הפרוטוקול משתמש בדגימת צואה לא פולשנית בשילוב עם תגובת שרשרת פולימראז כמותית כדי להציע שיטת אבחון נוחה ומהירה לזיהום הליקובקטר פילורי ועמידותו בפני קלריתרומיצין וקינולונים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
איתור זיהום הליקובקטר פילורי ועמידות לאנטיביוטיקה באמצעות ניתוח תגובת שרשרת פולימראז כמותי בצואה
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
הליקובקטר פילורי (H. pylori) נפוץ מאוד ברחבי העולם, כאשר לכ-50% מאוכלוסיית העולם יש היסטוריה של זיהום בהליקובקטר פילורי. בסין, שיעור ההדבקה נע בין 40% ל-70%. הליקובקטר פילורי קשור בעיקר למחלות במערכת העיכול כמו דלקת קיבה כרונית, כיבי קיבה וכיבים בתריסריון. נכון לעכשיו, הטיפול הקליני בזיהום הליקובקטר פילורי כולל טיפול משולש או מרובע. עם זאת, השימוש הנרחב באנטיביוטיקה הוביל להתפתחות עמידות לאנטיביוטיקה בהליקובקטר פילורי. לכן, זיהוי הן של הליקובקטר פילורי והן של עמידותו לאנטיביוטיקה הוא חיוני להנחיית הטיפול הקליני.
שיטות האבחון להליקובקטר פילורי כוללות בדיקת נשימה אוריאה (UBT), בדיקת אנטיגן, בדיקת נוגדנים סרולוגיים, אנדוסקופיה, בדיקת אוראז מהירה (RUT) ותרבית חיידקים. בעוד ששלוש השיטות הראשונות אינן פולשניות, הן אינן מאפשרות התאוששות חיידקים ולכן לא ניתן להשתמש בהן לבדיקת עמידות. שלוש השיטות האחרונות הן פולשניות, יקרות, דורשות מומחיות טכנית גבוהה ועלולות לגרום נזק לחולים.
לכן, שיטה לא פולשנית ומהירה לזיהוי בו-זמני של זיהום בהליקובקטר פילורי ועמידות לאנטיביוטיקה היא בעלת חשיבות קלינית עליונה למיגור יעיל של הליקובקטר פילורי. מאמר זה נועד להציג פרוטוקול ספציפי המשלב תגובת שרשרת פולימראז כמותית (qPCR) עם טכנולוגיית בדיקה פלואורסצנטית של TaqMan כדי לזהות במהירות זיהום בהליקובקטר פילורי ועמידות לאנטיביוטיקה. שיטה זו מספקת דרך נוחה, מהירה ולא פולשנית לאבחון זיהום ועמידות להליקובקטר פילורי , בניגוד לתרבית חיידקים מסורתית וטכניקות אחרות. qPCR משמש לזיהוי הזיהום וזיהוי מוטציות בגנים 23S rRNA ו-gyrA , הקשורים לעמידות לקלריתרומיצין וקווינולונים, בהתאמה. בהשוואה לטכניקות תרבית קונבנציונליות, גישה זו מציעה שיטה לא פולשנית, חסכונית וחסכונית בזמן לאיתור זיהום הליקובקטר פילורי וקביעת עמידותו לאנטיביוטיקה.
מבוא
הליקובקטר פילורי הוא חיידק גרם שלילי בצורת ספירלה שיכול להדביק באופן מתמשך את אפיתל הקיבה האנושי1. בשנת 1994, ארגון הבריאות העולמי סיווג את הליקובקטר פילורי כמסרטן מקבוצה 1 לסרטן הקיבה, כאשר ~3% מהאנשים שנדבקו פיתחו בסופו של דבר את המחלה2. סקירה שיטתית שפורסמה לאחרונה הצביעה על מגמה כללית של עלייה בשיעור העמידות לאנטיביוטיקה של הליקובקטר פילורי בעשור האחרון, שהגיעה לרמות מדאיגות ברחבי העולם, במיוחד עמידות לקלריתרומיצין3. בסין, נתוני הסקר האחרונים הראו כי השכיחות המצטברת של הליקובקטר פילורי בקרב סינים עירוניים היא 27.08%; שיעורי העמידות לקלריתרומיצין ולבופלוקסצין היו 50.83% ו-47.17%4, שהם גבוהים יותר מארה"ב (לבופלוקסצין 37.6%, קלריתרומיצין 31.5%)5ואירופה (לבופלוקסצין 15.8% וקלריתרומיצין 21.4%)6. כתוצאה מכך, אבחון וטיפול מוקדמים ומדויקים הם קריטיים. עם זאת, העמידות הגוברת לאנטיביוטיקה של הליקובקטר פילורי מפחיתה במידה ניכרת את יעילות הטיפול, מה שמדגיש את הצורך הדחוף במחקר מתמשך לאבחון ולטיפול בה.
