מאמר שיטה

פרמקולוגיה ברשת ואימות המנגנונים נוגדי הדיכאון של צ'יאנגז'יפאנג במודל עכברוש דיכאון המושרה על ידי ריסון כרוני

946 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68198

⸱

6 ביוני 2025

 ,  ,  , 
1College of Traditional Chinese Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 2Innovation Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 3Office of Shandong College of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מחקר זה העריך את היעילות נוגדת הדיכאון של Qiangzhifang במודל עכברוש של דיכאון כרוני הנגרם על ידי מתח והבהיר את השפעתו הרגולטורית על מסלולי HIF-1 ו-JAK-STAT על ידי פרמקולוגיה של רשת וניתוח עגינה מולקולרית.

תקציר

דיכאון הוא הפרעה פסיכיאטרית מורכבת המציבה אתגרי טיפול משמעותיים. Qiangzhifang (QZF), תרכובת המשמשת ברפואה הסינית המסורתית, מדגימה יעילות קלינית פוטנציאלית בטיפול בדיכאון. עם זאת, מנגנוני הפעולה והחומרים הפעילים של QZF לא הובהרו במלואם. המטרה העיקרית של מחקר זה הייתה להבהיר את החומרים הפעילים היעילים והמנגנונים המולקולריים הפוטנציאליים של QZF להקלה על דיכאון על ידי שילוב תחזיות פרמקולוגיה ברשת עם אימות ניסיוני.

אימצנו מודל עכברושים של איפוק כרוני (CRS) וערכנו מבחנים התנהגותיים כגון מבחן שדה פתוח (OFT), מבחן העדפת סוכרוז (SPT) ומבחן שחייה כפויה (FST) כדי להעריך את ההשפעות הטיפוליות של QZF על דיכאון. לגבי פרמטרים התנהגותיים, קבוצת QZF הראתה מסת גוף גבוהה משמעותית, יחס העדפת סוכרוז וזמן שהייה באזור המרכזי בהשוואה לקבוצת המודל (P < 0.01, P < 0.01, P < 0.01), וזמן קיבוע מופחת משמעותית במבחן השחייה הכפויה (P < 0.001). מחקרי פרמקולוגיה של רשת ועגינה מולקולרית מצביעים על כך של-QZF עשויות להיות השפעות נוגדות דיכאון על ידי אפנון מסלולי HIF-1 ו-JAK-STAT, עם גני מטרה מרכזיים כולל AKT1, IL-6, MTOR ו-TP53, המעורבים בדלקת, הגנה עצבית ואפופטוזיס. לסיכום, מחקר זה מציע תובנות חדשות לגבי המודרניזציה והפיתוח של תרכובות הרפואה הסינית לטיפול מקיף בדיכאון.

מבוא

דיכאון, אתגר בריאותי עולמי נפוץ, מאופיין במצב רוח ירוד מתמשך, ירידה בעניין ובהנאה וליקויים קוגניטיביים ונוירולוגיים1. כפי שדווח על ידי ארגון הבריאות העולמי, דיכאון משפיע על כ-380 מיליון אנשים ברחבי העולם, ונתון זה צפוי לגדולפי 2. כהפרעה נפשית מורכבת ורב-גורמית, דיכאון משפיע על איכות חייהם של החולים ומהווה נטל כלכלי ורפואי ניכר על החברה, המאופיין בשכיחות גבוהה, שיעורי הישנות ושיעורי נכות3.

האטיולוגיה של דיכאון היא מורכבת, כאשר המנגנונים המדויקים עדיין לא מובנים במלואם. ככל שהמחקר בתחום זה מתקדם, גורמים כמו דלקת עצבית, מתח חמצוני ואפופטוזיס זכו לתשומת לב משמעותית. מחקרים מצביעים על כך שחולים עם דיכאון מציגים רמות גבוהות של ציטוקינים מעודדי דלקת כמו TNF ואינטרלוקין-1β בהשוואה לאנשים בריאים, ושכיחות גבוהה יותר של דיכאון נצפתה אצל אנשים עם מצבים דלקתיים4. בעקה חמצונית, זני חמצן פעילים (ROS) מיוצרים יתר על המידה בתגובה לגירויים מזיקים, מכריעים את ההגנות נוגדות החמצון של הגוף ומובילים לחוסר איזון בין מערכות חמצון ונוגדי חמצון, ובכך גורמים לנזק לרקמות. מתח חמצוני מוגבר בדיכאון יכול להגביר את חמצון השומנים ולהחמיר את הנזק לגנים ולחלבונים תאיים, להשפיע על תפקוד העצבים ולתרום לניוון עצבי, אפופטוזיס ופגיעה בפלסטיות5. בנוסף, השינויים שנצפו במצגות קליניות, סמנים ביוכימיים ומבני מוח בחולים עם דיכאון קשורים לאפופטוזיס. מחקרי הדמיה חושפים ירידה בנפח ההיפוקמפוס וניוון בחולים עם דיכאון, כאשר אפופטוזיס עצבי עשוי לשחק תפקיד מרכזי בשינויים אלה6.

