Method Article

פרוטוקול מבוסס פלואורסצנציה לסינון ראשוני של מעכבי סינתזת חלבונים ממקורות טבעיים

DOI:

10.3791/68481

⸱

January 27th, 2026

 ,  , 
1Louisiana State University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מציג מתודולוגיית סקר פלואורומטרית המותאמת לזיהוי מעכבי מוצר טבעי/מולקולות קטנות של סינתזת חלבונים. הפרקטיות שלו הופכת אותה למתאימה הן להוראה לתואר ראשון בטכניקות גילוי תרופות והן ליישום בקמפיינים של כימיה רפואית.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מוצרים טבעיים מהווים מקור עשיר לתרכובות טיפוליות עם יישומים במגוון מחלות, במיוחד סרטן. באמצעות שימוש בביומולקולות אלו כתבניות מבניות בגילוי תרופות, החוקרים השיגו הן לוחות זמן פיתוח מהירים יותר והן יעילות ביולוגית משופרת בהשוואה לתרכובות סינתטיות מלאות. מסלול סינתזת החלבונים הפך למטרה משכנעת למוצרים טבעיים, במיוחד לאור מעורבותו בסרטן שקשה לטיפול. מעכב סינתזת החלבון החזק ציקלוהקסמיד, שמקורו ב-Streptomyces griseus, מדגים את הפוטנציאל של תרכובות טבעיות בתחום זה. כאשר נגזרות טבעיות אלו מפותחות למולקולות דמויות תרופה, אישור הפעילות המעכבת של סינתזת החלבונים שלהן נותר שלב אימות קריטי. המטרה העיקרית היא לספק פרוטוקול ידידותי לסטודנטים לתואר ראשון להערכה מהירה של פעילות עיכוב תרכובות. הפרוטוקול עושה שימוש במצע פלואורסצנטי ובטכניקות מיקרוסקופיה פלואורסצנטיות מתקדמות לזיהוי ומדידה שיטתית של יכולות העיכוב של מוצרים טבעיים אלו. המחקר בחן תרכובות שמקורן בשני מיני צמחים: Pinus sylvestris ו-Psoralea corylifolia. באמצעות ציקלוהקסמיד כמעכב ייחוס, שני המוצרים הטבעיים הראו רמות שונות של עיכוב סינתזת חלבונים.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סינתזת חלבונים כוללת תהליכים מפוקחים מאוד: שעתוק ותרגום. במהלך השעתוק, רצפי DNA של גנים מועתקים ומייצרים RNA שליח (mRNA). האנזים RNA פולימראז פועל להפריד את סליל ה-DNA הכפול ומשתמש בגדיל אחד כמדריך לבניית מולקולת mRNA תואמת. כאשר ה-mRNA נוצר במלואו, הוא עובר מהגרעין אל הציטופלזמה לתרגום. התרגום מתרחש בריבוזום, שבו mRNA משמש כתבנית להרכבת חומצות אמינו לשרשרת פוליפפטידים. שרשרת פוליפפטידית זו, ביציאה ממנהרת היציאה של הריבוזום, מקופלת לחלבון פונקציונלי. שעתוק מוסדר בעיקר על ידי גורמי שעתוק, שינויים בכרומטין ו-RNA רגולטורי, בעוד שהתרגום מוסדר על ידי גורמי התחלה, מסלולי איתות ומנגנוני יציבות RNA. מערכות רגולציה אלו מאפשרות לתאים לשמור על תפקודי התאים ולהגיב ללחץ או נזק ביעילות1.