שיטות האבחון של הליקובקטר פילורי מסווגות לטכניקות פולשניות ולא פולשניות7. שיטות פולשניות כוללות בדיקה היסטופתולוגית, בדיקת אוראז מהירה (RUT) ותרבית חיידקים8. בדיקה היסטופתולוגית מסתמכת על עיבוד ותצפית מיקרוסקופית של דגימות ביופסיה, עם דיוק מוגבל על ידי הכנה היסטולוגית ומומחיות בפתולוגיה9. RUT מזהה הליקובקטר פילורי באמצעות פעילות של אוראז, אשר מבצע הידרוליזה של אוריאה לייצור אמוניה, וכתוצאה מכך שינוי אלקליין במגיב, ובכך מצביע על נוכחות החיידק9. זה פשוט וחסכוני. לתרבית חיידקים, הנחשבת ל"תקן הזהב", יש לעתים קרובות שיעור הצלחה מתחת ל-50% בשל המאפיינים הפיזיולוגיים הייחודיים של הליקובקטר פילורי10.
שיטות לא פולשניות כוללות בדיקת נשימה אוריאה 13C/14C (UBT), אבחון סרולוגי ובדיקת אנטיגן צואה (SAT)11. בדיקת הנשימה פועלת על פי עיקרון דומה לזה של RUT, ומזהה CO2 מסומן איזוטופית באוויר נשוף כדי לאשר זיהום12. אבחון סרולוגי מזהה נוגדנים, שעלולים להימשך לאחר מיגור חיידקים, מה שמקשה על הערכת יעילות הטיפול13. בדיקת אנטיגן צואה מזהה אנטיגנים ספציפיים להליקובקטר פילורי בדגימות צואה, ומספקת שיטה אמינה ולא פולשנית עם שיעור נמוך יותר של תוצאות חיוביות כוזבות ודיוק טוב לאבחון זיהומים פעילים14.
לכל שיטת אבחון יש את היתרונות והמגבלות שלה15. מלבד תרבית חיידקים, שיטות אחרות מתקשות באיתור עמידות לאנטיביוטיקה, בעוד שתרבית נפגעת על ידי שיעורי הצלחה נמוכים16. לאחרונה, שיטות אבחון מולקולאריות כגון PCR כמותי בזמן אמת (qPCR) יושמו באופן נרחב לזיהוי מיקרוביאלי17. qPCR יכול לזהות במדויק את הליקובקטר פילורי ולנתח מוטציות בגנים עמידים, ומציע מבט מקיף יותר על הזיהום18.
בדיקות פלואורסצנטיות נועדו להיקשר במיוחד לרצף מטרה ב-DNA במהלך תהליך ה-qPCR. בדיקות אלה מסומנות בדרך כלל בצבע פלואורסצנטי, הפולט אות כאשר הגשושית נקשרת למטרה שלה ונבקעת על ידי הפולימראז במהלך ההגברה. זה מספק מדידה בזמן אמת של תהליך ה-PCR. בדיקות פלואורסצנטיות ידועות בספציפיות הגבוהה שלהן בשל העיצוב הייחודי של הגשושית, המבטיח שרק רצף ה-DNA של המטרה מזוהה, מה שמפחית את הסיכוי לקשירה לא ספציפית ומשפר את ספציפיות הבדיקה. זה הופך את טכנולוגיית הבדיקה הפלואורסצנטית לשימושית במיוחד לאיתור מטרות בשפע נמוך, כגון DNA הליקובקטר פילורי בדגימות צואה. בעוד ש-SYBR Green הוא צבע קושר DNA נפוץ ב-PCR, הוא יכול להיקשר לכל DNA דו-גדילי, מה שעלול לגרום להגברה לא ספציפית ולתוצאות חיוביות כוזבות.
