מאמר שיטה

זיהוי מהיר של אלימות והקלדה של הליקובקטר פילורי באמצעות טכנולוגיית תיוג נקודות קוונטיות

DOI:

10.3791/67792

⸱

13 ביוני 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בין שיטות האבחון הרבות להליקובקטר פילורי, אימונופלואורסצנציה של נקודות קוונטיות יכולה להקליד ולזהות במהירות הליקובקטר פילורי, ולספק בסיס להחלטות טיפול קליניות. מאמר זה מספק מבוא מפורט לערך היישום של טכנולוגיית נקודות קוונטיות בהקלדה וזיהוי של הליקובקטר פילורי.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים שיטה המבוססת על טכנולוגיית תיוג נקודות קוונטיות לזיהוי מהיר של האלימות של הליקובקטר פילורי וביצוע הקלדה, במטרה להתגבר על מגבלות שיטות האבחון הקונבנציונליות ולספק בסיס לטיפול קליני מותאם אישית. ערכה תוכננה בשיטת כריך אנטיגן כפול. זה כלל סדרה של צעדים קפדניים, כולל הקמת מערכות תגובת חיץ וביצוע תהליכי הפעלה וצימוד לתגובות אנטיגן-נוגדנים במהלך הכנת הערכה. בנוסף, היו נהלים ספציפיים לפעולות איסוף דגימות, עיבוד ובדיקה כדי לקבוע את מצב ההדבקה וסוג האלימות של הליקובקטר פילורי. על ידי הקמת מודלים של נתונים לתוצאות שונות (שליליות, סוג II וסוג I), אומתה היעילות של טכנולוגיית הנקודות הקוונטיות בזיהוי הקלדה. במקרה של דגימות שליליות, היו ערכי אות חלשים או ללא ערכי אות משמעותיים באזורי הזיהוי הרלוונטיים. עבור דגימות מסוג II, נצפתה דפוס ספציפי של ערכי אות חיוביים ושליליים עבור נוגדנים שונים, ועבור דגימות מסוג I, נצפתה קבוצה מובחנת של ערכי אות חיוביים המתאימים לנוגדנים מרכזיים. יתר על כן, יישומו במחקרים הקשורים לדלקת קיבה כרונית וסרטן הקיבה הוכיח את ערכו בשמש כאינדיקטור להקרנה. לשיטה מבוססת נקודות קוונטיות יש יתרונות כמו רגישות וספציפיות משופרות בהשוואה לשיטות אבחון מסורתיות. עם זאת, היא מתמודדת גם עם אתגרים כמו השפעות פוטנציאליות מזמן אחסון הדגימה ועלויות גבוהות יחסית. עם זאת, עם חידושים טכנולוגיים מתמשכים, הוא צפוי למלא תפקיד משמעותי יותר בתחום הביו-רפואי לגילוי הליקובקטר פילורי ואבחון מחלות קשורות בעתיד.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הליקובקטר פילורי (H. pylori) הוא חיידק גרם שלילי שנמצא בין רירית הפילורי לתת-רירית של אנטרום הקיבה 1,2. בשנת 1994, ארגון הבריאות העולמי/הסוכנות הבינלאומית לחקר הסרטן (WHO/IARC) סיווג אותו כמסרטן מסוג I. על פי השאלה אם הם מבטאים רעלנים של ציטוטוקסין A (VacA) וגן A (CagA) הקשורים לציטוטוקסין, הם מחולקים לשני סוגים: סוג I H. pylori זיהום זן אלים: אלים יותר ומזיק יותר לחולים. קשור קשר הדוק לשכיחות כיבי קיבה ותריסריון וסרטן הקיבה, זיהום מסוג II H. pylori כולל זנים בעלי אלימות נמוכה עם פתוגניות חלשה, המתבטאת בדרך כלל בהפרעות עיכול קלות 3,4. חוקרים מצאו כי שיעור ההדבקה מסוג I גבוה מזה של סוג II, כאשר שיעורי ההדבקה מסוג I וסוג II הם 72.4% ו-27.6%, בהתאמה. זיהוי מהיר של סוגי הליקובקטר פילורי, במיוחד ההבחנה בין סוג I לסוג II, הוא חיוני לטיפול קליני ולמניעת מחלות.