נכון לעכשיו, טיפול תרופתי הוא הגישה העיקרית לניהול דיכאון, כאשר מעכבי ספיגה חוזרת סלקטיביים של סרוטונין (SSRI) ומעכבי ספיגה חוזרת של נוראדרנלין (NRI) משמשים לעתים קרובות בפרקטיקה הקלינית7. עם זאת, תרופות אלו מלוות בתופעות לוואי משמעותיות. בנוסף לתסמינים של מערכת העצבים המרכזית כמו כאבי ראש ונדודי שינה, רוב התרופות נוגדות הדיכאון מציגות בדרך כלל גם תופעות לוואי במערכת העיכול, כולל בחילות ושלשולים. חלק מהתרופות נוגדות הדיכאון עלולות גם לגרום להפרעות בתפקוד המיני10, מה שמשפיע קשות על תוצאות הטיפול ומפחית את ההיענות לתרופות בקרב חולים עם דיכאון11. יתר על כן, יעילותן של תרופות אלו מוגבלת עבור חלק מהחולים. מחקרים מטבולומיים אחרונים הצביעו על כך שהבדלים אינדיבידואליים במיקרוביוטת המעיים עשויים להשפיע על יעילות התרופה12. לכן, פיתוח טיפולים בטוחים ויעילים יותר נותר מוקד קריטי בחקר הדיכאון.

ניסוחים של רפואה סינית מסורתית (TCM) הוכיחו פוטנציאל משמעותי בטיפול בדיכאון, המיוחס להשפעות הסינרגטיות שלהם הכוללות מרכיבים, מטרות ומסלוליםמרובים 13. הרפואה הסינית המסורתית מניחה כי יאנג צ'י נמרץ חיוני לשמירה על חיוניות הגוף. לכן, פרופסור יואן-צ'ינג דינג, תוך מינוף העקרונות הייחודיים של אבחון וטיפול ברפואה סינית מסורתית וניסיון קליני רב, הציע כי "יאנג יו שן טוי" הוא הפתוגנזה הבסיסית של דיכאון. בהתבסס על תפיסה זו, הוא פיתח את Qiangzhifang (QZF) כדי לטפל באופן ספציפי בפתוגנזה זו14. היישום הקליני של QZF בטיפול בדיכאון הוכיח יעילות משמעותית, עם שיעור אפקטיבי כולל של 71.43%15. QZF מורכב מחומרים רפואיים סיניים מסורתיים שונים, כולל רמולוס קינמומי (gui zhi, GZ), Polygala tenuifolia (יואן ג'י, YZ), Alpinia oxyphylla miq (יי ג'י רן, YZR), Paeonia lactiflora (באי שאו, BS), Fritillariae cirrhosae bulbus (צ'ואן ביי מו, CBM), ג'ינסנג קוריאני (רן שן, RS), רודיולה רוזאה L (הונג ג'ינג טיאן, HJT) וליקריץ (gan cao, GC) (קובץ משלים 1 ). מחקרים הראו כי Polygala tenuifolia עשיר בספונינים ומציג השפעות נוירו-פרוטקטיביות16. באופן דומה, זוג עשבי המרפא Ramulus Cinnamomi-Paeonia lactiflora מדגים יעילות פוטנציאלית בהקלה על כאב ודיכאון17. בנוסף, סך הספונינים של הג'ינסנג יכול להפחית את רמות הציטוקינים הפרו-דלקתיים בהיפוקמפוס, לשפר התנהגות דיכאונית ולהחליש את הנזק העצבי בהיפוקמפוס בחולדות18. ליקוריץ מכיל בעיקר טריטרפנואידים ופלבונואידים. סך הפלבונואידים (LF) של ליקוריץ יכול למלא תפקיד נוגד דיכאון על-ידי שיפור התנהגות דיכאונית, ויסות מסלול האיתות BDNF/TrkB ושיפור הפלסטיות הסינפטית19. עם זאת, המנגנונים הספציפיים העומדים בבסיס ההשפעות נוגדות הדיכאון של QZF נותרו לא ברורים, ובכך מגבילים את היישום הנרחב שלו.

לכן, המחקר שלנו נועד לבסס מודל חולדות דיכאון CRS, להדגים את ההשפעה הטיפולית של QZF על דיכאון בחולדות באמצעות ניסויים התנהגותיים, ולהעריך באופן שיטתי את המנגנון נוגד הדיכאון של QZF באמצעות פרמקולוגיה ברשת וטכנולוגיית עגינה מולקולרית20. על ידי הבהרת המרכיבים הפעילים והמטרות הפוטנציאליות של QZF, ניתן לאתר במדויק את יעדי הליבה של דיכאון. אנו מאמינים כי על ידי חקירה מעמיקה של מנגנון הפעולה של QZF, אנו יכולים לא רק לספק אפשרויות טיפול בטוחות ויעילות יותר לחולים עם דיכאון, אלא גם לספק בסיס מדעי ליישום הרפואה הסינית המסורתית בטיפול בדיכאון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הפרוטוקולים הניסויים אושרו על ידי ועדת האתיקה של ניסויים בבעלי חיים של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית (מספר אישור: YYLW2023000327) ועמדו במדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שהונפק על ידי המכונים הלאומיים לבריאות. בניסוי הזה השתמשנו ב-40 חולדות Wistar זכרים בריאים, בדרגת SPF, עם משקל גוף ממוצע של (140 ±-10) גרם (איור 1). עיין בטבלת החומרים לקבלת רשימה של כל החומרים, הציוד והתוכנה המשמשים בפרוטוקול זה.

