Method Article

תפקיד מגן העצם של Bupleurum במודל חולדה של אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר

DOI:

10.3791/68675

⸱

August 22nd, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1YouJiang Medical University for Nationalities, 2Affiliated Hospital of YouJiang Medical University for Nationalities, 3ShenZhen International Travel Health Care Center (ShenZhen Customs Port Clinic)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במחקר זה, השתמשנו במודל חולדה עם שחלות של אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר כדי להדגים כי נוזל הפה Bupleurum (Chai hu) משפר את מבנה המיקרו של העצם על ידי דיכוי גורמים פרו-דלקתיים ושיפור גורמים אנטי דלקתיים. זה מצביע על כך שהמנגנון האנטי דלקתי שלו מפחית חלקית אוסטאופורוזיס הנגרמת על ידי מחסור באסטרוגן.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול נועד לחקור את ההשפעות של מתן צ'אי הו על אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר בחולדות שעברו כריתת שחלות (OVX). נקבות חולדות Sprague-Dawley בנות שמונה שבועות עברו כריתת שחלות דו-צדדית באמצעות הגישה הגבית כדי לבסס מודל אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר. מינונים שונים של נוזל צ'אי הו דרך הפה ניתנו על ידי גבאז' דרך הפה במשך 12 שבועות רצופים, ולאחר מכן הערכות של מיקרו-מבנה העצם ומדידות של רמות ציטוקינים דלקתיים. טיפול בצ'אי הו במינון בינוני וגבוה עיכב חלקית אובדן עצם, הפחית את ביטוי הציטוקינים הפרו-דלקתיים והגביר את רמות הציטוקינים האנטי דלקתיים בחולדות OVX. נצפתה ירידה משמעותית בחומרת הרס העצם ממינונים נמוכים לגבוהים, ונצפו שיפורים הקשורים למינון בשחזור מיקרו-מבני של העצם. צ'אי הו מיתן אובדן עצם שנגרם כתוצאה ממחסור באסטרוגן והידרדרות מיקרו-מבנית, ובכך דיכא את התקדמות הזרחן האורגני במודל OVX זה. סביר להניח שזה נבע מההשפעות האנטי דלקתיות של המסלולים המעורבים.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אוסטאופורוזיס (OP) היא מחלת עצם מטבולית שכיחה המאופיינת בירידה במסת העצם, ירידה בחוזק העצם והרס מיקרו-ארכיטקטורת עצם1. OP יכול להתבטא כראשוני או משני, ו-OP ראשוני מסווג כ-OP לאחר גיל המעבר (PMOP), OP סנילי ו-OP אידיופטי (המופיע לעתים קרובות אצל מתבגרים). ביניהם, PMOP מסוג I מתרחש בעיקר אצל נשים PM, שם יש ירידה ניכרת בצפיפות העצם לאחר גיל המעבר עקב ירידה ברמות האסטרוגן2 במחזור הדם. זוהי מחלת עצם מטבולית מערכתית, המביאה לפעילות מוגברת של אוסטאוקלסטים ולהתמיינות אינטנסיבית3. בנוסף, עוצמת ספיגת העצם גדולה בהרבה מהיווצרותה, וכתוצאה מכך ירידה במסת העצם וכן שבריריות עצם מוגברת וסיכון לשבר4.

מחקרים עדכניים מצאו כי מחלות דלקתיות כרוניות רבות, כגון דלקת מפרקים ניוונית ודלקת חניכיים, קשורות לאובדן עצם משמעותי, מה שמצביע על כך שדלקת עשויה להיות קשורה קשר הדוק לזרחניםאורגניים 5. ככל שנשים מזדקנות, בנוסף לשינויים אנדוקריניים, התפקודים הפיזיולוגיים והחיסוניים יורדים, והגוף נותר במצב של דלקת כרונית לפרקי זמן ארוכים. רבים מהגורמים מקדמי הדלקת הללו וציטוקינים שמקורם בתאי T ממלאים תפקידים חשובים באובדן עצם. לכן, PMOP מוכר גם כמחלה דלקתית כרונית 6,7.

לרפואה הסינית המסורתית יש היסטוריה ארוכה וניסיון קליני עשיר במניעה וטיפול ב-PMOP, תוך התמקדות בניהול הוליסטי ואבחון וטיפול פרטני, ויכולה לווסת את המערכת האנדוקרינית והחיסונית בו זמנית, וזו ברכה לנשים לאחר גיל המעבר8. זה מאפשר לחלק גדול מהנשים גישה לטיפול רפואי. מחקרים פרמקולוגיים מודרניים וניסויים קליניים הראו כי לרפואה הסינית המסורתית יש יתרונות של ריבוי מטרות, רעילות נמוכה ותופעות לוואי, והיא זולה. ניתן להפחית מאוד את הסיכון לסיבוכים בטיפול ברפואה הסינית המסורתית ב-PMOP9.

לצ'אי הו עצמו יש תכונות אנטי דלקתיות10 ונוגדות דיכאון11, והוא יכול לווסת את הפרשת ההורמונים בגוף12 כמו גם לסייע לבריאות טובה13. צ'אי הו הוא המרכיב העיקרי הממלא תפקיד מרכזי בנוסחת תרכובת הרפואה הסינית המסורתית, גלולות שיאויאו, אשר משפיעות על הרגעת רגשות, קידום עיכול וספיגה בקיבה ובמעיים. הוא ידוע גם בחידוש הצ'י ואנרגיית הדם וכן בוויסות הסימפטומים של המחזור החודשי ואי הנוחות הנלווית אליו14. המרכיב העיקרי של צ'אי הו הוא צ'אי הו ספונין, בעל פעילות אנטי דלקתית חזקה, המתבטאת בעיקר בעיכוב ביטוי של ציטוקינים פרו דלקתיים, כגון גורם נמק גידול α (TNF-α), אינטרלוקין 1β ו- IL-615. בנוסף, הוא משפר את הביטוי של ציטוקין אנטי דלקתי, IL-10, ובכך מקל על דלקת, כגון קוליטיס, אנדומטריטיס והפטיטיס16.