דלקת קיבה כרונית הנגרמת על ידי זיהום בהליקובקטר פילורי עלולה להוביל למחלות קשות במערכת העיכול, כגון דלקת קיבה אטרופית, מחלת כיב פפטי, אדנוקרצינומה של הקיבה ולימפומה של רקמת לימפה הקשורה לרירית (MALT) בחולים נגועים 6,7,8. מחקר נטל המחלות העולמי משנת 2014 חוזה כי החל משנת 2010, כ-3.5 מקרי מוות לכל 100,000 אנשים ייגרמו ממחלת כיב פפטי בכל שנה9. דוחות מחקר מצאו כי כמעט 800,000 מקרים חדשים של סרטן קיבה ברחבי העולם בשנת 2018 היו קשורים לזיהום בהליקובקטר פילורי 10. בשנים האחרונות, מחקרים מצאו כי זיהום הליקובקטר פילורי קשור קשר הדוק גם למחלות נוירולוגיות, מחלות לב וכלי דם, סוכרת וכו'. זיהום הליקובקטר פילורי הפך לבעיה עולמית בבריאות הציבור. לכן, זיהוי מדויק של זיהום הליקובקטר פילורי חשוב לאיתור מחלות קשורות. הטיפול הוא קריטי, מה שהופך את הזיהוי המדויק של הליקובקטר פילורי למוקד מחקר.

מכיוון ששיעור ההדבקה בהליקובקטר פילורי גבוה בסין, זיהוי בזמן ומדויק של זיהום הליקובקטר פילורי מועיל לגילוי מוקדם וטיפול ויש לו משמעות חיובית למניעה וטיפול בסרטן הקיבה. ישנן שיטות שונות לאיתור זיהום בהליקובקטר פילורי, כולל שיטות פולשניות כגון בדיקת אוראז מהירה (RUT), מיקרוסקופיה מוכתמת של קטעי רקמת רירית הקיבה, אנדוסקופיה ובדיקת נשימה אוריאה C13 או C14. (UBT), בדיקת אנטיגן צואה של הליקובקטר פילורי (SAT) ושיטות לא פולשניות אחרות 11,12,13. לשיטות זיהוי אלה יש מגבלות מסוימות. לדוגמא, הבדיקה ההיסטולוגית עשויה לתת תוצאות שליליות כוזבות בשל איכות וגודל דגימת הביופסיה שנבחרה באתר הביופסיה; בדיקת הנשימה עשויה להיות מושפעת מהשימוש האחרון של המטופל באנטיביוטיקה או במעכבי משאבת פרוטון (PPI) ומהשפעת גורמים משפיעים שונים 11,14,15. לאור המגבלות של שיטות מסורתיות, כגון רגישות וסגוליות גוזלות זמן ולא מספיקות, פיתוח שיטות אבחון מהירות המבוססות על אימונופלואורסצנציה של נקודות קוונטיות (QD-IF) הראה פוטנציאל יישום גדול בתחום הבדיקות הביולוגיות16,17. ניתוח QD-IF מציג בדיקות פלואורסצנטיות של נקודות קוונטיות כדי להשיג זיהוי ספציפי של מטרות מולקולריות באמצעות קשירה ספציפית למטרות מולקולריות18,19.

נקודות קוונטיות הן ננו-חלקיקים מוליכים למחצה עם רדיוס קטן או קרוב לרדיוס האקסיטון של בוהר, בדרך כלל 1 עד 10 ננומטר. נקודות קוונטיות משמשות כבדיקות פלואורסצנטיות. אותות פלואורסצנטיים נוצרים על ידי נקודות קוונטיות מרגשות, ונתונים כמותיים מתקבלים על ידי מדידת המכשיר. יתרונותיו כוללים מגוון רחב של אורכי גל עירור, אורכי גל פליטה צרים, גודל פלואורסצנטי מתכוונן, רגישות גבוהה, יציבות אופטית טובה, אורך חיים ארוך של פלואורסצנטיות, משמרת סטוקס גדולה ויעילות פלואורסצנטית קוונטית גבוהה. נקודות קוונטיות מתגברות על החסרונות של סמנים אחרים, כגון זמן זוהר קצר, דרישות סביבתיות מדויקות, יכולת חזרה לקויה, יציבות ירודה (כגון צבעים פלואורסצנטיים), השבתת אנזימים ורגישות נמוכה. בדיקה חיסונית פלואורסצנטית של נקודות קוונטיות משלבת את היתרונות של בדיקה חיסונית פלואורסצנטית של נקודות קוונטיות ובדיקה חיסונית פלואורסצנטית של סמן ביולוגי ויש לה את היתרונות של פשטות, מהירות, ספציפיות גבוהה ורגישות גבוהה20,21.

