הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בניית מודל Xenograft של אדנוקרצינומה ריאתית בעכברים והערכת היעילות של מרתח XY באמצעות מסלול MAPK

588 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68023

⸱

25 באפריל 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2Respiratory Department, First Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Active Substances and Biological Mechanisms of Ginseng Efficacy, Changchun University of Chinese Medicine, 4Jilin Provincial Key Laboratory of Bio-Macromolecules of Chinese Medicine, Ministry of Education, Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

מחקר זה מדגים כי מרתח XY מפעיל השפעות טיפוליות נגד אדנוקרצינומה של הריאות על ידי ויסות מסלול MAPK.

תקציר

אדנוקרצינומה של הריאות הולכת וגוברת ברחבי העולם, מה שמעודד חקירה ופיתוח של שיטות טיפול יעילות. בשנים האחרונות הוכר יותר ויותר הפוטנציאל הטיפולי של הרפואה הסינית המסורתית לאדנוקרצינומה של הריאות, כמו מרתח XiaoYi (XY). מנגנון הפעולה של הרפואה הסינית המסורתית בטיפול באדנוקרצינומה של הריאות ממשיך להתבהר. במחקר זה, נעשה שימוש במודלים של בעלי חיים כדי לחקור את ההשפעות הטיפוליות של מרתח XY בטיפול באדנוקרצינומה של הריאות. המרכיבים הכימיים הנכנסים לדם של מרתח XY בעכברים הופרדו ונותחו במצבי יונים חיוביים ושליליים באמצעות UHPLC-QE-MS. הממצאים אומתו לאחר מכן באמצעות ניסויים in vivo , שהראו גודל גידול מופחת, שינויים פתולוגיים משופרים ואפופטוזיס מוגבר. כתוצאה מכך זוהו חמישה עשר רכיבים שנספגו בדם לאחר מתן מרתח XY: סטכיוז, קוורצטין-3-O-בטא-גלוקופירנוזיל-7-O-אלפא-רמנופירנוזיד; אימפריאלין; ספינוזין B; פיימין; בסיס פלבון + 3O, 2MeO, O-Hex; Picropodophyllotoxin; (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[(2R,3R,4S,5S,6R)-4,5-דיהידרוקסי-2 [[(3S,5R,8R,10R,12R,13R,14R,17S)-12-הידרוקסי-17-(2-הידרוקסי-6-מתיל-הפט-5-en-2-yl) 4,4,8,10,14-פנטמתיל-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecahydro-1H ציקלופנטה[a]פננתרן-3-yl]אוקסי]-6-(הידרוקסימתיל)אוקסן-3-יל]אוקסי-6-(הידרוקסימתיל)אוקסן-3,4,5-טריול; טריצין; ג'ינסנוסיד Rg1; (20R)-Ginsenoside Rh1; Jujuboside B; אוקובין; ג'ינסנוסיד Rg3; וחומצה בטא-אלמונית. ניסויים בבעלי חיים הראו כי מרתח XY עיכב את צמיחת הגידול, שיפר שינויים פתולוגיים וקידם אפופטוזיס של תאי גידול באופן תלוי מינון. המנגנונים המעורבים עשויים להיות קשורים לוויסות מוגבר של ביטוי חלבון p-JNK ו-p-P38 במסלול MAPK ולהפחתת ויסות ביטוי חלבון p-ERK במסלול MAPK. לסיכום, למרתח XY יש פוטנציאל לווסת את מסלול ה-MAPK ולהפעיל השפעות טיפוליות נגד אדנוקרצינומה של הריאות.

מבוא

שכיחות סרטן הריאות עולה ברחבי העולם. הוא מהווה 18% מכלל הגידולים הממאירים ואחראי למספר משמעותי של מקרי מוות הקשורים לסרטן 1,2. סרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC) הוא צורה נפוצה של סרטן ריאות, כאשר אדנוקרצינומה היא סוג3 הפתולוגי העיקרי. בשל התסמינים הערמומיים שלו, NSCLC מאובחן לרוב בשלב מתקדם ויש לו שיעור תמותה גבוה 4,5. לחולי NSCLC בשלב IV יש שיעור הישרדות של חמש שנים של 5% בלבד6, בעוד שאפילו ל-NSCLC בשלב מוקדם הניתן לכריתה בניתוח יש שיעור הישרדות של חמש שנים של 50% בלבד7.

נכון לעכשיו, הטיפול באדנוקרצינומה של הריאות כולל ניתוח, הקרנות, כימותרפיה, אימונותרפיה וטיפול ממוקד. בנוסף, הרפואה הסינית המסורתית (TCM) לאדנוקרצינומה של הריאות זוכה להכרה ומוערכת יותר ויותר8. לרפואה הסינית המסורתית יש היסטוריה ארוכה והיא שימשה לטיפול במחלות אונקולוגיות שונות עם תוצאות טיפוליות יעילות 9,10. הוא מתייחס לגוף האדם כישות שלמה, כאשר העיקרון הטיפולי מתמקד בשיקום תנועת הצ'י (צ'י מתייחס לאנרגיה החיונית המקדמת את זרימת הדם ונוזלי הגוף, תורמת לשיפור החסינות ולהפחתת דלקת בחולי NSCLC) באיברים פנימיים כדי להחזיר את האיזון הכללי ולעכב את התקדמות הסרטן.