בהשוואה לטיפולים סטנדרטיים של זרחנים אורגניים (כולל שימוש בביספוספונטים17, מודולטורים סלקטיביים של קולטני אסטרוגן18 ודנוסומאב19), לצ'אי הו, כרפואה סינית מסורתית נפוצה, יש יתרון פוטנציאלי של מנגנון פעולה רב-רכיבי ורב-מטרה. טיפולים סטנדרטיים מכוונים בדרך כלל למסלולים מטבוליים ספציפיים של העצם20 (עיכוב פעילות אוסטאוקלסטים), שעשויים להיות קשורים לתופעות לוואי מסוימות כגון אי נוחות במערכת העיכול, סיכון מוגבר לאוסטאונקרוזיס של הלסתות ותסמינים דמויי שפעת, כמו גם עלויות תרופות גבוהות לטווח ארוך21.

סקירת הספרות הרלוונטית מצאה כי השימוש בצ'אי הו להתערבות בחולדות PM עם זרחנים אורגניים יכול להיות בעל השפעות טיפוליות מקלות22. לפיכך, בהתבסס על ביואינפורמטיקה וניתוח פרמקולוגי כמו גם סימולציה של עגינה מולקולרית לחיזוי אתרי עגינה23, שיערנו כי צ'אי הו יכול להתערב בתהליך הדלקתי, לווסת את המצב החיסוני של הגוף ולשחזר את ההומאוסטזיס החיסוני של העצם. אלה יעדיפו את יציבות מצב שחזור העצם וישיגו את האפקט הטיפולי הרצוי של הקלה על OP.

במחקר זה נעשה שימוש במתן נוזל דרך הפה של צ'אי הו (ריכוז: 1 גרם/מ"ל) במשך 12 שבועות רצופים. משטר המינון תוכנן על סמך מינונים נפוצים קלינית ברפואה הסינית המסורתית ובמחקרים פרמקוקינטיים24.

המטרה הכוללת של שיטת מתן זו היא לבסס פרוטוקול מינון יציב ורלוונטי מבחינה קלינית, ובכך להעריך באופן שיטתי את השפעת ההתערבות המתמשכת של צ'אי הו במודל המטרה (מודל עכברוש של אוסטאופורוזיס לאחר גיל המעבר). גישת ניהול זו מבטיחה שהתרופה שומרת על ריכוז פלזמה יעיל לאורך כל תקופת הניסוי, ומספקת בסיס התערבות אמין להערכות הבאות (כגון מדדי חילוף חומרים בעצמות ורמות גורמים דלקתיים). יתר על כן, הוא מסייע להבהיר את תפקידו של צ'אי הו במחלות קשורות כמו גם את יחסי המינון-השפעה שלו, תוך שהוא מציע פרדיגמת התייחסות לניהול סטנדרטי של תרופות סיניות מסורתיות במחקר ניסיוני.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הליכי הניסוי הקשורים לבעלי חיים נערכו בהתאם למדריך ה-NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (מהדורה 8) ואושרו במיוחד על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית ללאומים של יו-ג'יאנג (אישור מס' 2024071001).

1. ניתוח פרמקולוגיה של רשת

הערה: סייברפרמקולוגיה היא גישה המשלבת ביולוגיה מערכתית, ביולוגיה חישובית ופרמקולוגיה ומטרתה להבין את מנגנון הפעולה של תרופות ואינטראקציות בין תרופות על ידי ניתוח רשתות ביומולקולריות25.

  1. סנן תרכובות פעילות עם זמינות ביולוגית אוראלית טובה (OB) ודמיון לתרופות (DL) באמצעות כלים כגון פלטפורמת מסד הנתונים והניתוח הפרמקולוגיה של מערכות הרפואה הסינית המסורתית (TCMSP: http://ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php). הגדר את ה-OB על ≥30%, ואת ה-DL על ≥0.1826. חפש צ'אי הו ולחץ על פרטי עשב והורד את כל הנתונים המורכבים. תן שם לקובץ שהורדת Chaihu.
  2. השג את שם היעד של מרכיב הליבה על ידי הדבקת מזהה MOL של מרכיב הליבה במסד הנתונים של TCMSP. הדבק בחיפוש אצווה של TCMSP ובחר חיזוי יעד ולאחר מכן לחץ על שלח.
  3. פתח את מסד הנתונים של UniProtsh, העתק את העמודה שם יעד לחיפוש ומצא את שם החלבון המודגש, שהוא זהה לחלוטין לשם חלבון היעד המודבק. לאחר מציאת שם החלבון המתאים, אסוף את שמות הגנים המתאימים בעמודה שאחריו.
  4. סנן את הגנים הקשורים לאוסטאופורוזיס במאגר GeneCards (https://www.genecards.org) לפי ציון הרלוונטיות ≥ 1 וקבל את כל הגנים (5741)27.
    הערה: הסיבות לבחירת גנים עם ציון רלוונטיות ≥ 1 ממסד הנתונים של GeneCards הן כדלקמן: ציון ≥ 1 מצביע על כך שלגן יש קשרים מתועדים עם מחלת המטרה, ומבדיל בבירור בינו לבין גנים ללא אסוציאציות מדווחות (ציון = 0). סף זה מבטיח שימור גנים בעלי רלוונטיות אמינה למחלה תוך הימנעות מהתערבות מוגזמת של גנים לא קשורים. סף נמוך יותר (<1) עשוי לכלול גנים ללא אסוציאציות מאומתות, ובכך להגדיל את התוצאות החיוביות השגויות.
  5. השג את הגנים המצטלבים לאחר שילוב מערכי גנים הקשורים למחלה עם מטרות תרופות להצטלבות. בהתבסס על האינטראקציות בין מטרות מחלה וחומרים פעילים בתרופות, בנה רשת צומת של רפואה סינית מסורתית-חומר פעיל-מטרה-מחלה באמצעות תוכנת Cytoscape.
  6. השג מידע על אינטראקציה בין חלבון לחלבון (PPI) באמצעות מסד הנתונים של המחרוזת (https://cn.string-db.org/) ובנה רשת PPI. פתח את Cytoscape (https://www.cytoscape.org), טען את קובץ ה- TSV שהורדת ברשת ההעלאה ולאחר מכן בחר חשב > TOP10 או TOP20 ולחץ על שלח.
  7. צור שתי טבלאות לייבוא ל- Cytoscape. צור קובץ גיליון אלקטרוני בשם רשת. בעמודה A, הזן את אותם מזהי MOL (CH1, CH2...) שהוחלפו בקיצור של הרפואה הסינית המסורתית. סמן את עמודה B כמזהה MOL ומיין אותה בסדר עולה לפי מזהי MOL. סמן את עמודה C כסימן. העתק מזהי רכיבים (מזהי MOL) ושמות גנים מקבצים הקשורים לצ'איהו לעמודות B ו-C, בהתאמה. לאחר מכן מחק את עמודה B ושנה את שמה של עמודה A למזהה MOL.
  8. הרחבת הטבלה לסוף הטקסט. בעמודה סמל, הזן את מזהי MOL (CH1, CH2...), שהוחלפו בקיצור של הרפואה הסינית המסורתית. בעמודה MOL ID, הזן את הקיצור של הרפואה הסינית המסורתית: CH. עם השלבים לעיל, השלמת המידע ובניית רשת הרפואה הסינית המסורתית - רכיב - יעד הושלמו.
  9. לאחר מכן, בצע את הטופס השני, קובץ TYPE. צור גיליון אלקטרוני חדש ותן לו את השם TYPE. סמן את עמודה A כמונח ואת עמודה B כ- TYPE. העתיקו את שם הגן לעמודת המונחים ותנו לו את תכונת הגן בעמודת הסוג (המטרה היא לחפש את הגן; כל שמות הגנים ייבחרו, כך שיהיה קל לתפעול). הזן את המרכיבים בעמודה מונח ותן למרכיב את התכונה תרופה1.
  10. ייבא לתוכנת Cytoscape. ייבא רשת כדי להעלות את קובץ הרשת וייבא טבלה כדי להעלות את קובץ הסוג. בתיבת החיפוש, הקלד גן, הקש Enter, כך שכל הגנים ייבחרו, משוך את הגנים שנבחרו שמאלה ולאחר מכן לחץ על Layout > Attribute() > Selected (בחר עגול או מרובע בסוגריים).
  11. לשלב את התוצאות של ניתוח פרמקולוגיה ברשת עם נתונים ניסיוניים כדי לזהות את התרכובות העיקריות והמנגנונים המולקולריים של פעולת התרופה.