לכלי אבחון מסורתיים לזיהוי הליקובקטר פילורי, כולל תרבית חיידקים, בדיקת נשימה אוריאה ובדיקות סרולוגיות, יש מגבלות משלהם. תרבית חיידקים גוזלת זמן ודורשת תנאי מעבדה קפדניים, מה שגורם לרוב לרגישות נמוכה יחסית בשל דרישות הגידול הקפדניות של הליקובקטר פילורי. בדיקת הנשיפה של אוריאה עשויה להניב תוצאות שליליות כוזבות בנסיבות מסוימות, כמו שימוש לאחרונה באנטיביוטיקה או מעכבי משאבת פרוטון 22,23,24. בדיקות סרולוגיות יכולות להצביע רק על חשיפה בעבר ולא על מצב זיהום נוכחי במקרים מסוימים, והן חסרות את היכולת להבחין בין סוגי אלימות שונים של הפתוגן.

לעומת זאת, טכנולוגיית Quantum Dot Immunofluorescence (QD-IF) התגלתה כחלופה מבטיחה. QD-IF משלב את התכונות האופטיות המצוינות של נקודות קוונטיות, כגון עוצמת פלואורסצנטיות גבוהה, ספקטרום פליטה צר ויציבות פוטו-יציבות טובה, עם הספציפיות של תגובות אימונולוגיות. זה מאפשר זיהוי מהיר ורגיש של אנטיגנים או נוגדנים להליקובקטר פילורי בדגימות ביולוגיות. יתר על כן, יש לו יתרון ייחודי בכך שהוא מסוגל לזהות בו זמנית את סוג האלימות של הזן המזהם, ששיטות מסורתיות מתקשות להשיג. על ידי מילוי הפער הזה בתהליך האבחון, לטכנולוגיית QD-IF יש פוטנציאל גדול לחולל מהפכה באופן שבו אנו מאבחנים ומנהלים זיהומי הליקובקטר פילורי , ולאפשר התערבויות רפואיות מותאמות אישית ויעילות יותר.

בסך הכל, קיים צורך קליני דחוף בשיטת אבחון יעילה ולא פולשנית שיכולה לזהות זיהום בהליקובקטר פילורי וסוגי האלימות שלו (סוג I וסוג II) בו זמנית. מאמר זה נועד להשתמש בשיטת QD-IF כדי להעריך את נוכחותו של זיהום הליקובקטר פילורי בדגימות רקמה ולבנות שיטה מהירה ומדויקת לאיתור סוגי זיהום בהליקובקטר פילורי . לגילוי מהיר של זיהום הליקובקטר פילורי וסוגי האלימות שלו יש חשיבות רבה להשגת רפואה מדויקת, שיפור השפעות הטיפול, הפחתת הסיכון למחלות נלוות ומניעת סרטן הקיבה. הוא מספק בסיס תיאורטי מדעי לצוות הקליני לבחור שיטות מדויקות לזיהוי זיהום בהליקובקטר פילורי .

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה (KY2025-191-01) בוצע תוך הקפדה על הנחיות ועדת האתיקה של המחקר בבני אדם של בית החולים העממי של מחוז גואנגדונג (האקדמיה למדעי הרפואה של גואנגדונג), האוניברסיטה הרפואית הדרומית. סעיף זה תואם את הבקשה לפטור מהסכמה מדעת.

הערה: מחקר זה נועד להשתמש בטכנולוגיית נקודות קוונטיות כדי לתכנן ולפתח ערכה לאבחון אם מיני הדם של המשתתפים מכילים נוגדנים להליקובקטר פילורי אוראז (אוראז), נוגדנים לציטוטוקסין A (VacA) ונוגדנים לרעלן הקשור לציטוטוקסין A (CagA) כדי לקבוע אם הליקובקטר פילורי נגוע והאם הזן הנגוע הוא מסוג I או סוג II. ערכה מעוצבת זו משתמשת בשיטת סנדוויץ' אנטיגן כפול למדידת נוגדני הליקובקטר פילורי אוראז, נוגדני CagA ונוגדני VacA. כאשר דגימת הבדיקה המכילה את חומר המטרה מתווספת לכרית הדגימה, היא זורמת דרך הכרית הקוונטית והממברנה באמצעות פעולת סיפון, ויוצרת קומפלקס אנטיגן-נוגדן בשלב מוצק. לאחר האיתור, קו הזיהוי והמסה נקראים בהתאמה על ידי המנתח. ערך האות של קו הבקרה משמש לקביעת המצב השלילי והחיובי של נוגדן Urase, נוגדן CagA ונוגדני VacA בהתבסס על ערכי אות T/C של כל אחד משלושת הנוגדנים. תרשים העיצוב מוצג באיור 1.

