במחקר זה פותחה טכניקת זיהוי כריכים המבוססת על נוגדנים כפולים לזיהוי מהיר של אנטיגנים צואתיים הנגועים בהליקובקטר פילורי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
במחקר זה פותחה טכניקת זיהוי כריכים המבוססת על נוגדנים כפולים לזיהוי מהיר של אנטיגנים צואתיים הנגועים בהליקובקטר פילורי.
הליקובקטר פילורי יכול להיות טפילי ברירית הקיבה, מה שעלול לגרום לסדרה של מחלות במערכת העיכול לאחר זיהום וקשור קשר הדוק לדלקת קיבה, כיב קיבה וסרטן הקיבה. השכיחות הגבוהה של זיהום בהליקובקטר פילורי באזורים עם תשתית רפואית ירודה ואזורי תברואה לא מספקים נותרה דאגה משמעותית לבריאות הציבור. כתוצאה מכך, יש חשיבות עליונה לפיתוח שיטות סריקה מהירות, פשוטות וחסכוניות לגילוי הליקובקטר פילורי בסביבות מוגבלות במשאבים.
במחקר זה, ערכנו סקר קהילתי בכפר שיטאן, מחוז גואנגדונג, אזור מרוחק ולא מפותח המאופיין באוכלוסייה קבועה של כ-300 תושבים עם הישגים חינוכיים נמוכים בדרך כלל. השתמשנו בבדיקת סנדוויץ' נוגדנים כפולה לזיהוי אנטיגן צואה של הליקובקטר פילורי , שיטה שנבחרה בשל היישום הפוטנציאלי שלה בסביבות דלות משאבים. בסך הכל נרשמו 261 משתתפים מהכפר, ודגימות הצואה שלהם נותחו בטכניקה זו. לצורך אימות השוואתי, אותן דגימות עברו ניתוח תגובת שרשרת פולימראז כמותית (qPCR). בהשוואה לתוצאות qPCR, הרגישות והספציפיות של זיהוי אנטיגן הליקובקטר פילורי בצואה היו 60.24% ו-80.08%. התוצאות הראו התאמה חזקה בין שיטת זיהוי האנטיגן הצואתי לבין qPCR (Kappa = 0.630). מחקר זה הבהיר באופן שיטתי את העקרונות, הנהלים, המתודולוגיות והיישומים הקליניים של זיהוי אנטיגן צואתי לזיהום בהליקובקטר פילורי , במטרה לחקור את טכנולוגיית כריכי הנוגדנים הכפולים מבוססת לטקס ולבסס אסטרטגיות חדשות והנחיות מעשיות לאבחון העזר שלה.
הליקובקטר פילורי (H. pylori, Hp) הוא חיידק מיקרואירופילי בצורת ספירלה, גרם שלילי1. בשל יכולתו להתיישב ולהדביק באופן כרוני את הקיבה האנושית2, פתוגן זה זוהה כגורם אטיולוגי עיקרי בהתפתחות אדנוקרצינומה בקיבה 3,4. בשנת 2015, ~4.4 מיליארד אנשים בעולם סבלו מזיהום בהליקובקטר פילורי 5. השכיחות של זיהום הליקובקטר פילורי מציגה שונות גיאוגרפית ניכרת, כאשר מדינות מתפתחות חוות שיעורים גבוהים משמעותית בהשוואה למדינות מפותחות. יש לציין כי במדינות בעלות הכנסה נמוכה ובקרב אוכלוסיות פגיעות מסוימות, שיעור ההדבקה יכול להגיע עד ל-75%6.
