מאמר מחקר

הערכה רב-מודאלית של השפעת ההגנה של Gentiopicroside בפגיעה בתאי HepG2 הנגרמת על ידי CDCA

DOI:

10.3791/68320

⸱

25 ביולי 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Internal Medicine of Traditional Chinese Medicine, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan, 4Institute of High Altitude Multimorbidity/TCM-Integrated High Altitude Medicine Center, Hospital of Chengdu University of TCM, 5Chengdu Tianxing Zhiyuan Biotechnology Co., Ltd.

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה הראה כי ג'נטיופיקרוזיד יכול לטפל בפגיעה בכבד כולסטטי על ידי שליטה בייצור ובחילוף החומרים של חומצות מרה ושומנים ומניעת מתח חמצוני ותגובות דלקתיות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המרכיב הפעיל העיקרי של Swertia chirayita, ג'נטיופיקרוזיד (GPS), הוכח כמגן על הכבד במקרים של כולסטזיס. על מנת להבהיר את מנגנון ההגנה של GPS מפני פגיעה בכבד כולסטטי, תאי HepG2 טופלו בחומצה chenodeoxycholic (CDCA) כדי לדמות את סביבת הכולסטזיס במבחנה, ונעשה שימוש בשיטת CCK-8 כדי לקבוע את ההשפעה המגנה של GPS על תאי HepG2. באמצעות ערכה ביולוגית זוהו תכולת TBA, T-CHO, TG, ALP, ALT, AST, GSH, IL-1β, IL-6, TNF-α, SOD ו-MDA. נעשה שימוש במיקרוסקופ לייזר קונפוקלי כדי לאשר את רמת ה-ROS. ביטויי תאי HepG2 של SHP-2, Tgr5, CYP7A1 ו-NTCP הוערכו באמצעות אימונופלואורסצנציה וניתוח כתמים מערביים. לאחר מכן נעשה שימוש בתוכנת Autodock כדי לאמת את העגינה המולקולרית של החומרים הפעילים העיקריים שלה. הממצאים הראו כי GPS מנע באופן משמעותי את הנזק שגרם ה-CDCA לתאי HepG2. אפקט מגן זה עשוי להיות מושג על ידי שליטה בייצור ובחילוף החומרים של חומצות מרה ושומנים בתוך התא ומניעת עקה חמצונית ותגובות דלקתיות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

האתר המטבולי של מערכת העיכול של הגוף הוא הכבד. הפרשת מרה היא מנגנון מפתח בתהליך קטבוליזם השומן של מערכת הכבד. המרכיבים העיקריים של המרה, חומצות מרה, משתחררים על ידי תאי הכבד והם חיוניים לשמירה על שיווי המשקל של חילוף החומרים של השומן. הן עבור אנשים בריאים והן עבור חולים, התהליכים הפיזיולוגיים והפתולוגיים של הכבד תלויים באיזון חומצות המרה החופשיות והמצומדות בכבד. אם שיווי משקל זה מופר זרימת חומצת המרה לא תתפקד כרגיל, מה שעלול להוביל לכולסטזיס תוך כבדי ולנזק לכבד לאחר מכן1. על פי מחקר שכבר נערך, פגיעה בכבד כולסטטי (CLI) היא מצב הקשור להפרעות מטבוליות, חוסר איזון במיקרוביוטה במעי ונמק תאי כבד2. זה נגרם על ידי חסימה של זרימת המרה והצטברות של חומצות מרה בתאי הכבד עבור CLI. מקרים חמורים של CLI יכולים להתקדם לשחמת כבד, פיברוזיס בכבד ואי ספיקת כבד3. נכון לעכשיו, המנגנון העומד בבסיס CLI עדיין מעט לא ברור ומורכב, ורוב החולים מקבלים יעילות נמוכה מטיפול תרופתי4 יחד עם תופעות לוואי משמעותיות5. כתוצאה מכך, אחת הסוגיות הדחופות ביותר העומדות בפני הקהילה הרפואית כיום היא החיפוש אחר תרופות CLI יעילות.

המחקר הנוכחי הוכיח את חשיבותם של כמה קולטנים גרעיניים בחילוף החומרים של חומצת מרה6. בין אלה, קולטן חומצת המרה הוא קולטן רגולטורי חיוני של חומצת מרה שעשוי להיקשר ל-BAs ולהפעיל חלבון טירוזין פוספטאז (SHP)7. מצד שני, הצטברות מוגזמת של BAs בהפטוציטים הגורמת לכולסטזיס תעכב לרעה את קולטן SHP ותפעיל את קולטן CYP7A1 (ציטוכרום P450 7A1), מה שיוביל לייצור חומצת מרה8. בנוסף, הוא חסם את קולטן חומצת המרה המצמד לחלבון G TGR5 מלהפריש BAs ועורר את קולטן הפוליפפטיד המשותף של נתרן טאורוכולט (NTCP) להובלת BAs. זה גורם לחומצות מרה להצטבר בתאי הכבד, מה שפוגע בכבד9. כתוצאה מכך, מחקר נוסף על מנגנון זה עשוי לשפוך אור על אפשרויות טיפול ב-CLI ברות קיימא יותר.