figure-protocol-1
איור 1: תרשים סכמטי של כרטיס מבחן הקלדת הליקובקטר פילורי . האיור מציג את המבנה וההרכב של כרטיס הבדיקה. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

1. הכנת ערכה

  1. הקמת מערכת תגובת חיץ של חומצה אתנו-סולפונית (MES) QDs-2-(n-morphine)
    1. איזון תמיסת ה-QDs המקורית לטמפרטורת החדר (RT). לאחר מכן, שאפו 1000 מיקרוליטר והוסיפו נפח שווה של תמיסת MES פי 2 (הריכוז הסופי של MES היה 10 ממול/ליטר).
    2. מערבבים, מנערים וסוניקציה במשך 30 שניות עד 3 דקות.
  2. ההפעלה
    1. הוסף 20 מ"ג/מ"ל 1-אתיל-3- (3-דימתילאמינפרופיל) קרבודימיד (EDC)/ N-הידרוקסיסוקסימיד (NHS) למערכת החיץ QDs-MES ביחס של 10:1. מערבבים, מנערים והופכים אותו לסוניקציה למשך 3 דקות.
    2. מניחים את התמיסה המוכנה באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות וצנטריפוגה בחום של 13,000 × גרם למשך 20 דקות.
    3. הסר את הסופרנטנט מהתמיסה הצנטריפוגתית והמיס אותו מחדש עם תמיסת MES 1x. נשפו את התמיסה שוב ושוב בעזרת פיפטה, נערו אותה כדי לערבב אותה באופן אחיד והפכו אותה לסוניקציה למשך 3 דקות.
    4. הניחו את התמיסה הנ"ל באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות וצנטריפוגה בחום של 13,000 × גרם למשך 20 דקות.
  3. צימוד
    1. הוסף 0.03 מ"ג של אנטיגן אוראז, אנטיגן CagA, אנטיגן VacA ו-IgG נגד עכבר עזים ל-1000 מיקרוליטר של תמיסת ההפעלה, פיפטה את הקצה שוב ושוב, נער וסוניקט למשך 3 דקות.
    2. הניחו את התמיסה הנ"ל באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס והגיבו במשך 3 שעות.
  4. סגירה ואחסון
    1. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת חסימה (טבלה משלימה 1) ודגירה למשך שעה.
    2. צנטריפוגה את התמיסה החסומה ב-13,000 × גרם למשך 15 דקות.
    3. הסר את הסופרנטנט מהתמיסה הצנטריפוגה, הוסף 750 מיקרוליטר של תמיסת בנייה מחדש (טבלה משלימה 1), שוב ושוב פיפטה, ניעור וסוניקט למשך 5 דקות, ולאחר מכן אחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

2. הכנת צלחות מצופות

  1. הכנת רפידות קוונטיות
    1. יש לדלל את קומפלקס האנטיגן H . pylori המסומן בנקודות קוונטיות 1:5 עם מאגר דילול נקודות קוונטיות כדי להכין את הכמות הנדרשת בהתאם לייצור אצווה.
    2. קח את המשטח הקוונטי ורסס באופן שווה כמות מסוימת של קומפלקס אנטיגן H . pylori המסומן בנקודות קוונטיות על הרפידה באמצעות מרסס סרט וייבש בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  2. הכנת קרום
    1. השתמש במאגר ההדפסה כדי לדלל את קו הבקרה וחומרי ציפוי קו הבדיקה והכין את הכמות הנדרשת בהתאם לנפח ייצור האצווה.
    2. הדביקו את קרום הניטרוצלולוזה על צלחת הפוליוויניל כלוריד (PVC), השתמשו במרסס זהב עם שריטות כדי לצפות באופן שווה את קו בקרת האיכות וחומרי קו הבדיקה על הממברנה, וייבשו בטמפרטורה של 57 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.