2. עגינה מולקולרית

הערה: עגינה מולקולרית היא טכניקה חישובית לחיזוי מצב הקישור האופטימלי והזיקה בין מולקולה קטנה (ליגנד) לחלבון מטרה או ביומולקולה28.

  1. הכנת קולטנים וליגנדים
    1. מקור קולטן (חלבון): השג את קובץ ה-PDB של חלבוני המטרה ממאגר נתוני החלבון RCSB (https://www.rcsb.org). חפש 3Q4B (דוגמה לקולטן IL-6), לחץ על הורד קבצים > תבנית PDB.
    2. הסר מולקולות מים קריסטלוגרפיות על-ידי לחיצה על ערוך > מחק > מים, יונים זרים וליגנדים לא חיוניים (שמור על גורמים משלימים קריטיים כגון יוני מתכת) על-ידי לחיצה על ערוך > מחק > הטרואטומים. הוסף אטומי מימן חסרים על ידי לחיצה על ערוך > מימן > הוסף. שמור כחלבון.pdbqt. על ידי לחיצה על ערוך > חיובים > מחשוב Gasteiger ולאחר מכן רשת > מקרומולקולה > בחר > שמור כ-PDBQT.
    3. מקור ליגנד (מולקולה קטנה): הורד את מבנה הליגנד מ-PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov). חפש ב-Saikosaponin A (CID:6443568), לחץ על 3D Conformer > הורד SDF.
    4. השתמש בתוכנת Open Babel כדי להמיר את קובץ Saikosaponin A בפורמט SDF לקובץ בפורמט PDB עם קונפורמציות תלת מימדיות באנרגיה נמוכה, וקרא לו saikosaponinA.
  2. הגדרת פרמטר עגינה (כלי עגינה אוטומטית)
    1. טען קבצי קולטנים וליגנד. ייבא את קובץ המולקולה הקטנה saikosaponin A ושמור אותו כקובץ PDBQT. לאחר מכן, טען את הקולטן והליגנד: לחץ על Docking > Macromolecule > Open, בחר IL6_receptor.pdbqt; ואז לחץ/י על Docking > Ligand > ״פתח״, בחר/י saikosaponinA.pdbqt.
    2. קביעת התצורה של תיבת הרשת: לחץ/ י על ״רשת״ >״תיבת רשת״, התאם/י את גודל התיבה כך שתקיף את האתר הפעיל במלואו (השתמש/י בחוגת הבקרה בחלונית השמאלית כדי לכוונן את העדין) ולאחר מכן שמור/י את ההגדרות הנוכחיות על-ידי לחיצה על ״קובץ״ > ״סגור את שמירת הנוכחי ״ ותן שם לקובץ grid.gpf.
    3. הגדרת תוכנית ההפעלה של AutoGrid: לחץ על הפעל AutoGrid, בחר את הקובץ grid.gpf ולאחר מכן לחץ על הפעל. לאחר מכן, הגדר את פרמטרי העגינה: ברצף, תחת תפריט העגינה, לחץ על מקרומולקולה ובחר את קובץ החלבון IL6_receptor.pdbqt; לחץ על Ligand ובחר את קובץ המולקולה הקטנה saikosaponin A.pdbqt; להגדיר אלגוריתם גנטי ולאשר אותו; התאם את פרמטרי העגינה ואשר אותם. לבסוף, בפלט, בחר את האלגוריתם Lamarckian (4,2), תן שם לקובץ dock.dpf ושמור אותו.
    4. הפעלת AutoGrid ושמירת התוצאות: לחץ על הפעל AutoDock, בחר את הקובץ dock.dpf והפעל את הסימולציה. בסיום, לחץ על כתוב מורכב, תן שם למבנה המורכב ושמור אותו בתבנית PDBQT.
  3. ניתוח תוצאות באמצעות PyMOL
    1. המר את קובץ פורמט PDBQT שהתקבל משלב העגינה המולקולרי הקודם לפורמט PDB באמצעות תוכנת Open Babel. לאחר מכן ייבא את קובץ פורמט PDB לתוכנת PyMOL לפעולות הדמיה עוקבות.
    2. אתר את הליגנד והפרד אותו בנפרד: לאחר בחירת הליגנד, שנה את צבעו על ידי לחיצה על Sele ולאחר מכן בחירת צבע מצבע. בעמודה Sele, לחץ על חלץ אובייקט תחת פעולה כדי לחלץ את הליגנד כאובייקט עצמאי חדש.
    3. מדידת מרחק קשרי מימן: בעמודת הסלה, לחץ על פעולה, מצא את אנשי הקשר הקוטביים ולחץ על לאטומים אחרים באובייקט; קשרי מימן יוצגו כקווים צהובים. לחץ על האפשרות מדידה בעמודה אשף, לחץ על האטומים בשני הקצוות של קשר המימן ברצף ולאחר מכן לחץ על בוצע כדי להשלים את המדידה.
  4. ייצוא התמונה: לחץ/י על ״ייצא תמונה כ-PNG ״ בקובץ. אם יש צורך ברינדור בחדות גבוהה, הזן ray 300 (פיקסלים ניתנים להתאמה) והקש Enter.

