הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בידוד ותרבית של כולנגיוציטים ראשוניים מעכברים עם מחלת כבד פוליציסטית בשיטת עיכול דו-שלבית

919 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68202

⸱

16 במאי 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Oncology, Tianjin First Central Hospital, School of Medicine, Nankai University, 2The Province and Ministry Co-sponsored Collaborative Innovation Center for Medical Epigenetics, Key Laboratory of Immune Microenvironment and Disease (Ministry of Education), State Key Laboratory of Experimental Hematology, Department of Biochemistry and Molecular Biology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מתאר שיטת עיכול דו-שלבית אופטימלית לבידוד כולנגיוציטים ראשוניים בעלי טוהר גבוה וכדאיות גבוהה מעכברים מסוג בר ועכברים עם מחלת כבד פוליציסטית.

תקציר

בפרוטוקול זה, ביצענו אופטימיזציה של שיטת עיכול דו-שלבית כדי לבודד כולנגיוציטים ראשוניים בעלי טוהר גבוה וכדאיות גבוהה מעכברים מסוג בר ועכברים עם מחלת כבד פוליציסטית (PLD). לאחר הרדמת העכברים, הכבדים הוחדרו דרך הווריד הנבוב התחתון עם 50 מ"ל של תמיסה A, ואחריה 30 מ"ל של תמיסה B ב-37 מעלות צלזיוס לעיכול אנזימטי של רקמת הכבד. דיסוציאציה מכנית, טלטול ומיקרודיסקציה בוצעו כדי להסיר תאים פרנכימליים דבקים, והשאירו עץ מרה שלם. לאחר מכן נטחן עץ המרה דק ועוכל בניעור במשך 60 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. התרחיף החד-תאי שהתקבל נאסף באמצעות מסננת תאים של 70 מיקרומטר. כולנגיוציטים טוהרו באמצעות בידוד חיסוני מגנטי. תרחיף התא הודגר עם נוגדן אנטי-EpCAM בסיבוב למשך 45 דקות ב-4 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן תוספת של חרוזי חלבון G וסיבוב נוסף למשך 45 דקות נוספות ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר שלוש שטיפות עם PBS, הכולנגיוציטים נאספו באמצעות מפריד מגנטי. הכולנגיוציטים הראשוניים המטוהרים הושעו מחדש במדיום תרבית כולנגיוציטים ונזרעו על צלחות תרבית תאים מצופות בקולגן זנב חולדה מסוג 1 מ"ג/מ"ל מסוג I. טוהר הכולנגיוציטים אושר על ידי צביעה חיסונית עבור הסמן הספציפי לכולנגיוציטים ציטוקרטין-19 (CK19). למרות שמחקר זה התמקד בבידוד כולנגיוציטים ראשוניים מעכברי בר ועכברי PLD, אנו בטוחים שניתן ליישם את הפרוטוקול גם על מודלים אחרים של עכברי מחלה. שיטת עיכול דו-שלבית מפורטת זו מקלה על מחקרי מבחנה של כולנגיופתיה ופיתוח טיפולים ממוקדים.

מבוא

כולנגיוציטים, תאי האפיתל המצפים את עץ המרה התוך-כבדי, יוצרים שכבה אחת ומהווים כ-3-5% מכלל אוכלוסיית התאים בכבד1. תאים אלה מתחברים בתוך הכבד ליצירת רשת צינורות תלת מימדית מורכבת2. בתנאים רגילים, כולנגיוציטים מבצעים פונקציות חיוניות, כולל הפרשה, ספיגה, תיקון פציעות ומשמשים כמחסום חיסוני, ובכך ממלאים תפקיד קריטי בפיזיולוגיה ובפתולוגיה של הכבד. עם זאת, תפקוד לקוי של כולנגיוציטים יכול להוביל למחלות שונות, כולל PLD, כולנגיטיס טרשתית ראשונית, כולנגיוקרצינומה ופגיעה בכבד כולסטטי 3,4,5.