למרות ששיטות זיהוי מסורתיות כגון גסטרוסקופיה מדויקות, יישומן בהקרנה בקנה מידה גדול ובמעקב שגרתי מוגבל בשל פולשנותן, עלותן הגבוהה וקבלת המטופלים הנמוכה7. לכן, החיפוש אחר שיטות אבחון לא פולשניות, פשוטות ומהירות הפך לכיוון חשוב במחקר הרפואה הקלינית המודרנית. המטרה העיקרית של אבחנה לא פולשנית של הליקובקטר פילורי היא לזהות בצורה מדויקת, בטוחה ונוחה אם המטופל נגוע בהליקובקטר פילורי ללא בדיקה אנדוסקופית. בדיקת נשימה אוריאה (UBT ), בדיקת אנטיגן צואתי (FAT)8 ובדיקה סרולוגית9 הן טכניקות לא פולשניות פופולריות.
מבין אלה, ה-UBT הוא ההליך הכי פחות פולשני ומדויק ביותר שיש10. הרגישות והספציפיות של UBT גבוהות מ-95%11. מבין שיטות האבחון הלא פולשניות הזמינות, ה-UBT הוכח כמדויק והאמין ביותר, כפי שניתן לראות במחקר אימות שנערך בעיראק, ה-UBT עשוי להיות מומלץ כבחירה הראשונה בשל ביצועיו הגבוהים יותר בהשוואה לשיטות אחרות12. עם זאת, ל-UBT יש גם חסרונות, כגון העלות הגבוהה והצורך בניתוח ספקטרומטרי מסה, המגביל את היישום בהגדרות מרוחקות או מוגבלות במשאבים13.
יש צורך קריטי בפיתוח שיטת אבחון מהירה, לא פולשנית וחסכונית לאיתור זיהום בהליקובקטר פילורי , במיוחד באזורים מוגבלים במשאבים. במחקר זה פיתחנו טכנולוגיית זיהוי מהיר לאנטיגן צואתי של הליקובקטר פילורי המבוססת על טכנולוגיית זיהוי כריך נוגדנים כפולים, המסוגלת לזהות אנטיגן הליקובקטר פילורי בדגימות צואה במהירות, ביעילות ובעלות נמוכה. טכנולוגיה זו מציעה יתרונות משמעותיים, כולל סבירות, לא פולשנית, ידידותיות למשתמש ויכולת הסתגלות לאזורים מרוחקים. אנו משערים כי שיטת סנדוויץ' הנוגדנים הכפולים לגילוי אנטיגן צואה של הליקובקטר פילורי תפגין רגישות וסגוליות דומות ל-qPCR, ותמצב אותה ככלי בר-קיימא לאבחון קליני לא פולשני.
פירטנו באופן מקיף את העקרונות, הנהלים, החוזקות המתודולוגיות והיישום הקליני של זיהוי אנטיגן צואתי לזיהום בהליקובקטר פילורי . כדי לאמת את המעשיות שלו, ערכנו חקירה אפידמיולוגית וסינון בכפר שיטאן, העיר צ'ינגיואן, מחוז גואנגדונג, סין, שהוא אזור מרוחק ולא מפותח עם אוכלוסייה קבועה של כ-400 והישגים חינוכיים מוגבלים. התוצאות שלנו מדגימות כי ניתן להשלים את טכנולוגיית הזיהוי המהיר של אנטיגן הליקובקטר פילורי בצואה שתוכננה כאן תוך 20 דקות. מודגש כי זיהוי מהיר של אנטיגן הליקובקטר פילורי בצואה הוא כלי פוטנציאלי ומבטיח לאבחון מהיר ואמין של זיהום הליקובקטר פילורי באזורים מרוחקים ומפגרים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מחקר חתך זה אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העממי של מחוז גואנגדונג (מספר אישור: KY2024-445-01), והנתונים האישיים של כל נבדקי המחקר היו חסויים לחלוטין במהלך המחקר. כל המשתתפים חתמו על הסכמה מדעת בכתב לפני הניסויים. תושבי הכפר שיטאן בעיר צ'ינגיואן, מחוז גואנגדונג, נבחרו בשנת 2024 כנבדקי המחקר, ולא היו הגבלות על גיל ומין. בדיקת כריך הנוגדנים הכפול (ניסוי איכותני) המתוארת להלן בוצעה על ידי צוות רפואי וטכני מקצועי על פי ההוראות. כל האוכלוסייה הקבועה של הכפר נבחרה למחקר זה, ללא קשר אם הם בריאים או סבלו מתסמינים או מחלות קיימות הקשורות למחלות במערכת העיכול.
