מחקר זה הראה כי ג'נטיופיקרוזיד יכול לטפל בפגיעה בכבד כולסטטי על ידי שליטה בייצור ובחילוף החומרים של חומצות מרה ושומנים ומניעת מתח חמצוני ותגובות דלקתיות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר מחקר
מחקר זה הראה כי ג'נטיופיקרוזיד יכול לטפל בפגיעה בכבד כולסטטי על ידי שליטה בייצור ובחילוף החומרים של חומצות מרה ושומנים ומניעת מתח חמצוני ותגובות דלקתיות.
המרכיב הפעיל העיקרי של Swertia chirayita, ג'נטיופיקרוזיד (GPS), הוכח כמגן על הכבד במקרים של כולסטזיס. על מנת להבהיר את מנגנון ההגנה של GPS מפני פגיעה בכבד כולסטטי, תאי HepG2 טופלו בחומצה chenodeoxycholic (CDCA) כדי לדמות את סביבת הכולסטזיס במבחנה, ונעשה שימוש בשיטת CCK-8 כדי לקבוע את ההשפעה המגנה של GPS על תאי HepG2. באמצעות ערכה ביולוגית זוהו תכולת TBA, T-CHO, TG, ALP, ALT, AST, GSH, IL-1β, IL-6, TNF-α, SOD ו-MDA. נעשה שימוש במיקרוסקופ לייזר קונפוקלי כדי לאשר את רמת ה-ROS. ביטויי תאי HepG2 של SHP-2, Tgr5, CYP7A1 ו-NTCP הוערכו באמצעות אימונופלואורסצנציה וניתוח כתמים מערביים. לאחר מכן נעשה שימוש בתוכנת Autodock כדי לאמת את העגינה המולקולרית של החומרים הפעילים העיקריים שלה. הממצאים הראו כי GPS מנע באופן משמעותי את הנזק שגרם ה-CDCA לתאי HepG2. אפקט מגן זה עשוי להיות מושג על ידי שליטה בייצור ובחילוף החומרים של חומצות מרה ושומנים בתוך התא ומניעת עקה חמצונית ותגובות דלקתיות.
האתר המטבולי של מערכת העיכול של הגוף הוא הכבד. הפרשת מרה היא מנגנון מפתח בתהליך קטבוליזם השומן של מערכת הכבד. המרכיבים העיקריים של המרה, חומצות מרה, משתחררים על ידי תאי הכבד והם חיוניים לשמירה על שיווי המשקל של חילוף החומרים של השומן. הן עבור אנשים בריאים והן עבור חולים, התהליכים הפיזיולוגיים והפתולוגיים של הכבד תלויים באיזון חומצות המרה החופשיות והמצומדות בכבד. אם שיווי משקל זה מופר זרימת חומצת המרה לא תתפקד כרגיל, מה שעלול להוביל לכולסטזיס תוך כבדי ולנזק לכבד לאחר מכן1. על פי מחקר שכבר נערך, פגיעה בכבד כולסטטי (CLI) היא מצב הקשור להפרעות מטבוליות, חוסר איזון במיקרוביוטה במעי ונמק תאי כבד2
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תרבית תאים וטיפול
תאי HepG2 ומדיית MEM נרכשו מספק מסחרי. תאי HepG2 גודלו במדיה MEM בתוספת 10% FBS, 1% 100 U/mL פניצילין ו-100 U/mL סטרפטומיצין, באטמוספירה של 37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 . לאחר הידבקות התאים, אמצעי התרבות השתנו. התאים גודלו ביחס של 1:3 לאחר 2-3 ימים, והם שימשו בניסוי לאחר שתרבית התאים הגיעה למפגש של 80%.
בדיקת כדאיות תאים
ביום הראשון, תאים נזרעו ב-2 x 104 תאי HepG2 (2 x 105 תאים/מ"ל, 100 מיקרוליטר לבאר) בצלחת של 96 בארות בשישה חזרות29. ביום השני, לאחר 24 שעות של חיסון, התאים טופלו ב-CDCA בריכוזים שו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ריכוז ה-CDCA נקבע ל-0 מיקרומטר, 20 מיקרומטר, 40 מיקרומטר, 60 מיקרומטר, 80 מיקרומטר ו-100 מיקרומטר שיפוע ריכוז לניסויים. כאשר ריכוז ה-CDCA היה 60 מיקרומטר, פעילות התא הייתה שונה באופן משמעותי מזו של קבוצת הביקורת, ולבסוף 60 מיקרומטר שימש כריכוז של CDCA (איור 1A). התוצאות הראו שאחרי הדגירה במשך 24 שעות אחרי מתן התרופה, לא היה הבדל משמעותי בפעילות התאים בין כל קבוצה לקבוצת הביקורת (איור 1B), מה שמצביע על כך של-GPS לא הייתה השפעה מעכבת על פעילות התא בריכוז של 800 מי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
CLI היא מחלת כבד הנגרמת על ידי חסימה של היווצרות, הפרשה או הפרשה של מרה. היא מתבטאת קלינית כגירוד, אוסטאופורוזיס, ואף מתפתחת לפיברוזיס בכבד, שחמת ומחלות אחרות, המסכנות את החיים והבריאות באופן חמור 36,37,38. UDCA מוכרת כתרופה הנפוצה ביותר בטיפול ב-CLI39. עם זאת, בשל המספר הגדול של חולים עם תגובה לקויה ל-UDCA בפרקטיקה הקלינית, פותחה בשנים האחרונות סדרה של חומרים טיפוליים חד.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
עבודה זו נתמכת על ידי הקרן למדעי הטבע של מחוז סצ'ואן (2024NSFSC0697), פרויקט קרן החדשנות המשותפת של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (LH202402015).
