פרוטוקול זה מתאר הליך הישרדות לכריתת לימפאדנקטומיה כלייתית דו-צדדית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב.
מאמר שיטה
כריתת לימפהדנקטומיה דו-צדדית של עכברים
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלות אוטואימוניות הן תוצאה של תאי חיסון שמכוונים באופן לא מתאים לרקמה עצמית, מה שמוביל לפתולוגיה ולנזק לאיברים חיוניים. איברים לימפואידיים משניים משמשים כאתר להפעלה של תאי B ו-T ולסבילות חיסונית היקפית, כתוצאה מניקוז אנטיגנים והעברת תאים מציגי אנטיגנים (APC) דרך הלימפה המקומית. תפקיד בלוטות הלימפה המנקזות המקומיות כאתר ההפעלה הראשוני של הלימפוציטים תואר במצבים של גידולים, זיהומים ומחלות אוטואימוניות ספציפיות לאיברים, אך לא באוטואימוניות מערכתית. לופוס אריתמטוזיס מערכתית, אחת מהמחלות הללו, היא מחלה אוטואימונית נפוצה עם מעורבות כליה נפוצה שמובילה לפגיעה בכליה ולבסוף לכשל מוחלט. הבנה מעמיקה יותר של תפקיד בלוטות הלימפה הכליות, שהן האתר העיקרי לניקוז אנטיגנים והעברת APC מהכליות, מוגבלת בשל חוסר היכולת להפריע ברקמה זו באופן סלקטיבי. מתואר כאן הליך הישרדות לניתוח לימפאדנקטומיה דו-צדדית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב. כלולים הוראות מפורטות, עזרים ויזואליים, טיפים מועילים להצלחה טובה יותר, ופתרון תקלות פרוצדורליות. הישרדות ארוכת טווח מצוינת ונצפתה לפחות 4 חודשים לאחר הניתוח. בלוטות הלימפה הכלייתיות שנחתכו שלמות ומוכנות מיד לעיבוד במורד הזרם. הליך זה מתאים במיוחד למחקרים של ההשפעה המקומית של בלוטות הלימפה בכליות.
מבוא
מחלות אוטואימוניות משתרעות על כל איבר בגוף האדם, החל ממחלות שמוגבלות יחסית לאיברים כמו הפטיטיס האוטואימונית, אובאיטיס וסוכרת סוג 1 ועד למחלות נפוצות כמו טרשת מערכתית ושוגרן 1,2,3,4,5. סבילות אימונולוגית היא שלב קריטי בהתפתחות תאי B ו-T למניעת תגובתיות עצמית6. בעוד שסבילות מרכזית באמצעות מחיקה קלונית בתימוס היא הכרחית ויעילה, זה לבדו משאיר פערים בהגנה מפני אוטואימוניות 7,8. סבילות היקפית היא מחסום משני לתגובה עצמית באמצעות אנרגיה, מחיקה או תשישות תאי T, המתרחשת באיברים לימפואידיים משניים, כולל בלוטות לימפה שמנקזות רקמות אזוריות לאחר ניקוז אנטיגן 9,10. עם זאת, מתברר יותר ויותר שתאים אוטוריאקטיביים עשויים להתגורר בתוך בלוטות הלימפה הללו ולנודד מהן אצל אנשים רגישים גנטית ו/או סביבתית לאחר הפעלה לא מתאימה11,12.
לופוס אריתמטוזוס מערכתית היא אחת מהמחלות האוטואימוניות הללו, עם מעורבות ברורה של תאי B ו-T במערכות איברים מרובות13. תופעה נפוצה ומורבידית במיוחד שלה היא דלקת זאבת והתקדמות למחלת כליות בשלב סופי14. היכולת להבין את ההשפעה הישירה של תאי B ו-T החיים מקומית במחלת כליות מונעת על ידי אוטואימוניות, בניגוד לפתופיזיולוגיה מערכתית במחזור הדם, מוגבלת כיום בשל חוסר היכולת להפריע באופן סלקטיבי לנקודות אלו. בהתחשב בפער זה, פותח הליך הישרדות לכריתת לימפאדנקטומיה דו-צדדית של עכברים ומתואר כאן.
המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא להשיג כריתה בטוחה ואמינה של בלוטות לימפה כליותיות דו-צדדיות בעכברים עם הישרדות וסבילות גבוהה לאחר הניתוח. הליך זה יתאים במיוחד למחקרים של ההשפעה המקומית של בלוטות הלימפה על פריימינג, הפעלה וסבילות לתאי חיסון הקשורים למחלות כליה. הליך זה אידיאלי כאשר משולב עם מודלים אוטואימוניים או אונקולוגיים המשפיעים על הכליה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים מתבצעים בהתאם לפרוטוקולי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים של ייל. לפיתוח ההליך הזה, השתמשו בזן Balb/c בן 8-12 שבועות, עכברים נוטים לזאבת (MRL/MpJ-Faslpr/J/J)ו-15 בקרה מזויפים תואמים גיל/מין/גנוטיפ. בנוסף, נבדקו גם עכברי זן C57BL/6 בני 8-12 שבועות, והקשרים נכרתו בבטחה. גם עכברים זכרים וגם נקבות נכללו. החומרים והציוד בהם משתמשים מופיעים בטבלת החומרים.