הרפואה הסינית המסורתית לא רק מטפלת במחלות אונקולוגיות בעלות רעילות נמוכה, מטרות מרובות ויעילות גבוהה11, אלא היא גם מסייעת בתיקון נזקים שנגרמו על ידי הקרנות וכימותרפיה, ובכך מאריכה את ההישרדות12.

טכנולוגיית כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה (LC-MS) משלבת כרומטוגרפיה נוזלית עם ספקטרומטריית מסה כדי להשיג הפרדה וזיהוי של רכיבים בתערובות מורכבות13. LC-MS מציע רזולוציה גבוהה, רגישות גבוהה וסגוליות גבוהה, המאפשרים הפרדה וזיהוי של רכיבים כימיים שונים במרתחים של הרפואה הסינית המסורתית (TCM). בשילוב עם כימיה רפואית בסרום, המפרידה ומזהה רכיבים פעילים הנכנסים לדם לאחר מתן דרך הפה14,15, LC-MS מאפשר חיזוי וניתוח של מנגנוני פעולה פוטנציאליים של תרופות. גישה זו מסייעת בהבנת ההרכב הכימי והמרכיבים הפרמקולוגיים של מרתחי הרפואה הסינית המסורתית, ומספקת נתונים חיוניים למחקר מעמיק על ההשפעות הפרמקולוגיות והיישומים הקליניים שלהם, מה שהופך אותה לשימושית ביותר במחקר הרפואה הסיניתהמסורתית 16,17.

מסלול האיתות MAPK ממלא תפקיד מכריע בהתהוות, התקדמות, גרורות ופלישה לסרטן הריאות, כאשר Erk, p38 ו-JNK הן תת-משפחות חשובות. מרתחי TCM הוכחו כמשפיעים על ביטוי החלבונים במסלול MAPK18. מרתח XiaoYi (XY) נגזר ממרתח YiGuan ומשמש לטיפול באדנוקרצינומה של הריאות בבית החולים המסונף הראשון של אוניברסיטת צ'אנגצ'ון לרפואה סינית (איור 1), מה שמדגים יעילות קלינית מדויקת. עם זאת, המנגנון הטיפולי שלו נותר לא ברור.

במחקר זה, נעשה שימוש בכרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד בשילוב עם ספקטרומטריית מסה Q-Exactive Orbitrap (UHPLC-QE-MS) כדי להבהיר את המנגנון הטיפולי האפשרי של מרתח XY נגד אדנוקרצינומה של הריאות, והשפעותיו אומתו באמצעות מחקרי in vivo .

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים של אוניברסיטת צ'אנגצ'ון לרפואה סינית מסורתית (אתיקה מס' 2024008). עכברים זכרים בני שישה שבועות C57BL/6 (20 ± 2 גרם), שגודלו בתנאים ספציפיים נטולי פתוגנים (SPF), הפגינו דפוסי פעילות גופנית אופייניים בסביבה מבוקרת עם טמפרטורה ולחות קבועים. הייתה להם גישה חופשית למזון ומים והם נשמרו במחזור אור/חושך של 12 שעות. פרטים על הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מסופקים בטבלת החומרים.

1. הכנת תמצית מימית מרתח XY

  1. מניחים ג'ינסנג קוריאני C.A. Mey (רנשן, 15 גרם), Chinemys reevesii (אפור) (Guiban, 30 גרם) ו-Trionyx sinensis Wiegmann (Biejia, 30 גרם) לסיר מרתח. מוסיפים 1000 מ"ל מים נטולי יונים ומשרים למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר.
  2. מרתיחים את שלושת עשבי התיבול משלב 1.1 למשך שעה. במקביל, יש להשרות את Rehmannia glutinosa Libosch (דיהואנג, 30 גרם), Trichosanthes kirilowii Maxim. (Tianhuafen, 30 גרם), Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (רומית.) Stapf (Yiyiren, 20 גרם), Paeonia lactiflora Pall. (Baishao, 30 גרם), Boswellia carterii Birdw. (Ruxiang, 7 גרם), Commiphora myrrha Engl. (Moyao, 7 גרם), Agrimonia pilosa Ledeb. (Xianhecao, 20 גרם), Alpinia oxyphylla Miq. (יז'ירן, 20 גרם), טחנת Ziziphus jujuba . var. spinosa (Bunge) (Suanzaoren, 30 גרם), Melia toosendan Sieb. et Zucc. (Chuanlianzi, 5 גרם), Fritillaria thunbergii Miq. (Zhebeimu, 15 גרם), Anemarrhena asphodeloides Bge. (ז'ימו, 10 גרם), Platycodon grandiflorum (Jacq.) (Jiegeng, 10 גרם), Polygala tenuifolia Willd. (Yuanzhi, 15 g), ו-Phragmites communis Trin. (לוגן, 30 גרם) במיכל אחר למשך 30 דקות. לאחר ההשריה, העבירו אותם לסיר המרתח משלב 1.1.
  3. מרתיחים את כל 18 עשבי התיבול משלב 1.1 ושלב 1.2 למשך 30 דקות. שופכים את נוזל הצמחים, מוסיפים 1000 מ"ל מים נטולי יונים ומרתיחים עוד 30 דקות. חזור על תהליך הרתיחה הזה שלוש פעמים כדי לקבל שלוש מנות של נוזל צמחי, ואז שלב וערבב אותם היטב.
  4. מסננים את נוזל הצמחים המעורבב דרך מטלית של 400 רשת. רכזו את המסנן בלחץ מופחת, ולאחר מכן העבירו את נוזל הצמחים המרוכז לציוד קירור להמשך עיבוד.
  5. יוצקים את נוזל הצמחים המרוכז למגש ליופיליזציה ומניחים אותו בתא ההקפאה מראש של ליופילייזר ואקום. לאחר השלמת ההקפאה המוקדמת, העבירו את המגש לתא ייבוש הסובלימציה כדי להסיר מים.
  6. הסר כל לחות שנותרה בטמפרטורה גבוהה. מרסקים את תמצית הצמחים המיובשת בהקפאה באמצעות מועך לקבלת אבקת מרתח XY עדינה (איור 2).