תרבית הליקובקטר פילורי מדגימות קליניות אינה מספקת נתוני עמידות לאנטיביוטיקה ישירות. לעומת זאת, qPCR מבוסס בדיקה פלואורסצנטית הוא מהיר יותר, נוח יותר וניתן להתאים אותו לזיהוי בו-זמני של הליקובקטר פילורי וסמני עמידות לאנטיביוטיקה. שיטה זו לא רק מספקת תוצאות מהירות יותר משיטות תרבות מסורתיות, אלא גם מאפשרת זיהוי בו זמנית של גנים עמידים לאנטיביוטיקה, מה שמשפר מאוד את יעילות הזיהוי והנוחות. שיטה זו מספקת דרך נוחה, מהירה ולא פולשנית לאבחון זיהום ועמידות להליקובקטר פילורי , בניגוד לתרבית חיידקים מסורתית וטכניקות אחרות.
ישנן שתי סוגיות מכריעות שיש לקחת בחשבון עבור עמידות לאנטיביוטיקה של הליקובקטר פילורי : 1) העקביות של הגנוטיפ והפנוטיפ, 2) העמידות לתרופות מרובות. מחקר רב-מרכזי רחב היקף בסין מצא כי דפוסי העמידות הכפולה לקלריתרומיצין/לבופלוקסצין היו 26.1%. פנוטיפים וגנוטיפים של H pylori עמידים לקלריתרומיצין ולבופלוקסאצין הראו הסכמה משביעת רצון (מקדם קאפה = 0.810 ו-0.782, בהתאמה)19. לכן, ניתן להשתמש בשיטת qPCR לאיתור זיהום בהליקובקטר פילורי ועמידות לתרופות. שיטות בדיקת אנטיגן צואה (SAT) ו-qPCR נמצאות בשימוש יותר ויותר בשל נוחות הדגימה. הרגישות, הספציפיות והדיוק של השיטות לזיהוי הליקובקטר פילורי הם כדלקמן: qPCR > UBT > SAT > RUT> CagA IgG > תרבית20. כל השיטות הלא פולשניות מתאימות לבדיקה ראשונית. מכיוון ש-qPCR יכול לזהות בנוסף גנים עמידים לתרופות, qPCR ותרבית יתאימו יותר להנחיית הטיפול.
גישות חדשניות אחרות, כגון אלגוריתמים של בינה מלאכותית (AI) בשילוב עם תמונות אנדוסקופיות21, מיקרופלואידיקה דיגיטלית22 ו-RPA-CRISPR/Cas12a23, מראות תיאורטית יעילות אבחון טובה וסיכויי יישום מבטיחים. עם זאת, qPCR היא כיום הטכניקה המתוחכמת ביותר לביולוגיה מולקולרית עם פוטנציאל לספק פתרון מעולה לאבחון וטיפול בזיהומי הליקובקטר פילורי .
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
מחקר זה מקפיד על ההנחיות האתיות שנקבעו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העממי המחוזי גואנגדונג, האוניברסיטה הרפואית הדרומית, גואנגג'ואו, סין (מס' אישור: KY2024-445-01). מידע מפורט לגבי החומרים המשמשים במחקר זה (ריאגנטים, כימיקלים, ציוד ותוכנה) ניתן למצוא בטבלת החומרים.
1. בחירת משתתפים
- בחר משתתפים בטווח הגילאים 18 עד 60 שנים.
- בחר משתתפים שעשויים לעבור בדיקת זיהום הליקובקטר פילורי , כגון חולים המציגים תסמינים כמו דלקת קיבה, כיבים פפטיים או דיספפסיה, כמו גם אנשים ללא תסמינים.