רוב מוחלט של סוגי הסרטן בבני אדם—כ-85%—מתבטאים כגידולים מוצקים2. למרות שגידולים אלו יכולים להשתנות באופן דרמטי בתכונות ובהתנהגות הספציפיות שלהם, הם נוטים לחלוק תכונות ודפוסים פיזיולוגיים משותפים, כמו סינתזת חלבונים מופרזת ללא קשר לאטיולוגיה או למיקום אנטומי3. תאי הסרטן מפריעים לסינתזת חלבונים על ידי השתלטות על מנגנון תרגומי כדי לתמוך בדרישות האנרגיה הגבוהות שלהם ובצמיחה בלתי מבוקרת. תכנות מחדש זה הוא תוצאה של חוסר ויסות כמעט בכל מסלולי האיתות האונקוגניים העיקריים, המקדם הישרדות תאים, התרבות וגרורות, תוך דיכוי מסלולי מוות תאים4. בתאי גידול, המנגנון לייצור ריבוזומים נכנס למצב של דחף יתר, מה שמאפשר ייצור חלבון מוגבר וחלוקה מהירה של תאים. מכיוון שסינתזת החלבון המוגברת הזו חיונית להישרדות סרטן, טיפולים שמכוונים וחוסמים תהליך זה מראים פוטנציאל לטיפולים5. לכן, מחקר המתמקד בגורמי תרגום ספציפיים לסרטן, בהרכבים ריבוזומליים ייחודיים או במסלולי איתות משתנים שמווסתים את סינתזת החלבונים עשוי להניב מעכבים ממוקדים יותר עם חלונות טיפולים משופרים.

מכיוון שמוצרים טבעיים (NPs) ידועים במגוון הרחב של פעילות ביולוגית, פיתוח מעכבי סינתזת חלבונים סלקטיביים לטיפול בסרטן באמצעות הפיגומים שלהם הוא גישה מבטיחה 6,7. NPs יכולים למקד רכיבים שונים במנגנון סינתזת החלבונים, החל מקישור ריבוזומים ועד הפרעה לגורמי התחלה או תהליכי הארכה, מה שהופך אותם לנקודות התחלה יקרות ערך בפיתוח תרופות למעכבי סינתזת חלבונים בגידולים מוצקים6. היכולת לסרוק במהירות תרכובות לפעילות רצויה משמשת נקודת כניסה קריטית לפלטפורמות גילוי תרופות השואפות לזהות ביעילות פגיעות NP. בדרך כלל, סקר בתפוקה גבוהה של תרכובות משתמש בבדיקות פלואורסצנציה לצמצום מהיר של מולקולות מועמדות עופרת8.

מדענים ברחבי העולם מסתמכים על טכניקות מבוססות פלואורסצנציה ככלים חיוניים לניתוח מערכות ביולוגיות. גישות אלו משמשות באופן נרחב לחקר תהליכים תאיים, ומאפשרות לחוקרים לעקוב אחר אינטראקציות ביומולקולריותבזמן אמת. כאשר משלבים אותן עם תגובות כימיה ביואורתוגונליות של קליק, שיטות אלו יכולות לאפשר הדמיה מדויקת של סינתזת חלבונים10. בדיקת סינתזת חלבון פלואורסצנטי שהוצגה היא טכניקה לא רדיואקטיבית להערכת סינתזת חלבונים, המשתמשת ב-O-פרופרגיל-פורומיצין (OPP), אנלוג פורומיצין המכיל אלקין חדיר לתאית. לאחר טיפול תאי, OPP משתלב בקצה C של שרשראות פוליפפטידיות מוארכות, וגורם לסיום התרגום. חלבונים מקוצרים מסומנים באלקין מזוהים באמצעות כימיה של קליק מזורזת בנחושת בשילוב עם 5 FAM-אזיד.

מבחן פלואורומטרי זה הוא כלי מחקר יקר ערך ושיטה נגישה בביולוגיה כימית להכשרת סטודנטים לתואר ראשון. על ידי מתן פרוטוקול נגיש ויעיל עם עיבוד נתונים מינימלי, הוא מעניק לסטודנטים ניסיון מעשי בטכניקות גילוי תרופות מודרניות ומאיץ את תהליך גילוי התרופות. ככל שהביקוש למעכבי סינתזת חלבונים חדשים גובר, גישה זו מציידת סטודנטים לתואר ראשון הזדמנויות מחקר משמעותיות תוך תרומה להתקדמות בתרופות בסרטן.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנת תגובות מהערכה

הערה: ערבב כראוי, סובב למטה, ושמור את כל החומרים על הקרח עד השימוש.