1. הכנת מכשירים, בעלי חיים וחדר הניתוח
- לחטא את כל כלי הניתוח. ודא שמשטח הפעולה וקונוס האף של ההרדמה מנוקים ב-70% אתנול.
- התקן את מיקרוסקופ הניתוח, כדי להבטיח ארגונומיה נוחה למנתח המנתח.
- התקן מכונת אידוי הרדמה בשאיפה עם חרוט אף ויניקה לאיסוף עודף של חומרי הרדמה. הקימו משטח פעולה עם משטח מים חמים לשמירה על טמפרטורת גוף בעלי החיים והאספקה במקום נוח וסטרילי.
- השרה הרדמה על ידי מתן איזופלוראן שנשאף 2%-3% עם קצב זרימת חמצן של 2 ליטר לדקה דרך קונוס האף ממכונת אידוי הרדמה שנשאפה (בהתאם לפרוטוקולים מאושרים על ידי המוסד).
- ודאו מישור הרדמה מתאים על ידי אישור קצב נשימה של כ-30-40 נשימות לדקה וחוסר תגובה לצביטה בכף הרגל האחורית. בדקו מחדש מדי פעם את מישור ההרדמה המתאים והתאימו את קצב זרימת האיזופלוראן בהתאם.
הערה: לחלופין, הרדמה בהזרקה מתאימה גם כן.
- ודאו מישור הרדמה מתאים על ידי אישור קצב נשימה של כ-30-40 נשימות לדקה וחוסר תגובה לצביטה בכף הרגל האחורית. בדקו מחדש מדי פעם את מישור ההרדמה המתאים והתאימו את קצב זרימת האיזופלוראן בהתאם.
- פעל לפי הנחיות המכון שלך לשיכוך כאבים והרדמה מקומית מתאימים. לדוגמה, ניתן לתת משכך כאבים ארוך טווח כמו בופרנורפין XR 3.25 מ"ג/ק"ג תת-עורית ולהזריק עד 0.04 מ"ל/5 גרם משקל גוף של 1 מ"ג/מ"ל לידוקאין תת-עורית באתרי חתך מתוכננים.
- הכינו את החיה להליך על ידי מריחת חומר סיכה לעיניים, פריטה או גזירה של הפרווה דו-צדדית, עיקור הגב עם תמיסת פובודין/יוד, לאחר מכן 70% אתנול, ומיקום דקוביטוס לטרלי ימין (צד ימין כלפי מטה).
- השתמשו בסרט דבק כדי לקבע את זרועו השמאלית של החיה כלפי מעלה ואת הזנב תחתון ליצירת יציבה רגועה אך מוארכת (איור 1A). זה יזיז את הכליה בצורה נמוכה יותר, מה שיגרום לשיפור הדמיה ובחשיפה.
- לבש כפפות סטריליות ולהניח וילונות סטריליים על החיה עם חלון לשדה הניתוח. שמרו על סטריליות לאורך כל ההליך.
- אופציונלי: הזרקת 10-20 מיקרוליטר של Evans Blue סטרילי, מסונן 5% בתמיסת מלח מפוספט בכריות אחוריות דו-צדדיות לפני מיקום בעלי החיים לזיהוי טוב יותר של בלוטות הלימפה הכלייתיות באמצעות ניקוז לאורך מסלול הלימפה האיליאקית16 (איור 1D-G).
הערה: היזהרו שצבע זה עלול להפריע לכתמים ולניתוחי ציטומטריות זרימה. בנוסף, עם הזמן, אוונס בלו גם יחדור לצירת הצירנה, ראו "פתרון תקלות" לטיפים (טבלה 1).
- אופציונלי: הזרקת 10-20 מיקרוליטר של Evans Blue סטרילי, מסונן 5% בתמיסת מלח מפוספט בכריות אחוריות דו-צדדיות לפני מיקום בעלי החיים לזיהוי טוב יותר של בלוטות הלימפה הכלייתיות באמצעות ניקוז לאורך מסלול הלימפה האיליאקית16 (איור 1D-G).
