מאמר שיטה

כימות ויולאצין ב - Chromobacterium violaceum ועיכובו על ידי תרכובות ביו-אקטיביות

DOI:

10.3791/68507

⸱

8 באוגוסט 2025

 ,  ,  , 
1Food Research Center, Department of Food and Experimental Nutrition, Faculty of Pharmaceutical Sciences, University of São Paulo (USP)

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מטרת פרוטוקול זה היא לכמת את ייצור הוויולצאין על ידי Chromobacterium violaceum ATCC 12472 כפרוקסי להערכת עיכוב חישת מניין על ידי תרכובות ביו-אקטיביות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חיידקים מתקשרים באמצעות מערכת המכונה חישת מניין (QS), המאפשרת להם לתאם את התנהגותם בתגובה לשינויים בצפיפות התאים. תהליך זה כולל ייצור, הפרשה וזיהוי של מולקולות איתות חוץ-תאיות קטנות, הנקראות בדרך כלל משרים עצמיים (AI). QS מווסת מגוון רחב של גנים ותפקודים, כולל היווצרות ופיזור ביופילם, תנועתיות נחילים, ייצור גורמי אלימות, עמידות לאנטיביוטיקה וביו-לומינסנציה, בין היתר. עיכוב QS הפך לאסטרטגיה אנטי-ויראלית מבטיחה נגד חיידקים עמידים לאנטיביוטיקה מכיוון שהוא מפעיל לחץ סלקטיבי נמוך יותר בהשוואה לאנטיביוטיקה מסורתית. בחיידק Chromobacterium violaceum ATCC 12472, חלבוני ה-QS CviI/CviR, שהם הומולוגיים לחלבוני QS מסוג LuxI/LuxR של Aliivibrio fisheri, שולטים בגנים רבים, כולל אלה האחראים לייצור הפיגמנט הסגול violacein. C. violaceum נמצא בשימוש נרחב כזן חיישן ביולוגי במחקרי עיכוב QS, במיוחד עיכוב ייצור ויולצאין. לתרכובות רבות יש פוטנציאל לעכב QS על ידי קשירה לחלבוני QS, הומולוג LuxI או LuxR, המשבש את מעגלי ה-QS. פרוטוקול זה מתאר את השיטה לכימות ויולאצין המיוצר על ידי C. violaceum ATCC 12472 ואת עיכובו על ידי תרכובות ביו-אקטיביות בריכוזים שאינם משפיעים על צמיחת חיידקים. הבדיקה המתוארת כאן מדגימה ירידה משמעותית בייצור הסגול על ידי התרכובות שנבדקו. מחקר זה מדגיש את הפוטנציאל לשימוש בפרוטוקול זה כדי לסנן מועמדים מבטיחים במחקר עיכוב QS.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חיידקים יכולים לתקשר באמצעות מערכת המכונה QS, המאפשרת אפנון מתואם של התנהגותם בתגובה לשינויים בצפיפות התאים. תהליך זה כולל ייצור, הפרשה וזיהוי של מולקולות איתות חוץ-תאיות קטנות, הנקראות גם משרות עצמיות, המאפשרות תקשורת הן בין מינים שונים והן בתוך אותו מין 1,2.

תקשורת זו מסוגלת לווסת גנים ותפקודים כגון היווצרות ופיזור ביופילם, תנועתיות והדבקה, התפשטות תאים, סינתזה של אקסואנזימים וסידרופורים, נבגים, עמידות לחומצה, העברת גנים אופקית, עמידות לאנטיביוטיקה, ביולומינסנציה, ייצור אקסופוליסכרידים, בין היתר 3,4,5. בהתחשב ברלוונטיות של פנוטיפים המווסתים על ידי QS, יש עניין רב בפיתוח מערכות המסוגלות להפריע לתקשורת סלולרית זו. העיכוב של איתות QS נקרא גם מרווה מניין (QQ)6. QQ יכול להתרחש בכמה דרכים, כולל מעכבי סינתזה של משרה עצמית, השבתה אנזימטית של אותות אלה ומולקולות בעלות השפעה אנטגוניסטית על מולקולות אלו 4,7.