3. ניתוח מיקרו-CT

  1. יש להזריק לחולדות SD נקבות (בנות 32 שבועות, 320-350 גרם) תוך צפקית נתרן פנטוברביטל (40 מ"ג/ק"ג) להרדמה עמוקה, המאושר על ידי היעדר רפלקס קרנית (ללא מצמוץ במגע צמר גפן) ורפלקס כאב (ללא התכווצות הגפיים האחוריות לצביטת מלקחיים).
    1. בצע ניתוח בידוד גפיים אחוריות. המתת חסד של החולדות על ידי הזרקה תוך-צפקית של נתרן פנטוברביטל במינון פי 3-5 ממינון ההרדמה הכירורגית (40 מ"ג/ק"ג), הנח אותן על גב ובצע חתך רוחבי של 3 ס"מ, 1 ס"מ מעל סימפיזה הערווה לאורך הרצועה המפשעתית. לנתח בצורה בוטה את הפער בין שרירי הגרציליס והסרטוריוס כדי לחשוף את עורק הירך (מבנה צינורי פועם). קשרו את שני קצוות עורק הירך באמצעות תפרים 4-0, והשאירו קטע לא קשור ביניהם, לפני חיתוך הכלי במספריים עיניים ומעבר אליו.
    2. סובב את הגפה התחתונה פנימית כדי לעקור את ראש הירך מהאצטבולום ולחתוך את קפסולת המפרק והרצועה העגולה, תוך שמירה על שלמות ראש הירך. טבלו את הגפה האחורית השלמה במי מלח מקוררים מראש, ולאחר מכן קבעו בתמיסת פורמלדהיד 4% למשך 24-48 שעות.
  2. הגדרת הדמיה: העבירו את עצם הירך הקבועה למתקן לסריקת מיקרו-CT. הפעל את מכשיר ה-Micro-CT ובחר את התוכנית המוגדרת מראש לסריקת עצמות של בעלי חיים קטנים . השתמש בפרמטרי הסריקה הבאים: מתח רנטגן = 90 קילו וולט, זרם רנטגן = 80 μA, שדה ראייה (FOV) = 36 מ"מ, גודל פיקסל = 72.0 מיקרומטר, סיבוב = 360°, משך סריקה = 14 דקות.
  3. הנח את עצם הירך השמאלית של החולדה הקבועה במחזיק הדגימה, קבע את אפיפיזה הירך לצילום, הפעל את המכשיר והמתן להשלמת הבדיקה העצמית של המכונה. התחל סריקת תצוגה מקדימה (סריקה מהירה ברזולוציה נמוכה) כדי לאשר שהדגימה ממורכזת, ולאחר מכן התאם את אזור העניין כך שיכסה את כל עצם הירך.
  4. לאחר השלמת הסריקה והצילום, מקור אור הרנטגן יכבה אוטומטית. בשלב זה, ערך הקרינה בתוך המכונה עולה על התקן, ואסור בתכלית האיסור להוציא את הדגימה ללא ציוד מגן.
  5. ניתוח תמונה: ניתוח פרמטרים של העצם (צפיפות מינרלים בעצם, מספר טרבקולרי) באמצעות התוכנה המובנית של הסורק. שמור וייצא תמונות משוחזרות להערכה נוספת.

4. PCR כמותי בזמן אמת למיצוי RNA מרקמת עצם חולדה

  1. הסר את השרירים הדבקים והפאשיה מעצם הירך הימנית. חותכים 100-200 מ"ג רקמת עצם לחתיכות קטנות. הוסף 2-3 חרוזי טחינה ו-500 מיקרוליטר של מאגר מיצוי RNA. הומוגניזציה באמצעות מטחנת רקמות ב-70 הרץ למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס.
  2. הפרדת פאזה: לאחר הצנטריפוגה, התמיסה נפרדת לשלב מימי עליון (מכיל RNA) ומשקע כהה תחתון (מכיל חלבונים, DNA ופוליסכרידים). העבירו בזהירות 500 מיקרוליטר של הסופרנטנט לצינור חדש ללא RNase בנפח 1.5 מ"ל.
  3. עבד את התמיסה העליונה המתקבלת מהבידוד למיצוי RNA כולל בהתאם להוראות היצרן.
  4. לאחר הוספת איזופרופנול לתמיסת הליזיס, הפוך בעדינות את הצינור כדי לערבב את התמיסה ותן לו לעמוד בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. בצע בדיקה ויזואלית בשלב זה; אם נצפים משקעי RNA פלוקולנטיים לבנים (נצמדים לדופן הצינור), זה מצביע על כך ש-RNA שקע ביעילות.
  5. השתמש בקצה פיפטה של 200 מיקרוליטר כדי לשאוב נוזל שנותר. שמור את כדור ה-RNA הלבן בתחתית הצינור/דופן. השהה RNA ב-50-100 מיקרוליטר של מים נטולי RNase ואחסן בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס.
  6. מערבבים 2 מיקרוליטר של תבנית RNA, 10 מיקרוליטר של תערובת מאסטר, 2 מיקרוליטר של DNase ו-5 מיקרוליטר של מים נטולי נוקלאז בשפופרת נטולת נוקלאז. מערבבים בעדינות על ידי פיפטינג.
  7. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות כדי להסיר זיהום DNA גנומי. יש לדגור בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות. בתום התגובה, יש לדגור בטמפרטורה של 85 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות כדי לבטל את התגובה.
  8. הגדר את מערכת ה-PCR הכמותית של הקרינה בזמן אמת על ידי הנחת ה-DNA המתועתק הפוך על קרח. מערבבים מראש את כל הרכיבים: 10 מיקרוליטר של qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox), 0.4 מיקרוליטר כל אחד של פריימר קדימה ופריימר הפוך, ו-8.2 מיקרוליטר של מים ללא RNase, מחלקים ומוסיפים 1 מיקרוליטר של DNA, מניפולציות על קרח והגנה מפני אור.
  9. הפעל את תוכנית ה-qPCR באופן הבא: קדם-דנטורציה ב-95 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות, מחזור אחד ואחריו דנטורציה ב-95 מעלות צלזיוס למשך 10 שניות למשך 40 מחזורים. בצע חישול, הארכה, רכישת פלואורסצנטיות ב-60 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות למשך 40 מחזורים בערוץ SYBR Green. השג עקומת התכה לטמפרטורה מ-65-95 מעלות צלזיוס עם עלייה/צעד של 0.5 מעלות צלזיוס ו-5 שניות לשלב. הפריימרים המשמשים מסופקים בטבלה 1.

5. הכנת בעלי חיים

  1. השג 48 נקבות חולדות SD נוליפריות (בדרגת SPF, בגיל 8 שבועות, משקל גוף 200-220 גרם).
  2. לפני הליכי הניסוי, אקלום את כל החולדות עם תקופת הסגר של 7 ימים במתקן בידוד בדרגת SPF ובבית בסביבת מעבדה מבוקרת SPF (טמפרטורה: 22-24 מעלות צלזיוס, לחות: 45%-55%).

6. הכנת תרופת בדיקה

  1. השג נוזל דרך הפה של צ'אי הו (אישור מוצר רפואי לאומי מס' Z41021539 בסין). הפורמולה מכילה צ'אי הו (מקור צפוני) כמרכיב הפעיל, עם חומרי עזר הכוללים חומר טעם, סוכרוז ופרופילן גליקול. כל בקבוקון של 10 מ"ל מכיל תמצית שוות ערך ל-10 גרם עשב גולמי.

7. הכנת מודל חולדה עם שחלות

  1. הכנה לפני הניתוח: חולדות מהירות למשך 12 שעות עם גישה אד ליביטום למים. בצע עיקור מכשירים על ידי חיטוי כל כלי הניתוח.
  2. הרדמה והכנה: מתן נתרן פנטוברביטל בהזרקה תוך צפקית (40 מ"ג/ק"ג). בדוק את עומק ההרדמה על ידי הערכת היעדר רפלקס בקרנית (ללא מצמוץ במגע בקרנית עם צמר גפן) והיעדר רפלקס צביטה בבוהן (ללא נסיגת גפיים אחוריות בהידוק). לאחר 15-20 דקות, יש לגלח את מקום הניתוח, לחטא ביוד ולכסות בווילון מעוצב. יש למרוח משחת עיניים ויטמין A (המכילה 15,000 יחב"ל/גרם) במהלך הניתוח כדי למנוע התייבשות של עיני בעל החיים (טבלה 2).
  3. מודל חולדה שחלתית: בצע את הניתוח בחדר ניתוח סטרילי ייעודי. כל אנשי הצוות לבשו חלוקי בידוד מלאים. נגב את השיש והציוד שמסביב עם 75% אתנול (טבלה 2) לפני הניתוח, והפעל את המנורות האולטרה סגולות למשך 30 דקות לפחות כדי לחסל חיידקים באוויר ועל משטחים.
    1. בצע חתך של 1 ס"מ על עור הגב, נתח בצורה בוטה את הרקמה התת עורית, צבט את שכבת השריר ובצע חתך של 1 ס"מ. אתר את כרית השומן והוציא אותה החוצה כדי לזהות את השחלה (בצבע אדום בוהק). קשרו את החצוצרה בתפר 4-0, כרתו את רקמת השחלה והכניסו אותה לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל המכיל 4% פרפורמלדהיד (טבלה 2).
  4. סגירת הפצע וחיטוי: יש לפזר אבקת פניצילין על הפצע לפני התפירה. יש לתפור את שכבת השריר בתפר מס' 6 שאינו נספג ולסגור את העור בתפר מס' 2. יש לחטא את החתך הסגור ביוד ולמרוח אבקת פניצילין מקומית.
  5. טיפול לאחר הניתוח: הניחו חולדות בכלובים טריים עם בקבוקי מים חמים ומגבות כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. בעלי חיים מהירים (מותרים במים) למשך 24 שעות לאחר הניתוח למניעת חסימת מעיים. מרחו אבקת פניצילין על מקום החתך מדי יום במשך 3 ימים רצופים.
    1. יש להזריק לידוקאין (ריכוז של 1%-2%, מקסימום 5 מ"ג/ק"ג) סביב החתך הניתוחי כדי להפחית את הכאב המיידי לאחר הניתוח. ספק משככי כאבים רציפים למשך 3-5 ימים, צמצם את המינון בהדרגה על סמך חומרת הכאב כדי למנוע הפסקה פתאומית.
    2. שמור את החיה במצב רוחבי או עם הראש למטה לפני ההתעוררות כדי למנוע נפילת לשון וחסימת דרכי הנשימה; אפשר מיקום נוח אוטונומי לאחר ההתעוררות. בודדו חיות לאחר הניתוח מאחרות עד להחלמה מלאה כדי להימנע מלחימה או זיהום צולב (איור 1).

8. קיבוץ ניסיוני ומתן תרופות

  1. הקצאת קבוצות: חלקו בסך הכל 40 חולדות SD לחמש קבוצות (n = 8 לקבוצה), כלומר, בקרה רגילה, בקרת מודל, צ'אי הו בריכוז נמוך, צ'אי הו בריכוז בינוני וצ'אי הו בריכוז גבוה.
  2. עבור קבוצת המינון הבינוני (5 מ"ל/ק"ג), בחר את המינון על סמך ההנחיות שנמצאוב-29,30. עקוב אחר מנת שיפוע ריכוז של 1:2:4 לקבוצת ריכוז נמוך: 2.5 מ"ל/ק"ג, קבוצת ריכוז בינונית: 5 מ"ל/ק"ג וקבוצת ריכוז גבוהה: 10 מ"ל/ק"ג.
  3. מתן תרופה: השתמש בגבאז' דרך הפה ומתן התרופה פעם ביום. עבור קבוצת הביקורת הרגילה וקבוצת הביקורת המודל (בעלי חיים שעברו כריתת שחלות דו-צדדית), בצע גבאז' דרך הפה עם כמות שווה של מי מלח. יש להתחיל את הטיפול בשבוע 1 לאחר הניתוח ולהמשיך במשך 12 שבועות.

9. ניתוח ואיסוף נתונים לאחר הניסוי

  1. בצע את הניתוחים הבאים על חמש קבוצות בעלי חיים: מיקרו-CT של מבנה העצם וקביעת ביטוי mRNA ציטוקינים דלקתיים ברקמות הירך של חולדות.
  2. לאסוף נתונים הכוללים תמונות חזותיות של מיקרו-מבנה טרבקולרי של עצם הירך; פרמטרים כמותיים של עצם (כולל צפיפות מינרלים בעצם, שבר נפח עצם, סטיית תקן בעובי טרבקולרי, מרווח טרבקולרי, מספר טרבקולרי וצפיפות קישוריות); ורמות ביטוי mRNA יחסיות של ציטוקינים פרו-דלקתיים (IL-6, IL-17) וציטוקינים אנטי דלקתיים (IL-4, IL-10) ברקמות הירך.
  3. בצע ניתוחי נתונים באמצעות תוכנת GraphPad Prism 10.1.2 על ידי ניתוח שונות חד כיווני (ANOVA). מובהקות סטטיסטית להבדלים בממוצע בין קבוצות הוגדרה כ-p < 0.05. השוואות מרובות לאחר מכן בוצעו באמצעות המבחן של Tukey.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פונקציית GO וניתוח העשרה במסלול KEGG

הסתמכנו על ניתוח העשרה GO ו-KEGG בביואינפורמטיקה כדי לחזות את מנגנון הפעולה הפוטנציאלי של צ'אי הו על PMOP. ניתוח העשרת GO של גני מטרה המצטלבים עם החומרים הפעילים של צ'אי הו למחלות הניב 2138 ערכים משמעותיים, ועשר התוצאות המשמעותיות ביותר רשומות עבור כל קבוצה (איור 2D). בהתייחס לתהליכים ביולוגיים (איור 2A), הגנים המצ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PMOP היא הפרעה מערכתית בחילוף החומרים של העצם המתרחשת לעתים קרובות אצל נשים PM, והיא נגרמת על ידי מחסור באסטרוגן שגורם להפרעה באיזון האוסטיאובלסטים-אוסטאוקלסטים, מה שמוביל לספיגת עצם אוסטאוקלסטים מוגברת ולירידה בייצור העצם של אוסטאובלסטים31. מספר הולך וגדל של מחקרים הראו כי רמות הגורמים הדלקתיים בגוף משפיעות גם על ההבחנה בין אוסטאוקלסטים לאוסטאובלסטים, וכי ביטוי יתר של גורמים פרו-דלקתיים תורם להתמיינות של אוסטאוקלסטים32. באופן דומה, ביטוי י...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין ניגוד אינטרסים.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית המחקר המדעי והפיתוח הטכנולוגי של בייס סיטי, ופרויקט שיפור היכולת הבסיסית של מורים צעירים ומבוגרים בגיל העמידה באוניברסיטאות גואנגשי לשנת 2025 (פרויקט מס': 2025KY0549). המחברים מודים לד"ר דב סוראנה מאימפריאל קולג' בלונדון ול-YMUN על עריכת כתבי היד. ZY ו-LYR תרמו באותה מידה לעבודה זו.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
הזרקת 0.9% נתרן כלורי Huarenpharmaceuticalh1712059
1 ופעמים; PBS תרמופישר10010023
75% אלכוהול נאנג'ינגריאגנטC069156931
95% אתנול נאנג'ינגריאגנטC0691520075
אתנול נטול מיםמקליןE809056
Bupleurum chinense הנאן באיקוואן בית מרקחת ושות 'Z41021539
תמיסת הסרת אבדן סולארביוE1171
משחת אריתרומיצין גואנגג'ואו Baiyunshan פרמצבטיקה חברה בע"מ Baiyunshan Hejigong מפעל תרופותH44023088
איזופרופיל אלכוהול ג'ינאן ג'ינריהה כימיקלים ושות'23727-29-9
כמוסות אשלגן פניצילין Vסצ'ואן פרמצבטיקהH20103156
פוליפורמלדהיד (CH2O)nביוטייםעמ' 0099
חומר חיטוי פובידון-יוד גואנגדונג הנגג'יאן פרמצבטיקה ושות'H44023924
ערכת PCR פלואורסצנטית בזמן אמתיאסן ביוטכנולוגיהברקוד 11201ES03
ערכת מיצוי RNAמונאדביוטקMI20201S
ערכת שעתוק הפוך של RNAYuGongBiotechEG15123S
נתרן פנטוברביטל שנחאי Jixiang ביוטכנולוגיה ושות'JX082085
טריזול תרמופישרברקוד 15596026CN

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. An, H., et al. Hyperoside alleviates postmenopausal osteoporosis via regulating mir-19a-5p/il-17a axis. Am J Reprod Immunol. 90 (1), e13709(2023).
  2. Wang, S., et al. Alginate oligosaccharide alleviates senile osteoporosis via the RANKL-RANK pathway in d-galactose-induced c57bl/6j mice. Chem Biol Drug Des. 99 (1), 46-55 (2021).
  3. Jiang, N., Qi, B., Li, G., Yao, L., Fan, X. Morin improves the bone histomorphology and biochemical markers in an animal model of ovariectomy-induced osteoporosis by suppressing autophagy and apoptosis. Food Sci Nutri. 12 (12), 10099-10109 (2024).
  4. Ramchand, S. K., Leder, B. Z. Sequential therapy for the long-term treatment of postmenopausal osteoporosis. J Clin Endocrinol Metab. 109 (2), 303-311 (2024).
  5. Juluri, R., et al. Association of postmenopausal osteoporosis and periodontal disease: A double-blind case-control study. J Int Oral Health. 7 (9), 119-123 (2015).
  6. Zhang, C., et al. Oxidative stress: A common pathological state in a high-risk population for osteoporosis. Biomed Pharmacother. 163, 114834(2023).
  7. Mansoori, M. N., et al. IL-18bp is decreased in osteoporotic women: Prevents inflammasome-mediated IL-18 activation and reduces Th17 differentiation. Sci Rep. 6, 33680(2016).
  8. Shanshan, J., Baorong, H., Tianyuan, C., Xiaoqiang, H. Research progress of Chinese medicine in treating postmenopausal women with osteoporosis. Front Med Sci Res. 5 (10), 92-98 (2023).
  9. Faiella, E., et al. Percutaneous vertebroplasty: A minimally invasive procedure for the management of vertebral compression fractures. Osteology. 2 (4), 139-151 (2022).
  10. Yue, L. C., et al. Correction: Saikosaponin d exerts an antidepressant effect by regulating Homer1-mGluR5 and mTOR signaling in a rat model of chronic unpredictable mild stress. Chinese Med. 18 (1), 147-147 (2023).
  11. Yue, T., Ge, Z., Ruonan, S., Hanqing, W., Nan, Z. Saikosaponin a activates tet1/dll3/notch1 signalling and promotes hippocampal neurogenesis to improve depression-like behavior in mice. J ethnopharmacol. 319 (P3), 117289-117289 (2023).
  12. Xuedong, A. N., et al. Shugan jieyu capsule improve sleep and emotional disorder in coronavirus disease 2019 convalescence patients: A randomized, double-blind, placebo-controlled trial. J Tradit Chin Med. 42 (5), 803-809 (2022).
  13. Ying, H. S. H. Experience of professor huang ying in treating postmenopausal syndrome by chaihu guizhi decoction. J Trad Chinese Med. 38 (23), 4557-4560 (2023).
  14. Yang, Y. X., et al. Studies on the anti-inflammatory effect of xiaoyao pills in the treatment of postmenopausal osteoporosis in mice. J Vis Exp. (210), e67051(2024).
  15. Wu, S. J., Tam, K. W., Tsai, W. H., Chang, C. C., Chao, J. C. Curcumin and saikosaponin a inhibit chemical-induced liver inflammation and fibrosis in rats. Am J Chin Med. 38 (1), 99-111 (2010).
  16. Zhou, Q. R., Chen, M. Y., Wang, M. D. Treatment of chronic endometritis by penning granule: A clinical randomized controlled trial. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 36 (9), 1055-1060 (2016).
  17. Weibing, J., Yankun, D., Jinxin, Z., Suqin, D. Clinical efficacy and safety evaluation of calcitriol combined with bisphosphonates in the therapy of postmenopausal osteoporosis: Based on a retrospective cohort study. BioMed Res Int. 2022, 2711938-2711938 (2022).
  18. Hussain, I., Talaulikar, V. S. A systematic review of randomised clinical trials - the safety of vaginal hormones and selective estrogen receptor modulators for the treatment of genitourinary menopausal symptoms in breast cancer survivors. Post Reprod Health. 29 (4), 222-231 (2023).
  19. Anastasilakis, A. D., et al. Follistatins, activins and inhibins during osteoporosis therapy with denosumab or zoledronate and after their discontinuation. Diabetes Obesity Metab. 27 (4), 2288-2293 (2025).
  20. Si, Y., et al. Curcumin-encapsulated exosomes in bisphosphonate-modified hydrogel microspheres promote bone repair through macrophage polarization and DNA damage mitigation. Materials Today Bio. 32, 101874-101874 (2025).
  21. Shouguo, L. Clinical observation of qiangjin zhuangji decoction combined with denosumab in the treatment of postmenopausal osteoporosis. , (2024).
  22. Yeom, M., Kim, E. Y., Kim, J. H., Jung, H. S., Sohn, Y. High doses of bupleurum falcatum partially prevents estrogen deficiency-induced bone loss with anti-osteoclastogenic activity due to enhanced inos/no signaling. Front Pharmacol. 9, 1314(2018).
  23. Lu, L., Yinliang, X., Liu, Y., Zhenzhong, J., Xiaoyan, L. Analysis of the mechanism of action of euphorbia fischeriana steud on cirrhosis based on network pharmacology. Medicine. 102 (37), e35118(2023).
  24. Nan, L. S. HPLC-UV for the determination of plasma concentration of saikosaponin C in rats' serum. Info Trad Chin Med. 32 (02), 66-68 (2015).
  25. Sakle, N. S., More, S. A., Mokale, S. N. A network pharmacology-based approach to explore potential targets of caesalpinia pulcherima: An updated prototype in drug discovery. Sci Rep. 10 (1), 17217(2020).
  26. Ru, J., et al. Tcmsp: A database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminformatics. 6, 13(2014).
  27. Bowen, Y., Qiuwen, Z., Xiaodong, W., Jingxin, M., Shuqing, Z. Using network pharmacology and molecular docking verification to explore the mechanism of ursolic acid in the treatment of osteoporosis. Medicine. 101 (49), e32222(2022).
  28. Belghalia, E., et al. In silico research on new sulfonamide derivatives as brd4 inhibitors targeting acute myeloid leukemia using various computational techniques, including 3D-QSAR, HQSAR, molecular docking, ADME/Tox, and molecular dynamics. J Biomol Struct Dyn. 42 (17), 9201-9219 (2023).