2. הכנת סרום המכיל תרופות

  1. הקצה באופן אקראי עכברים זכרים בני שישה שבועות C57BL/6 (20 ± 2 גרם) לקבוצת XiaoYi (XY) או לקבוצת הביקורת.
    הערה: מינון העכבר חושב באמצעות מקדם ההמרה מאדם לעכבר:
    מינון ניסיוני שווה ערך לעכברים (גרם/ק"ג) = {מינון אנושי (גרם/ק"ג) / משקל גוף (70 ק"ג)} x 9.1
    על סמך חישוב זה, המינון לעכברים נקבע כ-2.6 גרם/ק"ג.
  2. שוקלים 0.9152 גרם אבקת מרתח XY ליופיליזציה וממיסים אותה ב -3.2 מ"ל מים מזוקקים להכנת תמיסת התרופה.
    הערה: עכברים צמו במשך 12 שעות לפני מתן דרך הפה.
  3. מתן מרתח XY לעכברים בקבוצת XY באמצעות gavage, תוך מתן קבוצת הביקורת בנפח שווה ערך של מים נטולי יונים.
  4. שעתיים לאחר מתן דרך הפה, יש להרדים את העכברים עם נתרן פנטוברביטל (בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד). הסר את גלגלי העיניים באמצעות פינצטה לאיסוף דגימות דם, ולאחר מכן המתת חסד של העכברים באמצעות חנק CO2 ואחריו פריקת צוואר הרחם בהתאם להנחיות אתיות19.
  5. אפשר לדגימות הדם להתייצב בטמפרטורת החדר למשך 90 דקות. צנטריפוגה בטמפרטורה של 3450 x גרם (4 מעלות צלזיוס) למשך 15 דקות לאיסוף הסופרנטנט.

3. ניתוח UHPLC-QE-MS

  1. הוסף 100 מ"ג של אבקת ליופיליזציה מרתח XY ל-500 מיקרוליטר של תמיסת מיצוי (מתנול: מים = 4:1). מערבבים היטב, סוניקט ודוגרים באמבט מי קרח למשך שעה.
  2. שמרו על התערובת בטמפרטורה של -40 מעלות צלזיוס למשך שעה, ולאחר מכן צנטריפוגה בטמפרטורה של 13,800 x גרם (4 מעלות צלזיוס) למשך 15 דקות. סננו את הסופרנטנט דרך ממברנת מסנן של 0.22 מיקרומטר, ואז שלבו 100 מיקרוליטר מכל סופרנטנט כדי ליצור דגימות בקרת איכות (QC).
  3. לאחר הפשרת דגימות הפלזמה, קח 400 מיקרוליטר מדגימת הפלזמה של קבוצת הביקורת ו-400 מיקרוליטר מדגימות הפלזמה של קבוצת XY. הוסף 40 מיקרוליטר של חומצה הידרוכלורית (2 מול/ליטר) לכל דגימה. מערבולת למשך דקה אחת ונותנים לתערובת לעמוד על 4 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. חזור על שלב זה ארבע פעמים.
  4. הוסף 1.6 מ"ל אצטוניטריל ומערבולת למשך 5 דקות. צנטריפוגה ב-13,800 x גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. נושא 1,800 מיקרוליטר של הסופרנטנט לייבוש חנקן.
  5. להרכיב מחדש את הדגימות המיובשות ב-150 מיקרוליטר של 80% מתנול המכיל 10 מיקרוגרם/מ"ל מהתקן הפנימי על ידי מערבולת למשך 5 דקות. צנטריפוגה ב-13,800 × גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס, ואז להעביר 120 מיקרוליטר של הסופרנטנט לבקבוקון זכוכית טרי עבור ניתוח LC-MS (איור 3).