עם היסטוריה ארוכה של שימוש ברפואה, Swertia chirayita היא רפואה טיבטית סינית מסורתית. הוא נחשב לטידה הטובה ביותר ומשמש לעתים קרובות על ידי המקומיים לטיפול במחלות כיס המרהוהכבד 10. הוא משמש לעתים קרובות לטיפול באבני מרה, דלקת שלפוחית השתן, שחמת, דלקת כבד ומחלות כבד אחרות11. מחקר שנערך לאחרונה גילה כי לחלק מהרכיבים הכימיים האירידואידיים של סווארטיה, כמו גם למרכיבים הפעילים שלה, יש השפעה טיפולית טובה על מחלות כבד כגון פיברוזיס בכבד ופגיעה חריפה בכבד 12,13,14. המרכיבים הפעילים של Swertia chirayita מקלים על מחלות כבד על ידי הורדת דלקת15 ותכונותיה נוגדות החמצון16. המחקר הראשוני שלנו הראה כי נוסחת התרכובת הטיבטית עם Swertia chirayita כמרכיב העיקרי מציגה השפעה טיפולית חיובית על CLI, מה שמצביע על כך של-Swertia chirayita יש פוטנציאל כטיפול ב-CLI17. החומר הפעיל העיקרי המופק ומטוהר מ-Swertia chirayita הוא GPS (Gentiopicroside)18, שיש לו מספר פעולות פרמקולוגיות, כגון הגנה על הכבד19, ויסות חילוף החומרים של הגלוקוז20, שיפור מיקרוביום המעי21 ותכונות אנטי-גידוליות22. מחקרים קודמים הראו כי GPS משפר נזק לכבד במצבים כולסטטיים ומפחית כולסטזיס תוך כבדי על ידי ויסות הביטוי של מובילי חומצות מרה23,24. בדומה לכך, מחקר שנערך הן in vivo והן in vitro הוכיח כי GPS יכול להפחית נזק לכבד על ידי שיפור חילוף החומרים של השומנים, הפחתת דלקת והפחתת מתח חמצוני25,26.

תאי HepG2 משמשים לעתים קרובות במחקרי מבחנה של מחלות כבד מכיוון שהם מציגים פעילות אנזימים מטבוליים של הפטוציטים27. בינתיים, הפטוציטים יכולים להפריש יותר מרה כאשר הם נחשפים לאחת מארבע הצורות של חומצות מרה חופשיות, הכוללות CDCA28. כתוצאה מכך, ניתן להשתמש ב-CDCA כדי ליצור מודל תאים של פגיעה בכבד כולסטטי ולחקות את הסביבה הכולסטטית במבחנה. בהתחשב בכך שפגיעה בכבד הנגרמת על ידי CDCA מתווכת באופן קריטי על ידי מתח חמצוני ומסלולים דלקתיים ובהתחשב בהשפעות נוגדות החמצון והאנטי דלקתיות המתועדות של GPS בהקשרים אחרים של הכבד26, אנו משערים כי GPS עשוי להעניק הגנה מפני פגיעה בכבד כולסטטי על ידי הקלה על ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי CDCA בתאי HepG2. עבודה זו חקרה את ההשפעה המגנה של GPS על CLI והמנגנון המולקולרי שלו באמצעות מודל של נזק הנגרם על ידי CDCA לתאי HepG2.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תרבית תאים וטיפול
תאי HepG2 ומדיית MEM נרכשו מספק מסחרי. תאי HepG2 גודלו במדיה MEM בתוספת 10% FBS, 1% 100 U/mL פניצילין ו-100 U/mL סטרפטומיצין, באטמוספירה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 . לאחר הידבקות התאים, אמצעי התרבות השתנו. התאים גודלו ביחס של 1:3 לאחר 2-3 ימים, והם שימשו בניסוי לאחר שתרבית התאים הגיעה למפגש של 80%.