בין מחלות הקשורות לכולנגיופתיה, PLD בולטת כהפרעה תורשתית המאופיינת בהיווצרות ציסטות מלאות נוזלים רבות שמקורן בכולנגיוציטים. ההגדלה המתקדמת של ציסטות אלו מפחיתה משמעותית את איכות החיים של החולים6. אפשרויות הטיפול הנוכחיות ב-PLD אינן מספיקות, ומציעות יעילות מוגבלת בעוד שלעתים קרובות קשורות לשיעורי הישנות וסיבוכים גבוהים7. זה מדגיש את הצורך הדחוף בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות בטוחות ויעילות כדי להתמודד עם הדרישות הקליניות שלא נענו בניהול PLD.

המחקר על המנגנונים של כולנגיופתיה, כולל PLD, נפגע משמעותית בגלל היעדר קווי תאים מתאימים. כדי להתמודד עם מגבלה זו, השימוש במודלים של עכברי מחלה ובידוד של כולנגיוציטים ראשוניים ממודלים אלה לניסויים במבחנה הוכחו כבעלי ערך רב לחשיפת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס כולנגיופתיה וזיהוי אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות.

במחקר האחרון שלנו8, הקמנו בהצלחה מודל עכבר PLD באמצעות עכברי נוקאאוט מותנה (KO) Pkd1. ציסטות בכבד נצפו כבר חודש לאחר מחיקת Pkd1 וגדלו בהדרגה עם הזמן. בעוד שפרוטוקולים לבידוד כולנגיוציטים מחולדות ובני אדם מתועדים היטב 9,10, בידוד כולנגיוציטים ראשוניים מעכברים נותר מאתגר במיוחד בשל גודלם הקטן והארכיטקטורה המורכבת של וריד הפורטל ומערכת המרה. השיטות הקיימות מתמודדות עם מגבלות משמעותיות, כולל טוהר תאים נמוך, כדאיות ירודה, הליכים מורכבים ועלויות גבוהות11,12.

כתב יד זה מציג פרוטוקול מפורט לבידוד כולנגיוציטים ראשוניים בעלי טוהר גבוה מעכברים בשיטת עיכול דו-שלבית. גישה אופטימלית זו נועדה לתמוך במחקרי מבחנה , להקל על חקירת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס כולנגיופתית ולקדם את הפיתוח של אסטרטגיות טיפוליות חדשות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הטיפול בעכברים והפרוטוקולים הניסויים אושרו על ידי הוועדה האתית של האוניברסיטה הרפואית של טיאנג'ין (מס' מסמך: TMUa-MEC 2022016).

1. הכנת ציוד ופתרונות

  1. עיקור מכשירים כירורגיים (מספריים, מלקחיים וידיות אזמל) על ידי חיטוי לפחות יום אחד לפני בידוד התאים.
  2. לפחות יום אחד לפני בידוד התאים, הכינו את מדיום תרבית הכולנגיוציטים באמצעות הריאגנטים המפורטים בטבלה 1. עקר את מדיום תרבית הכולנגיוציטים על ידי סינון דרך מסנן של 0.22 מיקרומטר.
  3. לפחות יום אחד לפני בידוד התאים, הכינו את פתרון A ופתרון B באמצעות הריאגנטים המפורטים בטבלה 2 לזלוף כבד עכבר. עיקור תמיסה A ותמיסה B על ידי חיטוי או סינון דרך מסנן של 0.22 מיקרומטר והתאמת ה-pH שלהם ל-7.35 באמצעות NaOH סטרילי תוך ערבוב עדין.
    הערה: ניתן לאחסן את מדיום תרבית הכולנגיוציטים, תמיסה A ותמיסה B בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך חודש אחד לפחות.
  4. לפני תחילת הניסוי יש להוסיף אבקת קולגנאז II לתמיסה B ולערבב בעדינות עד לקבלת ריכוז סופי של 0.5 מ"ג/מ"ל. יש לחמם מראש את פתרון A ואת תמיסה B באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
  5. מיד לפני תחילת הניסוי, הכינו כלים בגודל 6 ס"מ מלאים ב-PBS סטרילי והניחו אותם על קרח כדי לשמור עליהם קרים במהלך ההליך.