4. תרבית תאים והכנת בעלי חיים

  1. זרע של 1 מ"ל של תאי קרצינומה של ריאות לואיס בצלחת תרבית המכילה את מדיום הנשר המותאם (DMEM) של Dulbecco בתוספת 10% סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין. דגירה על התאים בתנאים מבוקרים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2.
  2. כאשר התאים מגיעים למפגש של 80%, העבירו אותם באמצעות 0.25% טריפסין. המשך במעבר עד שמצב התא מתייצב, ולאחר מכן התאם את ריכוז התאים ל-3 x 106 תאים/מ"ל.
  3. הזרקו 0.1 מ"ל מתרחיף התא המוכן תת עורי לתוך בית השחי הימני של עכברי C57BL/6 זכרים כדי לבסס את מודל אדנוקרצינומה של הריאות.
    הערה: ניתן למשש רקמת גידול בבית השחי של עכברים 5 ימים לאחר החיסון.
  4. לאחר 5 ימים, חלקו את העכברים באופן אקראי לחמש קבוצות (n = 6 לקבוצה): קבוצת מודל (M) - ללא טיפול; קבוצת מרתח XY במינון נמוך (XY-L) - 1.3 גרם/ק"ג; קבוצת מינון בינוני מרתח XY (XY-Z) - 2.6 גרם לק"ג; קבוצת מינון גבוה של מרתח XY (XY-H) - 5.2 גרם/ק"ג; קבוצת ציספלטין (DDP) - מטופלת בציספלטין20.
  5. ממיסים את אבקת המרתח XY ב -200 מיקרוליטר מים מזוקקים במינון המתאים ונותנים אותה באמצעות gavage. קבוצות M ו-DDP מקבלות נפח שווה של מים מזוקקים באמצעות גבאז'.
  6. יש לתת ציספלטין לקבוצת ה-DDP באמצעות הזרקה תוך-צפקית (3 מ"ג/ק"ג) אחת ל-3 ימים. הזריק את אותו נפח של מי מלח פיזיולוגיים לקבוצות האחרות.

5. ניתוח פתולוגי של רקמת הגידול

  1. לאחר 21 יום, המתת חסד של כל העכברים באמצעות חנק CO2 ואחריו פריקת צוואר הרחם (בהתאם להנחיות אתיות) וכריתת רקמת הגידול21. מדוד את נפח הגידול ומשקלו (איור 4).
  2. תקן את רקמות הגידול שנכרתו ב-4% פרפורמלדהיד למשך 24 שעות). יבש את הרקמה באמצעות תמיסות אתנול מדורגות.
  3. נקה את גושי הרקמה המיובשים באמצעות קסילן, ולאחר מכן הטמיע אותם בשעוות פרפין מומסת. הניחו לשעווה להתמצק לגוש פרפין. חתכו את גוש הרקמה לפרוסות בעובי 5 מיקרומטר בעזרת מיקרוטום.
  4. הסרת שעווה מקטעי הרקמה בקסילן, ואחריה החזרת נוזלים בתמיסות אתנול מדורגות. מכתימים את החלקים בהמטוקסילין למשך 5 דקות, ואז שוטפים במים נטולי יונים.
  5. מכתים את החלקים בתמיסת אאוזין של 0.5% למשך דקה. התבונן בחלקים המוכתמים תחת מיקרוסקופ אופטי וצלם תמונות לניתוח.

6. ניתוח אימונוהיסטוכימי של רקמת הגידול

  1. בצע הסרת שעווה והחזרת נוזלים בהתאם להליכים המתוארים בשלבים 5.2-5.4.
  2. דגרו את החלקים בחוסם פרוקסידאז אנדוגני בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. חסום כריכה לא ספציפית על ידי דגירה של החלקים בסרום עיזים.
  3. יש למרוח את הנוגדנים העיקריים: Ki-67 (1:600) ו-Caspase-3 (1:100). דוגרים את החלקים למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. יש לשטוף עם מאגר PBS), ולאחר מכן למרוח נוגדן משני לשימוש כללי (1:500) ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  4. פתח את תגובת הצבע על ידי הוספת תמיסת DAB. מכתים את החלקים בתמיסת המטוקסילין.
  5. בצע ייבוש, ניקוי ואיטום של החלקים המוכתמים. התבונן בביטוי החלבון תחת מיקרוסקופ אופטי וצלם תמונות לניתוח.

7. ניתוח כתמים מערביים

  1. הומוגניזציה של רקמות הגידול באמצעות לייזר רקמות. חלץ את החלבון הכולל וקבע את ריכוזו באמצעות ערכת בדיקת חומצה ביצינצ'ונינית (BCA) (ראה טבלת חומרים).
  2. בצע כימות חלבון, ואחריו אלקטרופורזה SDS-PAGE והעברת חלבון לממברנה.
  3. דגרו את הממברנה למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם נוגדנים ראשוניים: P38 (1:2000), p-P38 (1:1000), ERK (1:20000), p-ERK (1:500), JNK (1:2000), p-JNK (1:5000), β-אקטין (1:200) (ראו טבלת חומרים).
  4. למחרת, דגרו על הממברנה עם נוגדן משני מצומד חזרת פרוקסידאז (HRP) בטמפרטורת החדר למשך 1.5 שעות. זיהוי רצועות חלבון באמצעות מערכת כימילומינסנציה משופרת (ECL).
    הערה: עוצמות פס החלבון כומתו באמצעות תוכנת ImageJ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תמיסת אבקת XY ודגימות סרום מקבוצת הביקורת וקבוצת ה-XY נותחו באמצעות UHPLC-QE-MS, וחשפו פסגות מופרדות היטב. דיאגרמות היינון הכוללות עבור מצבי היונים החיוביים והשליליים מוצגות באיור 3. הרכב מרתח ה-XY זוהה על סמך זמן שמירה, מצב רכישה ושברי ספקטרום מסה. חמישה עשר מרכיבי כניסת דם זוהו על ידי השוואת הסרום של קבוצות המתן האוראלי של מרתח ריק ומרתח XY עם מרכיבי תמיסת אבקת XY (טבלה 1).