בדיקת כדאיות תאים
ביום הראשון, תאים נזרעו ב-2 x 104 תאי HepG2 (2 x 105 תאים/מ"ל, 100 מיקרוליטר לבאר) בצלחת של 96 בארות בשישה חזרות29. ביום השני, לאחר 24 שעות של חיסון, התאים טופלו ב-CDCA בריכוזים שונים של CDCA (0, 20, 40, 60, 80, 100 מיקרומטר) במשך 12 שעות. כדאיות התא זוהתה בשיטת CCK-8. לאחר 24 שעות של זריעת תאים ראשונית, התאים טופלו ב-CDCA בריכוזים שונים של GPS (0, 25, 50, 100, 200, 400 ו-800 מיקרומטר) למשך 24 שעות. ביום השלישי זוהתה כדאיות התא בשיטת CCK-8. ביום הרביעי, 2 x 104 תאי HepG2 (2 x 105 תאים/מ"ל, 100 מיקרוליטר לבאר) נזרעו בצלחת של 96 בארות בשישה שכפולים למשך 24 שעות. ביום החמישי, התאים מופרדים לשש קבוצות: ביקורת, מודל, חומצה Ursodeoxycholic (UDCA) ו-GPS: 25 מיקרומטר, 50 מיקרומטר ו-100 מיקרומטר. למעט קבוצת הביקורת, תמיסת CDCA של 60 מיקרומטר נוספה לכל הקבוצות למשך 12 שעות. לאחר מכן נוספו פתרון UDCA (60 מיקרומטר) ופתרון GPS (25 מיקרומטר, 50 מיקרומטר ו-100 מיקרומטר) למשך 24 שעות, ל-UDCA ול-3 קבוצות ה-GPS, בהתאמה. ביום השישי זוהתה כדאיות התא בשיטת CCK-8.

בדיקת ציטוקינים
על פי הספרות המדווחת, ערכות TNF-α, IL-6 ו-IL-1β שימשו לאיתור רמות הגורמים הדלקתיים בתאי HepG2 לאחר טיפולים שונים30. לאחר 24 שעות של התערבות CDCA או CDCA+GPS, השליכו את מדיום התרבית ושטפו אותו עם PBS. צנטריפוגה את תרחיף התא ב-69 x גרם למשך 10 דקות, השליכו את הסופרנטנט וקחו את התא משקעים. הוסף תמיסת PBS והומוגניזציה בתנאי אמבט מי קרח להכנת הומוגנטים של תאים. לאחר צנטריפוגה של 10 דקות ב-10,005 x g ו-4 מעלות צלזיוס, הסופרנטנט הוסר, וטכניקת BCA שימשה למדידת החלבון הכולל בתכולת התא. על פי הוראות היצרן, רמות TNF-α, IL-6 ו-IL-1β בסופרנטנט התא נקבעו על ידי ELISA. הספיגה נמדדה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות רב תכליתי.

זיהוי TBA, TG ו-T-CHO
בדיקות TBA, TG ו-T-CHO נוצלו בהתאם להוראות הערכה לזיהוי חומצות המרה וחילוף החומרים של תאי HepG231. TBA, TG ו-T-CHO נרכשו באופן מסחרי. לאחר שמשקעי התא פורקו באופן אולטרסאונד באמבט מי קרח, הוכן התא הומוגנאט על ידי הוספת ליזאט RIPA למשך 30 דקות. הספיגה נמדדה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות רב תכליתי. בעקבות הוספת פתרונות עבודה BCA לכל באר והומוגניזציה של התאים, נמדדה הספיגה ב-562 ננומטר באמצעות אנזימולטר, ותקופת הדגירה הייתה 30 דקות הספיגה של המוצר הסטנדרטי שימשה לבניית העקומה הסטנדרטית, ונעשה שימוש בנוסחה הבאה כדי לקבל את ערך הספיגה:
תכולת TBA (μmol/gprot) = (מדגם A ריק)/(A סטנדרטי-A ריק)×Cכיול/החייאה
T-CHO, TG תוכן (mmol/gprot) = (מדגם A ריק)/(תקן Aריק)×Cסטנדרטי/CPR

הערכת תפקודי כבד
תפקודי הכבד הוערכו באמצעות ALT, AST ו-ALP. ALT, AST ו-ALP נרכשו באופן מסחרי. לאחר שני סבבים של ניקוי מאגר PBS על התאים שנאספו, התאים עברו צנטריפוגה למשך 10 דקות ב-69 x גרם, הסופרנטנט הוסר, התאים הושקעו, נוסף מאגר PBS וההומוגנט נוצר על ידי ריסוק קולי באמבט מי קרח. לאחר מכן נקבעו חורי הבדיקה והבקרה. עקבו אחר טבלת הניתוח תוך הוספת המגיב, ניעור וערבוב עדין של צלחת החור ולתת לה לשבת בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. ערך ה-OD של כל חור נקבע באמצעות אנזימולטר באורך גל של 505 ננומטר. לאחר מכן הוכנס ערך ה-OD המוחלט לעקומה הסטנדרטית ובוצע ניתוח כמותי נוסף באמצעות הנוסחה.