האיום הגובר של עמידות לאנטיביוטיקה הניע מחקר על טיפולים אלטרנטיביים, כולל מעכבי חישת מניין (QSI), המשבשים את התקשורת החיידקית מבלי להרוג ישירות פתוגנים. תרכובות אלו עשויות להראות השפעות סינרגטיות בשילוב עם אנטיביוטיקה, להגביר את הרגישות לחיידקים ולאפשר מינונים מופחתים של אנטיביוטיקה, שהיא אסטרטגיה חיונית להאטת התפתחות עמידות. לדוגמה, רזברטרול וקנאמיצין יחד מעכבים את צמיחת Aeromonas hydrophila 8, בעוד ש-N-אצטילציסטאין מסונכרנת עם טוברמיצין כדי לשבש את הביופילמים של Pseudomonas aeruginosa 5.

עם שימוש יתר באנטיביוטיקה ופיתוח תרופות עומדות, גישות אנטי-ויראליות כמו עיכוב QS מציעות שינוי פרדיגמה9. במקום להתמקד בכדאיות, הם מכוונים לגורמי אלימות, מה שהופך את החיידקים לפחות מזיקים ופגיעים יותר לחסינות המארח או לאנטיביוטיקה5. אסטרטגיה זו מטילה לחץ סלקטיבי חלש יותר בהשוואה לאנטיביוטיקה מסורתית, ממזערת את העמידות ומשמרת את המיקרוביוטה המועילה10,11. למרות תוצאות מעבדה מבטיחות, אימות בעולם האמיתי באמצעות ניסויים קליניים נותר לא נחקר12. עיכוב QS מהווה השלמה מבטיחה לאנטיביוטיקה, אך תרגומו לתרגול דורש הוכחות נוספות ליעילות ובטיחות בסביבות ביולוגיות מורכבות.

C. violaceum הוא בטא פרוטאובקטריום היוצר מושבות סגולות עם משטח חלק ומבריק. הם בצילים אנאירוביים פקולטטיביים ואינם יוצרים נבגים13. המנגנון של QS ב-C. violaceum כולל לולאת משוב חיובית המבוססת על מערכת הגנים האנלוגית למודל הלוקס של Aliivibrio fisheri, המכיל חלבונים CviI (הומולוגי ל-LuxI) ו-CviR (הומולוגי ל-LuxR; איור 1). Violacein מפגין פעילות ביוצידית כנגד אורגניזמים שונים, כולל פטריות, חיידקים, נמטודות ווירוסים, במיוחד בשלב הגידול הנייח של החיידקים, כאשר צפיפות האוכלוסייה גבוהה במיוחד, וחומרי המזון כמעט מתרוקנים. כתוצאה מכך, ניתן לראות בייצור ויולאצאין אסטרטגיה תחרותית להארכת הישרדותה של המושבה המיקרוביאלית14.

צמחים מייצרים תרכובות שמקורן במטבוליזם משני, הממלאות תפקיד מכריע בהגברת יכולתם להסתגל לסביבות שליליות. מטבוליטים אלה, כגון אלקלואידים, פנולים, פלבנואידים, קינונים, טאנינים, טרפנים ולקטינים מוכרים באופן נרחב כמנגנוני הגנה מפני אוכלי עשב ומיקרואורגניזמים15. הפוטנציאל של תרכובות שמקורן בצמחים כ-QSI משך תשומת לב מיוחדת בשל האינטראקציות הדינמיות בין צמחים למיקרואורגניזמים. מחקרים על אינטראקציות בין צמח לפתוגן בריזוספרה הראו שצמחים יכולים להגיב לגורמים עצמיים של חיידקים על ידי הפרשת תרכובות ביו-אקטיביות המסוגלות לפעול כמעכבים נגד פתוגנים16.

במחקר זה, אנו מתארים שיטה מעשית שמטרתה לכמת ייצור ויולאצאין על ידי C. violaceum, תוך התמקדות בעיכובו על ידי תרכובות ביו-אקטיביות. שיטה זו משמשת ככלי סינון ראשוני לבחירת תרכובות בעלות פעילות QSI פוטנציאלית. הוא מספק גישה מהירה ומעשית לפיתוח טיפולי עתידי נגד חיידקים פתוגניים גראם-שליליים. פרוטוקול סטנדרטי זה יהיה שימושי מכיוון שהוא מספק תיאור מפורט שלא נעשה במחקרים קודמים ויקל על השוואה בין מחקרים שונים בעתיד 17,18,19.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. הכנת תרבית (איור 2)

  1. גדל במבחנה תרבית של 5 מ"ל של C. violaceum ATCC 12472 במרק Luria Bertani (LB: טריפטון 10 גרם/ליטר, תמצית שמרים 5 גרם/ליטר, 5 גרם/ליטר NaCl) ב-30 מעלות צלזיוס באינקובטור רועד (220 סל"ד) למשך 24 שעות.
  2. התאם את התרבית ל-OD595 של 0.1 במרק LB, המתאים לכ-1 x 108 CFU/mL.