1. בחירת המטופל
2. נוהל לזיהוי אנטיגן זיהום בהליקובקטר פילורי בצואה
הערה: האלגוריתם לבדיקת אנטיגן צואה של הליקובקטר פילורי תוכנן כדי להבטיח את הדיוק והאמינות של התוצאות, תוך התחשבות בפשטות והיגיינה. התהליך כולו מחולק לחמישה שלבים: איסוף דגימות, עיבוד דגימות, אחסון דגימות, זיהוי ופרשנות תוצאות. תרשים זרימת העבודה והתרשים הסכמטי של זיהוי הדגימה מוצגים באיור 1 ובאיור 2.
3. מיצוי DNA
4. qPCR לגילוי הליקובקטר פילורי ועמידות לאנטיביוטיקה
הערה: ביצענו qPCR לזיהוי זיהום בהליקובקטר פילורי על ידי הגברת הגן ureA . כל מוצרי בקרת האיכות השליליים הם מים סטריליים ומטוהרים. תוצר בקרת האיכות החיובי בערכת זיהוי חומצות הגרעין של הליקובקטר פילורי הוא חרוזים סטנדרטיים של הליקובקטר פילורי מושבת (ATCC 43504). AC, T ≤ 30 עם עקומה טיפוסית בצורת S נחשבת חיובית.
5. ניתוח סטטיסטי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
סקר שאלונים
בסך הכל נרשמו למחקר 261 משתתפים, הכוללים 144 נשים ו-117 גברים, בגילאים שנעו בין 4 ל-99 שנים. הגיל הממוצע של הנבדקים היה 48.30 ± 17.61 שנים. בפיגוע השתתפו 17 קטינים (בני 17-0), 202 מבוגרים (64-18) ו-42 קשישים (>64 שנים). תוצאות השאלון מוצגות בטבלה 1. רוב הנבדקים (90.8%) חשבו שיש צורך לבצע בדיקת הליקובקטר פילורי .
תוצאות סינון של זיהוי אנטיגן הליקובקטר פילורי בצואה בכפר זה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הליקובקטר פילורי מייצג את אחד הזיהומים החיידקיים הנפוצים ביותר בכל רחבי העולם15. תוצאות השאלון חשפו כי 55.2% מהאוכלוסייה חסרה מודעות להליקובקטר פילורי, בעוד ש-90.8% האמינו כי יש צורך בבדיקת הליקובקטר פילורי. ממצאים אלה מדגישים את החשיבות של יישום תוכניות סקר להליקובקטר פילורי באזורים מוחלשים כלכלית ומרוחקים16. למרות שבדיקת הנשיפה של אוריאה (UBT) היא שיטת אבחון נפוצה, עלותה הגבוהה וחוסר התאמתה לילדים ונשים...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ערכת מיצוי DNA | ג'יאנגסו שומה ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | 20230223 | ללא |
| H. pylori ערכת גילוי אנטיגן צואתי | האנגג'ואו nuohui טכנולוגיה בריאה ושות', בע"מ | 20213401126 | ללא |
| h. pylori ערכת זיהוי חומצות גרעין | ג'יאנגסו שומה ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | 20230226 | ללא |
| PCR כמותי פלואורסצנטי בזמן אמת | שנחאי Hongshi טיפול רפואי טכנולוגיה ושות', בע"מ | 20183221659 | ללא |
| פתרונות מוצרים ושירותים סטטיסטיים | חברת IBM | ללא | ללא |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.