קביעת פעילויות SOD, MDA, GSH
פעילות SOD, תכולת MDA ותכולת GSH הוערכו בהתאם להוראות היצרן, בהתאמה. SOD, MDA ו-GSH נרכשו באופן מסחרי. בקצרה, נעשה שימוש בצלחת של שש בארות כדי לחסן את התאים. לאחר הטיפול, התאים עברו טיפול מקדים (איסוף ושבירה) בהתאם להוראות הניסוי של הערכה. לאחר מכן נשפכו פתרונות העבודה המתאימים ללוחית זיהוי התאים לאחר שהוקמו חורים ריקים, חורים סטנדרטיים וחורי מדידה בהתאם לשלבי הפעולה של ההוראות. לאחר מכן, התאים מתורבתים בטמפרטורה ובמשך הזמן המוזכרים בהוראות הערכה. לאחר מכן נעשה שימוש בערכת זיהוי BCA כדי לכמת את תכולת החלבון. בסופו של דבר, הספיגה נקבעה באורך הגל המתאים, ונערך ניתוח כמותי יסודי יותר של מדד העקה החמצונית.

איתור שינויים ב-ROS בתאי HepG2 באמצעות בדיקה DCFH-DA
בוצעה תרבית שגרתית לספירת תאים. תאי HepG2 בצפיפות של 1 x 105 תאים/מ"ל חוסנו לכלי זכוכית עם תחתית זכוכית בנפח של 1.5 מ"ל כל אחד, וגודלו על פי השיטה לעיל. לאחר התרבית, המדיום הושלך והתאים נשטפו ב-PBS. ה-DCFH-DA דולל לריכוז של 1:1000, נוסף בדילול של 1.5 מ"ל לבאר, והודגר במשך 20 דקות. לאחר הדגירה, התאים נשטפו פי 3 עם תמיסת תרבית בסיסית MEM. לאחר מכן, 100 מיקרוליטר של אמצעי הרכבה נגד דהייה עם DAPI נוספו לכל מנה. מיקרוסקופ קונפוקלי פלואורסצנטי שימש לצפייה וצילום תמונות ב-488 ננומטר לעירור ו-525 ננומטר לפליטה32.

הדמיה אימונופלואורסצנטית
התאים נשטפו פי 3 עם מאגר PBS לאחר הדגירה. לאחר קיבוע במשך 30 דקות עם 4% פרפורמלדהיד, התאים נוקו באמצעות מאגר PBS על שולחן טלטול. המדלל הוסף, ואז קירר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס הרחק מהאור למשך הלילה. לאחר מכן, התאים צופו בדילול פלואורסצנטי והודגרו הרחק מהאור למשך שעה אחת בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר הדגירה, התאים נשטפו שלוש פעמים עם מאגר PBS. לאחר קיבוע עם 4% פרפורמלדהיד למשך 30 דקות, התאים נשטפו עם מאגר PBS על שייקר סיבובי. לאחר מכן, 150 מיקרוליטר של מדלל נוגדנים ראשוני נוספו והודגרו למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס בתנאים מוגנים מאור. מדלל הנוגדנים העיקרי הוחזר, ואחריו נוסף נפח מספיק של מאגר PBS וניעור למשך 5 דקות; הליך כביסה זה חזר על עצמו שלוש פעמים. לאחר מכן כל מנה קיבלה 150 מיקרוליטר של מדלל נוגדנים משני פלואורסצנטי והודגרה ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת באינקובטור מוגן אור. נפח מתאים של מאגר PBS נוסף לכל מנה ונשטף על שייקר סיבובי למשך 8 דקות, וחזר על עצמו במשך שלושה מחזורים. לבסוף, התאים כוסו בתמיסת צביעה מספקת של DAPI למשך 10 דקות, הורכבו עם מדיום הרכבה נגד דהייה, וצולמו באמצעות מערכת הדמיה ברזולוציהגבוהה 33.

ניתוח כתמים מערביים
לאחר טיפולים שונים, כל החלבון של תאי HepG2 הופק באמצעות RIPA lysate, וריכוז החלבון נבדק בטכניקת BCA. לאחר בידוד חלבון המטרה באמצעות 10% SDS-PAGE, הוא הועבר לממברנת PVDF של 0.45 מיקרומטר. לאחר מכן, הממברנה נאטמה למשך 1.5 שעות ב-25 מעלות צלזיוס באמצעות 5% BSA. נוגדנים ראשוניים נגד SHP-2 (1:1000), CYP7A1 (1:1000), Tgr5 (1:1000), NTCP (1:1000) ו-β-actin (1:1000) הודגרו במהלך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הממברנה הודגרה עם נוגדן משני אימונוגלובולין G נגד ארנב עזים (1:10000) מצומד עם חזרת פרוקסידאז למשך שעתיים בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס. לאחר מכן נראו הרצועות המצופות פרוקסידאז באמצעות תמיסת ECL כימילומינסנט בעלת רגישות גבוהה במיוחד, והתמונות צולמו באמצעות מערכת הדמיה34.