1. מודל דיכאון עכברים

  1. דיור וקיבוץ בעלי חיים
    1. היכנסו לחדר הרבייה עם בעלי החיים ומספור אותם באמצעות מכשיר לסימון זנב.
    2. שיכנו את החולדות בנפרד בכלובים, תוך שמירה על טמפרטורה של 21 ± 2 מעלות צלזיוס ומחזור אור / חושך של 12 שעות / 12 שעות.
    3. אקלום החולדות במעבדה למשך 7 ימים, ומספק גישה אד ליביטום למזון ומים תוך טיפול יומיומי בהם לצורך הסתגלות.
    4. לאחר תקופת ההתאקלמות, יש למדוד את משקל הגוף, ולבצע את מבחני העדפת הסוכרוז (SPT) ומבחני השדה הפתוח (OFT).
    5. בהתבסס על נתוני הניסוי, חלקו את החולדות לארבע קבוצות, וודאו שכל קבוצה מורכבת מ-10 חולדות: קבוצת הביקורת (CON), קבוצת המודל (CRS), קבוצת QZF וקבוצת הפלואוקסטין (F).
  2. הקמת מודל עכברושים לריסון כרוני (CRS)
    1. בנה את התקן ריסון החולדות. בחרו צינור פלסטיק שקוף בקוטר ובאורך המתאימים לגודל21 של החולדה, המאפשר לחולדה לעמוד ולהסתובב פנימה תוך מניעת בריחה. השתמש במנקב חורים מברזל הלחמה חשמלי כדי ליצור חורים בצידי צינור הפלסטיק ועל המכסה כדי להבטיח זרימת אוויר תקינה.
    2. הנח בעדינות את החולדות בהתקני הריסון (למעט אלה בקבוצה C) שעה אחת לאחר מתן תוך-קיבה יומי של התרופה, וודא שהן במצב נוח.
    3. מנע מכל קבוצות החולדות מזון ומים בתקופת האיפוק. לאחר סיום תקופת הריסון יש לספק להם מזון ומים בשפע באופן אחיד. קבעו את משך הריסון היומי ל-6 שעות (מ-9:30 עד 15:30) ושמרו עליו במשך 28 ימים רצופים.

2. התערבות תרופתית

  1. מתן באמצעות גבאז': 1 מ"ל תמיסה/100 גרם משקל גוף, פלואוקסטין (2.7 מ"ג-ק"ג-1·יום-1) ו-QZF (2 גרם·ק"ג-1·יום-1)22. ספק לקבוצות C ו-CRS תמיסת מלח נורמלית שווה ערך לבקרה של משתנה יחיד.
    הערה: מתן תרופות יומי בוצע בשעה 08:00, החל באופן סינכרוני עם הקמת המודל ונמשך לאורך כל תקופת הדוגמנות של 28 יום.

3. מבחן העדפת סוכרוז (SPT)

  1. מנעו מהחולדות מזון ומים למשך 24 שעות לפני תחילת הניסוי.
  2. הכינו תמיסת סוכרוז מימית 1% ומלאו את התמיסה והמים הטהורים בבקבוקי השתייה של חיות הניסוי לשקילה. מדוד את צריכת המים הטהורים ומי הסוכרוז על ידי שקילת הבקבוקים לפני ואחרי הניסוי.
  3. הניחו בקבוק אחד של תמיסת סוכרוז ובקבוק אחד של מים טהורים בצריכת המים של כל מכסה כלוב חולדות, אחד משמאל ואחד מימין, לגישה חופשית לשתייה. כדי למנוע מחולדות להעדיף צד אחד לצריכת מים, החליפו את מיקומי בקבוקי המים משמאל ומימין לאחר 30 דקות לתוך הניסוי.
  4. לאחר שעה אחת של הניסוי, הסר את כל בקבוקי המים, שקול אותם מיד ורשום את צריכת תמיסת הסוכרוז ומים טהורים. חשב את יחס העדפת הסוכרוז השבועי באמצעות הנוסחה:
    ערך העדפת סוכרוז = figure-protocol-1 × 100%

4. מדידת משקל גוף

  1. שקלו את החולדות מדי שבוע עם כניסתן למעבדה וקבעו את השעה הקבועה לשקילה בשעה 7:00 בבוקר. קבע לוח זמנים זה כדי להקל על התבוננות בשינויים במשקל הגוף.