- להוציא מהמחקר מטופלים שהשתמשו באנטיביוטיקה, חומרים המכילים ביסמוט (כגון כמוסות אשלגן ביסמוט ציטראט, כמוסות פקטין ביסמוט קולואידיות, או טבליות תרכובת ביסמוט-אלומיניום), או תרופות סיניות אנטי-מיקרוביאליות במהלך החודש האחרון, או כאלה שהשתמשו במעכבי משאבת פרוטון או אנטגוניסטים לקולטן H2 (כגון אומפרזול, פנטופרזול, רבפרזול, סימטידין או ניזטידין) במהלך השבועיים האחרונים. כמו כן, לא לכלול נשים במהלך המחזור החודשי שלהן מהמחקר.
2. איסוף דגימות צואה
הערה: ספק את סעיף 2 כהוראות למשתתפים.
- ודא שהאריזה החיצונית של ערכת הדגימה אינה פגומה ובתוך תאריך התפוגה. הסר את החומרים מהערכה.
- מניחים נייר איסוף צואה לבן בקערת האסלה ועושים את צרכיהם (כדי למנוע זיהום בשתן).
- בעזרת מרית, אוספים חלק של צואה בערך בגודל של שעועית רחבה (~5 גרם) ומעבירים אותה למיכל הדגימה.
- הנח את מרית הדגימה, יחד עם דגימת הצואה, לתוך צינור האיסוף, וודא שמפלס הנוזל עולה קרוב לקו הדגימה המצוין על הצינור.
- הדק היטב את מכסה הצינור. הפוך את הצינור מספר פעמים כדי להבטיח ערבוב יסודי של הדגימה עם תמיסת השימור.
- אחסן את הדגימה בקירור עד למסירה למעבדה הקלינית לזיהוי הבא של הליקובקטר פילורי והערכת פרופילי עמידות לאנטיביוטיקה באמצעות qPCR.
3. מיצוי חומצות גרעין
הערה: השלם את כל ההליכים בתוך ארון בטיחות ביולוגית כדי למנוע זיהום.
- הפוך את צינור שימור הדגימה וערבב היטב. העבירו 1.0 מ"ל מתמיסת דגימת הצואה לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה.
- לאחר ערבוב צינורות הצנטריפוגה, הניחו אותם באמבט מתכת בחום של 80 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, עם ערבוב לסירוגין למשך 30 שניות בדקה החמישית. לאחר שהצינורות התקררו לטמפרטורת החדר, צנטריפוגה ב-10,000 × גרם למשך 5 דקות ואספו את הסופרנטנט להמשך עיבוד.
- הפוך את צלחת 96 הבארות מספר פעמים כדי להשעות מחדש את החרוזים המגנטיים. הסר בזהירות את אטם נייר האלומיניום, הקפד להימנע מטלטול כדי למנוע שפיכה.
- הוסף 200 מיקרוליטר מהדגימה המוכנה (משלב 3.2) לכל באר של צלחת 96 הבארות המכילה מאגר ליזה, וודא שכל באר מתאימה לדגימה אחת. הנח את צלחת 96 הבארות בתא הדגימה המיועד של מכשיר מיצוי חומצות הגרעין למיצוי אוטומטי.
- אחסן את כל הדגימות שנותרו ואת דגימות חומצות הגרעין שחולצו ב-20 מעלות צלזיוס לשימור ארוך טווח ולשימוש עתידי.
4. qPCR איתור חומצות גרעין הליקובקטר פילורי ומוטציות עמידות לקלריתרומיצין וקינולונים
- קח את הריאגנטים מאזור אחסון הריאגנטים והפשיר אותם בטמפרטורת החדר.
הערה: ערכה זו שימשה לזיהוי איכותי של חומצת גרעין הליקובקטר פילורי , כולל מוטציות בגן 23S rRNA (A2143G, A2143C, A2144G) ובגן gyrA (261A, 261G, 260T, 271A, 271T, 272G). הפריימרים, הבדיקות, האנזים Taq, האנזים UNG וה-dNTPs היו זמינים בערכה. גני המטרה של הליקובקטר פילורי ו-β-אקטין אנושי נכללו בבקרת האיכות החיובית. הגןהאנושי β-אקטין נבחר כבקרת האיכות הפנימית. - בהתבסס על מספר הדגימות שייבדקו, השתמש בעותקים של N + 2 של המגיב הליופילי, כאשר N מייצג את מספר הדגימות שיש לבדוק ו-2 מייצג את ה-QCs השליליים והחיוביים.