עגינה מולקולרית
כפי שדווח, תהליך העגינה המולקולרית בוצע על פי הנהלים הבאים35. מבנה התרופה small molecule.mol2 הורד מפלטפורמת ChemicalBook, ומבנה חלבון הליגנד .sdf הורד מפלטפורמות Uniprot ו-RCSBPDB. מולקולות הליגנד והמים הוסרו על ידי תוכנת Pymol, וחלבון הליגנד יובא לתוכנת AutoDock לצורך הידרוגנציה וזיהוי. הפלט הסופי הוא בפורמט .pdbqt. ניתוח תיבת העגינה, RunAutoGrid, RunAutoDock וכלי AutoDock בוצעו בתוכנת AutoDock, ואנרגיית הכריכה המינימלית של כל קבוצה של תוצאות עגינה נשמרה. נבחרה הקונפורמציה עם אנרגיית הקישור החופשית הנמוכה ביותר של כל קבוצה, וקונפורמציה של קולטן הליגנד-קולטן שלה הודגמה על ידי תוכנת Pymol.

ניתוח סטטיסטי
הנתונים הנ"ל מוינו סטטיסטית באמצעות GraphPad Prism 9.2, וכל תוצאות הניסוי דווחו כ-Mean ± SD. על מנת להשוות סטטיסטית את הנתונים בין הקבוצות, נעשה שימוש ב-ANOVA חד-כיווני. ההבדל בין שתי הקבוצות נחשב מובהק כאשרp < 0.05.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ריכוז ה-CDCA נקבע ל-0 מיקרומטר, 20 מיקרומטר, 40 מיקרומטר, 60 מיקרומטר, 80 מיקרומטר ו-100 מיקרומטר שיפוע ריכוז לניסויים. כאשר ריכוז ה-CDCA היה 60 מיקרומטר, פעילות התא הייתה שונה באופן משמעותי מזו של קבוצת הביקורת, ולבסוף 60 מיקרומטר שימש כריכוז של CDCA (איור 1A). התוצאות הראו שאחרי הדגירה במשך 24 שעות אחרי מתן התרופה, לא היה הבדל משמעותי בפעילות התאים בין כל קבוצה לקבוצת הביקורת (איור 1B), מה שמצביע על כך של-GPS לא הייתה השפעה מעכבת על פעילות התא בריכוז של 800 מי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CLI היא מחלת כבד הנגרמת על ידי חסימה של היווצרות, הפרשה או הפרשה של מרה. היא מתבטאת קלינית כגירוד, אוסטאופורוזיס, ואף מתפתחת לפיברוזיס בכבד, שחמת ומחלות אחרות, המסכנות את החיים והבריאות באופן חמור 36,37,38. UDCA מוכרת כתרופה הנפוצה ביותר בטיפול ב-CLI39. עם זאת, בשל המספר הגדול של חולים עם תגובה לקויה ל-UDCA בפרקטיקה הקלינית, פותחה בשנים האחרונות סדרה של חומרים טיפוליים חד...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכת על ידי הקרן למדעי הטבע של מחוז סצ'ואן (2024NSFSC0697), פרויקט קרן החדשנות המשותפת של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (LH202402015).