5. מבחן שדה פתוח (OFT)

  1. לפני תחילת הניסוי, התאקלמו את החולדות בחדר ההתנהגותי למשך שעה אחת והתאימו את התאורה בתיבת השדה הפתוח כדי להבטיח פיזור אחיד. ודא שהחולדות נראות בבירור בתוכנת המעקב.
  2. השתמש במערכת המעקב והניתוח של הווידאו כדי לחלק את המשטח התחתון של תיבת השדה הפתוח (50 ס"מ x 50 ס"מ x 50 ס"מ) לתשע רשתות מרובעות בעלות שטח שווה. ייעד את שמונה הרשתות הסמוכות לקירות כאזור ההיקפי ואת הגריד המרכזי כאזור המרכזי.
  3. מקם את החולדה באזור המרכזי של תיבת השדה הפתוח. הקלט את תנועת החולדה במשך 5 דקות באמצעות מערכת מעקב הווידאו.
  4. לאחר בדיקת כל חולדה, נקו את החדר עם 75% אתנול כדי להסיר ריח שיורי ולמנוע הפרעה להתנהגות החולדה הבאה. הזן את המרחק הכולל (מ"מ) של פעילויות שדה פתוח ואת מספר הערכים ברשת המרכזית ברשומות OFT.

6. מבחן שחייה כפוי (FST)

הערה: ניסוי השחייה הכפויה של חולדות כולל ניסוי מקדים וניסוי פורמלי. ערכו את הניסוי המקדים 24 שעות לפני הניסוי הפורמלי, בהתאם לאותו הליך, כאשר החולדה שוחה במשך 15 דקות.

  1. העבירו את חיות הניסוי לחדר ההתנהגות לפחות 30 דקות לפני הניסוי כדי לאפשר להן להתאקלם בסביבה.
  2. מכינים גליל פרספקס גלילי שקוף (50 ס"מ גובה, 20 ס"מ קוטר) וממלאים אותו במים בטמפרטורה של 23-25 מעלות צלזיוס. התאם את עומק המים על סמך משקל החיה, וודא שזנב החיה יישאר במרחק מסוים מתחתית הגליל.
  3. הכניסו את החולדות לאט לתוך גליל המים ושמרו על שקט לאורך כל הניסוי. הפעל את המצלמה ומערכת רכישת האותות. התבונן ורשום את משך חוסר התנועה הצף תוך 300 שניות. הוציאו מיד את החולדות מהמים וייבשו אותן בסוף הניסוי.
  4. לאחר כל מפגש, החלף את המים כדי למנוע כל השפעה על החולדה הבאה.