3. הרכבה

  1. הדבק את רפידות הקוונטום והדגימה על לוחית ה-PVC המצופה בסרט ברצף.

4. חיתוך לרצועות

  1. השתמש בחותך רצועות כדי לחתוך את הלוח הגדול המורכב לרצועות בדיקה.

5. אריזה פנימית

  1. השלם את האריזה בהתאם לדרישות הרכב הערכה.
    הערה: מרכיבי הערכה הם כדלקמן: (i) כרטיס בדיקה: הוא מורכב ממעטפת רצועת בדיקה ורצועת בדיקה. רצועת הבדיקה מורכבת מלוח PVC, כרית דגימה, כרית קוונטית (קומפלקס אנטיגן המסומן בנקודות קוונטיות; הקומפלקס מכיל אנטיגן אוראז, אנטיגן CagA, אנטיגן VacA ו-IgG של עכבר), קרום ניטרוצלולוזה (אזור הזיהוי קבוע באנטיגן VacA, אנטיגן CagA ואנטיגן אוראז (ביטוי אוקריוטי של אנטיגן רקומביננטי), ואזור בקרת האיכות מצופה ב-IgG נגד עכבר עז (נוגדן פולי עזים)), ונייר סופג. למפרטי אריזה שונים יש כמויות שונות של כרטיסי בדיקה. נדרש כרטיס בדיקה אחד עבור מגיב של אדם אחד. (ii) כרטיס SD: 1 חתיכה/קופסה. אסור לערבב רכיבי כרטיס בדיקה וכרטיס דיגיטלי מאובטח (SD) מקבוצות שונות של ערכות בדיקה.

6. עיבוד מדגם

הערה: לאיסוף דגימות, עיין בנוהלי תפעול המעבדה הקלינית הלאומית.

  1. אסוף דם בשפופרת ג'ל הפרדה. הקפד להימנע מהמוליזה.
  2. בדוק את דגימת הסרום המופרדת תוך 4 שעות בטמפרטורת החדר (RT). אם לא ניתן לבדוק אותו בזמן, אחסן את הדגימה בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס למשך 3 ימים. לטווח ארוך (תוך שנה), אטמו ואחסנו מתחת ל-20 מעלות צלזיוס.
  3. שחזר את הדגימות ל-RT וערבב אותן היטב לפני השימוש.
    הערה: יש להפשיר לחלוטין דגימות קפואות ומופשרות לפני השימוש, ומספר מחזורי ההקפאה-הפשרה לא יעלה על חמישה. דגימות חוזרות ונשנות שהופשרו בהקפאה עלולות לגרום להידרדרות האנליט ויש להימנע מהן. דגימות צ'ילה והמוליזה חמורות ישפיעו גם הן על הבדיקה ויש להימנע מהן.

7. נוהל הבדיקה

  1. הוצא את ערכת הריאגנטים וחומרי בקרת האיכות כדי לאזן ל-RT.
  2. הכנת דגימה: צנטריפוגה את דגימות הדם השלמות ב -1467 גרם למשך 10 דקות.
  3. ודא שמספר האצווה של כרטיס ה-SD תואם לזה של ערכת הריאגנט. הכנס את כרטיס ה-SD למכשיר לכיול אוטומטי.
  4. הפעל את המכשיר ואת מחשב ההפעלה. הפעל את התוכנה הייעודית ובחר את מודול הבדיקה . בחר הגדרות אתחול כדי לאתחל את המכשיר ולהמתין להשלמה מוצלחת.
  5. גש לאזור המגיב של המכשיר והסר את חריץ כרטיס הבדיקה. פתח את ערכת הריאגנט ובחר את המספר הנדרש של כרטיסי בדיקה.
  6. פתח את שקיות נייר הכסף של כרטיסי הבדיקה והנח אותם בחריץ בהתאם לכיוון המצוין. הכנס מחדש את חריץ הכרטיס לאזור המגיב של המכשיר.
  7. בדיקת בקרת איכות (QC).
    1. בתוך מודול הבדיקה , בחר הזנה ידנית. לחץ על הזנת מידע והזן את המידע הספציפי של חומר QC. לחץ על צור. הנח את חומרי ה-QC במדף הדגימה המיועד, והבטיח סדר וכיוון נכונים.
    2. לחץ על התחל בדיקה כדי להתחיל בדיקת QC. מחט הדגימה של המכשיר תשאב 80 מיקרוליטר מהדגימה ותחלק אותה אנכית לבאר הדגימה. המכשיר יתחיל בתזמון אוטומטי לאחר חלוקת הדגימה. לאחר 15 דקות, המכשיר יבצע זיהוי, יקרא את ערכי המדידה ויוציא את התוצאות.
  8. בדיקה לדוגמא: בתוך מודול הבדיקה , בחר LIS דו-כיווני. הנח את הדגימות לבדיקה במדף הדגימה המיועד, תוך הקפדה על סדר וכיוון נאותים. לחץ על התחל בדיקה. המכשיר ישאף באופן דומה 80 מיקרוליטר של דגימה מכל אחד ויעבד אותם באופן זהה לתהליך ה-QC.
  9. לאחר השלמת הבדיקה, הסר את כרטיסי הבדיקה המשומשים מהמכשיר והשליך אותם כפסולת רפואית.