2. זלוף עיכול רקמות כבד

  1. להרדים את העכבר באמצעות מנת יתר של שאיפת איזופלורן. הנח את העכבר המורדם במצב שכיבה ואבטח אותו עם סרט דבק כדי להקל על ההליך.
  2. פתח את חלל הבטן של העכבר לאחר עיקור הבטן עם 75% אתנול ולאחר מכן, קשר קשר סביב הווריד הנבוב התחתון באמצעות מחט מחורבנת. שטפו קטטר תוך-ורידי 24 גרם בתמיסה A באמצעות מזרק של 20 מ"ל.
  3. הכנס את הצנתר התוך-ורידי לתוך הווריד הנבוב התחתון מתחת לקשר, אבטח את הקשר וקבע את הקטטר במקומו בעזרת סרט דבק.
  4. חדרו את הכבד עם 50 מ"ל של תמיסה A דרך הווריד הנבוב התחתון באמצעות מזרק של 20 מ"ל, וחתכו את וריד שער הכבד כדי לנקז את תמיסת הזלוף. שמור על קצב הזלוף על 10 מ"ל לדקה.
  5. המשך זלוף עם 30 מ"ל של תמיסה B המכילה קולגנאז II בקצב זרימה של 3.5 מ"ל לדקה באמצעות משאבה פריסטלטית.
    הערה: שלב זה מיועד לעיכול רקמת הכבד.
  6. הסר את רקמת הכבד שהוחדרה בהצלחה והניח אותה בכלי בגודל 6 ס"מ מלא ב-PBS סטרילי קר.

3. בידוד כולנגיוציטים

הערה: מכיוון שמספר הכולנגיוציטים בעכברים רגילים נמוך יחסית, מומלץ להשתמש בקבוצה של 2-6 עכברים לצורך ההליך. עם זאת, עבור מודלים של מחלות עכברים עם התפשטות כולנגיוציטים חריגה, כגון PLD, הכולנגיוציטים מעכבר בודד מספיקים. אלא אם צוין אחרת, דגימות וריאגנטים תמיד צריכים להישמר על קרח, ויש לבצע את כל ההליכים בארון בטיחות ביולוגי.

  1. לנתק ולנער מכנית את רקמת הכבד באמצעות מלקחיים מעוקלים. לאחר מכן, בצע מיקרודיסקציה תחת מיקרוסקופ מנתח כדי להסיר תאים פרנכימליים דבקים, ולהשאיר עץ מרה שלם. הסר את רקמת כיס המרה לפני שתמשיך לשלב הבא.
    שטפו את הטישו פעמיים עם PBS.
  2. טוחנים דק את עץ המרה באמצעות להב כירורגי, ומעכלים אותו ב-3 מ"ל של תמיסת עיכול (טבלה 3) לכל עכבר עם ניעור (90 סל"ד) ב-37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות. לאחר 30 דקות, פיפטה בעדינות את התערובת בעזרת קצה פיפטה כדי לערבב היטב.
    הערה: יש להכין את תמיסת העיכול לפני השימוש.
  3. העבירו את מתלה התא דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר. השתמש בבוכנה של מזרק של 5 מ"ל או 10 מ"ל כדי ללחוץ בעדינות על מתלה התאים דרך המסננת. שוטפים את המסננת עם PBS.
  4. צנטריפוגה את מתלה התא ב-500 x גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. שוטפים את התאים פי 3 עם מדיום RPMI.
  5. שוב צנטריפוגה ב-500 x גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס.
  6. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים ב-900 מיקרוליטר של מדיום RPMI המכיל 40 U/mL DNase I. הוסיפו 2 מיקרוגרם של נוגדן נגד EpCAM ודגרו את התרחיף על מסובב (20 סל"ד) ב-4 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות.
  7. צנטריפוגה ב-500 x גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס.
  8. השליכו את הסופרנטנט והשעו מחדש את התאים ב-1 מ"ל של מדיום RPMI המכיל 40 U/mL DNase I. חרוזי חלבון G לשטיפה מוקדמת עם 1 מ"ל של מדיום RPMI. הוסף 20 מיקרוליטר של חרוזי חלבון G לתרחיף התא ודגירה בסיבוב (20 סל"ד) ב-4 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות נוספות.
    הערה: ניתן גם לדגור מראש את הנוגדן נגד EpCAM עם חרוזי חלבון G כדי ליצור קומפלקס חרוזים-נוגדנים לפני הכנסת תרחיף התאים.
  9. שטפו את התאים פי 3 עם PBS באמצעות מפריד מגנטי.
  10. בצע ספירת תאים והערכת כדאיות תאים באמצעות צביעת Trypan Blue (0.04%, 3 דקות) על המוציטומטר.
    הערה: אין צורך להוציא את החרוזים מהכולנגיוציטים, הם יתנתקו באופן טבעי עם תחילת התרבות ולא יפריעו לתרבית התאים.