7. חיזוי פרמקולוגי ברשת

  1. אוסף תרכובות QZF ומטרות משוערות
    1. גש למסד הנתונים של פרמקולוגיה של מערכות הרפואה הסינית המסורתית (TCMSP) (https://old.tcmsp-e.com/)23, למסד הנתונים HERB24 ולמסד הנתונים TCMID (https://www.bidd.group/TCMID/). השתמשו בשמונת שמות הרפואה הסינית המסורתית ב-QZF, כולל GZ, YZ, YZR, BS, CBM, RS, HJT ו-ZGC, כמילות מפתח כדי לחפש תרכובות פעילות ומטרות של צמחי המרפא. אסוף יעדים מ-TCMSP ומחיזוי היעדים השוויצרי (http://www.swisstargetprediction.ch/). הגדר את ערך המסנן להסתברות* > 0.
      הערה: בדרך כלל, המרכיבים נכללו כמרכיבים פעילים על סמך המאפיינים הפרמקוקינטיים שלהם: זמינות ביולוגית דרך הפה (OB) ≥ 30% ומאפיינים דמויי תרופה (DL) ≥ 0.1825.
  2. חיזוי יעדי מחלה
    1. חפשו את מילת המפתח "דיכאון" במסד הנתונים של GeneCards (https://www.genecards.org/), השיגו מטרות גנים הקשורות לדיכאון, הורידו את הגיליון האלקטרוני של מטרות המחלה, סננו את ציוני הגנים הגבוהים מהערך הממוצע והרכיבו רשימה של מטרות דיכאון26.
  3. רשת תרופה-רכיב-מחלה-מטרה
    1. צור גיליון אלקטרוני חדש ואכלס אותו ביעדים הקשורים לדיכאון ומטרות תרופות באותה עמודה. לחץ על התחל בשורת התפריטים | עיצוב מותנה | כללי הדגשת תאים | ערכים כפולים. בחר תבנית (לדוגמה, "מילוי אדום בהיר") בתיבת הדו-שיח המופיעה27, לחץ על OK כדי להציג את התוצאות.
    2. הפעל את תוכנת ניתוח הרשת וייבא את קובץ הגיליון האלקטרוני על ידי לחיצה על קובץ בשורת התפריטים | יבוא | רשת. מטב את מראה הרשת על-ידי התאמת הגודל והצבע של הצמתים בחלונית Style הממוקמת בלוח הבקרה השמאלי. בצע ניתוח טופולוגיית רשת על ידי לחיצה על כלים בשורת התפריטים | נתח את רשת27.
  4. רשת אינטראקציה בין חלבון לחלבון (PPI)
    1. גש לכלי Jvenn (https://jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html), העלה את מטרות התרכובת ויעדי המחלה בנפרד, שרטט את הגנים החופפים (OGE) בין המטרות המשוערות של התרכובת ויעדי המחלה. לחץ על המספרים בתמונה והעתק אותם לגיליון אלקטרוני והורד את תמונת דיאגרמת ון.
    2. גש למסד הנתונים STRING (https://stringdb.org/)28 והזן את ה-OGEs מהגיליון האלקטרוני למסד הנתונים. באופן ספציפי, הדבק את רשימת היעד החופפת למניעת דיכאון QZF בתיבת הדו-שיח רשימת שמות . בחר הומו ספיינס בקטע אורגניזמים ולחץ על חיפוש | המשך. בחר באפשרות ייצוא משורת הכותרת והורד את טבלת הסיכום של רשת PPI בפורמט PNG ו-TSV29.
  5. סינון חלבוני ליבה
    1. הפעל את תוכנת ניתוח הרשת (https://cytoscape.org/). לאחר מכן, בשורת התפריטים, לחץ על קובץ | יבוא | רשת | קובץ לייבוא קובץ בפורמט TSV שנוצר בשלבהקודם 30.
    2. בחרו 'נתח רשת' בשורת התפריטים ולחצו על הלחצן 'נתח '. לאחר מכן, צפה בתוצאות הניתוח והבין את המאפיינים המבניים הכוללים של הרשת, כגון מספר הצמתים, מספר הקצוות והדרגה הממוצעת.
    3. בחר אפליקציות | מנהל האפליקציות בשורת התפריטים. חפש את MCODE, התקן את התוסף והפעל את התוסף כדי לקבל את יעד הרכזת. לאחר מכן, חפש את CytoNCA, התקן את התוסף והתמקד בשלושת ערכי הפרמטרים של מעלות, מרכזיות קרבה (CC) ומרכזיות בין (BC). על פי הערכים של פרמטרים אלה, צמתים מסננים עם דרגה גבוהה יותר, CC ו-BC, הנחשבים בדרך כלל לחלבוני ליבה31.
  6. ניתוח העשרה של אונטולוגיה גנטית (GO) ואנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים (KEGG)
    1. פתח את פלטפורמת הביואינפורמטיקה (https://www.omicshare.com/). לחץ על תפריט כלים , מצא את כלי המרת הגנים של המזהה ולחץ עליו. לאחר מכן, לחץ על כפתור העלאת הקובץ , בחר את השלב שנוצר בליבת גני היעד והורד את רשימת מזהי הקבצים שהומרו.
    2. בתפריט כלים , לחץ על הכלי ניתוח העשרה דינמי של KEGG . העלה את רשימת מזהי הגנים. באפשרות מינים , בחר הומו ספיינס ולחץ על כפתור שלח .
    3. בתפריט כלים, לחץ על הכלי ניתוח העשרה דינמי GO | אפשרות גן | אפשרות העלאת קובץ. בחר ברשימת מזהה הגן ובאפשרות Species, בחר Homo sapiens. בחר את סוג ה-GO לניתוח, כולל תהליך ביולוגי, תפקוד מולקולרי ורכיב תאי.
    4. לתוצאות ניתוח העשרה של KEGG ו-GO, הגדר את סף הסינון כ-p <-0.05. סדר את הספירות בסדר יורד.

8. אימות עגינה מולקולרית

  1. בקר באתר האינטרנט של PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). הזן את תרכובות היעד בסרגל החיפוש. לחץ על המבנה הדו-ממדי והורד אותו.
  2. פתח את מסד הנתונים PDB (https://www.Rcsb.org/). בחר את מבנה הגביש ברזולוציה גבוהה ומכיל את הליגנד המקורי. הורד את קובץ PDB.
  3. לאופטימיזציה של מבנה החלבון, פתח את תוכנת ההדמיה המולקולרית. טען את קובץ ה-PDB שהורדת. הסר מולקולות מים ושמור את קובץ ה-PDB המותאם.
  4. פתח את תוכנת העגינה המולקולרית וייבא את קובץ ה-PDB המותאם. ב-AutoDockTools, לוחצים על עריכה | מחק מים כדי למחוק מולקולות מים. לחץ על ערוך | הוספת מימן | הוסף כדי להוסיף אטומי מימן לחלבון וליגנד29.
  5. ב - AutoDockTools, הגדר את סרגל הקולטן ל- receptor.pdbqt ואת סרגל הליגנד ל- ligand.pdbqt. פתח את ה-pdbqt. file כדי להציג את אתרי הקישור של החלבון והליגנד ולהגדיר את הגודל והמיקום של תיבת העגינה כדי להבטיח שהיא יכולה לסגור לחלוטין את חלבון הקולטן ואת תרכובת הליגנד. ב-AutoDockTools, לחץ על רשת | הגדר תיבת רשת לקביעת הקואורדינטות והממדים המרכזיים של התיבה והשתמש בערכי ברירת מחדל לעגינה מולקולרית. מסגרות העגינה ימוינו אוטומטית בסדר יורד של אנרגיות קשירה.
  6. פתח את התוצאה file ורשום את ערך אנרגיית הכריכה האופטימלי. אנרגיות קשירה נמוכות יותר מעידות על קשירה יציבה יותר. השתמש בתוכנת ההדמיה המולקולרית כדי לטעון את קובץ התוצאה. התאם את view וצבע כדי להציג בבירור את האינטראקציה בין ליגנד-קולטן.