גרף קו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שכיחות הסרטן עולה מדי שנה, ומושכת עניין קליני ומחקרי משמעותי22,23. מחקרים אחרונים הוכיחו את יעילותה של הרפואה הסינית המסורתית (TCM) בטיפול בסרטן ריאות 24,25,26. לדוגמה, מרתח מיימנדונג הוכח כמשפר את המספר והפעילות של תאי NK, ובכך מעכב גרורות סרטן ריאות27. באופן דומה, מרתח Mahuang Fuzi Xixin השיג השפעות טיפוליות על ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי פריט תוכנית הפיתוח המדעי והטכנולוגי של מחוז ג'ילין (YDZJ202301ZYTS459).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אצטוניטרילCNW טכנולוגיות5/8/1975
2-כלורו-L פנילאלניןשנחאי Hengbo ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ103616-89-3
תמיסת אמוניום הידרוקסידסין קבוצת התרופות הלאומית ריאגנט כימי ושות 'בע"מ#2028
נוגדן-ובטא;-אקטיןAbcamab8228
Anti-Erk1 (pT202/pY204) + Erk2 (pT185/pY187) נוגדןAbcamab4819
Anti-ERK1/ERK2 נוגדןAbcamab184699
Anti-JNK1 (pY185) + JNK2 (pY185) + JNK3 (pY223) נוגדןAbcamab76572
Anti-JNK1/JNK2/JNK3 נוגדןAbcamab208035
Anti-Ki67 Anti-Ki67 Anti-AntibodyCell Signaling TechnologyGB121141
Anti-p38 (phospho T180) AntibodyAbcamab178867
Anti-p38 alpha/MAPK14 AntibodyAbcamab170099
BCA ערכת בדיקת ריכוז חלבוןBCA Boster Biological Technology17E17B46
אלבומין סרום בקר (BSA)DAKOBIOFROXX
מעכב פוספטאז רחב ספקטרום (100x)Boster Biological TechnologyAR1183
C57bl/6 עכבריםLiaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK2021-0006
עמודה כרומטוגרפיתWatersACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μ m2.1*100 מ"מ
Cisplatinסין הלאומית פרמצבטיקה קבוצה כימית ריאגנט ושות', בע"מ232120
ציטראט (pH 6.0) תמיסת אחזור אנטיגןווהאן Baiqiandu ביוטכנולוגיה ושות', בע"מB2010
כיסוי להחליקג'יאנגסו שיטאי ציוד מעבדה ושות', בע"מ10212432C
שלב קריוגניווהאן ג'ונג'י אלקטרוניקה ושות', בע"מJB-L5
DAB ערכה כרומוגניתג'יאנגסו שיטאי ציוד מעבדה ושות', בע"מ
2005289 שייקר הסרת צבעבייג'ינג ליו יי מפעל מכשיריםWD-9405A
מייבשווהאן ג'ונג'י אלקטרוניקה ושות', בע"מJJ-12J
תנור ייבוששנחאי Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
מדיום הנשר השונה של DulbeccoGibco8121587
EDTA (pH 8.0) תמיסת אחזור אנטיגןWuhan Baiqiandu Biotechnology Co., Ltd.B2001
EDTA (pH 9.0) תמיסת אחזור אנטיגןווהאן Baiqiandu ביוטכנולוגיה ושות', בע"מB2002
מאגר אלקטרופורזהNCM Biotech20230801
מכונת הטבעהWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
Eosinסין קבוצת התרופות הלאומית מגיב כימי ושות', בע"מ
אתנולסין לאומית פרמצבטיקה קבוצה כימית ריאגנט ושות', בע"מ
סרום בקר עובריGibco2166090RP
חומצה פורמיתSIGMA64-18-6
תוכנת GraphPad פריזמהתוכנת GraphPad, LLCגרסה 9.0.0
המטוקסיליןסין הלאומית פרמצבטיקה קבוצה כימית ריאגנט ושות', בע"מH3136
כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהיםAgilent1260 Infinity II Prime
צנטריפוגה מקוררת במהירות גבוההThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוההThermo Fisher ScientificQ Exactive Focus
HRP מצומד עז נגד עכברSeraCare5220-0341
עיזים מצומד HRP נגד ארנבSeraCare5220-0336
HRP מצומד עז נגד ארנב/עכבר נוגדן משני אוניברסליDAKOK5007
HRP מצומד עיזים נגד חולדותSeraCare5220-0364
HRP מצומד ארנב נגד עזיםSeraCare5220-0362
חומצה הידרוכלוריתקבוצת התרופות הלאומית של סין ריאגנט כימי ושות', בע"מH9892
מי חמצןסין הלאומית פרמצבטיקה קבוצה כימית ריאגנט ושות', בע"מB12555
ערכת כימילומינסנציה ECL רגישה יתר על המידהNCM BiotechP10300
ImageJ תוכנההמכונים הלאומיים לבריאותv1.8.0
מערכת הדמיהניקון (יפן)NIKON DS-U3
תאי קרצינומה של ריאות לואיסהתרופות הלאומית של סין מגיב כימי ושות 'בע"מ.
בד רשת90020104 Baijie100110779650
מכשיר בקרת טמפרטורת חימום מתכתBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
מתנולאלאדיןM116118
MicropipetteDlab Scientific Co., Ltd.KE0003087 / KA0056573
מיקרוסקופ שקופיותג'יאנגסו שיטאי ציוד מעבדה ושות', בע"מ10212432C
מיקרוטוםשנחאי Leica מכשירים ושות', בע"מRM2016
תנור מיקרוגלGalanz מיקרוגל מכשירי חשמל ושות', בע"מP70D20TL-P4
בלזם ניטרליסין הלאומית פרמצבטיקה קבוצת ריאגנט כימית ושות', בע"מ
מיקרוסקופ אופטיניקון (יפן)ניקון Eclipse CI
תנורשנחאי Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.של ג'ל DHG-9140A
PAGEBiosharpPL566B-5
ParaformaldehydeChina National Pharmaceutical Group Chemical Reagent Co., Ltd.8.18715
תמיסת מלח חוצצת פוספט (1x)Gibco8120485
סמן חלבון צבע מוכתם מראש (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
מאגר טעינת חלבון (5X)Boster Biological TechnologyAR1112
מרסקShangzhiqiao Co., Ltd.DFT-100A
PVDF (0.45 μ מ)Cywin Innovation (בייג'ינג) ביוטכנולוגיה ושות', בע"מSW120-01
פתרון העברת ממברנה מהירהCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
RIPA ליזאטבוסטר טכנולוגיה ביולוגית ושות', בע"מAR0105
TBS מאגרNCM Biotech23HA0102
תחנת עבודה לציפה רקמותJinhua Kedi Instrument Equipment Co., Ltd., מחוז ג'ה-ג'יאנג.KD-P
NCM Biotech23CA2000
טריפסין (0.25%, 1x)HyCloneJ210045
מכשיר שיבוש תאים אולטרסאונדNingbo Xinyi ציוד קולי ושות', בע"מJY92-IIDN
מיקרוסקופ אופטי זקוףניקון (יפן)ניקון Eclipse CI
ואקום ליופילייזרLanjing Co., Ltd.HD-LG20D
מערבל מערבולתKylin-BellXW-80A
קסילןסין הלאומית פרמצבטיקה קבוצה כימית ריאגנט ושות', בע"מ
212954493511 קבוצת 10004160ערכת הכנה מהירה מאגר טרנסממברני 214736