8. בקרת איכות

  1. הליקובקטר פילורי שלילי: בדוק וודא שהתוצאות של מוצרי ייחוס שליליים של הליקובקטר פילורי , כלומר נוגדן אוראז, נוגדן CagA ונוגדני VacA, כולן שליליות.
  2. זיהום הליקובקטר פילורי מסוג II: בדוק וודא שתוצר הייחוס הליקובקטר פילורי מסוג II, כלומר נוגדן אוראז, חיובי, ותוצאות נוגדן CagA ונוגדני VacA שליליות.
  3. זיהום הליקובקטר פילורי מסוג I: בדוק וודא שמוצר הייחוס הליקובקטר פילורי מסוג I, כלומר נוגדן אוראז חיובי, נוגדן CagA ו/או נוגדן VacA חיוביים.

9. ניתוח תוצאות

  1. זיהום מסוג II עם זנים חלשים או לא רעילים: כאשר קריאת הנוגדנים של אוראז חיובית, וקריאות נוגדני CagA ונוגדני VacA שליליות, יש לפרש זאת כזיהום בזן הליקובקטר פילורי חלש או לא רעיל.
  2. זיהום מסוג I בזנים פתוגניים מאוד המייצרים רעלנים: כאשר קריאת הנוגדנים של אוראז חיובית, ונוגדני CagA או קריאת נוגדני VacA חיוביים, או ששניהם חיוביים, יש לפרש זאת כזיהום בזן המייצר רעלן הליקובקטר פילורי פתוגני מאוד.
  3. שלילי: כאשר הקריאות של נוגדן אוראז, נוגדן CagA ונוגדני VacA שליליות, יש לפרש זאת כחוסר זיהום בזני הליקובקטר פילורי .
  4. לא חוקי: כאשר המכשיר שופט את התוצאה כלא חוקית, בדוק אם יש פעולה שגויה או כשל בערכת הריאגנטים ונסה שוב את ההליך.