תרומת המחבר:
קייטונג וו: מתודולוגיה, ניתוח פורמלי, אוצר נתונים, כתיבת הטיוטה המקורית וכתיבה ועריכה. יאנג שיאו: המשגה, חקירה, הדמיה ואימות. פוהאן אוהד: אימות ועריכה. ג'אנגלי ליי, שיאן-הואה ג'ואו ושיאנלי מנג: עריכה ותרגום. יונג זנג, הו יה ופנג שן: המשגה, מתודולוגיה, תיקוף, חקירה, סקירה ותיקון של הטיוטה ופיקוח.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ALPנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהA059-2-2
ALTנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהC009-2-1
ASTנאנג'ינג ג'יאנצ'נג ביו-הנדסהC010-2-1
BCAבוסטר ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מAR0146
CDCAצ'נגדו מדשנג טכנולוגיה ושות', בע"מ474-25-9
ערכת ספירת תאים-8Boster ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מAR1160-500
ציטוכרום P450 7A1 נוגדןAbmart שנחאי ושות', בע"מ
TD2612S DAPIBeyotime BiotechnologyC1005
DMSOBoster Biological Technology Co., LtdPYG0040
עיזים נגד ארנב IgG (H& L)צ'נגדו Zen-Bioscience Co., Ltd.
עז אנטי ארנב IgG AF488Abmart שנחאי ושות', בע"מ
M21012M GPSצ'נגדו Medesheng טכנולוגיה ושות', בע"מRP210717
GSHנאנג'ינג ג'יאנצ'נג מכון ביו-הנדסהA006-2-1
תאי HepG2Procell מדעי החיים & טכנולוגיה ושות', בע"מCL-0103
HRP עז נגד ארנב IgGWuhan  אבקלונל  ביוטכנולוגיה ושות' בע"מ AS014
IL-1&BETA;Elabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H0149c
IL-6Elabscience Biotechnology Co., LtdE-EL-H6156
MDAנאנג'ינג Jiancheng מכון ביו-הנדסהA003-1-2
MEM בסיס מדיוםProcell מדעי החיים & טכנולוגיה ושות', בע"מPM150410
PBSBoster ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מPYG0021
מאגר העברה מהירה (20 ופעמים;)NCM ביוטקWB4600
RIPAבאסטר ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מBL651A
ROSBeyotime BiotechnologyS0033S
SHP2 ארנבבוואהאן  אבקלונל  ביוטכנולוגיה ושות' בע"מ A12486
SLC10A1 נוגדןAbmart שנחאי ושות', בע"מ
SODנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהA001-3-1
TBAנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהE003-2-1
T-CHOנאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסהA111-1-1
TGנאנג'ינג ג'יאנצ'נגA110-1-1
TGR5 נוגדן פוליקלונליחברת ImmunoWay BiotechnologyYT4636
TNF-αElabscience ביוטכנולוגיה ושות', בע"מE-EL-H0109c
תמיסת טריפסין (0.25%)Yeasen ביוטכנולוגיה (שנחאי) ושות', בע"מ40126ES60
UDCAצ'נגדו Lemetian טכנולוגיה רפואית ושות', בע"מDSTDX007601
&&בטא;-אקטין ארנב mAbWuhan  אבקלונל  ביוטכנולוגיה ושות' בע"מ AC026
511202PU276166S