מקורות

  1. Ferlay, J., et al. Cancer statistics for the year 2020: An overview. Int J Cancer. 149 (4), 778-789 (2021).
  2. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  3. Ahn, M. J., et al. Asian Thoracic Oncology Research Group (ATORG) expert consensus statement on MET alterations in NSCLC: Diagnostic and therapeutic considerations. Clin Lung Cancer. 23 (8), 670-685 (2022).
  4. Seguin, L., Durandy, M., Feral, C. C. Lung adenocarcinoma tumor origin: A guide for personalized medicine. Cancers (Basel). 14 (7), 1759(2022).
  5. Nasim, F., Sabath, B. F., Eapen, G. A. Lung cancer. Med Clin North Am. 103 (3), 463-473 (2019).
  6. Miller, K. D., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022. CA Cancer J Clin. 72 (5), 409-436 (2022).
  7. Torrente, M., et al. Understanding prognosis and survival outcomes in patients with early-stage non-small-cell lung cancer. Clin Med (Lond). 22 (Suppl 4), 38-40 (2022).
  8. Li, Z., Feiyue, Z., Gaofeng, L. Traditional Chinese medicine and lung cancer--From theory to practice. Biomed Pharmacother. 137, 111381(2021).
  9. Wei, Z., et al. Traditional Chinese medicine has great potential as candidate drugs for lung cancer: A review. J Ethnopharmacol. 300, 115748(2023).
  10. Miao, K., et al. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  11. Wang, K., et al. Anticancer activities of TCM and their active components against tumor metastasis. Biomed Pharmacother. 133, 111044(2021).
  12. Chen, S., et al. Efficacy and safety of TCM combined with chemotherapy for SCLC: A systematic review and meta-analysis. J Cancer Res Clin Oncol. 146 (11), 2913-2935 (2020).
  13. Yu, Y., Yao, C., Guo, D. A. Insight into chemical basis of traditional Chinese medicine based on the state-of-the-art techniques of liquid chromatography-mass spectrometry. Acta Pharm Sin B. 11 (6), 1469-1492 (2021).
  14. Wei, J., et al. Integrated serum pharmacochemistry and network pharmacology approach to explore the effective components and potential mechanisms of Menispermi rhizoma against myocardial ischemia. Front Chem. 10, 869972(2022).
  15. Shao, D., et al. Identification of the active compounds and functional mechanisms of Jinshui Huanxian formula in pulmonary fibrosis by integrating serum pharmacochemistry with network pharmacology. Phytomedicine. 102, 154177(2022).
  16. Han, J., et al. Using network pharmacology to explore the mechanism of panax notoginseng in the treatment of myocardial fibrosis. J Diabetes Res. 2022, 8895950(2022).
  17. Wang, Y., et al. Mechanisms underlying the therapeutic effects of Qingfeiyin in treating acute lung injury based on GEO datasets, network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 145, 105454(2022).
  18. Rubio, K., et al. Non-canonical integrin signaling activates EGFR and RAS-MAPK-ERK signaling in small-cell lung cancer. Theranostics. 13 (8), 2384-2407 (2023).
  19. Guo, T. F., Li, W., Xi, B. Animal welfare and slaughter methods of fur animal. J Econ Anim. 15 (2), 112-119 (2011).
  20. Moar, K., et al. Synergistic anticancer activity of resveratrol with cisplatin and carboplatin in A549 lung adenocarcinoma cells. Int J Clin Exp Pathol. 17 (11), 411-420 (2024).
  21. Li, Z., et al. Exploring tumor-suppressive effect and mechanism of action of Zilongjin Tablets combined with icotinib in Lewis tumor-bearing mice based on EGFR/PI3K/Akt signaling pathway. Chin Tradit Herb Drugs. 56 (2), 529-535 (2025).
  22. Mullard, A. Addressing cancer's grand challenges. Nat Rev Drug Discov. 19 (12), 825-826 (2020).
  23. Williams, P. A., Zaidi, S. K., Sengupta, R. AACR cancer disparities progress report 2022. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 31 (7), 1249-1250 (2022).
  24. Zhao, W., et al. Si Jun Zi decoction inhibits the growth of lung cancer by reducing the expression of PD-L1 through TLR4/MyD88/NF-κB pathway. J Ethnopharmacol. 318 (Pt A), 116948(2024).
  25. Ye, Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the effects and mechanisms of Qinghao Biejia decoction and its active compound artemisinin B against non-small-cell lung cancer. Drug Des Devel Ther. 17, 2461-2479 (2023).