תרומת המחבר:
קייטונג וו: מתודולוגיה, ניתוח פורמלי, אוצר נתונים, כתיבת הטיוטה המקורית וכתיבה ועריכה. יאנג שיאו: המשגה, חקירה, הדמיה ואימות. פוהאן אוהד: אימות ועריכה. ג'אנגלי ליי, שיאן-הואה ג'ואו ושיאנלי מנג: עריכה ותרגום. יונג זנג, הו יה ופנג שן: המשגה, מתודולוגיה, תיקוף, חקירה, סקירה ותיקון של הטיוטה ופיקוח.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| ALP | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה | A059-2-2 | |
| ALT | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה | C009-2-1 | |
| AST | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג ביו-הנדסה | C010-2-1 | |
| BCA | בוסטר ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מ | AR0146 | |
| CDCA | צ'נגדו מדשנג טכנולוגיה ושות', בע"מ | 474-25-9 | |
| ערכת ספירת תאים-8 | Boster ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מ | AR1160-500 | |
| ציטוכרום P450 7A1 נוגדן | Abmart שנחאי ושות', בע"מ | ||
| TD2612S DAPI | Beyotime Biotechnology | C1005 | |
| DMSO | Boster Biological Technology Co., Ltd | PYG0040 | |
| עיזים נגד ארנב IgG (H& L) | צ'נגדו Zen-Bioscience Co., Ltd. | ||
| עז אנטי ארנב IgG AF488 | Abmart שנחאי ושות', בע"מ | ||
| M21012M GPS | צ'נגדו Medesheng טכנולוגיה ושות', בע"מ | RP210717 | |
| GSH | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג מכון ביו-הנדסה | A006-2-1 | |
| תאי HepG2 | Procell מדעי החיים & טכנולוגיה ושות', בע"מ | CL-0103 | |
| HRP עז נגד ארנב IgG | Wuhan אבקלונל ביוטכנולוגיה ושות' בע"מ | AS014 | |
| IL-1Β | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-EL-H0149c | |
| IL-6 | Elabscience Biotechnology Co., Ltd | E-EL-H6156 | |
| MDA | נאנג'ינג Jiancheng מכון ביו-הנדסה | A003-1-2 | |
| MEM בסיס מדיום | Procell מדעי החיים & טכנולוגיה ושות', בע"מ | PM150410 | |
| PBS | Boster ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מ | PYG0021 | |
| מאגר העברה מהירה (20 ופעמים;) | NCM ביוטק | WB4600 | |
| RIPA | באסטר ביולוגי טכנולוגיה ושות', בע"מ | BL651A | |
| ROS | Beyotime Biotechnology | S0033S | |
| SHP2 ארנב | בוואהאן אבקלונל ביוטכנולוגיה ושות' בע"מ | A12486 | |
| SLC10A1 נוגדן | Abmart שנחאי ושות', בע"מ | ||
| SOD | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה | A001-3-1 | |
| TBA | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה | E003-2-1 | |
| T-CHO | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג המכון לביו-הנדסה | A111-1-1 | |
| TG | נאנג'ינג ג'יאנצ'נג | A110-1-1 | |
| TGR5 נוגדן פוליקלונלי | חברת ImmunoWay Biotechnology | YT4636 | |
| TNF-α | Elabscience ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ | E-EL-H0109c | |
| תמיסת טריפסין (0.25%) | Yeasen ביוטכנולוגיה (שנחאי) ושות', בע"מ | 40126ES60 | |
| UDCA | צ'נגדו Lemetian טכנולוגיה רפואית ושות', בע"מ | DSTDX007601 | |
| &&בטא;-אקטין ארנב mAb | Wuhan אבקלונל ביוטכנולוגיה ושות' בע"מ | AC026 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה פורסם
הסרטון יגיע בקרוב