- צנטריפוגה בקצרה כדי להבטיח שהאבקה הליופילית תתייצב בתחתית הצינורות. פתח את המכסה של המגיב הליופילי (הקפד למנוע שפיכה של האבקה) והוסף 25 מיקרוליטר לבאר של חומצות הגרעין המופקות מהדגימות לבדיקה, כמו גם את הבקרות החיוביות והשליליות. סגור את הצינורות בחוזקה.
- מערבולת את ריאגנטים ה-PCR למשך 8-10 שניות, ואז צנטריפוגה קצרה למשך 3-5 שניות כדי למנוע היווצרות בועות.
- הנח את לוחית ה-qPCR בעלת 96 הבארות על מכונת ה-qPCR. הגדר את תוכנית הרכיבה באופן הבא: ראשית, דגרו את תערובת התגובה (המכילה פריימרים, בדיקות, Taq polymerase, אנזים UNG, dNTPs וכו') ב-42 מעלות צלזיוס ו-95 מעלות צלזיוס (שני השלבים במחזור אחד) למשך 2 דקות; לאחר מכן, מחזור 10x עם 10 שניות ב-95 מעלות צלזיוס ו-45 שניות ב-65 מעלות צלזיוס; לבסוף, מחזור פי 35 עם 10 שניות ב-95 מעלות צלזיוס ו-45 שניות ב-58 מעלות צלזיוס לדנטורציה, חישול והארכה.
- הגדר את פרמטרי זיהוי אותות הקרינה כדלקמן: תיוג פלואורסצנטי ROX של גנים משומרים של הליקובקטר פילורי ; תיוג פלואורסצנטי FAM של גנים עמידים ל - H. pylori clarithromycin; תיוג פלואורסצנטי HEX של גנים עמידים להליקובקטר פילורי קווינולון; ותיוג פלואורסצנטי CY5 של גן β-אקטין אנושי שימשו כבקרה הפנימית של הערכה. אסוף נתונים בטמפרטורה של 58 מעלות צלזיוס. עם השלמת התגובה, ודא שהנתונים נשמרים לניתוח עתידי.
- נתח את הנתונים באמצעות תוכנה ספציפית ל-qPCR, מכיוון שהמכשיר בוחר אוטומטית את סף הבסיס. הגדר את כל קריטריוני האבחון, כולל נוכחות של זיהום או עמידות להליקובקטר פילורי , לערך CT ≤30; מאשרים שהם מציגים עקומה אופיינית בצורת S.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
יישום qPCR לזיהוי זיהום הליקובקטר פילורי ועמידות לאנטיביוטיקה בדגימות צואה
עיצבנו פריימרים ובדיקות המבוססים על מוטציות נקודתיות בגנים השמורים של הליקובקטר פילורי, כמו גם בגן 23S rRNA ובגן gyrA . פריימרים ובדיקות אלה סומנו בצבעי פלורסנט שונים ולאחר מכן שימשו לזיהוי qPCR. תוצאות בקרת האיכות עבור ניסויי ה-qPCR היו בטווח המומלץ, מה שמצביע על תוצאות זיהוי אמינות (איור 1). במחקר זה, ב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
בשנים האחרונות, שיטות זיהוי מולקולאריות יושמו באופן נרחב בתחום המיקרוביולוגיה, ושינו באופן משמעותי את הניהול הקליני של מספר מחלות זיהומיות. שיטות אלו פועלות ברמה הגנטית, ומאפשרות לא רק אישור נוכחות חיידקים אלא גם בדיקת סוג גנים ועמידות לאנטיביוטיקה. PCR כמותי פלואורסצנטי בזמן אמת (qPCR) מועדף יותר ויותר בשל זמן העיבוד הקצר שלו, הרגישות והדיוק הגבוהים והסיכון הנמוך לזיהום צולב. הוא הפך לשימוש נרחב במעבדות קליניות לאבחון זיהומי הליקובקטר פילורי .
שילוב ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.