  26. Zhang, J., et al. Ze-Qi decoction inhibits non-small cell lung cancer growth and metastasis by modulating the PI3K/Akt/p53 signaling pathway. J Tradit Complement Med. 13 (5), 417-429 (2023).
  27. Zhang, Z., et al. Maimendong decoction inhibits lung cancer metastasis by increasing the proportion and killing activity of NK cells. J Ethnopharmacol. 338 (Pt 3), 119127(2025).
  28. Zhang, W., et al. Explore the mechanism and substance basis of Mahuang FuziXixin decoction for the treatment of lung cancer based on network pharmacology and molecular docking. Comput Biol Med. 151 (Pt A), 106293(2022).
  29. Lee, J. Y., et al. Picropodophyllotoxin inhibits cell growth and induces apoptosis in gefitinib-resistant non-small lung cancer cells by dual-targeting EGFR and MET. Biomol Ther (Seoul). 31 (2), 200-209 (2023).
  30. Li, J. X., et al. Metabolomics and integrated network pharmacology analysis reveal Tricin as the active anticancer component of Weijing decoction by suppression of PRKCA and sphingolipid signaling. Pharmacol Res. 171, 105574(2021).
  31. Hong, J., Gwon, D., Jang, C. Y. Ginsenoside Rg1 suppresses cancer cell proliferation through perturbing mitotic progression. J Ginseng Res. 46 (3), 481-488 (2022).
  32. Wei, H., et al. Shuangshen granules attenuate lung metastasis by modulating bone marrow differentiation through mTOR signaling inhibition. J Ethnopharmacol. 281, 113305(2021).
  33. Nakhjavani, M., et al. Anti-Angiogenic properties of Ginsenoside Rg3. Molecules. 25 (21), 4905(2020).
  34. Liu, Z., et al. Insights into the antitumor mechanism of ginsenosides Rg3. Mol Biol Rep. 48 (3), 2639-2652 (2021).
  35. Huang, G., et al. Stachyose-induced apoptosis of Caco-2 cells via the caspase-dependent mitochondrial pathway. Food Funct. 6 (3), 765-771 (2015).
  36. Lin, Q., et al. Mechanistic and therapeutic study of novel antitumor function of natural compound imperialine for treating non-small cell lung cancer. J Ethnopharmacol. 247, 112283(2020).
  37. Zhang, T., et al. Peimine-induced apoptosis and inhibition of migration by regulating reactive oxygen species-mediated MAPK/STAT3/NF-κB and Wnt/β-catenin signaling pathways in gastric cancer MKN-45 cells. Drug Dev Res. 83 (7), 1683-1696 (2022).
  38. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  39. Zhang, P., et al. Jujuboside B suppresses angiogenesis and tumor growth via blocking VEGFR2 signaling pathway. Heliyon. 9 (6), e17072(2023).
  40. Guo, L., et al. Jujuboside B inhibits the proliferation of breast cancer cell lines by inducing apoptosis and autophagy. Front Pharmacol. 12, 668887(2021).
  41. Shao, M., et al. Aucubin exerts anticancer activity in breast cancer and regulates intestinal microbiota. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 4534411(2022).
  42. Yang, Z., et al. Jujuboside B reverses CUMS-promoted tumor progression via blocking PI3K/Akt and MAPK/ERK and dephosphorylating CREB signaling. J Immunol Res. 2022, 5211368(2022).
  43. Sun, J., et al. Peimine inhibits MCF-7 breast cancer cell growth by modulating inflammasome activation: Critical roles of MAPK and NF-κB signaling. Anticancer Agents Med Chem. 23 (3), 317-327 (2023).
  44. Shan, X., et al. Ginsenoside Rg3-induced EGFR/MAPK pathway deactivation inhibits melanoma cell proliferation by decreasing FUT4/LeY expression. Int J Oncol. 46 (4), 1667-1676 (2015).
  45. Wang, J., et al. Low toxicity ginsenoside Rg1-carbon nanodots as a potential therapeutic agent for human non-small cell lung cancer. Colloids Surf B Biointerfaces. 246, 114392(2025).
  46. Colic, E., Patel, P. U., Kent, O. A. Aberrant MAPK signaling offers therapeutic potential for treatment of ovarian carcinoma. Onco Targets Ther. 15, 1331-1346 (2022).
  47. Bahar, M. E., Kim, H. J., Kim, D. R. Targeting the RAS/RAF/MAPK pathway for cancer therapy: From mechanism to clinical studies. Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 455(2023).
  48. Sugiura, R., Satoh, R., Takasaki, T. ERK: A double-edged sword in cancer. ERK-dependent apoptosis as a potential therapeutic strategy for cancer. Cells. 10 (10), 2509(2021).
  49. Ullah, R., et al. RAF-MEK-ERK pathway in cancer evolution and treatment. Semin Cancer Biol. 85, 123-154 (2022).
  50. Romany, A., et al. Analysis of the ERK pathway cysteinome for targeted covalent inhibition of RAF and MEK kinases. J Chem Inf Model. 63 (8), 2483-2494 (2023).