10. כיול מנתח הקרינה

  1. ראשית, הפעל את המנתח ותן לו להתחמם במשך כ-15 דקות כדי לייצב את ביצועיו. לאחר מכן, הכנס את תקן הכיול שסופק על ידי היצרן למחזיק המדגם.
  2. לאחר מכן, גש לפונקציית הכיול בממשק המנתח והתחל את התהליך. המנתח יזהה אוטומטית את הקרינה של התקן ויתאים את הפרמטרים הפנימיים שלו בהתאם כך שיתאימו לערכי הייחוס שנקבעו מראש.
  3. לאחר מכן, הסר את תקן הכיול והכנס דגימה ריקה כדי לוודא שהקריאות נמצאות בטווח המקובל.
  4. חזרה קבועה על שלבים אלה לפי לוח הזמנים המומלץ עוזרת לשמור על דיוק המנתח למדידות אמינות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איור 2 מציג את עקרון העבודה של אימונואנלייזר פלואורסצנטי של נקודות קוונטיות. הוא מורכב בעיקר ממקור אור עירור, מקור אור מקבל, מודול מעגל המרה פוטואלקטרי, מעגל עיבוד אותות, מעגל המרת ערך AD ומודול חישוב עיבוד אותות; מקור אור העירור מייצר סמני פלורסנט. הוא סופג אור מונוכרומטי באורך גל דומה, והאור המונוכרומטי מאיר על נקודת הסריקה הקבועה של רצועת המגיב (על חלון הזיהוי של רצועת המגיב) דרך נתיב אור העירור. החומר הפלואורסצנטי ליד נקודת הסריקה (על חלון הזיהוי של רצועת המגיב) נרגש לפלוט פלואורסצנטיות....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיטות האבחון הנוכחיות להליקובקטר פילורי מחולקות בעיקר לשתי קטגוריות: פולשניות ולא פולשניות26. לשיטות כגון בדיקת אוראז מהירה (RUT), היסטולוגיה, ביולוגיה מולקולרית ותרבות חיידקים יש מגבלות בפולשניות, רגישות, ספציפיות, אילוצי זמן, עלות, דרישות ציוד, טיפול בדגימות וניטור בזמן אמת. נפוצים יותר הם אבחון מהיר במבחנה בשיטות כמו בדיקת נשימה אוריאה, אנטיגן צואה ובדיקת נוגדנים סרולוגיים. עם זאת, ישנם גורמים רבים המשפיעים על בדיקת הנשימה של אוריאה. יחד עם זא...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מומן על ידי פרויקט קרן המחקר הבסיסי והיישומי של מחוז גואנגדונג (מענק מס': 2021A1515220022, 2022A1515220023).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1-(3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC)Sigma25952-53-85 גרם / בקבוק
2-(n-מורפין) חומצה אתנסולפונית (MES)Sigma145224-94-8100 גרם / בקבוק
צנטריפוגהSigma3K15
פלואורסצנטי אימונולוגי מנתחגואנגג'ואו Labsim Biotech Co., Ltdמחוז גואנגדונג רישום מכשור רפואי מס '.
ערכת בדיקת הקלדה הליקובקטר פילורי צ'ונגצ'ינג iSIA BIO-Technology Co., Ltdרישום מכשור רפואי לאומי מס' 20203400330QDs שיטת אימונופלואורסצנציה
מלח נתרן של N-hydroxythiosuccinimide (NHS)Sigma106627-54-71 גרם / בקבוק
2017221743