4. תרבות כולנגיוציטים

הערה: הכינו מנות תרבית תאים טריות בציפוי קולגן זנב חולדה מסוג I לפני תרבית כולנגיוציטים. מצננים מראש את כל הריאגנטים על קרח.

  1. בהתאם להוראות היצרן, ערבבו ddH2O סטרילי, 10x PBS, 1 N NaOH וקולגן זנב חולדה מסוג I כדי להשיג ריכוז סופי של 1 מ"ג/מ"ל קולגן זנב חולדה מסוג I ב-1x PBS. מצפים באופן שווה את כלי תרבית התאים בתערובת, ומניחים את הכלים באינקובטור בחום של 37 מעלות צלזיוס עם 5%CO2 למשך 30 דקות כדי לאפשר לקולגן להתמצק.
  2. שטפו את כלי תרבית התאים המצופים בקולגן זנב עכברוש מסוג I עם PBS מחומם מראש.
  3. השעו מחדש את הכולנגיוציטים במדיום תרבית כולנגיוציטים שחומם מראש. זרעו את תרחיף התאים על צלחות תרבית תאים מצופות קולגן של זנב חולדה מסוג I ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2. החלף את המדיום כל יומיים.

5. מעבר ושימור בהקפאה של כולנגיוציטים

  1. שטפו כולנגיוציטים פעמיים עם PBS, ואז דגרו על התאים ב-0.25% טריפסין ב-37 מעלות צלזיוס למשך 5-10 דקות.
  2. הוסף נפח שווה של מדיום תרבית כולנגיוציטים כדי לנטרל את הטריפסין, ואז צנטריפוגה ב -500 x גרם למשך 5 דקות.
  3. הכן מנות תרבית תאים מצופות קולגן זנב חולדה מסוג I כמתואר בשלב 4.1.
  4. בצע את שלבים 4.2 ו-4.3.
  5. אם נדרש שימור בהקפאה, השעו מחדש את הכולנגיוציטים באמצעי אחסון (9:1 FBS: DMSO) ואחסנו במקפיא של -80 מעלות צלזיוס או בחנקן נוזלי. להפשיר את התאים לפי הצורך לשימוש עתידי.

6. אימות כולנגיוציטים

הערה: טוהר הכולנגיוציטים הוערך על ידי צביעה לסמן כולנגיוציטים CK19.

  1. שטפו את הכולנגיוציטים פעמיים עם PBS, ואז קבעו את התאים ב-4% פרפורמלדהיד למשך 15 דקות.
  2. שוטפים את הכולנגיוציטים עם PBS, ואז מחלחלים את התאים עם 1% טריטון X-100 למשך 8 דקות.
  3. שוטפים את הכולנגיוציטים עם PBS, ואז חוסמים את התאים ב-5% BSA למשך שעה.
  4. שטפו את הכולנגיוציטים עם PBS, ולאחר מכן דגרו על התאים עם הנוגדן העיקרי נגד CK19 (דילול 1:12 עם 2% BSA) למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס.
  5. שטפו את הכולנגיוציטים פעמיים עם PBS, ולאחר מכן דגרו על התאים עם נוגדן משני נגד חולדות חמור Alexa Fluor 488 (דילול 1:1,000 עם PBS) למשך שעה בטמפרטורת החדר.
  6. שטפו את הכולנגיוציטים עם PBS, צבעו עם 4',6-דיאמידינו-2-פנילינדול למשך 15 דקות, והתבוננו במיקרוסקופ.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