  51. Ghosh, A. K., et al. Covalent inhibition in drug discovery. ChemMedChem. 14 (9), 889-906 (2019).
  52. Kaoud, T. S., et al. Modulating multi-functional ERK complexes by covalent targeting of a recruitment site in vivo. Nat Commun. 10 (1), 5232(2019).
  53. Qian, X., et al. Qingyihuaji formula promotes apoptosis and autophagy through inhibition of MAPK/ERK and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway on pancreatic cancer in vivo and in vitro. J Ethnopharmacol. 307, 116198(2023).
  54. Yue, S. J., et al. A ferulic acid derivative FXS-3 inhibits proliferation and metastasis of human lung cancer A549 cells via positive JNK signaling pathway and negative ERK/p38, AKT/mTOR and MEK/ERK signaling pathways. Molecules. 24 (11), 2165(2019).
  55. Ozgun, G. S., et al. Piperine induces cellular stresses, apoptosis, and cytotoxicity via JNK signaling and has concentration-dependently additive or synergistic effects with sorafenib in hepatocellular carcinoma: An in vitro study. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. , (2024).
  56. Martínez-Limón, A., et al. The p38 pathway: From biology to cancer therapy. Int J Mol Sci. 21 (6), 1913(2020).
  57. Xie, C. Q., et al. Triptolide exerts pro-apoptotic and cell cycle arrest activity on drug-resistant human lung cancer A549/Taxol cells via modulation of MAPK and PI3K/Akt signaling pathways. Oncol Lett. 12 (5), 3586-3590 (2016).
  58. Luo, Y. H., et al. Anticancer effects of baicalein on cervical carcinoma cells through down-regulation of the ERK/p38/MAPK pathway. J Biol Regul Homeost Agents. 35 (3), 945-952 (2021).
  59. Lan, H. Y., et al. Aidi injection induces apoptosis of hepatocellular carcinoma cells through the mitochondrial pathway. J Ethnopharmacol. 274, 114073(2021).
  60. Remnant, L., et al. The intrinsically disorderly story of Ki-67. Open Biol. 11 (8), 210120(2021).
  61. Ma, W., et al. Breast cancer Ki67 expression prediction by DCE-MRI radiomics features. Clin Radiol. 73 (10), 909.e1-909.e5 (2018).
  62. Ahmed, S. T., et al. Proliferative index (Ki67) for prediction in breast duct carcinomas. Asian Pac J Cancer Prev. 19 (4), 955-959 (2018).
  63. Sobecki, M., et al. Cell-cycle regulation accounts for variability in Ki-67 expression levels. Cancer Res. 77 (10), 2722-2734 (2017).
  64. Gown, A. M. The biomarker Ki-67: Promise, potential, and problems in breast cancer. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 31 (7), 478-484 (2023).
  65. Piri, R., et al. Ki-67/MIB-1 as a prognostic marker in cervical cancer - A systematic review with meta-analysis. Asian Pac J Cancer Prev. 16 (16), 6997-7002 (2015).
  66. Pelosi, G., et al. Ki-67 antigen in lung neuroendocrine tumors: Unraveling a role in clinical practice. J Thorac Oncol. 9 (3), 273-284 (2014).
  67. Li, H., et al. A correlation research of Ki67 index, CT features, and risk stratification in gastrointestinal stromal tumor. Cancer Med. 7 (9), 4467-4474 (2018).
  68. Asadi, M., et al. Caspase-3: Structure, function, and biotechnological aspects. Biotechnol Appl Biochem. 69 (4), 1633-1645 (2022).
  69. Eskandari, E., Eaves, C. J. Paradoxical roles of caspase-3 in regulating cell survival, proliferation, and tumorigenesis. J Cell Biol. 221 (6), e202201159(2022).
  70. Jiao, C., et al. Caspase-3/GSDME mediated pyroptosis: A potential pathway for sepsis. Int Immunopharmacol. 124 (Pt B), 111022(2023).
  71. Zhou, M., et al. Caspase-3 regulates the migration, invasion and metastasis of colon cancer cells. Int J Cancer. 143 (4), 921-930 (2018).
  72. Ke, H., et al. Effect of weimaining on apoptosis and Caspase-3 expression in a breast cancer mouse model. J Ethnopharmacol. 264, 113363(2021).
  73. Xu, H., et al. The natural product dehydrocurvularin induces apoptosis of gastric cancer cells by activating PARP-1 and caspase-3. Apoptosis. 28 (3-4), 525-538 (2023).
  74. Huang, Y. L., et al. Expression levels of Caspase-3 and gasdermin E and their involvement in the occurrence and prognosis of lung cancer. Cancer Rep (Hoboken). 5 (9), e1561(2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

UHPLC QE MS

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.