איור 1: מיקום אנטומי של העכבר והאיברים והזרקת אוונס בלו האופציונלית. (א) מיקום והיבטחות בעלי חיים לחשיפה לכליה שמאלית. (ב) כיוון אנטומי בתוך חלונות ניתוח. שרשרת בלוטת הלימפה הכלייתית השמאלית נמצאת בסמוך לכלי האדרנל ולאאורטה, מעל כלי הדם הכלייתיים. בלוטת הלימפה הכלייתית הימנית נמצאת ממש מעל כלי הדם הכלייתיים. (ג) מיקום והיבטח בעלי חיים לחשיפה לכלייתית הימנית. (D-G) יישום של 20 מיקרוליטר 5% הזרקת אוונס בלו. (ד) שרשרת בלוטת הלימפה של כף הרגל האחורית השמאלית והכליה השמאלית (חץ לבן) לפני הצביעה. שימו לב למיקום הכללי של הקיסטרנה כילי (קופסה מקווקוקת), שלרוב שקופה ו/או קשה לזיהוי אלא אם כן היא מלאה בלימפה. (ה) שרשרת קשרי הלימפה של כף הרגל האחורית השמאלית (חץ לבן) 5 דקות לאחר הזרקת הצבע. שימו לב לכלי לימפה אפרנטיים (חץ שחור). (F) כף הרגל האחורית הימנית ובלוטת הלימפה הכלייתית הימנית (חץ לבן) לפני הצביעה. ז) כף הרגל האחורית הימנית ובלוטת הלימפה הכלייתית הימנית (חץ לבן) 5 דקות לאחר הזרקת הצבע. שימו לב לכלי לימפה אפרנטיים (חצים שחורים). פסי סולם: A,C = 1.0 ס"מ; D-G (מבט על כף הרגל האחורית) = 0.5 ס"מ; D-G (תצוגות פנימיות) = 0.1 ס"מ. אנא לחצו כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של הדמות הזו.
2. כריתת לימפאדנקטומיה של הכליה השמאלית
- עשה חתך אלכסוני של 1 ס"מ דרך העור, קצת מתחת לטחול (כ-1 ס"מ מתחת לצלע העליונה). נתח בצורה ישירה את העור מדופן הבטן/החזה וזהה את הטחול בתוך הבטן.
- בצע חתך של 1 ס"מ דרך שרירי דופן הבטן מעט מתחת לטחול כדי להגיע לחלל הפריטונאלי (איור 2A,B).
הערה: בעכברים עם עור ללא פיגמנט, הטחול נראה בקלות דרך העור המוכן כאיבר כהה ונייד השוכן לרוחב הבטן ומעט נחות מהצלע האולטימטיבית.
- בצע חתך של 1 ס"מ דרך שרירי דופן הבטן מעט מתחת לטחול כדי להגיע לחלל הפריטונאלי (איור 2A,B).
- זהה את הכליה השמאלית כאיבר חלק לאורך דופן הבטן האחורית ורק תחתון מהטחול. הכליות ובלוטות הלימפה הנלוות נלוות נמצאות ברטרופריטונאום. באמצעות שני מלקחיים בזווית, יש לנתח בצורה ישירה את החלק האחורי של הכליה השמאלית כדי לקבל גישה לרטרופריטונאום (איור 2C).
הערה: טכניקת כריתה קהה נכונה ובטוחה כוללת הפעלת לחץ קל עם מלקחיים סגורים במישור הרקמה הרצוי ומתן פתיחה עדינה למכשיר, תוך גרימת מישורי הרקמה. - משקף את הכליה השמאלית בקדום.
- באמצעות מיקרוסקופ הניתוח, זהה את כרית השומן העוטפת את בלוטת הלימפה הכלייתית השמאלית, שתהיה אחורית לכליה השמאלית ומעל כלי הדם השמאליים. זהה והימנע מבלוטת יותרת הכליה כלפי מעלה, האאורטה האחורית, והכילי הציסטנלי קדמית (איור 1B,D).
- באמצעות מלקחיים עם קצה דק, יש לנתח באופן ישיר סביב קפסולת בלוטת הלימפה (להפרידה מהכלים הסובבים), תוך הפעלת מתח נגדי עדין עם מלקחיים בזווית (איור 2E). ניתן גם להשתמש במספריים מדויקים כדי לנתח בצורה ישירה את המישור הזה.
- באמצעות מלקחיים ישרים עם קצה דק, משכו את ראש בלוטת הלימפה הכלייתית השמאלית לאחור תוך שימוש במספריים דקים לחתוך חד את החיבורים האחוריים של בלוטת הלימפה. יש להיזהר לא להפריע לכלי הדם הסמוכים ולצינור החזה/הצוסטרנה הסמוכים (איור 2F).
- התבונן באזור המיסטזיס (איור 2G).
- החזירו את הכליה למיקומה האנטומי וסגרו את הבטן בשתי שכבות (דופן הבטן והעור) עם תפר פוליפרופילן מונופילמנט 6-0 באופן רציף. מרחו דבק ניתוחי סטרילי על הפצע.