2. הכנת תרכובת

  1. בצלחת שטוחה עם 96 בארות, מוסיפים מרק LB ואת התרכובת הביו-אקטיבית לפי חישוב דילול סדרתי, בהתאם לתיאור שלהלן. בהתאם למסיסותן, תרכובות ביו-אקטיביות מדוללות בדרך כלל בתמיסת DMSO טהורה או DMSO: מים (1:1).
    הערה: במתודולוגיות המעריכות QSI, חיוני לוודא שהריכוזים המשמשים הם מתחת לריכוז המעכב המינימלי (תת-MIC), כלומר הם אינם משפיעים על צמיחת חיידקים. לכן, מומלץ לבצע בדיקות עקומת גדילה בריכוזים שונים כדי לאשר שהתרכובת מעכבת באופן ספציפי תקשורת בין תאים ולא כדאיות מיקרוביאלית. אנא ראה איור משלים 1 לבדיקות עקומת גדילה של התרכובות הביו-אקטיביות שנבדקו המשמשות בפרוטוקול זה.
  2. כדי לחשב את ריכוז התרכובות הביו-אקטיביות בבאר, בהתחשב בתמיסת מלאי של פרנזול ולינאלול ב-20 מ"ג/מ"ל וריכוז יעד של 200 מיקרוגרם/מ"ל בבאר, כמו גם רזברטרול ב-2.5 מ"ג/מ"ל בתמיסת המלאי ו-25 מיקרוגרם/מ"ל בבאר, בצע את החישוב באופן הבא:
    C1V1 = C2V2
    20,000 מיקרוגרם/מ"ל x V1 = 200 מיקרוגרם/מ"ל x 200 מיקרוליטר
    V1 = 40,000/20,000 μL
    V1 = 2 מיקרוליטר
    כאשר C1 = ריכוז תמיסת מלאי (20 מ"ג/מ"ל, השווה ערך ל-20,000 מיקרוגרם/מ"ל); V1 = נפח תמיסת המלאי שיש להוסיף; C2 = ריכוז סופי רצוי (200 מיקרוגרם/מ"ל); V2 = נפח סופי בבאר (200 מיקרוליטר).

3. דילול סדרתי20 והכנת צלחת (איור 3)

הערה: דילול סדרתי משמש להערכה מהירה של מגוון ריכוזים של תרכובת שנבדקה. בתהליך זה, התרכובת מדוללת ברציפות ביחס קבוע, במקרה זה 1:2. כל דילול מפחית את ריכוז התרכובת בחצי בהשוואה לריכוז הקודם, וכתוצאה מכך טווח של ירידה בריכוזים20.

  1. בעמודה הראשונה של הדילול הסדרתי, הוסף 196 מיקרוליטר מרק LB (בדוגמה שלנו, עמודות 3, 5 ו-7). על הבארות הבאות של הדילול הסדרתי, הוסף 100 מיקרוליטר מרק LB (במקרה שלנו, עמודות 4, 6 ו-8).
  2. לאחר מכן, הוסף פי 2 מכמות התרכובת הביו-אקטיבית שחושבה בשלב הקודם (2.2) כדי לבצע דילול סדרתי. החישוב הביא ל-2 מיקרוליטר מכל תרכובת שנבדקה כדי להשיג את הריכוז הסופי בבאר הראשונה, אז הוסיפו 4 מיקרוליטר מהתרכובת (עמודות 3, 5 ו-7).
  3. מעבירים מחצית מהנפח הכולל של הבאר (100 מיקרוליטר) לעמודה הבאה (במקרה שלנו, עמודות 4, 6 ו-8), וכך הלאה עד לריכוז הרצוי האחרון, אם מבצעים דילול סדרתי. זכור לערבב היטב את התכולה לפני ההעברה.
    הערה: במערך ניסיוני זה, השתמשנו רק בשני ריכוזים לפשטות וכל התרכובות מתאימות לצלחת אחת בלבד.
  4. בצע את הניסוי לפחות משולש לכל ריכוז של כל תרכובת. מומלץ גם שלושה שכפולים ביולוגיים. החלף את הקצה וחזור על ההליך עד לריכוז הרצוי האחרון. בעמודה האחרונה (במקרה שלנו, 4, 6 ו-8), קחו ממנו 100 מיקרוליטר והשליכו.
  5. הוסף 80 מיקרוליטר מרק LB לכל הבארות, בסך הכל 180 מיקרוליטר (שורות B עד D). לאחר מכן, הוסיפו 20 מיקרוליטר מתרבית C. violaceum המתוקננת בשלב 1.2, והבטיחו נפח סופי של 200 מיקרוליטר לבאר (שורות B עד D). הקפד להחליף את קצות הפיפטה בכל פעם בעת החלפת בארות כדי למנוע העברת ריכוזים גבוהים יותר בין הבארות או זיהום.
  6. אם התרכובת מומסת בממס כלשהו, הקפד להכין את הבקרה עם אותו ממס. השתמשנו ב-DMSO. במקרה זה, הכינו בקרת ממס, שתהיה הבקרה הלא מטופלת - UC (ללא תרכובת ביו-אקטיבית; עמודה 9). הוסף 2 מיקרוליטר של DMSO לכל באר בקרה. זה נותן ריכוז מקסימלי של 1% DMSO בבדיקה.
    הערה: DMSO ב-1% אינו משפיע על צמיחת חיידקים21,22.
  7. הכן את הריק, או בקרת הצבע אם משתמשים בתרכובות פיגמנטיות, ללא חיידקים. לאחר הוספת 80 מיקרוליטר מרק LB לכל הבארות, בסך הכל 180 מיקרוליטר (שורות B עד D, כפי שתואר קודם לכן), הוסף 20 מיקרוליטר מרק LB לבארות הריקות המתאימות, בסך הכל 200 מיקרוליטר (שורות E עד G). זה נעשה מכיוון שיש קצת כתמי רקע מסגול קריסטל שצריך להפחית מקריאות ה-OD, כפי שיתואר בשלב 5 של פרוטוקול זה.
  8. אם עמודה כלשהי נשארת ריקה, מלאו אותה ב-200 מיקרוליטר של מרק LB או מים מזוקקים סטריליים (עמודות 1, 2, 10, 11 ו-12). שלב זה חשוב למניעת ייבוש יתר של המדיום בחממה.

4. דגירה ומיצוי של ויולאצין

  1. מכסים את הצלחת במכסה או בסרט איטום (כמפורט בטבלת החומרים) כדי למנוע אידוי, בהתאם לספקטרופוטומטר בו נעשה שימוש.
  2. דגרו את הצלחת ב-30 מעלות צלזיוס עם תסיסה ב-130 סל"ד למשך 24 שעות.לאחר מכן, הוציאו את הצלחת מהחממה, הניחו אותה בחממת ייבוש ב-60 מעלות צלזיוס, הסירו את המכסה והניחו לצלחת להתייבש לחלוטין (כ-8 שעות).
  3. לאחר שהצלחת התייבשה, הוציאו אותה מהחממה והוסיפו 200 מיקרוליטר DMSO טהור לכל באר, ואז כסו אותה. מניחים את הצלחת באינקובטור בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס תוך ניעור ב-130 סל"ד למשך 30 דקות כדי להמיס את פיגמנט הסגול.
  4. לאחר זמן זה, הוציאו את הצלחת מהחממה והעבירו 100 מיקרוליטר למיקרופלטה אחרת, תוך הימנעות ממגע בין הקצה לדפנות הבאר.

5. כימות ייצור ויולצאין

  1. כמת את כמות ייצור הסגול על ידי מדידת הספיגה ב-595 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר צלחת מתאים (טבלת חומרים). העיכוב של פיגמנט הוויולצאין הוא פרופורציונלי לקריאות ספיגה נמוכות יותר.
  2. כימות ייצור ויולאצאין על ידי שימוש בבקרה שלילית (בקרה לא מטופלת) כהתייחסות לייצור 100% ויולצאין (טבלה 1). ראשית, הפחיתו את ערך הספיגה של הריק מכל שכפול טיפול כדי לקבל את הספיגה המתאימה אך ורק לפיגמנט הסגול (למעט הפרעות מהמרק או מצבע התרכובת). לאחר מכן, חשב את אחוז ייצור הוויולצאין עבור כל טיפול, באמצעות המשוואה הבאה.
    % ייצור ויולאצאין = (OD של התרכובת הביו-אקטיבית / OD של בקרה לא מטופלת) x 100
  3. חשב את הניתוחים הסטטיסטיים בשלושה חזרות. ניתן להגיש את התוצאות ל-ANOVA, ולאחר מכן את הבדיקה של Tukey באמצעות תוכנת GraphPad Prism 8.0. הערך של p <0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לתוצאות המוצגות כאן השתמשו בשלוש תרכובות ביו-אקטיביות שנחקרו בעבר על-ידיקבוצת המחקר 8 שלנו, רסברטרול, פרנזול ולינאלול. כל תרכובת נבדקה על יכולתה לעכב את ייצור הוויולצאין ב-C. violaceum ATCC 12472, פנוטיפ המווסת על ידי מערכת QS על אופרון vioABCDE 23.

התוצאות מאמתות את יעילות הפרוטוקול שלנו בכימות ייצור ויולאצאין ועיכובו על ידי תרכובות ביו-אקטיביות ב- C. violaceum ATCC 12472. הירידה המשמעותית ברמות הסגול על-ידי פרנזול, לי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השיטה הראשונה למיצוי ואפיון ויולאצאין מ-C. violaceum הופיעה בשנות ה-90, והתמקדה בזיהוי מקורות פחמן מתאימים לסינתזה של פיגמנטים. בתהליך זה, ויולאצין - יחד עם התאים ומדיום התרבית - יובש, הושעה מחדש באתנול, ולאחר מכן הופרד על ידי מיצוי סופרנטנט. הוויולצאין, המומס כעת באתנול, יובש לאחר מכן שוב, והניב צורה טהורה ויבשה של הפיגמנט27. ב-1998 שונה הפרוטוקול28. בעוד שאתנול עדיין שימש להמסת ויולצאין, השיטה המעודכנת הציגה שלבי סינון, מיצוי סוק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ברצוננו להודות למועצה הלאומית לפיתוח מדעי (CNPQ) באמצעות מענקים #403661/2023-4 ו-#444794/2024-7 ומלגה #306685/2022-1, ולקרן המחקר של סאו פאולו (FAPESP) על המענקים #2024/05158-6 ו-2023/17090-4 והתמיכה הכספית למרכז לחקר המזון (FoRC) #2013/07914-8.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
DMSO סינתיסייזר
פרנזולסיגמא-אולדריץ'F20395%
לינלולסיגמא-אולדריץ'L260297%
לוריא-ברטאני בינונידיפקו244620
סרט דבק אופטיתרמו פישר4311971מיקרו אמפר
רזברטרולסיגמא-אולדריץ'₪1000≥ 99% (HPLC)
קורא רב-מצבי Synergy HTXביוטק
צלחות תרבית רקמות 96 היטבKasviK12-096

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mukherjee, S., Bassler, B. L. Bacterial quorum sensing in complex and dynamically changing environments. Nat Rev Microbiol. 17 (6), 371(2019).
  2. Lima, E. M. F., Winans, S. C., Pinto, U. M. Quorum sensing interference by phenolic compounds - A matter of bacterial misunderstanding. Heliyon. 9 (7), (2023).
  3. Papenfort, K., Bassler, B. L. Quorum sensing signal-response systems in Gram-negative bacteria. Nat Rev Microbiol. 14 (9), 576-588 (2016).
  4. Grandclément, C., Tannières, M., Moréra, S., Dessaux, Y., Faure, D. Quorum quenching: role in nature and applied developments. FEMS Microbiol Rev. 40 (1), 86-116 (2016).
  5. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Sircili, M. P., Bueris, V., Pinto, U. M. N-acetylcysteine (NAC) attenuates quorum sensing regulated phenotypes in Pseudomonas aeruginosa PAO1. Heliyon. 9 (3), (2023).
  6. Allen, R. C., Popat, R., Diggle, S. P., Brown, S. P. Targeting virulence: can we make evolution-proof drugs. Nat Rev Microbiol. 12 (4), 300-308 (2014).
  7. Kalia, V. C., Patel, S. K. S., Kang, Y. C., Lee, J. K. Quorum sensing inhibitors as antipathogens: biotechnological applications. Biotechnol Adv. 37 (1), 68-90 (2019).
  8. Santos, C. A., Lima, E. M. F., Franco, B. D. G. deM., Pinto, U. M. Exploring phenolic compounds as quorum sensing inhibitors in foodborne bacteria. Front Microbiol. 12, 735931(2021).
  9. Ahmed, S. A. K. S., et al. Natural quorum sensing inhibitors effectively downregulate gene expression of Pseudomonas aeruginosa virulence factors. Appl Microbiol Biotechnol. 103 (8), 3521-3535 (2019).
  10. Yang, Q., Defoirdt, T. Weak selection for resistance to quorum sensing inhibition during multiple host infection cycles. ISME J. 18 (1), 251(2024).
  11. Defoirdt, T. Specific antivirulence activity, A new concept for reliable screening of virulence inhibitors. Trends Biotechnol. 34 (7), (2016).
  12. Defoirdt, T. Quorum-sensing systems as targets for antivirulence therapy. Trends Microbiol. 26 (4), 313-328 (2018).
  13. Mahendrarajan, V., Easwaran, N. Quorum quenching effects of linoleic and stearic acids on outer membrane vesicle-mediated virulence in Chromobacterium violaceum. Biofouling. , 1-11 (2024).
  14. Durán, N., et al. Advances in Chromobacterium violaceum and properties of violacein-Its main secondary metabolite: A review. Biotechnol Adv. 34 (5), 1030-1045 (2016).
  15. Nazir, N., et al. Characterization of phenolic compounds in two novel lines of Pisum sativum L. along with their in vitro antioxidant potential. Env Sci Pollut Res Int. 27 (7), 7639(2020).
  16. Majdura, J., Jankiewicz, U., Gałązka, A., Orzechowski, S. The role of quorum sensing molecules in bacterial-plant interactions. Metabolites. 13 (1), (2023).
  17. Çevikbaş, H., Ulusoy, S., Kaya Kinaytürk,, N, Exploring rose absolute and phenylethyl alcohol as novel quorum sensing inhibitors in Pseudomonas aeruginosa and Chromobacterium violaceum. Sci Rep. 14 (1), 15666(2024).
  18. Choi, S. Y., Lim, S., Yoon, K. H., Lee, J. I., Mitchell, R. J. Biotechnological activities and applications of bacterial pigments violacein and prodigiosin. J Biol Eng. 15 (1), (2021).
  19. Moradi, F., Hadi, N., Bazargani, A. Evaluation of quorum-sensing inhibitory effects of extracts of three traditional medicine plants with known antibacterial properties. New Microb New Infect. 38 (100769), 100769(2020).
  20. Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances. Nat Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).
  21. Scardino, A., et al. Cinnamaldehyde effectively disrupts Desulfovibrio vulgaris biofilms: potential implication to mitigate microbiologically influenced corrosion. Appl Env Microbiol. 91 (5), (2025).
  22. Summer, K., Browne, J., Hollanders, M., Benkendorff, K. Out of control: The need for standardised solvent approaches and data reporting in antibiofilm assays incorporating dimethyl-sulfoxide (DMSO). Biofilm. 4, 100081(2022).
  23. Ravichandran, V., et al. Virtual screening and biomolecular interactions of CviR-based quorum sensing inhibitors against Chromobacterium violaceum. Front Cell Infect Microbiol. 8, (2018).
  24. Lima, E. M. F., de Almeida, F. A., Pinto, U. M. Exploring the antivirulence potential of phenolic compounds to inhibit quorum sensing in Pseudomonas aeruginosa. World J Microbiol Biotechnol. 41 (2), (2025).
  25. Blosser, R. S., Gray, K. M. Extraction of violacein from Chromobacterium violaceum provides a new quantitative bioassay for N-acyl homoserine lactone autoinducers. J Microbiol Methods. 40 (1), 47-55 (2000).
  26. Zhu, H., He, C. C., Chu, Q. H. Inhibition of quorum sensing in Chromobacterium violaceum by pigments extracted from Auricularia auricular. Lett Appl Microbiol. 52 (3), 269-274 (2011).
  27. Durán, N., Antonio, R. V., Haun, M., Pilli, R. A. Biosynthesis of a trypanocide by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 10 (6), 686(1994).
  28. Rettori, D., Production Durán, N. extraction and purification of violacein: an antibiotic pigment produced by Chromobacterium violaceum. World J Microbiol Biotechnol. 14 (5), 685(1998).
  29. Cheng, K. -C., Hsiao, H. -C., Hou, Y. -C., Hsieh, C. -W., Hsu, H. -Y., Chen, H. -Y., Lin, S. -P. Improvement in violacein production by utilizing formic acid to induce quorum sensing in Chromobacterium violaceum. Antiox. 11 (5), 849(2022).
  30. Defoirdt, T., Brackman, G., Coenye, T. Quorum sensing inhibitors: how strong is the evidence. Trends Microbiol. 21 (12), 619-624 (2013).
  31. Alyousef, A. A., et al. Myrtus communis and its bioactive phytoconstituent, linalool, interferes with Quorum sensing regulated virulence functions and biofilm of uropathogenic bacteria: In vitro and in silico insights. J King Saud Univ Sci. 33 (7), 101588(2021).
  32. Kanekar, S., Devasya, R. P. Growth-phase specific regulation of cviI/R based quorum sensing associated virulence factors in Chromobacterium violaceum by linalool, a monoterpenoid. World J Microbiol Biotechnol. 38 (2), (2022).
  33. Dias, J. P., Domingues, F. C., Ferreira, S. Linalool reduces virulence and tolerance to adverse conditions of listeria monocytogenes. Antibiotics. 13 (6), 474(2024).
  34. Rodrigues, C. F., Černáková, L. Farnesol and tyrosol: Secondary metabolites with a crucial quorum-sensing role in Candida biofilm development. Genes. 11 (4), (2020).
  35. Hacioglu, M., Yilmaz, F. N., Yetke, H. I., Haciosmanoglu-Aldogan, E. Synergistic effects of quorum-sensing molecules and antimicrobials against Candida albicans and Pseudomonas aeruginosa biofilms: in vitro and in vivo studies. J Antimicrob Chemother. 79 (11), 2828(2024).
  36. Bhattacharyya, S., Agrawal, A., Knabe, C. Sol-gel silica controlled release thin films for the inhibition of methicillin resistant Staphylococcus aureus. Biomater. 35, 509-517 (2014).
  37. Qu, Y., Zou, Y., Wang, G., Zhang, Y., Yu, Q. Disruption of communication: Recent advances in antibiofilm materials with anti-quorum sensing properties. ACS Appl Mater Interfaces. 16 (11), 13353-13383 (2024).
  38. Li, B., et al. Effects of Rhapontigenin as a Novel Quorum-Sensing Inhibitor on Exoenzymes and Biofilm Formation of Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum and Its Application in Vegetables. Molecules. 27 (24), (2022).
  39. Mattio, L. M., Catinella, G., Pinto, A., Dallavalle, S. Natural and nature-inspired stilbenoids as antiviral agents. Eur J Med Chem. 202 (112541), 112541(2020).
  40. Duarte, A., Alves, A. C., Ferreira, S., Silva, F., Domingues, F. C. Resveratrol inclusion complexes: Antibacterial and anti-biofilm activity against Campylobacter spp. and Arcobacter butzleri. Food Res Int. 77, 244-250 (2015).
  41. Martinelli, D., Grossmann, G., Séquin, U., Brandl, H., Bachofen, R. Effects of natural and chemically synthesized furanones on quorum sensing in Chromobacterium violaceum. BMC Microbiol. 4 (1), (2004).
  42. Tan, L. Y., Yin, W. F., Piper Chan, K. G. nigrum, Piper betle and Gnetum gnemon-natural food sources with anti-quorum sensing properties. Sensors. 13 (3), 3975-3985 (2013).
  43. Tan, L. Y., Yin, W. F., Chan, K. G. Silencing quorum sensing through extracts of Melicope lunu-ankenda. Sensors. 12 (4), 4339-4351 (2012).
  44. Oliveira, B. D., et al. Antioxidant, antimicrobial and anti-quorum sensing activities of Rubus rosaefolius phenolic extract. Ind Crops Prod. 84, 59-66 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Quorum SensingViolaceinvirulent virulent

מאמרים קשורים