9. ניתוח סטטיסטי

  1. לבצע ניתוח סטטיסטי בתוכנת ניתוח הנתונים המדעיים והדמיה ולהציג את כל הנתונים כממוצע ± SEM. להשתמש ב-ANOVA דו-כיווני חוזר להשוואה בין קבוצות לפני ואחרי מתן תרופה. השתמש ב-ANOVA חד-כיווני לצורך השוואות בין יותר משתי קבוצות.
  2. ניקח את הערך של P < 0.05 כמובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תוצאות מבחן התנהגותי במודל דיכאון עכברושים המושרה על ידי CRS

תוצאות בדיקת העדפת סוכרוז
בנקודת ההתחלה, לא היה הבדל במקדם העדפת הסוכרוז בין הקבוצות (P > 0.05). לאחר 28 ימי התערבות, מקדם העדפת הסוכרוז של קבוצת ה-CRS היה נמוך משמעותית מזה של קבוצת ה-CON (P < 0.05), בעוד שקבוצות F ו-QZF הראו מקדמים גבוהים משמעותית בהשוואה לקבוצת CRS ( שניהם P < 0.01). התוצאות הצביעו על כך שחולדות לחוצות הראו תסמינים אנהדוניים אופייניים, שהוקל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

CRS היא שיטה בשימוש נרחב לביסוס מודלים של דיכאון בבעלי חיים. מודל זה מחקה את הלחץ הפסיכולוגי הכרוני שנתקל בו בחיי אדם וגורם להתנהגויות דמויות דיכאון בחולדות35. במחקר זה, צינור הריסון של החולדה נבנה מפלסטיק שקוף, מה שמבטיח את בטיחות בעלי החיים תוך מתן אפשרות לתצפית ברורה במהלך הניסוי. הצינור השקוף נמדד באורך של כ-18 ס"מ ובקוטר של 6 ס"מ וכלל חורי אוורור מרובים, כל אחד בקוטר של 1 ס"מ, המפוזרים באופן אחיד לאורך הצדדים והמכסה כדי לספק זרימת אוויר מספקת לחולדות. החולדות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

תודות

המחקר נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82374311), המינהל הממלכתי לרפואה סינית מסורתית ברמה גבוהה (TCM) תיאוריה בסיסית של תיאוריה בסיסית (zyyzdxk-2023118), פרויקט בניית סטודיו למומחים לרפואה סינית מסורתית לאומית (מכתב חינוך לרפואה סינית לאומית מס' 75) והקרן למדעי הטבע של מחוז שאנדונג (ZR2022LZY016). גרגירי QZF הוכנו על ידי המחלקה למוצרים פרמצבטיים, בית החולים המסונף של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מערכת ניתוח התנהגות בעלי חייםשנחאי Xinsoft טכנולוגיית מידע ושות', בע"מXR-SuperMaze
AutoDockToolsמכון המחקר סקריפס
ציטוסקייפ  תוכנהקונסורציום Cytoscapeגירסה 3.7.2
מנקב חורים מברזל הלחמה חשמלינאנג'ינג Naiwei טכנולוגיה ושות', בע"מ
פלואוקסטיןלילי סוג'ואו פרמצבטיקה ושות', בע"מ
מערכת ניסיונית בשטח פתוחשנחאי Xinsoft טכנולוגיית מידע ושות', בע"מXR-XZ301
פיימולSchrö דינגר
צ'יאנגז'יפאנג בית החולים המסונף של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית, ג'ינאן, סין
צינור פלסטיק שקוף ננטונג באיאנג מוצרי פלסטיק ושות', בע"מ 