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tacconelli, E., et al. research and development of new antibiotics: WHO priority list of antibioticresistant bacteria and tuberculosis. Lancet Infect Dis. 18 (3), 318-327 (2018).
  2. Kamboj, A. K., et al. Helicobacter pylori: past, present, and future of treatment. Mayo Clin Proc. 92 (4), 599-604 (2017).
  3. Yamaoka, Y. Disease mechanisms: Helicobacter pylori virulence factors. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 7 (11), 629-641 (2010).
  4. Sharndama, H. C., Mba, I. E. Helicobacter pylori: an updated overview on its virulence and pathogenesis. Braz J Microbiol. 53 (1), 33-50 (2022).
  5. Lin, Y., et al. Infection status of type I and type II Helicobacter pylori in areas with high incidence of gastric cancer and its impact on gastrin and pepsinogen levels. World J Gastroenterol. 26 (25), 3673-3685 (2020).
  6. Li, Y. H., et al. Global prevalence of Helicobacter pylori infection from 1980 to 2022: a systematic review and metaanalysis. Lancet Gastroenterol Hepatol. 8 (6), 553-564 (2023).
  7. Karbalaei, M., Keikha, M. Rescue effect of lactobacillicontaining bismuth regimen on Helicobacter pylori treatment failure. New Microbiol New Infect. 42, 100904(2021).
  8. Malfertheiner, P., et al. Helicobacter pylori infection. Nat Rev Dis Primers. 9 (1), 19(2023).
  9. Stewart, B., et al. Global burden of disease requiring emergency surgery. Br J Surg. 101 (1), e9-e22 (2014).
  10. de Martel, C., et al. The global burden of cancer attributable to infection in 2018: a global incidence analysis. Lancet Glob Health. 8 (2), e180-e190 (2020).
  11. Godbole, G., et al. Review: diagnosis of Helicobacter pylori infection. Helicobacter. 25 (S1), e12735(2020).
  12. Lee, Y. C., et al. Diagnosis and treatment of Helicobacter pylori infection. Annu Rev Med. 73 (1), 183-195 (2022).
  13. Fischbach, W., Malfertheiner, P. Helicobacter pylori infection. Ger Int Med J. 115, 429-436 (2018).
  14. Zhang, C., et al. Survey on the quantitative detection of serum Helicobacter pylori antibodies in clinical laboratories in my country. J Clin Lab Anal. 36 (1), e24069(2021).
  15. Wan, W. S., et al. Improving the detection rate of Helicobacter pylori in chronic gastritis biopsies: a comparative analysis of H&E, methylene blue, WarthinStarry, immunohistochemistry, and quantum dot immunohistochemistry. Front Oncol. 13, 1229871(2023).
  16. Bodo, J., et al. Quantitative in situ detection of phosphoproteins in fixed tissues using quantum dot technology. J Histochem Cytochem. 57 (7), 701-708 (2009).
  17. Chen, C., et al. Quantum dotbased immunofluorescence technology for quantitative determination of HER2 expression in breast cancer. Biomaterials. 30 (15), 2912-2918 (2009).
  18. Kuang, H., et al. Recent developments in quantum dot analytical applications. TrAC Trends Anal Chem. 30 (10), 1620-1636 (2011).
  19. Park, Y., et al. Medically transformable quantum dots for biosensing and imaging. J Photochem Photobiol C Photochem Rev. 30, 51-70 (2017).
  20. SanmartinMatalbobs, J., et al. Semiconductor quantum dots as target analytes: properties, surface chemistry and detection. Chem Detect Nanomaterials. 12 (14), 2501(2022).
  21. Katan, C., Mercier, N., Even, J. Quantum and dielectric confinement effects in lowerdimensional hybrid perovskite semiconductors. Chem Rev. 119 (5), 3140-3192 (2019).
  22. Chinese Medical Association Branch of Health Management. Physical examination population 13C expert consensus on technical specifications for urea breath tests. Health Exam Manag. 2 (2), 94-96 (2021).
  23. National Clinical Medical Research Center for Digestive Diseases. Expert consensus on clinical application of Helicobacter pyloriurea breath test (2020). Chin J Health Manag. 14 (2020), 510-513 (2020).
  24. Zhang, Y., et al. The influence factors of Helicobacter pylori infection were detected by urea breath test. Chin J Clin Gastroenterol. 32 (3), 197-202 (2020).
  25. Lin, B., et al. Diagnostic value of gastric function triad and Helicobacter pylori typing in chronic gastritis and gastric cancer. Labeled Immunoassays Clin Med. 30 (1), 74-76 (2023).
  26. Cardos, A. I., et al. Evolution of diagnostic methods for Helicobacter pylori infection: from traditional tests to hightech, advanced sensitivity and identification tools. Diagnostics. 12 (508), 1-23 (2022).
  27. Ding, S. Z., et al. Chinese consensus report on familybased Helicobacter pylori infection control and management (2021 edition). Gut. 71 (2), 238-253 (2021).
  28. Wan, W., et al. Comparison of quantum dot immunofluorescence histochemistry and conventional immunohistochemistry in detecting Helicobacter pylori infection in paraffinembedded tissue of gastric biopsy. J Mol Histol. 52, 461-466 (2021).
  29. Zhou, Y., et al. Development of a fast and sensitive doubleantigen sandwich lateral flow immunoassay based on quantum dot nanobeads and its clinical performance in detecting SARSCoV2 total antibodies. Sens Actuators B Chem. 343, 130139(2021).
  30. Liu, H., et al. Consistency analysis of highsensitivity cardiac troponin I in peripheral blood and venous blood using quantum dot immunofluorescence method and its clinical application in acute myocardial infarction. J Chest Dis. 14 (4), 1267-1274 (2022).
  31. Xirong, W., et al. Development of quantum dotbased lateral flow immunoassay test strips for rapid and sensitive detection of SARSCoV2 neutralizing antibodies. Sci Rep. 13, 22253(2023).
  32. Purwidyantri, A., et al. Programmable graphenebased microfluidic sensor for DNA detection. Sens Actuators B Chem. 367, 132044(2022).
  33. Lee, K. S., Wagner, M., Stocker, R. Ramanbased sorting of microbial cells to link functions to their genes. Microb Cell. 7 (3), 62-65 (2020).
  34. Hu, C., et al. Design and fabrication of carbon dots for energy conversion and storage. Chem Soc Rev. 48 (8), 2315-2337 (2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Helicobacter pyloriROC

מאמרים קשורים