דיאגרמת זרימת העבודה עבור תהליך העיכול הדו-שלבי המשמש לבידוד כולנגיוציטים מוצגת באיור 1. ההליך כולו אורך ~5 שעות. ראשית, הכבד מוזרם בתמיסה A דרך הווריד הנבוב התחתון כדי להסיר דם, כפי שמצוין על ידי הכבד מחוויר. לאחר מכן מחדירים לכבד תמיסה B המכילה קולגנאז II כדי להתחיל בעיכול רקמות. שלב עיכול ראשוני זה רגיש לזמן, ועיכול מוצלח מעיד על כך שהרקמה הופכת רכה באופן ניכר. לאחר מכן, דיסוציאציה מכנית וניעור עדין באמצעות מלקחיים מעוקלים מסייעים בהסרת הפטוציטים; עיכול תק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מספק שיטה מפורטת לבידוד כולנגיוציטים ראשוניים בטוהר גבוה מעכברים באמצעות תהליך עיכול דו-שלבי, המאפשר לחקור את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס כולנגיופתיה. מספר שלבים קריטיים חיוניים כדי להבטיח בידוד מוצלח של כולנגיוציטים.

הצעד הקריטי הראשון הוא הבטחת זלוף ועיכול יעילים באמצעות תמיסה A ותמיסה B. זלוף מוצלח עם תמיסה A אושר על ידי החוורת הכבד, ועיכול מוצלח עם תמיסה B אושר על ידי רכות רקמת הכבד באופן ניכר. כישלון בזלוף יעכב את עיכול רקמת הכבד ויפגע...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מוועדת החינוך העירונית של טיאנג'ין (2022ZD054 ל-L.Z.)

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.22 μ מסנן mPALL4612
0.25% טריפסיןGibco25200-056
מזרק 10 מ"לKONSMED10 מ"ל 1.2*30TWLB
20 מ"ל מזרקKONSMED20 מ"ל 1.2*30TWLB
24 גרם קטטר תוך ורידיWEGO24GX19  מ"מ/Y-G
3,3',5-triiodo-L-thyronineSigmaT55161.7 מלאי מ"ג/מ"ל
4% פרפורמלדהידSolarbioP1110
5 מ"ל מזרקKONSMED5 מ"ל 0.7*30TWLB
6 ס"מ כליםתרמו סיינטיפיק150462
70 ומיקרו; מסננת תאים mקורנינג352350
נוגדן נגד CK19DSHBTROMA-III
נוגדן נגד EpCAMDSHBG8.8
BSASolarbioA8020
CaCl2Sangon BiotechA5013302 M מלאי
תרכיז שומנים מוגדר כימית (100x)Gibco11905-031
קולגנאז IIוורת'ינגטוןLS004176
קולגנאז XIסיגמאC76573.2 מ"ג/מ"ל מלאי
דקסמתזוןסיגמאD175610 מ"ג/מ"ל מלאי
חיתוך מיקרוסקופLeicaEZ4
DMEM/F12 (1:1)VivaCell biosciencesC3130-0500
DMSOSigmaD2650
DNase ISigmaD451310 יחידות L מלאי
חמור נגד חולדות Alexa Fluor 488 נוגדן משניInvitrogenA21208
EGTASolarbioE805050 מ"מ (PH = 8) מלאי
גורם גדילה אפידרמיס (1 מ"ג/מ"ל)סיגמאSRP3196
אתנולמיןסיגמאE9508
סרום בקר עובריVivaCell biosciencesC04001-500
ForskolinSigmaF3917מלאי 20 מ"מ
תמיסת גנטמיצין/אמפוטריצין (500x)GibcoR01510
המוציטומטרQIUJINGXB. ק.25.
HEPESSigmaH4034
HyaluronidaseSigmaH3506מלאי 10 מ"ג/מ"ל
אינסולין-טרנספרין-סלניום (100x)Gibco41400045
איזופלורןRWDR510-22-10
KClSangon BiotechA100395
L-גלוטמין (200 מ"מ)SigmaG7513
מפריד מגנטיPromegaZ5342
MEM חומצות אמינו לא חיוניות (100x)תמיסת ויטמין Gibco11140050
MEM (100x)Gibco11120052
MgCl2Sangon BiotechA100288מלאי 1.5 מיליון
Na Pyruvate  (100 מ"מ)Gibco11360070
Na2HPO4sub>Sangon BiotechA600487
NaClSangon BiotechA610476
NaOHSangon BiotechA6206171 N מלאי
PBSVivaCell biosciencesC3580-0500
PBSSolarbioP1010
פניצילין-סטרפטומיצין (100x)Gibco15140-122
משאבה פריסטלטיתBaodingRongbaiYZ1515PPS
חרוזי חלבון GInvitrogen10004D
מסובבKylin-BellQB-528
RPMIVivaCell biosciencesC3010-0500
מעכב טריפסין פולי סויהSigmaT652210 מ"ג/מ"ל מלאי
מחוברתJinhuan MedicalHM601
Triton X-100SolarbioT8200
טריפן כחולסיגמאT614610 מ"ג/מ"ל מלאי
סוג I קולגן זנב עכברושBD354236
מחט