תודות
מחקר זה מומן על ידי קרן המחקר לכישרונות מתקדמים של בית החולים העממי של מחוז גואנגדונג [מענק מס. KY012023293]. עבודה זו נתמכה על ידי Jiangsu Mole Bioscience Co. למממנים לא היה כל תפקיד בתכנון המחקר, באיסוף הנתונים ובניתוחם, בהחלטה לפרסם או בהכנת כתב היד.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| BSC-1500IIA2-X | BIOBASE | SEDA | ארון בטיחות ביולוגית |
| צינור איסוף ואחסון צואה חד פעמי | שומה | לאסוף דגימות צואה | |
| צנטריפוגה E-צנטריפוגה | WEALTEC | הנוזל השיורי מדופן הצינור | |
| חומצת גרעין הליקובקטר פילורי, קלריתרומיצין וערכת זיהוי מוטציות עמידות לקווינולון | שומה | איתור זיהום הליקובקטר פילורי ועמידות לאנטיביוטיקה; מגיב הליקובקטר פילורי מיובש בהקפאה (המכיל פריימרים, בדיקות, Taq פולימראז, אנזים UNG, dNTPs וכו'), בקרה חיובית להליקובקטר פילורי (המכיל הליקובקטר פילורי וגני מטרה אנושיים &בטא;-אקטין), ובקרה שלילית להליקובקטר פילורי (המכיל גנים מטרה אנושיים ובטא;-אקטין) | |
| שומה 96M אוטומטית מחלץ חומצות גרעין | שומה | למיצוי | |
| DNAערכת מיצוי חומצות גרעין | שומה | לחילוץ חומצת גרעין; מכיל מאגר ליזה (מלח גואנידין, טריס הידרוקסימתיל אמינומתאן, טווין-20, נתרן כלורי), מאגר כביסה 1 (נתרן כלורי), מאגר כביסה 2 (טריס הידרוקסימתיל אמינומתאן, טווין-20), מאגר כביסה 3 (חרוזים מגנטיים, Tween-20), מאגר כביסה 4 (מים ללא נוקלאז) ומאגר אלוטיון (טריס הידרוקסימתיל אמינומתאן), יחד עם מתלה מגנטי | |
| SLAN מערכת ניתוח PCR רפואית אוטומטית לחלוטין | ניתוח נתונים | HONGSHI | |
| SLAN-96S מכונת PCR בזמן אמת | HONGSHI | הגברת PCR כמותית פלואורסצנטית | |
| מקפיאים בטמפרטורה נמוכה במיוחד (DW-YL450) | MELING | SEDA | 20172220091-20 ° C לאחסון ריאגנטים |
| Vortex-5 | Kylin-bell | לערבוב מגיב |
מקורות
- Yuan, C., et al. The global prevalence of and factors associated with Helicobacter pylori infection in children: a systematic review and meta-analysis. Lancet Child Adolesc Health. 6 (3), 185-194 (2022).
- Watari, J., et al. Helicobacter pylori associated chronic gastritis, clinical syndromes, precancerous lesions, and pathogenesis of gastric cancer development. World J Gastroenterol. 20 (18), 5461-5473 (2014).
- Yu, Y., et al. Global primary antibiotic resistance rate of Helicobacter pylori in recent 10 years: A systematic review and meta-analysis. Helicobacter. 29 (3), e13103(2024).
- Wang, L., et al. cross-sectional surveillance of Helicobacter pylori prevalence and antibiotic resistance to clarithromycin and levofloxacin in urban China using the string test coupled with quantitative PCR. Lancet Microbe. 5 (6), e512-e513 (2024).
- Ho, J. J. C., Navarro, M., Sawyer, K., Elfanagely, Y., Moss, S. F. Helicobacter pylori antibiotic resistance in the United States between 2011 and 2021: A systematic review and meta-analysis. American J Gastroenterol. 117 (8), 1221-1230 (2022).
- Megraud, F., et al. Helicobacter pylori resistance to antibiotics in Europe in 2018 and its relationship to antibiotic consumption in the community. Gut. 70 (10), 1815-1822 (2021).
- Guevara, B., Cogdill, A. G. Helicobacter pylori: A review of current diagnostic and management strategies. Dig Dis Sci. 65 (7), 1917-1931 (2020).
- Rotimi, O., Cairns, A., Gray, S., Moayyedi, P., Dixon, M. F. Histological identification of Helicobacter pylori: Comparison of staining methods. J Clin Pathol. 53 (10), 756-759 (2000).