  1. ארגן וקבל ערכת עיכוב סינתזת חלבונים, בופר PBS, מדיום תרבית תאים, לוחות שטופלו בתרביות תא, צינורות צנטריפוגה פוליפרופילן סטריליים קונית בקוטר 15 מ"ל, צינורות צנטריפוגה של 2 מ"ל, פיפטות p10, p20, p200 ו-p1000, וקצוות מתאימים.
  2. הכינו את בופר הכביסה.
    1. הפשיר את בופר השטיפה של 10x בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס על ידי הבקבוקון ביד. השתמש בחום הגוף שבידיים כדי להפשיר ולבדוק לעיתים קרובות אם ההפשרה הושלמה.
    2. מדלל את מאגר השטיפה של 10x ביחס 1:10 במים דה-יוניים בצינור צנטריפוגה. ערבב על ידי היפוך או תלייה מחדש על ידי פיפטינג למעלה ולמטה. שמרו על הקרח עד השימוש.
  3. הפשרה של תמיסת קיבוע בטמפרטורת החדר. שמרו על הקרח עד השימוש.
  4. הכינו את בופר הפרמיאביליזציה.
    1. הפשיר את בופר החדירות של פי 10 בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס על ידי הבקבוקון ביד. השתמש בחום הגוף שבידיים כדי להפשיר ולבדוק לעיתים קרובות אם ההפשרה הושלמה.
    2. מדלל את ה-10x 1:10 במים דה-יוניים בצינור צנטריפוגה. מערבבים את הרכיבים על ידי היפוך או תלייה מחדש על ידי פיפטינג למעלה ולמטה. שמרו על הקרח עד השימוש.
  5. הפשרת תווית חלבון פי 400, אזיד פלואורסצנטי פי 100, ציקלוקסימיד פי 100, צביעת DNA, וסוכן מפזר פי 20 בטמפרטורת החדר. שמור על הקרח בסביבה חשוכה בזמן השימוש. כסה את הצבעים בנייר אלומיניום או שמרו אותם במקרר של 2 מעלות צלזיוס כשאינם בשימוש.

2. בקרות תיוג ותאים ניסיוניים

הערה: פרוטוקול זה פותח באמצעות תאי MDA-MB-231 של סרטן השד האפיתל היציב. ניתן להשתמש בכל קווי תאים דבקים. כל השלבים המפורטים להלן משתמשים בלוח של 96 בארות, וכל הנפחים והריכוזים מחושבים עבור שתי תרכובות בדיקה ושני בקרות בנפח עבודה של 100 מיקרוליטר.

  1. תרבית תאים יונקים דבקים
    הערה: יש להעביר תאים לפני ההגעה ל-80-90% מפגש כדי לשמור על גדילה בריאה ואקספוננציאלית ולמנוע עיכוב או התמיינות במגע.
  2. הפשיר בקבוקון של תאים מוקפאים לטמפרטורת החדר, ואז מדלל עם מדיום מתאים.
  3. צנטריפוגה את המתלים כדי לגלגל את התאים ולשאוף את הסופרנטנט. החזירו את הכדור למדיום טרי והעבירו לבקבוק חדש בצפיפות התאים המתאימה.
  4. לאחר שהתאים מתאחדים ב-80%, הסר את המדיום ושאוף מדיום צמיחה ישן מהבקבוק. לאחר מכן, שטוף תאים עם PBS סטרילי כדי להסיר סרום שנותר שמטריד את הטריפסין. הוסף תמיסת טריפסין-EDTA לכיסוי שכבת התא ודגר במשך 3-5 דקות או עד שהתאים מתנתקים ב-37 מעלות צלזיוס.
  5. הוסף חומר מלא המכיל סרום כדי לנטרל את הטריפסין, ואז העבר את תליית התא לצינור, ערבב בעדינות וסופר את התאים.
  6. תאי זרעים בפלטות סינון מדללים תאים ביחס הפיצול המתאים (למשל, 1:3 או 1:5) לתוך בקבוק חדש עם מדיום חדש ומדגרים (בדרך כלל 37 מעלות צלזיוס, 5% CO2) כדי להשיג את ריכוז התאים הרצוי.
    הערה: בניסוי המתואר כאן, קו התאים צופה ב-2 × 104 לכל באר (לוח 96 בארים) ודגרה ב-37 מעלות צלזיוס למשך 12 שעות.