מקורות

  1. Wang, Z., et al. Human cholangiocytes form a polarized and functional bile duct on hollow fiber membranes. Front Bioeng Biotechnol. 10, 868857(2022).
  2. Li, P., et al. Three-dimensional human bile duct formation from chemically induced human liver progenitor cells. Front Bioeng Biotechnol. 11, 1249769(2023).
  3. Fabris, L., et al. Pathobiology of inherited biliary diseases: a roadmap to understand acquired liver diseases. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (8), 497-511 (2019).
  4. Jalan-Sakrikar, N., et al. Central role for cholangiocyte pathobiology in cholestatic liver diseases. Hepatology. , (2024).
  5. Ilyas, S. I., Gores, G. J. Pathogenesis, diagnosis, and management of cholangiocarcinoma. Gastroenterology. 145 (6), 1215-1229 (2013).
  6. Perugorria, M. J., et al. Polycystic liver diseases: advanced insights into the molecular mechanisms. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11 (12), 750-761 (2014).
  7. Masyuk, T. V., Masyuk, A. I., LaRusso, N. F. Polycystic liver disease: Advances in understanding and treatment. Annu Rev Pathol. 17, 251-269 (2022).
  8. Ji, R., et al. Multi-omics profiling of cholangiocytes reveals sex-specific chromatin state dynamics during hepatic cystogenesis in polycystic liver disease. J Hepatol. 78 (4), 754-769 (2023).
  9. Tabibian, J. H., et al. Characterization of cultured cholangiocytes isolated from livers of patients with primary sclerosing cholangitis. Lab Invest. 94 (10), 1126-1133 (2014).
  10. Muff, M. A., et al. Development and characterization of a cholangiocyte cell line from the PCK rat, an animal model of autosomal recessive polycystic kidney disease. Lab Invest. 86 (9), 940-950 (2006).
  11. Nagaya, M., Katsuta, H., Kaneto, H., Bonner-Weir, S., Weir, G. C. Adult mouse intrahepatic biliary epithelial cells induced in vitro to become insulin-producing cells. J Endocrinol. 201 (1), 37-47 (2009).
  12. Karjoo, S., Wells, R. G. Isolation of neonatal extrahepatic cholangiocytes. J Vis Exp. (88), e51621(2014).
  13. Kudira, R., et al. Isolation and culturing primary chaolangiocytes from mouse liver. Bio Protoc. 11 (20), e4192(2021).
  14. Ueno, Y., et al. Evaluation of differential gene expression by microarray analysis in small and large cholangiocytes isolated from normal mice. Liver Int. 23 (6), 449-459 (2003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

בידוד כבד של עכברבידוד אימונו-מגנטיעץ המרהתרבית תאיםציטוקרטין-19נוגדן EpCAMמפריד מגנטי

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.