- Lim, L. L., Ho, K. Y., Ho, B., Salto-Tellez, M. Effect of biopsies on sensitivity and specificity of ultra-rapid urease test for detection of Helicobacter pylori infection: A prospective evaluation. World J Gastroenterol. 10 (13), 1907-1910 (2004).
- Hortelano, I., Moreno, Y., Vesga, F. J., Ferrús, M. A. Evaluation of different culture media for detection and quantification of H. pylori in environmental and clinical samples. Int Microbiol. 23 (4), 481-487 (2020).
- Wang, Y. K., et al. Diagnosis of Helicobacter pylori infection: Current options and developments. World J Gastroenterol. 21 (40), 11221-11235 (2015).
- Gisbert, J. P., Pajares, J. M. Review article: 13C-Urea breath test in the diagnosis of Helicobacter pylori infection -- a critical review. Aliment Pharmacol Ther. 20 (10), 1001-1017 (2004).
- Laheij, R. J., Straatman, H., Jansen, J. B., Verbeek, A. L. Evaluation of commercially available Helicobacter pylori serology kits: A review. J Clin Microbiol. 36 (10), 2803-2809 (1998).
- Gisbert, J. P., Pajares, J. M. Stool antigen test for the diagnosis of Helicobacter pylori infection: A systematic review. Helicobacter. 9 (4), 347-368 (2004).
- Benigno, T. G. D. S., et al. pylori primary strains and virulence genotypes in the Northeastern region of Brazil. Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 64, e47(2022).
- Savoldi, A., Carrara, E., Graham, D. Y., Conti, M., Tacconelli, E. Prevalence of antibiotic resistance in Helicobacter pylori: A systematic review and meta-analysis in World Health Organization regions. Gastroenterology. 155 (5), 1372-1382.e17 (2018).
- Kalach, N., et al. Usefulness of gastric biopsy-based real-time polymerase chain reaction for the diagnosis of Helicobacter pylori infection in children. J Pediatr Gastroenterol Nutr. 61 (3), 307-312 (2015).
- Han, X., et al. Quantitative PCR of string-test collected gastric material: A feasible approach to detect Helicobacter pylori and its resistance against clarithromycin and levofloxacin for susceptibility-guided therapy. Helicobacter. 28 (4), e12985(2023).
- Zhong, Z., et al. A retrospective study of the antibiotic-resistant phenotypes and genotypes of Helicobacter pylori strains in China. Am J Cancer Res. 11 (10), 5027-5037 (2021).
- Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H. Detection of Helicobacter pylori infection by invasive and non-invasive techniques in patients with gastrointestinal diseases from Iraq: A validation study. PloS One. 16 (8), e0256393(2021).
- Bang, C. S., Lee, J. J., Baik, G. H. Artificial intelligence for the prediction of Helicobacter pylori infection in endoscopic images: Systematic review and meta-analysis of diagnostic test accuracy. J Med Internet Res. 22 (9), e21983(2020).
- Liu, J., et al. Rapid and multi-target genotyping of Helicobacter pylori with digital microfluidics. Biosens Bioelectron. 256, 116282(2024).
- Liu, H., Wang, J., Hu, X., Tang, X., Zhang, C. A rapid and high-throughput Helicobacter pylori RPA-CRISPR/Cas12a-based nucleic acid detection system. Clin Chim Acta. 540, 117201(2023).
- Fan, C. J., et al. Diagnostic accuracy of a real-time PCR assay for detection of Helicobacter pylori and resistance to clarithromycin and levofloxacin directly from stool. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 28 (12), 3836-3840 (2024).
- Patel, S. K., Pratap, C. B., Jain, A. K., Gulati, A. K., Nath, G. Diagnosis of Helicobacter pylori: what should be the gold standard. World J Gastroenterol. 20 (36), 12847-12859 (2014).
- Celiberto, F., et al. The state of the art of molecular fecal investigations for Helicobacter pylori (H. pylori) antibiotic resistances. Int J Mol Sci. 24 (5), 4361(2023).
- Yang, H., Hu, B. Diagnosis of Helicobacter pylori infection and recent advances. Diagnostics. 11 (8), 1305(2021).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