3. הוספת תרכובות

  1. הכינו את המיקס הראשי A.
    1. סמנו צינור צנטריפוגה כ"A". פיפטה 598.5 מיקרוליטר של מדיום תרבית ו-1.5 מיקרוליטר של תווית חלבון ל-"A". החזירו את התערובת לתלות כדי להבטיח הומוגניות על ידי פיפטינג למעלה ולמטה.
  2. הכינו את המיקס הראשי B.
    1. תייג צינור צנטריפוגה כ"B". פיפט 1.5 מיקרוליטר של תווית חלבון, 6.6 מיקרוליטר ציקלוהקסמיד, ו-591.9 מיקרוליטר של תווך תרבית ל"B". החזירו את התערובת לתלות כדי להבטיח הומוגניות על ידי פיפטינג למעלה ולמטה.
  3. לטפל בתאים עם תרכובות רצויות (איור 1), חיובי ושלילי.
    1. הסר תאים מהאינקובטור והסר את מדיום הגידול באמצעות שאיבה. הטה את הפלטת ושאף בצד הבאר במקום במרכז כדי למנוע הפרעה לתאים.
    2. פיפטה של 1 מיקרולטר של תרכובת בדיקה לבאר ו-1 מיקרוליטר של רכב תרכובת בדיקה (0.1% v/v DMSO) לבאר. למחקרים כפולים, הוסף כל דגימה לבאר שנייה וחזור על התהליך הזה. הוסף 99 מיקרו ליטר של מיקס מאסטר A לבארות אלו. הפיפטה בעדינות בזווית לתוך צד הבאר כדי למנוע הפרעה קינטית לתאים.
      הערה: הריכוז המרבי של DMSO לסקר תרכובות תלוי בסוג התא ובבדיקה, אך ההנחיות הכלליות הן: 0.1-0.5% DMSO - בדרך כלל בטוח לרוב הבדיקות המבוססות על תאים עם רעילות מינימלית, ו-1% DMSO - המקסימום והמקובל לסוגים רבים של תאים בבדיקות קצרות טווח.
    3. פיפטה של 100 מיקרו-ליטר של מיקס מאסטר B לשתי בארות. פיפט בזווית לצד הבאר כדי למנוע הפרעה של התאים.
    4. טפחו בעדינות על הפלטה כדי לשלב את הרכיבים הרצויים עם התאים. דגרו תאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 0.5-2 שעות.

4. סיום הניסוי ושטיפת התאים

  1. להסיר את מדיום התרבות דרך שאיפה. הטה את הפלטת ושאף בצד הבאר במקום במרכז כדי למנוע הפרעה לתאים.
  2. הוסיפו 100 מיקרוליטר של בופר PBS לכל באר וצנטריפוגות את הפלטה ב-900 × גרם למשך 5 דקות.
  3. הסר את בופר ה-PBS באמצעות שאיבה.

5. קיבוע וחדירות

  1. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסה קיבועית לכל באר. דגרו את התאים בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות בסביבה חשוכה.
  2. הסר את הפתרון הקיבעוני באמצעות שאיבה. הטה את הלוח ושאף בצד הבאר במקום במרכז.
  3. שטוף תאים עם 100 מיקרוליטר של בופר שטיפה והסרת בופר באמצעות שאיבה. חזור על השלב הזה פעמיים.
  4. הוסיפו 100 מיקרוליטר של בופר חדירות לכל באר ודגרו בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.
  5. הסר את בופר החדירות באמצעות שאיבה. הטה את הלוח ושאף בצד הבאר במקום במרכז.

