 5 דקות, השלך את ההמטוקסילין, ולאחר מכן שטוף במים מזוקקים נטולי יונים למשך 2 x 5 דקות.

9. תצפית

  1. התבונן בתוצאות הצביעה באמצעות מיקרוסקופ אופטי.
    הערה: חיובי אמיתי מראה כתמים חומים חזקים בתוך תאי HeLa המבטאים MDA5; זה מאשר את הנוגדנים העצמיים נגד MDA5 בדגימת המטופל. תוצאה שלילית מראה תאי HeLa ללא צביעה חומה, מה שמעיד על היעדר נוגדנים עצמיים נגד MDA5. תוצאה חיובית כוזבת מראה צביעה חומה נרחבת בכל התאים ללא קשר לביטוי MDA5. יש להבחין בין צביעה לא ספציפית זו, הנראית במצבים אוטואימוניים אחרים, לבין חיובית אמיתית כדי למנוע אבחון שגוי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הצוות שערך את הבדיקות היה עיוור לזהות הדגימות, כולל המטופלים הספציפיים שמהם הן נלקחו, כדי למזער הטיה פוטנציאלית בתהליך ההערכה. עם זאת, בעוד שדגימות הביקורת הבריאות לא היו נתונות לסמיות, הן הניבו באופן עקבי תוצאות ברורות וחד משמעיות.

איור 1A מדגים את הביטוי המוצלח של MDA5 בתאי HeLa שעברו טרנספטציה עם מבנה pENTER-MDA5. כדי לאמת את יעילות הטרנספקציה, ICC בוצע באמצעות נוגדן מסחרי נגד MDA5. צביעה ציטופלז...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הטכניקה מבוססת ה-ICC שלנו לזיהוי נוגדנים עצמיים נגד MDA5 מציעה יתרונות משמעותיים על פני שיטות מסורתיות כגון ניתוח כתמי קו ובדיקה רדיואימונית. בעבר, Nombel et al. דיווחו על ערכי רגישות וסגוליות של 96% ו-100%, בהתאמה, על ידי השוואת אימונופלואורסצנציה עקיפה (IIF) על תאים שעברו טרנספטציה של MDA5 עם ELISA בקבוצה של 23 חולי דרמטומיוזיטיס חיוביים נגד MDA5 ו-22 בקרות שליליות נגד MDA514. עם זאת, ELISA זה אינו זמין מסחרית ומיועד לשימוש מחקרי בלבד. בהתבסס על ממצאים אלה, המחק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין אינטרסים מתחרים להצהיר עליהם.

חלקים מכתב היד הזה נוצרו בסיוע GPT-4 של OpenAI. המחברים סקרו וערכו את התוכן כדי להבטיח דיוק ומקוריות.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמועצה הלאומית למדע וטכנולוגיה של טייוואן שהוענקו לג'יי-לין סו (NSTC 114-2320-B-039-038 ו-NSTC 113-2320-B-039-032). מחקר זה נתמך בחלקו גם על ידי מענקים של האוניברסיטה הרפואית ובית החולים של סין שהוענקו לג'יי-לין סו (CMU113-MF-89 ו-C1110812016-12).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
לוחות עם 24 בארות (1.9 ס"מ ומעל/באר)קורנינג354541
אנטיביוטיקה-אנטימיקוטיתגיבקו15240062
בקבוקפירקס1000-600
צינורות חרוטיים (15 מ"ל)קורנינג430052
צינורות חרוטיים (50 מ"ל)קורנינג430290
מים מזוקקים ללא יונייםהמים המזוקקים ללא יוניים שלנו מיוצרים בתוך החברה באמצעות מערכת Milli-Q (עמודה 1: Quantum TEX, SN: F4EB53476; עמודה 2: Prepak, SN: F1CB11442)
סרום בקר עוברי מאופייןציטיבהSH30396.03
צילינדרים מדורגים (50 מ"ל)VITLAB64804
המטוקסילין גיל IIלייקה3801522
הייקלון דולבקו' s Modified Eagle Medium עם רמת סוכר גבוההציטיבהSH30243.02
ליפופקטמין 2000 מגיב טרנספקציהInvitrogen11668019תגובת טרנספקציה
MDA-5 (D74E4) Rabbit mAbטכנולוגיית איתות סלולרי5321
צינורות מיקרוצנטריפוגה (צינורות אפנדורף 1.5 מ"ל)אקסיגן142503
Opti-MEM I מדיום סרום מופחתגיבקו31985070
מנענע מסלול (אופציונלי)FIRSTEKS300R
פאראפורמלדהידסיגמא-אלדריץ'4% ב-1x PBS
PBSPRO TECHME222605
pENTER-MDA5Vigene Biosciences Inc.CH863586
פרוקסידאז אפיני IgG אנטי-אנושי טהור עז (H+L)Jackson ImmunoResearch109-035-003
בקר פיפטהתרמו-סיינטיפיק130165
Pipettes גילסון
פיפטות וקצות פיפטות (10 ומיקרו; L)QSP104-Q
פיפטות וקצות פיפטות (200 ומיקרו; L)QSPT090-Q
פיפטות וקצות פיפטות (1000 ומיקרו; L)QSP111-Q
פיפטות סרולוגיות (5 מ"ל)SPL91005
פיפטות סרולוגיות (10 מ"ל)SPL91010
פיפטות סרולוגיות (25 מ"ל)SPL91025
ערכת מצע DAB של SignalStainאיתות סלולרי80590.3% ב-PBS

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry. Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).
  2. Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms. Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).
  3. Fujisawa, T. Management of myositis-associated interstitial lung disease. Medicina. 57 (4), 347(2021).
  4. Sasaki, N., et al. Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease. Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).
  5. Go, D. J., et al. Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease. Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).
  6. Tsuji, H., et al. Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis. Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).
  7. Hozumi, H., et al. Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease. Respir Med. 122, 1-8 (2016).
  8. Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease. Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).
  9. Koga, T., et al. The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM. Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).
  10. Fuzzi, E., et al. Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside. Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).
  11. Sato, S., et al. Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis. Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).
  12. Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity. Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).
  13. Chen, Y. L., Li, A. Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy. Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).
  14. Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies. Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).
  15. Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease. Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).
  16. Sato, S., et al. Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis. Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).
  17. Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy. Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Triton X 100DAB

מאמרים קשורים