פרוטוקול זה מדגים את טכניקת השאיפה האורופרינגיאלית לשימוש במודל עכברי הבלאומיצין של פיברוזיס ריאתי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מתן אורו-לוע של בלאומיצין במודל העכברי של פיברוזיס ריאתי
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלת ריאות אינטרסטיציאלית (ILD) מייצגת ספקטרום רחב של הפרעות המאופיינות בהצטלקות מתקדמת ולעתים קרובות בלתי הפיכה של פרנכימת הריאות, הנפוצה ביותר היא פיברוזיס ריאתי אידיופטי (IPF). פותחו מספר מודלים של בעלי חיים של IPF, כאשר מודל עכברי הבלאומיצין הוא הנפוץ ביותר. בלאומיצין הוא תרופה כימותרפית הידועה כגורמת לנזק ל-DNA באפיתל המכתשית, וכתוצאה מכך לפגיעה חריפה בריאות ולפיברוזיס ריאתי בבני אדם. מודלים של מכרסמים של IPF משתמשים במתן בלאומיצין בשיטות שונות, הנפוצה ביותר היא תוך-קנה הנשימה (IT). לאחרונה, טכניקת שאיבת הפה והלוע (OA) הוכחה כיעילה באותה מידה כמו IT עבור תרופות פיברוזיות מרובות, עם הרבה פחות תופעות לוואי ודרך אספקה קלה יותר. פרוטוקול זה מפרט את שיטת ה-OA להעברת בלאומיצין לריאת העכברים ומדגיש דוגמאות ליישומים פוטנציאליים במורד הזרם לכימות נתונים. מתודולוגיה זו מציעה דרך פשוטה, מהירה ובטוחה להשתמש במודל בעלי חיים בשימוש נרחב זה לחקר המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס IPF.
מבוא
מחלת ריאות אינטרסטיציאלית (ILD) מתייחסת לקבוצה הטרוגנית של הפרעות המאופיינת בהצטלקות מתקדמת ובלתי הפיכה של חלל הנאדיות, האינטרסטיציום ודרכי הנשימה הדיסטליות1. פיברוזיס ריאתי אידיופטי (IPF) היא הצורה הנפוצה ביותר של ILD ונושאת הישרדות חציונית של כשלוש שנים2. IPF הוא מצב סופני בסופו של דבר, כאשר השתלת ריאות אורתוטופית היא טיפול הצלה עבור חולים נבחרים. ישנם כיום שני טיפולים שאושרו על ידי ה-FDA ל-IPF, שניהם רק מאטים את קצב ההתקדמות במקום לייצב או לשפר את תפקוד הריאות עבור חולים 3,4. מאמצי מחקר משמעותיים מתבצעים כדי להבהיר את היסודות ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
מחקרים בבעלי חיים שתוארו בניסויים אלה נערכו תחת פרוטוקולים (ARC-2021-025, ARC-2010-039) שאושרו על ידי ועדת המחקר בבעלי חיים של UCLA (ARC) והוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC). נשמרה עמידה מלאה בכל התקנות והמדיניות המדינתית והפדרלית בנוגע לשימוש בחיות מעבדה. בעלי החיים שוכנו במתקן לטיפול בבעלי חיים של UCLA וטופלו על ידי הצוות המיומן של המחלקה למעבדה ורפואת בעלי חיים (DLAM) של UCLA בתנאים נטולי פתוגנים. עכברי Wildtype C57BL/6 הושגו באופן מסחרי והורשו להתאקלם במשך 14 יום לפחות. עכברים זכרים בגילאי 8-12 שבועות שימשו למחקרים אלה, עם משקל גוף ממוצע של 20-25 גרם. ניתן להשתמש גם בעכברים נקבות, אם כי חשוב להתאים בעלי חיים למין ולגי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
הפרוטוקול המתואר כאן מסכם את מסלול השאיפה של הפה והלוע במודל עכברי הבלאומיצין. בניסויים אלה, בעלי חיים טופלו בבלאומיצין (0.75U/kg משקל גוף) או PBS לבקרת דמה. בימים 7, 14 ו-21, עכברים הורדמו, ריאותיהם הושתלו ורקמותיהם תוקנו, כפי שתואר קודםלכן 35. פיברוזיס הוערכה באמצעות צביעה היסטולוגית של המטוקסילין ואאוזין (H&E). ביום השביעי ניתן לראות שינוי פיברוטי של המחיצה המכתשית, יחד עם שינויים דלקתיים/פיברוטיים קטנים, בהשוואה לביקורת PBS (איור 3A,B). ביום ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול וידאו מפורט מסופק על טכניקת השאיפה האורופרינגיאלית למתן בלאומיצין לשימוש במודל העכברי של פיברוזיס ריאתי. בנוסף, אנו מדגישים יישומים פוטנציאליים במורד הזרם לכימות שינויים פיברוטיים ודלקתיים הנגרמים על ידי בלאומיצין OA.
בעוד שאף בעל חיים לא מסכם באופן מלא את המורכבות של מחלות אנושיות, מודל עכבר הבלאומיצין נמצא בשימוש בחמשת העשורים האחרונים ונותר המיושם ביותר לחקר הפתוגנזה של IPF36. ישנן דרכים רבות לתת בלאומיצין במודלים של מכרסמים.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי אינטרסים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מענק הכשרה למחקר מוסדי (T32) של NIH Ruth L. Kirchstein (NRSA) שהוענק ל-RW (2T32HL072752-16). המחברים רוצים גם להודות על תמיכתו של מרכז בריאות הריאות של קרן סול וג'ויס ברנדמן.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נגד עכבר CD45, Brlliant Violet 605 | BioLegend | 103155 | |
| נגד עכבר CD64, AlexaFluor 647 | BioLegend | 139322 | |
| נגד עכבר Ly6G, AlexaFluor 700 | BioLegend | 127622 | |
| נגד עכבר MerTK, PE/Cy7 | BioLegend | 151522 | |
| נגד עכבר SiglecF, PE | BD Biosciences | 552126 | |
| מתאמי BD Luer-Stub | פישר סיינטיפיק | 13-681-21 | |
| Bleomycin | McKesson | 1129996 | מ- NorthStar Rx 16714088601 |
| ערכת אינטובציה של עכבר אנדוטרכיאלי | קנט סיינטיפיק | ETI-MSE | |
| ניתן לתיקון חי/מת סגול | תרמו | L34955 | |
| FlowJo v10 תוכנה | FlowJo | ||
| gentleMACS Dissociator | Miltenyi | 130-093-235 | |
| ערכת בדיקת הידרוקסיפרולין | Sigma | MAK463 | |
| Liberase TM | Roche | 5401127001 | |
| Moria Vessel Clamp | Fine Science Tools | 18350-11 | |
| ערכת אינטובציה אנדוטרכיאלית של עכבר | קנט | ETI-MSE | |
| צעד פיפטה | Dymax | TI15469 | |
| עכברי Wildtype C57BL/6 | מעבדות ג'קסון | JAX, כתם #000664 |
מקורות
- Martinez, F. J., et al. Idiopathic pulmonary fibrosis. Nat Rev Dis Primers. 3, 17074(2017).
- Hutchinson, J., Fogarty, A., Hubbard, R., Mckeever, T. Global incidence and mortality of idiopathic pulmonary fibrosis: A systematic review. Eur Respir J. 46 (3), 7....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