6. תגובת חלבון וצביעה

  1. הכינו את תערובת המאסטר של קוקטייל התגובה.
    1. הוסף 651 מיקרוליטר של בופר PBS, 7.0 מיקרוליטר של 100x תגובת נחושת, 7 מיקרוליטר של אזיד פלואורסצנטי, ולבסוף 35 מיקרוליטר של חומר מפזר לצינור צנטריפוגה. החזירו את התערובת הזו כדי להבטיח הומוגניות.
      הערה: עקוב אחרי הסדר המדויק הזה כשאתה מוסף את המגבים. השתמש תוך 15 דקות מההכנה.
  2. הוסיפו 100 מיקרוליטר מקוקטייל התגובה לכל באר. דגרו את התאים למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר בסביבה חשוכה כדי למנוע הלבנת פוטו.
  3. תאי צנטריפוגה ב-900 × גרם למשך 5 דקות. איזון הצנטריפוגה על ידי הוספת צלחות ריקות כדי לפזר את המשקל באופן שווה. הסר את התערובת באמצעות שאיבה.
  4. שטוף תאים עם 100 מיקרוליטר של בופר שטיפה והסרת בופר באמצעות שאיבה. חזור על השלב הזה פעמיים.

7. צביעת DNA

  1. הכינו דילול פי 1 של צבע DNA כולל והוסיפו 100 מיקרוליטר לכל באר. דגרו תאים בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות בסביבה חשוכה כדי למנוע הלבנת פוטו.
  2. צנטריפוגה על הפלטה ב-900 × גרם למשך 5 דקות. איזון הצנטריפוגה על ידי הוספת צלחות ריקות כדי לפזר את המשקל באופן שווה. הסר את התערובת באמצעות שאיבה.
  3. שטוף תאים עם 100 מיקרוליטר של בופר שטיפה והסרת בופר באמצעות שאיבה. חזור על השלב הזה פעמיים.
  4. החזירו תאים עם 100 מיקרוליטר של בופר PBS מקורר כדי להכין אותם להדמיה.

8. דימות

  1. הכנס את הפלטה לקורא הלוחות.
  2. הגדר הגדלה ל-20x.
  3. נתח את צבע הגרעין עם ערוץ GFP 469/525 ננומטר. השתמשו באוטובינינג ובפוקוס אוטומטי כדי לשפר את תוצאות ההדמיה.
  4. נתח סינתזת חלבונים פעילה עם ערוץ Texas Red 586/647nm. השתמשו באוטובינינג ובפוקוס אוטומטי כדי לשפר את תוצאות ההדמיה.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בדיקה זו השתמשה בפלואורסצנציה כדי להמחיש ולכמת את יכולת המוצרים הטבעיים השונים לעכב סינתזת חלבונים. ציקלוקסימיד (CHX) הוא מעכב סינתזת חלבונים ידוע שאופן פעולתו כולל הפרעה לתהליך הטרנסלוקציה במהלך הארכה11. במחקר זה, תאים חיים זוהו עם צבע גרעיני ירוק פלואורסצנטי. OPP הוא נגזרת של פורומיצין שנקשר באופן קוולנטי לחלבונים מתפתחים12. קו התאים MDA-MB-231 שימש כמודל מתאים לאור הנגישות הרחבה שלו וביצועי הניסוי האמינים13. בנוכח...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה מספק מתודולוגיית סקר פלואורומטרית לבדיקת מוצרים טבעיים ומולקולות קטנות להערכת יכולתם לעכב סינתזת חלבונים. הפשטות של פרוטוקול זה מאפשרת לחוקרים לתואר ראשון ליישם אותו בצורה נכונה, ומאפשרת להם לתרום תרומות משמעותיות לידע המדעי. הפרוטוקול דורש הבנה בסיסית של שיטות וטכניקות ביולוגיות, כאשר השלבים דורשים ביצוע מדויק כדי להבטיח תוצאות מדויקות ואמינות.

לדוגמה, שלב הפרוטוקול 2.1 דורש התפלגות תאים אחידה וכימות מדויק בכל הבארות כדי להבטיח שחזוריות. ספירת תאי...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה נתמך במענק מספר R15GM148983 של NIGMS, מועצת המנהלים של לואיזיאנה LEQSF(2021-25)-RD-A-05, וחלק מקרן המדע הלאומית של ארה"ב תחת מענק מספר OIA-1946231 ל-F.R.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
קורא רב-מצבי של Agilent Biotek Cytation 1 Cell ImagingAgilent BTCYT1V
תרכובת 1 (דהידרביאטילאמין, CAS 1446-61-3)אנאמיןEN300-7409771
קומפאונד 2 (בקוצ'יול, CAS 10309-37-2)ChemFacesCFN99047
הראוס מגאפוג' 16Rתרמו סיינטיפיק 75004271
לוחית Ibidi Gmbh-שקופית עם 96 בארותאיבידי80826
קווי תאים MDA-MB-231ATCCATCC HTB-26
pH 7.4 במי מלח מפושט בפוספטATCCATCC 30-2200
ערכת בדיקת סינתזת חלבונים (ירוקה)אבקאםAb239725