מקורות

  1. Wu, C., Mu, Q., Gao, W., Lu, S. The characteristics of anhedonia in depression: A review from a clinically oriented perspective. Transl Psychiatry. 15 (1), 90(2025).
  2. Moitra, M., et al. Global mental health: Where we are and where we are going. Curr Psychiatry Rep. 25 (7), 301-311 (2023).
  3. Rong, J., Cheng, P., Li, D., Wang, X., Zhao, D. Global, regional, and national temporal trends in prevalence for depressive disorders in older adults, 1990-2019: An age-period-cohort analysis based on the global burden of disease study 2019. Ageing Res Rev. 100, 102443(2024).
  4. Liu, F., et al. Impacts of inflammatory cytokines on depression: A cohort study. BMC Psychiatry. 24 (1), 195(2024).
  5. Correia, A. S., Cardoso, A., Vale, N. Oxidative stress in depression: The link with the stress response, neuroinflammation, serotonin, neurogenesis and synaptic plasticity. Antioxidants (Basel). 12 (2), 470(2023).
  6. Xu, D. H., et al. Upregulation of KLK8 contributes to CUMS-induced hippocampal neuronal apoptosis by cleaving NCAM1. Cell Death Dis. 14 (4), 278(2023).
  7. Kovich, H., Kim, W., Quaste, A. M. Pharmacologic treatment of depression. Am Fam Physician. 107 (2), 173-181 (2023).
  8. Braund, T. A., et al. Antidepressant side effects and their impact on treatment outcome in people with major depressive disorder: An iSPOT-D report. Transl Psychiatry. 11 (1), 417(2021).
  9. Oliva, V., et al. Gastrointestinal side effects associated with antidepressant treatments in patients with major depressive disorder: A systematic review and meta-analysis. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 109, 110266(2021).
  10. Rothmore, J. Antidepressant-induced sexual dysfunction. Med J Aust. 212 (7), 329-334 (2020).
  11. Niarchou, E., Roberts, L. H., Naughton, B. D. What is the impact of antidepressant side effects on medication adherence among adult patients diagnosed with depressive disorder: A systematic review. J Psychopharmacol. 38 (2), 127-136 (2024).
  12. Wang, Y., et al. Multi-omics reveal microbial determinants impacting the treatment outcome of antidepressants in major depressive disorder. Microbiome. 11 (1), 195(2023).
  13. Yang, J., et al. Analysis of medication rule of traditional Chinese medicine in treating depression based on data mining. Heliyon. 10 (20), e39245(2024).
  14. Liu, X. Study on the mechanism of qiangzhifang's remodeling of hippocampal neural structure in depression model rats based on the pathogenesis of "yang yu shen tui". , https://link.cnki.net/doi/10.27282/d.cnki.gsdzu.2020.000110 (2020).
  15. Zhou, M. The effect of qiangzhifang on camp-pka-creb signaling pathway in hippocampus of depression emotion model rats based on "yang yu shen tui" pathogenesis. , https://link.cnki.net/doi/10.27282/d.cnki.gsdzu.2019.000030 (2019).
  16. Chen, Z., Yang, Y., Han, Y., Wang, X. Neuroprotective effects and mechanisms of senegenin, an effective compound originated from the roots of polygala tenuifolia. Front Pharmacol. 13, 937333(2022).
  17. Pan, H. T., Xi, Z. Q., Wei, X. Q., Wang, K. A network pharmacology approach to predict potential targets and mechanisms of "Ramulus cinnamomi (Cassiae) - Paeonia lactiflora" herb pair in the treatment of chronic pain with comorbid anxiety and depression. Ann Med. 54 (1), 413-425 (2022).
  18. Qin, M., et al. Total saponins of panax ginseng via the CX3CL1/CX3CR1 axis attenuates neuroinflammation and exerted antidepressant-like effects in chronic unpredictable mild stress in rats. Phytother Res. 37 (5), 1823-1838 (2023).
  19. Wang, R., et al. Antidepressant effect of licorice total flavonoids and liquiritin: A review. Heliyon. 9 (11), e22251(2023).
  20. Xiao, Y. G., Wu, H. B., Chen, J. S., Li, X., Qiu, Z. K. Exploring the potential antidepressant mechanisms of pinellia by using the network pharmacology and molecular docking. Metab Brain Dis. 37 (4), 1071-1094 (2022).
  21. Seewoo, B. J., et al. Validation of chronic restraint stress model in young adult rats for the study of depression using longitudinal multimodal mr imaging. eNeuro. 7 (4), (2020).
  22. Wei, Y. Discussion on "yang yu shen tui"mechanism of depression. , https://link.cnki.net/doi/10.27282/d.cnki.gsdzu.2022.000933 (2022).
  23. Ru, J., et al. TCMSP: A database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminform. 6, 13(2014).
  24. Fang, S., et al. A high-throughput experiment- and reference-guided database of traditional Chinese medicine. Nucleic Acids Res. 49 (D1), D1197-D1206 (2021).
  25. Zou, J., et al. Network pharmacology-based approach to research the effect and mechanism of Si-Miao-Yong-An decoction against thromboangiitis obliterans. Ann Med. 55 (1), 2218105(2023).
  26. Safran, M., et al. Genecards version 3: The human gene integrator. Database (Oxford). 2010, baq020(2010).