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, T., Hasan, M. N., Gu, L. Bile acids regulation of cellular stress responses in liver physiology and diseases. eGastroenterology. 2 (2), e100074(2024).
  2. Lin, S., et al. A systemic combined nontargeted and targeted LC-MS based metabolomic strategy of plasma and liver on pathology exploration of alpha-naphthylisothiocyanate induced cholestatic liver injury in mice. J Pharma Biomed Anal. 171, 180-192 (2019).
  3. Pouwels, S., et al. Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD): a review of pathophysiology, clinical management and effects of weight loss. BMC Endocr Disord. 22 (1), 63(2022).
  4. Wagner, M., Fickert, P. Drug Therapies for Chronic Cholestatic Liver Diseases. Ann Rev Pharmacol Toxicol. 60, 503-527 (2020).
  5. Nasr, P., Ignatova, S., Kechagias, S., Ekstedt, M. Natural history of nonalcoholic fatty liver disease: A prospective follow-up study with serial biopsies. Hepatol Commun. 2 (2), 199-210 (2017).
  6. Halilbasic, E., Claudel, T., Trauner, M. Bile acid transporters and regulatory nuclear receptors in the liver and beyond. J Hepatol. 58 (1), 155-168 (2013).
  7. Katafuchi, T., Makishima, M. Molecular Basis of Bile Acid-FXR-FGF15/19 Signaling Axis. Int J Mol Sci. 23 (11), 6046(2022).
  8. Ding, L., Yang, L., Wang, Z., Huang, W. Bile acid nuclear receptor FXR and digestive system diseases. Acta Pharma Sinica. B. 5 (2), 135-144 (2015).
  9. Wei, S., et al. The contribution of small heterodimer partner to the occurrence and progression of cholestatic liver injury. J Gastroenterol Hepatol. 39 (6), 1134-1144 (2024).
  10. Bhatt, A., Rawal, R. S., Dhar, U. Ecological features of a critically rare medicinal plant, Swertia chirayita in Himalaya. Plant Species Biol. 21, 49-52 (2006).
  11. Swati, K., Bhatt, V., Sendri, N., Bhatt, P., Bhandari, P. Swertia chirayita: A comprehensive review on traditional uses, phytochemistry, quality assessment and pharmacology. J Ethnopharmacol. 300, 115714(2023).
  12. Yong, Q., et al. Gentiopicroside improves NASH and liver fibrosis by suppressing TLR4 and NLRP3 signaling pathways. Biomed Pharmacother. 177, 116952(2024).
  13. Shi, M., Tang, J., Zhang, T., Han, H. Swertiamarin, an active iridoid glycoside from Swertia pseudochinensis H. Hara, protects against alpha-naphthylisothiocyanate-induced cholestasis by activating the farnesoid X receptor and bile acid excretion pathway. J Ethnopharmacol. 291, 115164(2022).
  14. He, X., et al. Swertia bimaculata moderated liver damage in mice by regulating intestine microbiota. Ecotoxicol Environ Saf. 263, 115223(2023).
  15. Lad, H., Bhatnagar, D. Amelioration of oxidative and inflammatory changes by Swertia chirayita leaves in experimental arthritis. Inflammopharmacology. 24 (6), 363-375 (2016).
  16. Chen, Y., et al. In vitro and in vivo antioxidant effects of the ethanolic extract of Swertia chirayita. J Ethnopharmacol. 136 (2), 309-315 (2011).
  17. Qin, J., et al. Determination of the pharmacodynamic substances and mechanism of Shiwuwei Saierdou Pills against cholestatic hepatitis through chemical profile identification and network pharmacology analysis. Arabian J Chem. 17 (2), 105504(2024).
  18. Guo, S., et al. Swertia L.: A comprehensive review of its genetic relationship, chemical compositions, pharmacological effects, toxicities, and applications. Phytother Res. 37 (6), 2605-2643 (2023).
  19. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  20. Xiao, H., et al. Gentiopicroside targets PAQR3 to activate the PI3K/AKT signaling pathway and ameliorate disordered glucose and lipid metabolism. Acta Pharma Sinica. B. 12 (6), 2887-2904 (2022).
  21. Wang, L., et al. Gentiopicroside improves high-fat diet-induced NAFLD in association with modulation of host serum metabolome and gut microbiome in mice. Front Microbiol. 14, 1145430(2023).
  22. Chen, Q., et al. Gentiopicroside inhibits the progression of gastric cancer through modulating EGFR/PI3K/AKT signaling pathway. Euro J Med Res. 29 (1), 47(2024).
  23. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  24. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem Int J Exp Cell Physiol Biochem Pharmacol. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  25. Jin, M., et al. Gentiopicroside Ameliorates Oxidative Stress and Lipid Accumulation through Nuclear Factor Erythroid 2-Related Factor 2 Activation. Oxid Med Cell Longev. 2020, 2940746(2020).
  26. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  27. Choi, J. M., et al. HepG2 cells as an in vitro model for evaluation of cytochrome P450 induction by xenobiotics. Arch Pharma Res. 38 (5), 691-704 (2015).
  28. Labib, P. L., Goodchild, G., Pereira, S. P. Molecular Pathogenesis of Cholangiocarcinoma. BMC Cancer. 19 (1), 185(2019).
  29. Bai, J., et al. The enhanced mitochondrial dysfunction by cantleyoside confines inflammatory response and promotes apoptosis of human HFLS-RA cell line via AMPK/Sirt 1/NF-κB pathway activation. Biomed Pharmacother. 149, 112847(2022).
  30. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 103, 154240(2022).
  31. Liu, Y. H., Guo, Y., Xu, H., Feng, H., Chen, D. Y. Impact of Non-Alcoholic Simple Fatty Liver Disease on Antituberculosis Drug-Induced Liver Injury. Infect Drug Resist. 14, 3667-3671 (2021).