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Merrick, W. C. Mechanism and regulation of eukaryotic protein synthesis. Microbiol Rev. 56, 291-315 (1992).
  2. Ng, L., Navarro, A., Law, W. -L. Editorial: evolving roles of piRNAs in solid tumors. Front Oncol. 13, 1178634(2023).
  3. Brown, J. M., Giaccia, A. J. The unique physiology of solid tumors: opportunities (and problems) for cancer therapy. Cancer Res. 58 (7), 1408-1416 (1998).
  4. Kovalski, J. R., Kuzuoglu-Ozturk, D., Ruggero, D. Protein synthesis control in cancer: selectivity and therapeutic targeting. EMBO J. 41 (8), e109823(2022).
  5. Liu, T., et al. Synthetic silvestrol analogues as potent and selective protein synthesis inhibitors. J Med Chem. 55 (20), 8859-8878 (2012).
  6. Liu, L., Li, Z., Wu, W. Harnessing natural inhibitors of protein synthesis for cancer therapy: a comprehensive review. Pharmacol Res. 209, 107449(2024).
  7. Dias, D. A., Urban, S., Roessner, U. A historical overview of natural products in drug discovery. Metabolites. 2 (2), 303-336 (2012).
  8. Broach, J. R., Thorner, J. High-throughput screening for drug discovery. Nature. 384 (6604 Suppl), 14-16 (1996).
  9. Fang, X., Zheng, Y., Duan, Y., Liu, Y., Zhong, W. Recent advances in design of fluorescence-based assays for high-throughput screening. Anal Chem. 91 (1), 482-504 (2019).
  10. McKay, C. S., Finn, M. G. Click chemistry in complex mixtures: bioorthogonal bioconjugation. Chem Biol. 21 (9), 1075-1101 (2014).
  11. Schneider-Poetsch, T., et al. Inhibition of eukaryotic translation elongation by cycloheximide and lactimidomycin. Nat Chem Biol. 6 (3), 209-217 (2010).
  12. Liu, J., Xu, Y., Stoleru, D., Salic, A. Imaging protein synthesis in cells and tissues with an alkyne analog of puromycin. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (2), 413-418 (2012).
  13. Liu, K., et al. Evaluating cell lines as models for metastatic breast cancer through integrative analysis of genomic data. Nat Commun. 10, 2138(2019).
  14. Ma, J., et al. Dehydroabietylamine exerts antitumor effects by affecting nucleotide metabolism in gastric cancer. Carcinogenesis. 45 (10), 759-772 (2024).
  15. Shinde, A., et al. A review of single-cell adhesion force kinetics and applications. Cells. 10 (3), 577(2021).
  16. Vargas-Accarino, E., Herrera-Montávez, C., Ramón y Cajal, s, Aasen, T. Spontaneous cell detachment and reattachment in cancer cell lines: an in vitro model of metastasis and malignancy. Int J Mol Sci. 22 (9), 4929(2021).
  17. Song, L., Hennink, E. J., Young, I. T., Tanke, H. J. Photobleaching kinetics of fluorescein in quantitative fluorescence microscopy. Biophys J. 68 (6), 2588-2600 (1995).
  18. Ling, T., et al. Dehydroabietylamine derivatives target triple-negative breast cancer. Eur J Med Chem. 102, 9-13 (2015).
  19. Gautam, L. N., Ling, T., Lang, W., Rivas, F. Anti-proliferative evaluation of monoterpene derivatives against leukemia. Eur J Med Chem. 113, 75-80 (2016).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Protein Synthesis InhibitorsFluorescence AssayNatural Products ScreeningCycloheximide ReferenceFluorescence MicroscopyCancer TherapeuticsProtein Synthesis PathwayCytotoxicity AssayDose ResponsePhotobleaching Prevention

Related Articles