  27. Zhao, X. Y., Yang, Y. Y., Feng, J. L., Feng, C. L. Network pharmacology prediction and experimental validation of Trichosanthes-fritillaria thunbergii action mechanism against lung adenocarcinoma. J Vis Exp. (193), e64847(2023).
  28. Szklarczyk, D., et al. The string database in 2023: Protein-protein association networks and functional enrichment analyses for any sequenced genome of interest. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D638-D646 (2023).
  29. Zeng, B., et al. Network pharmacology prediction and metabolomics validation of the mechanism of fructus phyllanthi against hyperlipidemia. J Vis Exp. (194), e65071(2023).
  30. Shannon, P., et al. Cytoscape: A software environment for integrated models of biomolecular interaction networks. Genome Res. 13 (11), 2498-2504 (2003).
  31. Huang, S. P., et al. Evaluation of the mechanism of jiedu huazhuo quyu formula in treating Wilson's disease-associated liver fibrosis by network pharmacology analysis and molecular dynamics simulation. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 9363131(2022).
  32. Zhou, W., et al. Huangqin qingre qubi capsule inhibits RA pathology by binding FZD8 and further inhibiting the activity of Wnt/β-catenin signaling pathway. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115886(2023).
  33. Tan, X., et al. Cinnamaldehyde ameliorates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice by modulating TLR4/NF-κB signaling pathway and NLRP3 inflammasome activation. Chem Biodivers. 20 (2), e202200089(2023).
  34. Que, W., et al. Molecular mechanism of Gelsemium elegans (gardner and champ.) benth. against neuropathic pain based on network pharmacology and experimental evidence. Front Pharmacol. 12, 792932(2021).
  35. Tzeng, H. T., Chyuan, I. T., Lai, J. H. Targeting the JAK-STAT pathway in autoimmune diseases and cancers: A focus on molecular mechanisms and therapeutic potential. Biochem Pharmacol. 193, 114760(2021).
  36. Chen, H., et al. The potential role of hypoxia-inducible factor-1 in the progression and therapy of central nervous system diseases. Curr Neuropharmacol. 20 (9), 1651-1666 (2022).
  37. Xie, X., et al. Scutellarin attenuates oxidative stress and neuroinflammation in cerebral ischemia/reperfusion injury through PI3K/AKT-mediated Nrf2 signaling pathways. Eur J Pharmacol. 957, 175979(2023).
  38. Semenza, G. L. Hypoxia-inducible factors in physiology and medicine. Cell. 148 (3), 399-408 (2012).
  39. Amin, N., et al. Hif-1α ablation reduces the efficiency of NeuroD1 gene-based therapy and aggravates the brain damage following ischemic stroke. Expert Opin Drug Deliv. 22 (1), 121-138 (2025).
  40. Bergeron, M., et al. Role of hypoxia-inducible factor-1 in hypoxia-induced ischemic tolerance in neonatal rat brain. Ann Neurol. 48 (3), 285-296 (2000).
  41. Zhang, Y., et al. Lactate modulates microglial inflammatory responses through Hif-1α-mediated CCL7 signaling after cerebral ischemia in mice. Int Immunopharmacol. 146, 113801(2025).
  42. Moresi, V., Adamo, S., Berghella, L. The JAK/STAT pathway in skeletal muscle pathophysiology. Front Physiol. 10, 500(2019).
  43. Fei, S., Li, W., Xiang, L., Xie, X., Zhang, L. Protective effect of alprostadil on acute pancreatitis in rats via inhibiting janus kinase 2 (JAK2)/STAT3 signal transduction pathway. Med Sci Monit. 25, 7694-7701 (2019).
  44. Sarapultsev, A., et al. JAK-STAT signaling in inflammation and stress-related diseases: Implications for therapeutic interventions. Mol Biomed. 4 (1), 40(2023).
  45. Dowlati, Y., et al. A meta-analysis of cytokines in major depression. Biol Psychiatry. 67 (5), 446-457 (2010).
  46. Li, J., et al. The JAK/STAT/NF-κB signaling pathway can be regulated by rosemary essential oil, thereby providing a potential treatment for DNCB-induced in mice. Biomed Pharmacother. 168, 115727(2023).
  47. Heinrich, P. C., Behrmann, I., Müller-Newen, G., Schaper, F., Graeve, L. Interleukin-6-type cytokine signalling through the gp130/Jak/STAT pathway. Biochem J. 334 (Pt 2), 297-314 (1998).
  48. Nguyen, T. L. L., Huynh, D. T. N., Jin, Y., Jeon, H., Heo, K. S. Protective effects of ginsenoside-Rg2 and -Rh1 on liver function through inhibiting TAK1 and STAT3-mediated inflammatory activity and Nrf2/ARE-mediated antioxidant signaling pathway. Arch Pharm Res. 44 (2), 241-252 (2021).
  49. Croce, C. M., et al. The BCL-2 protein family: From discovery to drug development. Cell Death Differ. , (2025).
  50. Fakhri, S., et al. Natural products attenuate PI3K/AKT/mTOR signaling pathway: A promising strategy in regulating neurodegeneration. Phytomedicine. 91, 153664(2021).
  51. Huang, Z., Jin, G. Licochalcone B induced apoptosis and autophagy in osteosarcoma tumor cells via the inactivation of PI3K/AKT/mTOR pathway. Biol Pharm Bull. 45 (6), 730-737 (2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Molecular DockingHIF 1JAK STAT

מאמרים קשורים