  32. Fu, Q., Jiang, Z. Z., Zhang, L. Y. Impairment of triptolide on liver mitochondria in isolated liver mitochondria and HL7702 cell line. Chinese J Integrat Med. 19 (9), 683-688 (2013).
  33. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. Eur J Pharmacol. 912, 174617(2021).
  34. Wang, X., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA 210/ISCU1/2(COX10) signaling pathway. J Ethnopharmacol. 241, 111801(2019).
  35. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 109, 154568(2023).
  36. Yu, H., Wangensteen, K., Deng, T., Li, Y., Luo, W. MRGPRX4 in Cholestatic Pruritus. Semin Liver Dis. 41 (3), 358-367 (2021).
  37. Rini, S. S., Wibawa, I. D. N. Evaluation and Management of Chronic Cholestatic Liver Diseases. Middle East J Digest Dis. 15 (3), 148-155 (2023).
  38. Srivastava, A. Progressive familial intrahepatic cholestasis. J Clin Exp Hepatol. 4 (1), 25-36 (2014).
  39. Samant, H., et al. Cholestatic liver diseases: An era of emerging therapies. World J Clin Cases. 7 (13), 1571-1581 (2019).
  40. Younossi, Z. M., et al. Obeticholic acid for the treatment of non-alcoholic steatohepatitis: interim analysis from a multicentre, randomised, placebo-controlled phase 3 trial. Lancet. 394 (10215), 2184-2196 (2019).
  41. Trauner, M., et al. Safety and Sustained Efficacy of the Farnesoid X Receptor (FXR) Agonist Cilofexor Over a 96-Week Open-label Extension in Patients With PSC. Clin Gastroenterol Hepatol. 21 (6), 1552-1560.e2 (2023).
  42. Sanyal, A. J., et al. Potent suppression of hydrophobic bile acids by aldafermin, an FGF19 analogue, across metabolic and cholestatic liver diseases. JHEP Rep Innovat Hepatol. 3 (3), 100255(2021).
  43. Iracheta-Vellve, A., et al. FXR and TGR5 Agonists Ameliorate Liver Injury, Steatosis, and Inflammation After Binge or Prolonged Alcohol Feeding in Mice. Hepatol Commun. 2 (11), 1379-1391 (2018).
  44. Han, H., Xu, L., Xiong, K., Zhang, T., Wang, Z. Exploration of Hepatoprotective Effect of Gentiopicroside on Alpha-Naphthylisothiocyanate-Induced Cholestatic Liver Injury in Rats by Comprehensive Proteomic and Metabolomic Signatures. Cell Physiol Biochem. 49 (4), 1304-1319 (2018).
  45. Lai, Q., et al. Mechanisms for Bile Acids CDCA- and DCA-Stimulated Hepatic Spexin Expression. Cells. 11 (14), 2159(2022).
  46. Li, X., et al. UDCA and CDCA alleviate 17α-ethinylestradiol-induced cholestasis through PKA-AMPK pathways in rats. Toxicol Appl Pharmacol. 311, 12-25 (2016).
  47. Sonne, D. P., et al. Postprandial Plasma Concentrations of Individual Bile Acids and FGF-19 in Patients With Type 2 Diabetes. J Clin Endocrinol Metabol. 101 (8), 3002-3009 (2016).
  48. Tang, X., et al. Target profiling analyses of bile acids in the evaluation of hepatoprotective effect of gentiopicroside on ANIT-induced cholestatic liver injury in mice. J Ethnopharmacol. 194, 63-71 (2016).
  49. Hao, J., et al. Gentiopicroside Ameliorated Ductular Reaction and Inflammatory Response in DDC-induced Murine Cholangiopathies Model. Curr Mol Pharmacol. , (2023).
  50. Han, S., et al. Probiotic Pediococcus pentosaceus Li05 Improves Cholestasis through the FXR-SHP and FXR-FGF15 Pathways. Nutrients. 15 (23), 4864(2023).
  51. Yan, M., et al. Diosgenin alleviates nonalcoholic steatohepatitis through affecting liver-gut circulation. Pharmacol Res. 187, 106621(2023).
  52. Huang, C., et al. Gentiopicroside improves non-alcoholic steatohepatitis by activating PPARα and suppressing HIF1. Front Pharmacol. 15, 1335814(2024).
  53. Xie, X., et al. Therapeutic effects of gentiopicroside on adjuvant-induced arthritis by inhibiting inflammation and oxidative stress in rats. Int Immunopharmacol. 76, 105840(2019).
  54. Peiseler, M., et al. Immune mechanisms linking metabolic injury to inflammation and fibrosis in fatty liver disease - novel insights into cellular communication circuits. J Hepatol. 77 (4), 1136-1160 (2022).
  55. Ren, G., et al. Synthesis and Biological Evaluation of Gentiopicroside Derivatives as Novel Cyclooxygenase-2 Inhibitors with Anti-Inflammatory Activity. Drug Des Devel Ther. 17, 919-935 (2023).
  56. Zhang, Y., Pan, S., Yi, S., Sun, J., Wang, H. Gentiopicroside ameliorates CCl4-induced liver injury in mice by regulating the PPAR-γ/Nrf2 and NF-κB/IκB signaling pathways. J Int Med Res. 51 (10), 3000605231204501(2023).
  57. Wu, L., et al. Lactobacillus acidophilus ameliorates cholestatic liver injury through inhibiting bile acid synthesis and promoting bile acid excretion. Gut microbes. 16 (1), 2390176(2024).
  58. Zhang, L., et al. Isoastragaloside I attenuates cholestatic liver diseases by ameliorating liver injury, regulating bile acid metabolism and restoring intestinal barrier. J Ethnopharmacol. 335, 118649(2024).
  59. Ma, X., et al. Paeoniflorin inhibited GSDMD to alleviate ANIT-induced cholestasis via pyroptosis signaling pathway. Phytomedicine. 134, 156021(2024).
  60. Zhang, Z., et al. Biliary NIK promotes ductular reaction and liver injury and fibrosis in mice. Nat Commun. 13 (1), 5111(2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

GentiopicrosideCDCAWestern Blot
הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים