הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

השפעות של משחת כוויה חשופה לחה על ניאווסקולריזציה של פצעים ואקסוזומלי פלזמה mir-31-5p בעכברים סוכרתיים

623 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68649

⸱

26 באוגוסט 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Endocrinology, The Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities, 2Department of Cardiology, General Hospital of Central Theater Command, 3Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Diabetic Chronic Wounds in Baise City, 4Key Laboratory of Metabolic Diseases in Baise City

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מאמר זה מתאר כיצד משחת כוויות חשופה ללחות מקדמת תיקון פצע סוכרתי על ידי ויסות דינמי של ניאו-וסקולריזציה של פצע סוכרתי וביטוי של פלזמה אקסוזומלית mir-31-5p.

תקציר

משחת כוויות לח (MEBO) היא רפואה סינית מסורתית המשמשת לטיפול בפצעי סוכרת כרוניים; עם זאת, המנגנון הבסיסי אינו ברור. עדויות עדכניות מצביעות על תפקידם של אקסוזומים ו-miRNAs פונקציונליים בניאו-וסקולריזציה של פצעים. כאן, מטרתנו הייתה לחקור את ההשפעות של MEBO על ניאו-וסקולריזציה של פצעים וביטוי mir-31-5p אקסוזומלי בפלזמה בעכברים סוכרתיים. בסך הכל 120 עכברי C57BL/6 חולקו באופן אקראי לקבוצת ביקורת שאינה סוכרתית (n = 24) וקבוצת סוכרת שהושרה על ידי סטרפטוזוטוצין (n = 96), אשר חולקה באופן אקראי לקבוצת ביקורת סוכרתית, MEBO, beifuxin וקבוצות MHY1485 (n = 24 כל אחת). חמש קבוצות הוקמו עם מודלים של כריתת עור בעובי מלא, שטופלו בתמיסת מלח פיזיולוגית, מי מלח פיזיולוגיים, MEBO, ביפוקסין ו-MHY1485, בהתאמה. בימים 1, 7, 13 ו-18, קצב סגירת הפצע, צפיפות המיקרו-כלי ורמות הביטוי pExo-mir-31-5p, יחד עם VPS4a ו-Rab27a mRNA ורמות חלבון ברקמות הפצע, נותחו באמצעות ImageJ, צביעת המטוקסילין-אאוזין (HE), תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (qPCR) וכתם מערבי (WB), בהתאמה. יתר על כן, נותחו מתאמים בין הביטוי של VPS4a, חלבון Rab27a, pExo-mir-31-5p וצפיפות כלי הדם. מצאנו ש-MEBO קידם תיקון פצעים בעכברים סוכרתיים (p < 0.050). הוא שיפר את הניאו-וסקולריזציה של הפצע במהלך השלבים המוקדמים והאמצעיים של ריפוי הפצע, אך עיכב אותו בשלב מאוחר יותר (עמ' < 0.050). MEBO הגביר את ויסות ה-mRNA של Vps4a ו-Rab27a וביטוי החלבון ברקמות הפצע, כמו גם pExo-mir-31-5p בשלבי הריפוי המוקדמים והביניים, תוך הפחתת ויסות שלהם בשלב מאוחר יותר (p < 0.050). יתר על כן, VPS4a, חלבון Rab27a, ביטוי pExo-mir-31-5p וצפיפות מיקרו-כלי דם נמצאו בקורלציה חיובית בעכברים שטופלו ב-MEBO (p < 0.050). לסיכום, MEBO מווסת באופן דינמי את הניאו-וסקולריזציה של הפצע ואת ביטוי pExo-mir-31-5p בעכברים סוכרתיים, ומספק תמיכה תיאורטית חדשה ליישום הקליני שלו.

מבוא

שכיחות הסוכרת בחולים מבוגרים גבוהה ועולה מדי שנה. המחלה קשורה לפצעי סוכרת כרוניים (CDWs), שיש להם השפעה מזיקה על בריאות המטופל, תפקודו ואיכות חייו הכללית1. בדרך כלל, סגירת פצע כוללת ארבעה שלבים נפרדים: המוסטזיס, דלקת, התפשטות ואפיתלמחדש 2. מבין אלה, שלב ההתפשטות הוא החשוב ביותר. במהלך שלב ההתפשטות המוקדם, תאי אנדותל נימיים מתרבים ונודדים לפצע, מנביטים כלי דם חדשים ויוצרים רשת מורכבת3. עם זאת, בשלבים מאוחרים יותר של תיקון הפצע, רוב הלומינה הנימים עוברת חסימה, כאשר מיעוטם עוברים לעורקים וורידים קטנים. בחולים עם CDW, אובדן רקמות, נמק ונמק, ורמות שונות של דלקת והיפרגליקמיה, משבשים את האיזון הדינמי בין אנגיוגנזה לאנטי-אנגיוגנזה, ומעכבים את ריפוי הפצעים, במיוחד כאשר אנגיוגנזה נפגעת 4,5,6. משחת כוויה לח (MEBO) היא רפואה סינית מסורתית המשמשת לטיפול ב-CDW, אך המנגנון שלה נותר לא ברור. לאחרונה, מחקרים רבים הראו כי miRNAs נישאים באקסוזום יכולים לקדם אנגיוגנזה ובכך לקדם ריפוי פצעי סוכרת 7,8. עם זאת, מעט מחקרים חקרו את הקשר בין MEBO ל-miRNAs הנישאים על ידי אקסוזומים. לכן, יש צורך לחשוף את המנגנון שבאמצעותו MEBO ממריץ אנגיוגנזה ב-CDW מנקודת המבט האקסוזומית והתפקודית של miRNA.

אקסוזומים הם שלפוחיות קרומיות כדוריות המשתחררות על ידי תאים חיים, בגודל 30-200 ננומטר, צפיפות של 1.1-1.2 גרם/מ"ל, ומכילות חלבוני סמן כמו CD81 ורגישות לגידול 101 (TSG101)9. ייצור והפרשה של אקסוזומים מסווגים לקומפלקס מיון אנדוזומי הנדרש למסלולים תלויי הובלה (ESCRT) ושאינם תלויים ב-ESCRT. הרגולטורים הקריטיים ביותר במסלולים אלה הם מיון חלבון ואקואולרי 4 הומולוג a (VPS4a) וחלבון הקשור ל-Ras Rab-27a (Rab27a)10,11,12. Vps4a פועל כ-ATPase, מזרז את תהליך שיפוץ הממברנה התלוי ב-ESCRT, המווסת את גודל האקסוזום ואת קצב היווצרות האקסוזום13,14. Rab27a הוא GTPase קטן וחיוני המווסת את העגינה של גופים רב-שלפוחיים לקרום הפלזמה15. הפרשת אקסוזום מווסתת באופן שלילי על ידי יעד היונקים של קומפלקס רפמיצין 1 (mTORC1)16, המופעל על ידי MHY1485 קשירה תחרותית לתחום המבני ATP של רפמיצין17. בסך הכל, MHY1485 יכול לעכב בעקיפין את הסינתזה וההפרשה של אקסוזומים. ניתן לזהות אקסוזומים כמעט בכל נוזלי הגוף. אקסוזומים בפלזמה פרודוקטיביים יותר מאשר אקסוזומים שמקורם בנוזלי גוף אחרים18. יתר על כן, אקסוזומים מגנים על חומצות הגרעין שהם נושאים מפני פירוק19.

MiRNAs הם מולקולות RNA קטנות שאינן מקודדות המווסתות את הפעילות התאית20. אקסוזומים התגלו בשפע במספר רב של miRNAs החיוניים לשיפור אנגיוגנזה של פצעים, במיוחד mir-126, mir-125a ו-mir-31-5p. מחקר קודם הראה כי אקסוזומים שמקורם בתאי גזע מזנכימליים של מח עצם mir-126 המבטאים יתר על המידה קידמו את ההתפשטות, הנדידה והיווצרות הצינורות של תאי אנדותל וריד הטבור האנושיים במבחנה על ידי העברת mir-12621. מחקר אחר הצביע על כך שאקסוזומים המופרשים על ידי תאי גזע מזנכימליים שמקורם בשומן אנושי העבירו mir-125a לתאי אנדותל וקידמו אנגיוגנזה על ידי דיכוי המעכב האנגיוגני דמוי דלתא 4 בפצעים9. יאן ועמיתיו דיווחו כי mir-31-5p שהועמס לאקסוזומי חלב שיפר את תפקודי תאי האנדותל במבחנה, קידם אנגיוגנזה ושיפר את ריפוי פצעי הסוכרת in vivo22. מבין ה-miRNAs הללו, mir-31-5p היה ה-miRNA היחיד שהיה מווסת באופן משמעותי בפצעי עכברים סוכרתיים בהשוואה לזה בפצעי עכברים רגילים22.

MEBO היא משחה שמנונית שניתן להשתמש בה לטיפול בפצעים עקשניים כגון CDWs23,24. עם זאת, המנגנון של MEBO המקדם ריפוי פצעים לא הובהר. מחקרים קודמים הראו כי MEBO מקדם ניאו-וסקולריזציה של פצעים על ידי ויסות יתר של ביטוי גורם גדילה אנדותל כלי דם בחולדות סוכרתיות25. עם זאת, רק מחקרים מעטים התייחסו לנושא זה מנקודת המבט של miRNAs הנישאים על ידי אקסוזומים. במחקר זה, כדי לחקור את ההשפעות של MEBO על CDWs, גרמנו מודל פצע בעובי מלא בעכברים סוכרתיים באמצעות סטרפטוזוטוצין (STZ) ותזונה עתירת שומן. הראינו ש-MEBO האיץ משמעותית את ריפוי הפצעים בעכברים סוכרתיים. יתר על כן, חקרנו את ההשפעות של MEBO על צפיפות כלי המיקרו, רמות הביטוי של pExo-mir-31-5p, יחד עם VPS4a ו-Rab27a mRNA וחלבון ברקמות הפצע. לכן, שיערנו ש-MEBO קידם ריפוי פצעים על ידי ויסות pExo-mir-31-5p כדי לווסת אנגיוגנזה של פצעים בעכברים סוכרתיים. סקירה סכמטית של תכנון המחקר מוצגת באיור 1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל פרוטוקולי הניסויים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית יוג'יאנג ללאומים, בייס, סין (2018051501). עכברים זכרים ספציפיים ללא פתוגן (SPF) C57BL/6 (בני 7 שבועות) שוכנו במרכז חיות המעבדה של המכללה הרפואית יוג'יאנג ללאומים וניזונו מתזונה רגילה או עתירת שומן ומים נקיים. לאורך כל המחקר, הטמפרטורה בחדר ההאכלה של בעלי החיים נשמרה בין 23 ל-25 מעלות צלזיוס, הלחות הייתה 40% עד 60%, ומחזור האור/חושך היה 12 שעות. הטיפול בבעלי חיים ניתן בהתאם להנחיות של מכוני הבריאות הלאומיים של ארה"ב והמכון הלאומי הסיני לבריאות (בייג'ינג, סין). כל ההתערבויות הכירורגיות בוצעו בהרדמה עם נתרן פנטוברביטל (0.3%, 50 מ"ג/ק"ג) תוך שימוש בפרוטוקול סטנדרטי שנקבע במעבדה שלנו. כל המאמצים נעשו כדי להפחית את מספר בעלי החיים בשימוש ולמזער את אי הנוחות של בעלי החיים. כל סעיפי דוח זה מצייתים להנחיות ARRIVE לדיווח על מחקר בבעלי חיים.

דגם פצע עכבר וטיפול בו
בסך הכל 120 עכברים חולקו באופן אקראי לקבוצת ביקורת שאינה סוכרתית (NDB-CTR; n = 24) או לקבוצת סוכרת (n = 96). כדי לדמות סוכרת אנושית מסוג 2, עכברים בקבוצת הסוכרת הוזנו בתזונה עתירת שומן וסוכר מזוקק במשך 4 שבועות ולאחר מכן הוזרקו תוך צפקית (ip) עם STZ (100 מ"ג/ק"ג), פעם ביום, במשך יומיים רצופים לאחר צום במשך 16 שעות. רמות הגלוקוז בדם בצום נמדדו ביום ה-5 וה-6 לאחר הזרקת STZ. עכברים עם ערכי גלוקוז בדם בצום גבוהים מ-16.7 ממול/ליטר בשתי הזדמנויות ועם תסמינים כמו פוליפגיה, פולידיפסיה, פוליאוריה וירידה במשקל נחשבו למודלים מוצלחים של סוכרת26. לאחר שבוע אחד גולח שיער הגב, ונוצר פצע עורי עגול בעובי מלא (קוטר = 15 מ"מ) בגב כל עכבר לאחר מתן תוך-צפקי של נתרן פנטוברביטל (0.3%, 50 מ"ג/ק"ג). העכברים בקבוצת הסוכרת הוקצו באופן אקראי לקבוצות MEBO, BFX (beifuxin), DB-CTR (ביקורת סוכרתית) או MHY1485 (MHY). עכברים בקבוצות MEBO ו-BFX טופלו ב-MEBO (0.2 גרם/ס"מ2) וג'ל BFX (0.2 גרם/ס"מ2) שנמרחו על הפצע פעם ביום, בהתאמה. ג'ל BFX, ששמו הגנרי הוא ג'ל גורם גדילה בסיסי של בקר, הוא תרופה מקומית המשמשת לטיפול בפצעים כרוניים27. העכברים בקבוצות NDB-CTR, DB-CTR ו-MHY טופלו במי מלח פיזיולוגיים. קבוצת MHY טופלה גם ב-MHY1485 (10 מ"ג/ק"ג, ip) במשך יומיים רצופים. העכברים הסוכרתיים קיבלו הזרקה תת עורית של אינסולין במינון של 2-4 IU/kg פעם ביום כדי לשלוט ברמת הגלוקוז בדם.

אסיפת דגימות
בימים 1, 7, 13 ו-18, שישה עכברים בכל קבוצה נבחרו באופן אקראי להמתת חסד על ידי פריקת צוואר הרחם, ודגימות של רקמות אפידרמיס בצורת טבעת, כולל הפצע, נלקחו במרחק של 0.5 ס"מ מקצה הפצע עם מספריים סטריליים. לאחר מכן נאספו רקמות הפצע לצביעה של HE, ניתוח qPCR ובדיקות WB. דגימות דם נלקחו מעכברים בקבוצות DB-CTR ו-MEBO בשיטת רטרו-אורביטל בהרדמת נתרן פנטוברביטל. דגימות דם עורבבו עם הפרין בצינורות נוגדי קרישה וצנטריפוגה ב-3,000 x גרם למשך 15 דקות כדי לשחזר את הסופרנטנט בפלזמה. כל הדגימות אוחסנו בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס. כדי לחשב את קצב סגירת הפצע, נעשה שימוש במצלמה דיגיטלית כדי לצלם תמונות של ריפוי פצעים בנקודת זמן קבועה ובמרחק שווה עם סולם מדורג בצד. אזור הפצע נמדד באמצעות תוכנת ImageJ. שיעור סגירת הפצע חושב באופן הבא:

שיעור סגירת פצע (%) = [W1-Wn] / W1 x 100%

כאשר W1 ו-Wn מתייחסים לאזורי הפצע בימים 1 ו-n, בהתאמה.

בדיקה היסטופתולוגית
צביעת HE בוצעה כדי לצפות באופן דינמי בריפוי פצעים פתולוגי. לאחר קיבוע עם תמיסת פרפורמלדהיד של 4% למשך 16 שעות, רקמות הפצע התייבשו, הוטמעו בפרפין, ולאחר מכן נחתכו למקטעים של 3 מיקרומטר. צביעת HE בוצעה על שקופיות רקמות. כדי לחקור את צפיפות המיקרו-כלי של רקמות הפצע, שקופיות רקמות צולמו באמצעות מיקרוסקופ אופטי. כדי לכמת את צפיפות המיקרו-כלי של כל דגימה, בחרנו את האזור עם צפיפות הנימים הגבוהה ביותר תחת מיקרוסקופ פי 10, ואז בחרנו וצילמנו שלושה אזורים שאינם חופפים תחת מיקרוסקופ פי 20. צפיפות המיקרו-כלי חושבו וחושבו בממוצע באמצעות ImageJ.

בידוד ואפיון של אקסוזומים בפלזמה
אולטרה-צנטריפוגה בוצעה כדי לבודד אקסוזומים בפלזמה על פי פרוטוקול שפורסם עם שינויים קלים28. בקצרה, 2 מ"ל פלזמה צנטריפוגה ב-2,000 x גרם ב-4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. הסופרנטנט צנטריפוגה שוב ב-10,000 x גרם ב-4 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות כדי להסיר את השלפוחיות הגדולות יותר. הסופרנטנט סונן דרך ממברנת סינון של 0.45 מיקרומטר, והפילטר נאסף. לאחר מכן צנטריפוגה ב-100,000 x גרם ב-4 מעלות צלזיוס למשך 70 דקות. לאחר הסרת הסופרנטנט, הכדור הושעה מחדש עם 10 מ"ל של 1x PBS מקורר מראש וצנטריפוגה ב-4 מעלות צלזיוס, 100,000 x גרם, למשך 70 דקות. הסופרנטנט הוסר, והגלולה הושעתה מחדש עם 150 מיקרוליטר של PBS 1x מקורר מראש ואוחסנה בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס. כדי לאשר את אקסוזומי הפלזמה שנאספו לעיל, השתמשנו במיקרוסקופ אלקטרונים שידור (TEM) כדי לקבוע את המורפולוגיה של אקסוזומים, מערכת ציטומטריית ננו-זרימה לניתוח הגודל והריכוז של אקסוזומים, ו-WB כדי לזהות את רמות הביטוי של סמני האקסוזומים CD81 ו-TSG101.

מיצוי RNA, תמלול הפוך (RT) ו-qPCR
qPCR בוצע כדי לכמת את רמות ביטוי ה-mRNA של Vps4a, Rab27a ו-pExo-mir-31-5p. רקמות פצע נאספו כדי לחלץ RNA כולל באמצעות מגיב מיצוי RNA. ריכוז RNA כולל בין 400-700 ננוגרם/מיקרוליטר נחשב מקובל. דגימות ה-RNA הועתקו לאחור ל-cDNA באמצעות טרנסקריפטאז הפוך עם dsDNase בהתאם להוראות היצרן. qPCR בוצע באמצעות SYBR Green qPCR Mix (ללא ROX). באשר ל-mir-31-5p, RNA מאקסוזומי פלזמה חולץ באמצעות ערכת המיני, תומלל לאחור באמצעות ערכת סינתזת ה-cDNA של הגדיל הראשון, והוגבר באמצעות SYBR Green qPCR Master Mix. הביטויים של mRNAs ו-miRNAs נותחו בשיטת 2-ΔΔCt ביחס ל-β-actin ו-cel-mir-39, בהתאמה. הפריימרים המשמשים מוצגים בטבלה 1.

כתם מערבי
בדיקת WB שימשה לאיתור רמות הביטוי של חלבוני Vps4a ו-Rab27a, כמו גם את רמות סמני האקסוזום CD81 ו-TSG101. רמות החלבון הכוללות של רקמות הפצע ואקסוזומי הפלזמה חולצו על ידי מאגר ליזה של RIPA, וריכוז החלבון נקבע על ידי ערכת בדיקת חלבון חומצה ביצינצ'ונינית. בסך הכל 50 מיקרוגרם של חלבון הופרד על ידי נתרן דודציל סולפט-פוליאקרילאמיד. לאחר כתמים על ממברנות פלואוריד פוליווינילידן, הממברנות נחסמו באלבומין בסרום בקר, ואז הודגרו ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה עם נוגדנים נגד Vps4a (1:3000), Rab27a (1:1000), גליצרלדהיד-3-פוספט דהידרוגנאז (GAPDH) (1:5000), CD81 (1:3000), TSG101 (1:3000), ואז הודגרו עם נוגדנים משניים, אנטי-ארנב IgG פרוקסידאז מצומד (1:3000), ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעה. הממברנות הודגמו באמצעות ערכת כימילומינסנציה משופרת.

ניתוח סטטיסטי
כל הנתונים שהוצגו במחקר זה נותחו למובהקות סטטיסטית באמצעות תוכנת SPSS. כל התוצאות שהתקבלו בניתוחים אלה הודגמו באמצעות תוכנת GraphPad Prism. ההבדלים בין שתי הקבוצות נבדקו באמצעות מבחן t מדגם בלתי תלוי. עבור השוואות מרובות קבוצות, נעשה שימוש בניתוח חד כיווני של שונות לנתוני שונות הומוגנית, בעוד שהמבחן של וולש יושם על נתוני שונות הטרוגנית. יתר על כן, השתמשנו במבחן ההבדל הכי פחות מובהק להשוואה זוגית של נתוני שונות שווה ובמבחן T2 של Tamhane לנתוני שונות לא שווה. נתונים כמותיים מוצגים כממוצע ± סטיית תקן. מתאמים נותחו באמצעות ניתוח המתאם של ספירמן עבור משתנים בהתפלגות לא נורמלית ותוארו כמקדמי מתאם ורווחי סמך של 95%. P < 0.050 נחשב למובהק סטטיסטית. כל הניסויים חזרו על עצמם לפחות שלוש פעמים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

MEBO מאיץ את ריפוי הפצעים בעכברים סוכרתיים
כדי לאמת את היעילות של MEBO בפצעי סוכרת, הקמנו מודל פצע סוכרתי וצילמנו תמונות בימים 1, 7, 13 ו-18. הפצעים בכל קבוצה החלימו בהדרגה עם הזמן (איור 2A). הפצעים בקבוצת NDB-CTR החלימו לחלוטין ביום ה-18. הפצעים בקבוצת MEBO החלימו במהירות הגבוהה ביותר מבין פצעי הסוכרת, ויצרו כמה חלקיקי גרנולציה ורודים ביום השביעי, ואז גידלו שטח גדול של רקמת גרנולציה אדומה בהירה לאחר שנשפכו ביום ה-13, ובסופו של דבר תוקנו, כאשר רקמת הגרנולציה הצטמצמה במידה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

CDWs, סיבוך של סוכרת, יכול להוביל לתמותה ונכות משמעותית, ולעתים קרובות קשור להפרעות בכלי הדם29. MEBO יעיל בטיפול ב-CDW; עם זאת, המנגנון הבסיסי שלו אינו ברור30. לכן, ביקשנו לבחון אותו מנקודת המבט של אקסוזומים ו-miRNA פונקציונליים. במחקר זה, מצאנו ששיעור סגירת הפצע וצפיפות המיקרו-כלי של קבוצת MEBO היו הגבוהים ביותר בכל נקודות הזמן בעכברים סוכרתיים. תוצאות qPCR ו-WB הראו כי רמות הביטוי של VPS4a ו-Rab27a mRNA וחלבון ברקמות הפצע ו-pExo-mir-31-5p...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין תחת מענק [מספר 81960875], קרן גואנגשי למדעי הטבע תחת מענק [מספר 2023GXNSFDA026008], פרויקט פיתוח ויישום טכנולוגיה מתאימה לרפואה ובריאות גואנגשי תחת מענק [מספר S2022134], פרויקט מחקר במימון עצמי של ועדת הבריאות של האזור האוטונומי של גואנגשי ג'ואנג לרפואה מערבית תחת מענק [מספר 20210234], והלשכה לרפואה סינית מסורתית של גואנגשי במימון עצמי פרויקט מחקר תחת מענק [מספר GZZC2020255].

תרומת המחבר:
Yuanyuan Xu: כתיבה - טיוטה מקורית, תוכנה, מתודולוגיה, חקירה, ניתוח פורמלי, המשגה. ג'יאנצ'אנג שו: משאבים, מתודולוגיה, חקירה. אנבאנג ג'ואו: חקירה, ניתוח פורמלי. נימיאו צ'ן: ויזואליזציה, לינה הואנג: פיקוח. ביאוליאנג וו: כתיבה-סקירה ועריכה, משאבים, ניהול פרויקטים, מתודולוגיה, רכישת מימון, אוצר נתונים, המשגה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1 ופעמים; PBS Solarbio (בייג'ינג, סין)#P1020פתרון חוצץ
תמיסת פרפורמלדהיד 4%Solarbio (בייג'ינג, סין)#P1110תיקון רקמות
אנטי ארנב IgG peroxidase מצומד זיקה#S0001נוגדן משני
ג'ל BeifuxinEssexbio (ג'וחאי, סין)#042404A06משחה לטיפול בפצעים כרוניים
נוגדן CD81נוגדן איתות#41779נוגדן ראשוני
ערכת כימילומינסנציה משופרת Epizyme(סין)#SQ101ערכת כימילומינסנציה לרצועת חלבון
נוגדן גליצרלדהיד-3-פוספט דהידרוגנאז (GAPDH)זיקה#AF7021נוגדן ראשוני
פריזמה של GraphPadhttps://www.graphpad.com/prism/ויזואליזציה
תמונהJ https://imagej.net/ij/למדוד את שטח הפצע 
ערכת בדיקת חלבון מיידית של חומצה ביצינצ'ונינית (BCA) Epizyme(סין)#ZJ102קבע את ריכוז החלבון
מערכת LightCycler96רושציוד qPCR
MHY1485MedChemExpress (ארה"ב)#326914-06-1מפעיל את המטרה היונקת של קומפלקס רפמיצין 1 (mTORC1) 
miRNeasy מיני קיט  טיאנגן (סין)#217004מיצוי RNA (miRNA)
משחת כוויות חשופה ללחותMebo (Shantou, סין)#2403103Bמשחה לטיפול בפצעים כרוניים
MonAmp SYBR Green qPCR Mix (ללא ROX) Monad (סין)#MQ10101Sערכת qPCR (mRNA)
MonScript RTIII All-in-One Mix עם dsDNase Monad (סין)#MR05101Sערכת תמלול הפוך (mRNA)
מערכת ציטומטריית זרימה ננוN30E (סין)ציוד לניתוח גודל וריכוז האקסוזומים
מיקרוסקופ אופטיאולימפוס (טוקיו, יפן)התבונן בפתומורפולוגיה של רקמות
תמיסת מלח פיזיולוגיתקלון (סצ'ואן, סין)#L24041709מי מלח פיזיולוגיים
ממברנות פלואוריד פוליווינילידןMillipore (ארה"ב)#IPVH00010קרום הכתמה מערבי
פריימריםGeneray Biotech Co., Ltd. (שנגחאי, סין)
נוגדן Rab27aטכנולוגיית איתות תאים#69295נוגדן ראשוני
ערכת סינתזת cDNA של RevertAid First Strandתרמו פישר (ארה"ב)#K1622ערכת תמלול הפוך (miRNA)
מאגר ליזה RIPASolarbio (בייג'ינג, סין)#R0010מיצוי חלבון כולל
נתרן דודציל סולפט– פוליאקרילאמיד Epizyme(סין)#PG222מאגר אלקטרופורזה
נתרן פנטוברביטלMerck (שנגחאי, סין)#P3761הרדמה
עכברי C57BL/6 זכרים ספציפיים ללא פתוגןגואנגדונג ויטל ריבר מעבדה בעלי חיים טכנולוגיה ושות', בע"מ (גואנגדונג, סין)חיות ניסוי
אס.פי.אס.אסhttps://www.ibm.com/spssניתוח סטטיסטי
סטרפטוזוטוציןSolarbio (בייג'ינג, סין)#S8050לגרום למודל עכבר סוכרתי 
SYBR ירוק qPCR מאסטר מיקס רוש (שוויץ)#4943914001-SRערכת qPCR (miRNA)
מיקרוסקופ אלקטרונים שידורהיטאצ'י (יפן)HT-7700ציוד לקביעת המורפולוגיה של אקסוזומים
טריזול Invitrogen (ארה"ב)#15596026CNמיצוי RNA (mRNA)
נוגדן TSG101אבקם# ab125011נוגדן ראשוני
נוגדן Vps4aאבקם# ab197896נוגדן ראשוני

מקורות

  1. Zhi, Q., et al. The effectiveness of cell-derived exosome therapy for diabetic wound: A systematic review and meta-analysis. Ageing Res Rev. 85, 101858(2023).
  2. David, S., Vikrant, R., Sarah, M., Kira, C., Devendra, K. A. Impact of resolvin mediators in the immunopathology of diabetes and wound healing. Expert Rev Clin Immunol. 17 (6), 681-690 (2021).
  3. Holly, N. W., Matthew, J. H. Wound healing: cellular mechanisms and pathological outcomes. Open Biol. 10 (9), 200223(2020).
  4. Vikrant, R., Rebecca, M., Devendra, K. A. Stem Cells and Angiogenesis: Implications and Limitations in Enhancing Chronic Diabetic Foot Ulcer Healing. Cells. 11 (15), 2287(2022).
  5. Nour, S., Imani, R., Chaudhry, G. R., Sharifi, A. M. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  6. Shirin, N., Rana, I., Chaudhry, G. R., Ali, M. S. Skin wound healing assisted by angiogenic targeted tissue engineering: A comprehensive review of bioengineered approaches. J Biomed Mater Res A. 109 (4), 453-478 (2020).
  7. Ruo, L., et al. Exosome-cargoed microRNAs: Potential therapeutic molecules for diabetic wound healing. Drug discovery today. 27 (10), 103323(2022).
  8. Li, Q., et al. MiR146a-loaded engineered exosomes released from silk fibroin patch promote diabetic wound healing by targeting IRAK1. Signal transduction and targeted therapy. 8 (1), 62(2023).
  9. Yang, A., et al. Exosomes from adipose-derived stem cells and application to skin wound healing. Cell Prolif. 54 (3), 119(2021).
  10. Fang, W., Yan, L. The emerging roles of exosome-derived noncoding RNAs in the tumor immune microenvironment and their future applications. Biomed Pharmacother. 156, 113863(2022).
  11. Phyllis, I. H., Anil, C. Multivesicular body morphogenesis. Annu Rev Cell Dev Biol. 28, 337-362 (2012).
  12. Matias, O., et al. Rab27a and Rab27b control different steps of the exosome secretion pathway. Nat Cell Biol. 12 (1), 1-13 (2009).
  13. Christophe, C., Sourav, M., Nolwenn, M., Wouter, H. R., Winfried, W. The role of VPS4 in ESCRT-III polymer remodeling. Biochem Soc Trans. 47 (1), 441-448 (2019).
  14. Hao, L., Rui, Z., Wen, W., Li, L. miR-4454 Promotes Hepatic Carcinoma Progression by Targeting Vps4A and Rab27A. Oxid Med Cell Longev. 2021, 9230435(2021).
  15. Mostafa, J., et al. Identification of the first structurally validated covalent ligands of the small GTPase RAB27A. RSC Med Chem. 13 (2), 150-155 (2022).
  16. Wen, Z., et al. Exosome Release Is Regulated by mTORC1. Adv Sci (Weinh). 6 (3), 1801313(2019).
  17. Ji, Z., et al. Administration of follicle-stimulating hormone induces autophagy via upregulation of HIF-1α in mouse granulosa cells. Cell Death Dis. 8 (8), e3001(2017).
  18. Tânia, S. M., José, C., Ilka, M. R., Odete, A. S. Henriques Ana Gabriela. Exosome isolation from distinct biofluids using precipitation and column-based approaches. PLoS One. 13 (6), e0198820(2018).
  19. Yuan, Z., Yun, L., Hai, L., Wai, T. Exosomes: biogenesis, biologic function and clinical potential. Cell Biosci. 9, 19(2019).
  20. Kehinde, R. MiR equal than others: MicroRNA enhancement for cutaneous wound healing. J Cell Physiol. 236 (12), 8050-8059 (2021).
  21. Lei, Z., et al. Exosomes from microRNA-126 overexpressing mesenchymal stem cells promote angiogenesis by targeting the PIK3R2-mediated PI3K/Akt signalling pathway. J Cell Mol Med. 25 (4), 2148-2162 (2020).
  22. Cheng, Y., et al. Milk exosomes-mediated miR-31-5p delivery accelerates diabetic wound healing through promoting angiogenesis. Drug Deliv. 29 (1), 214-228 (2022).
  23. Yuan, G., Yan, J., Jin, H., Zuo, H., Qian, T. Moist exposed burn ointment accelerates diabetes-related wound healing by promoting re-epithelialization. Front Med (Lausanne). 9, 1042015(2023).
  24. Ming, S., et al. Combined application of moist exposed burn ointment and maggot therapy in wound healing. J Wound Care. 31 (Sup10), S41-S52 (2022).
  25. Qian, T., et al. Moist exposed burn ointment promotes cutaneous excisional wound healing in rats involving VEGF and bFGF. Mol Med Rep. 9 (4), 1277-1282 (2014).
  26. Xiao, Q., et al. Role of Hydrogen Sulfide in the Development of Colonic Hypomotility in a Diabetic Mouse Model Induced by Streptozocin. J Pharmacol Exp Ther. 384 (2), 287-295 (2022).
  27. Jia, Z., et al. Hydrogel plus growth factors treatment after 2940nm erbium:YAG lattice laser improves periorbital wrinkles and wound healing: a case report. J Int Med Re.s. 49 (9), 3000605211042506(2021).
  28. Hina, K., et al. Comparative proteomics evaluation of plasma exosome isolation techniques and assessment of the stability of exosomes in normal human blood plasma. Proteomics. 13 (22), 3354-3364 (2013).
  29. Yi, H., et al. Exosomes derived from pioglitazone-pretreated MSCs accelerate diabetic wound healing through enhancing angiogenesis. J Nanobiotechnology. 19 (1), 150(2021).
  30. Ai, Z., et al. Effects of Moist Exposed Burn Therapy and Ointment (MEBT/MEBO) on the autophagy mTOR signalling pathway in diabetic ulcer wounds. Pharm Biol. 58 (1), 124-130 (2020).
  31. Nina, D., et al. Updates in Diabetic Wound Healing, Inflammation, and Scarring. Semin Plast Surg. 35 (3), 153-158 (2021).
  32. Dimitrios, B., Ioanna, E., Aristidis, V. Pathogenesis and treatment of impaired wound healing in diabetes mellitus: new insights. Adv Ther. 31 (8), 817-836 (2014).
  33. Heng, G., et al. Metal-polyphenol nanocomposite hybrid hydrogel: A multifunctional platform for treating diabetic foot ulcers through metabolic microenvironment reprogramming. Biomaterials. 322, 123414(2025).
  34. Elof, E., et al. Chronic wounds: Treatment consensus. Wound Repair Regen. 30 (2), 156-171 (2022).
  35. Elena, T., Andreas, B., Hannes, R., Andreas, R., Stefan, R. B. Current aspects in the pathophysiology and treatment of chronic wounds in diabetes mellitus. Biomed Res Int. 2013, 385641(2013).
  36. Jamie, L. B., Wyant, W. A., Beatriz, A. A., Robert, S. K., Ivan, J. Diabetic Wound-Healing Science. Medicina (Kaunas). 57 (10), 1072(2021).
  37. Xin, Z., Yan, G., Kun, Y., Peng, L., Jun, W. The signaling pathways of traditional Chinese medicine in promoting diabetic wound healing. J Ethnopharmacol. 282, 114662(2021).
  38. Vilelmine, J. C., Evangelia, G. T., Georgia, C. S., Fotini, N. A., John, D. I. Comparing oil based ointment versus standard practice for the treatment of moderate burns in Greece: a trial based cost effectiveness evaluation. BMC Complement Altern Med. 11, 122(2011).
  39. Hong, Z., Qing, S., Lei, Y., Jia, C. Clinical Study of MEBO Combined with Jinhuang Powder for Diabetic Foot with Infection. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5531988(2021).
  40. Ya, T., Xiao, L., Lei, J. Simultaneous Determination of 12 Components in Moist Exposed Burn Ointment by HPLC. China Pharm. 31 (16), 73-77 (2022).
  41. Wei, L., Yu, M., Qi, Y., Yu, P., Qing, M. Moist exposed burn ointment for treating pressure ulcers: A multicenter randomized controlled trial. Medicine (Baltimore). 96 (29), e7582(2017).
  42. Qing, H., et al. Vps4A mediates the localization and exosome release of β-catenin to inhibit epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma. Cancer Lett. 457, 47-59 (2019).
  43. Zhi, W., et al. Extracellular vesicles in fatty liver promote a metastatic tumor microenvironment. Cell Metab. 35 (7), 1209-1226 (2023).
  44. Sathish, M., Asawari, B., Rashmi, J., Naveen, J., Madhan, J. Exosomal therapy-a new frontier in regenerative medicine. Stem Cell Investig. 8, 7(2021).
  45. Sonam, G., Dany, P., Loukia, T. o, Julien, B. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Commun Signal. 19 (1), 47(2021).
  46. Roi, I., Felipe, C. R., Wei, Y., Jerrold, M. O. Exosomes as mediators of intercellular crosstalk in metabolism. Cell Metab. 33 (9), 1744-1762 (2021).
  47. Xiao, Z., et al. The function and clinical application of extracellular vesicles in innate immune regulation. Cell Mol Immunol. 17 (4), 323-334 (2020).
  48. Li, C., Shu, S., Song, W. LncRNA SNHG16 Knockdown Promotes Diabetic Foot Ulcer Wound Healing via Sponging MiR-31-5p. Tohoku J Exp Med. 261 (4), 283-289 (2023).
  49. Ai, S., Ning, S., Xiao, L., Zhen, H. Circ-FBXW12 aggravates the development of diabetic nephropathy by binding to miR-31-5p to induce LIN28B. Diabetol Metab Syndr. 13 (1), 141(2021).
  50. Wei, X., Ya, L., Ying, Z., Zhi, Y. Identification of miRNA-mRNA Regulatory Networks Associated with Diabetic Retinopathy using Bioinformatics Analysis. Endocr Metab Immune Disord Drug Targets. 23 (13), 1628-1636 (2023).
  51. Fei, W., et al. MicroRNA-31 Can Positively Regulate the Proliferation, Differentiation and Migration of Keratinocytes. Biomed Hub. 5 (2), 93-104 (2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

PCRWestern BlotRab27a
הסרטון יגיע בקרוב
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.