  29. Chinese pharmacopoeia Commission. The Pharmacopeia of the People's Republic of China 2020 Edition: Volume I. , CHINA MEDICAL SCIENCE PRESS. (2020).
  30. Chinese pharmacopoeia Commission. The pharmacopoeia of the People's Republic of China 2020 edition: volume IV. , CHINA MEDICAL SCIENCE PRESS. (2020).
  31. Xu, S., et al. Material Basis and Mechanism of Erzhi Pill for Preventing Osteoporosis Based on Network Pharmacology. Chin Pharma J. 53 (22), 1913-1920 (2018).
  32. Lee, D. K., et al. Phospholipase c β4 promotes rankl-dependent osteoclastogenesis by interacting with mkk3 and p38 mapk. Exp Mol Med. 57 (2), 323-334 (2025).
  33. Huang, Q., et al. The effects of Ti and Ta particle surface chemistry on inflammation, osteogenesis, and osteoclastogenesis in vitro and in vivo. Colloid Interf Sci Commun. 54, 100716(2023).
  34. Zhao, M., et al. Comprehensive comparison on the anti-inflammation and gc-ms-based metabolomics discrimination between bupleuri chinense dc. And b. Scorzonerifolium willd. Front Pharmacol. 13, 1005011(2022).
  35. Bin, L., et al. Analysis of mutual-detoxication compatibility rules of "bupleuri radix decreaseing liver's yin essence" based on data mining. Chin Trad Herbal Drugs. 53 (14), 4428-4436 (2022).
  36. Ying, W., Xuefeng, Z., Minjing, L., Tingting, Z., Ping, L. Xiaochaihu decoction in diabetic kidney disease: A study based on network pharmacology and molecular docking technology. Integrat Med Nephrol Androl. 8 (1), 13-13 (2021).
  37. Sheng, Z., Hongcheng, L., Min, X. Identifying immune cell infiltration and effective diagnostic biomarkers in rheumatoid arthritis by bioinformatics analysis. Front Immunol. 12, 726747(2021).
  38. Menon, S. M. P., Elengoe, A. Evaluation of the role of kras gene in colon cancer pathway using string and cytoscape software. Biomed Res Ther. 7 (6), 3835-3842 (2020).
  39. Yang, J., et al. Bioinformatics identification based on causal association inference using multi-omics reveals the underlying mechanism of gui-zhi-shao-yao-zhi-mu decoction in modulating rheumatoid arthritis. Phytomed Int J Phytother Phytopharmacol. 136, 156332(2024).
  40. Yang, M., et al. Purification of harvested rainwater using gravity-driven ceramic membrane: A visualization study combining micro-CT and Comsol simulations. J Environ Manag. 373, 123333(2024).
  41. Jui-Ting, H., et al. A comparison of micro-CT and dental CT in assessing cortical bone morphology and trabecular bone microarchitecture. PloS one. 9 (9), e107545(2014).
  42. Yang, S. S., et al. Grem1 inhibits osteogenic differentiation of mbmscs in ovx rats through bmp/smad1/5 signaling pathway. Regenerat Ther. 28, 527-535 (2025).
  43. Huang, W., Zheng, X., Yang, X., Fan, S. Stimulation of osteogenic differentiation by saikosaponin-a in bone marrow stromal cells via wnt/β-catenin pathway. Calcified Tiss Int. 100 (4), 392-401 (2017).
  44. Hattori, T., et al. The fixed herbal drug composition "saikokaryukotsuboreito" prevents bone loss with an association of serum IL-6 reductions in the ovariectomized mouse model. Phytomedicine. 17 (3-4), 170-177 (2010).
  45. Wu, X., et al. Inhibition of lipopolysaccharide-induced inflammatory bone loss by saikosaponin d is associated with regulation of the rankl/rank pathway. Drug Des Dev Ther. 15, 4741-4757 (2021).
  46. Yu-Ting, H., et al. Effects of saikosaponin d on differentially expressed genes, Ctla-4, IL-10, and IL-17 in mice with autoimmune hepatitis. J Shanghai Jiaotong Uni. 40 (03), 303-309 (2020).
  47. Allergy, Z. C. F., et al. Sebocytes contribute to skin inflammation by promoting the differentiation of t helper 17 cells. Br J Dermatol. 178 (3), 722-730 (2018).
  48. Piao, C. H., Song, C. H., Lee, E. J., Chai, O. H. Saikosaponin a ameliorates nasal inflammation by suppressing il-6/ror-γt/STAT3/IL-17/nf-κb pathway in ova-induced allergic rhinitis. Chem Biol Interact. 315, 108874(2020).
  49. Zhimeng, L., et al. Il-17/il-17 receptor pathway-mediated inflammatory response in apostichopus japonicus supports the conserved functions of cytokines in invertebrates. J Immunol. 208 (2), 464-479 (2022).
  50. Wang, X., et al. Forsythiaside a repairs uvb-induced skin inflammatory damage by il-17 signaling pathway. Food Biosci. 64, 105845-105845 (2025).
  51. Ridvan, G., Emine, Y. Evaluation of the awareness and knowledge levels of dentists regarding bisphosphonates and bisphosphonate-related jaw necrosis. J Craniofac Surg. 36 (4), e376-e382 (2025).
  52. Lijuan, W., et al. An ultra-performance liquid chromatography photodiode array detection tandem mass spectrometric method for simultaneous determination of seven major bioactive constituents in Xiaochaihutang and its application to a fourteen-compound compatibility study. J Chromatograph Sci. 53 (9), 1570-1576 (2015).
  53. Wang, D. L., Fang, F. F., Liu, C. S., Su, J. C. expert consensus on integrated traditional chinese and western medicine diagnosis and treatment for osteoporotic fractures. Zhongguo gu shang China. J Orthopaed Traumatol. 37 (3), 242-250 (2024).
  54. Shimeng, L., et al. Antidepressant active components of bupleurum chinense dc-paeonia lactiflora pall herb pair: Pharmacological mechanisms. BioMed Res Int. 2022, 1024693-1024693 (2022).
  55. Ran, S., et al. Bupleurum in treatment of depression disorder: A comprehensive review. Pharmaceuticals (Basel). 17 (4), 512(2024).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Postmenopausal OsteoporosisOvariectomized RatsBone MicrostructureChai Hu TreatmentBone Loss InhibitionInflammatory CytokinesAnti Inflammatory PathwaysEstrogen DeficiencyBone DestructionDose Response

Related Articles