איור 2: כריתת לימפאדנקטומיה של הכליה השמאלית. (א) חתך אלכסוני שמאלי מעט תחתון ואחורי לצל הטחול. (ב) זיהוי הטחול כלפי מעלה (קו לבן), אחורי אדרנל שמאלי (חץ שחור), והכליה השמאלית תחתונה (קו שחור). (ג) מישור אל הרטרופריטונאום נוצר על ידי ניתוח ישיר מיד מאחורי הכליה (חץ שחור). (D) בלוטת הלימפה הכלייתית השמאלית (חצים לבנים) נראית מיד בתוך מעטפת שומן. (ה) נוצר מישור בין כלי השיט הסמוכים לצומת (חצים לבנים). (ו) הצומת נמשך בעדינות ונחתך בחדות לאורך המישור שנוצר. (G) המוסטזיס מאושר, והמרחב הריק (חצים דהויים מ-(D)) שבו חיה בעבר בלוטת הלימפה (החץ הלבן) נרשם כחופשי מכל קשר לימפה שאריתי. (H) בלוטת הלימפה השמאלית היא לעיתים קרובות שרשרת של מספר קשרים (חצים לבנים). שקע הוא שרשרת בלוטת לימפה שמאלית מחוץ לחי (1 מ"מ x 3.5 מ"מ). פסי סולם: 0.2 ס"מ. טיק = 1 מ"מ. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של הדמות הזו.
3. כריתת לימפאדנקטומיה של הכליה הימנית
- מיקום מחדש של בעל חיים בדקוביטוס הלטרלי השמאלי (צד שמאל כלפי מטה). שוב, השתמש בסרט דבק כדי לקבע את זרועו הימנית של החיה כלפי מעלה ואת הזנב תחתון כדי ליצור יציבה רגועה אך מוארכת. זה חשוב במיוחד בצד ימין, שם הכבד עלול להפריע לחשיפה (איור 1C).
- עשה חתך אלכסוני של 1 ס"מ דרך העור, קצת מתחת לצלע האולטימטיבית (קצת יותר עליונה מהצד השמאלי). נתח באופן ישיר את העור הרחק מדופן הבטן/החזה ובצע חתך של 1 ס"מ דרך שרירי דופן הבטן כדי לקבל גישה לחלל הפריטונאלי (איור 3A).
- זהה את הכליה הימנית כאיבר חלק לאורך דופן הבטן האחורית ופשוט תחתון מהכבד. ייתכן שיהיה צורך להשתמש במטוס עם קצה כותנה כדי למשוך את ראש הכבד. באמצעות שני מלקחיים בזווית מנתחים בצורה ישירה את החלק האחורי של הכליה הימנית כדי לקבל גישה לרטרופריטונאום (איור 3B,C).
- השתקף את הכליה הימנית בכיוון הקדמי.
- באמצעות מיקרוסקופ הניתוח, זהה את כרית השומן העוטפת את בלוטת הלימפה הימנית, שתהיה אחורית לכליה הימנית ומעל כלי הדם הימניים. זהה והימנע מבלוטת יותרת הכליה בצורה מעליות (איור 1B,D).
- באמצעות מלקחיים עם קצה דק או מספריים דקיקים, יש לנתח בצורה ישירה סביב קפסולת בלוטת הלימפה (להפרידה מהכלים הסובבים), תוך יישום אחיזה נגדית עדינה עם מלקחיים בזווית (איור 3E).
- באמצעות מלקחיים ישרים עם קצה דק, משוך את ראש בלוטת הלימפה הימנית תוך שימוש במספריים דקים לחתוך חד את החיבורים האחוריים של בלוטת הלימפה (איור 3F). היזהרו לא להפריע לכלי הדם הכלייתיים, שפועלים מעט מתחת לבלוטת הלימפה.
- התבוננו באזור המיסטזיס (איור 3G).
הערה: באופן כללי, נמצא שלבלוטת הלימפה הימנית יש כלי דם גדול יותר שמנקז את החלק האחורי, אשר נוטה יותר לדמם לאחר שאילוף מוצלח של בלוטת הלימפה. ניתן לשלוט בדימום מכלי זה באמצעות לחץ עדין באמצעות מטוש עם קצה כותנה עד להשגת המוסטזיס. - החזירו את הכליה למיקומה האנטומי וסגרו את הבטן בשתי שכבות (דופן הבטן והעור) עם תפר פוליפרופילן מונופילמנט 6-0 באופן רציף. מרחו דבק ניתוחי סטרילי על הפצע.
איור 3: כריתת לימפאדנקטומיה של הכליה הימנית. (A) חתך אלכסוני ימני, רק תחתון ואחורי לצלע העליונה. (ב) קצה הכבד מזוהה כלפי מעלה (קו לבן) והכליה השמאלית תחתונה (קו שחור). האדרנל הימני מוסתר על ידי קצה הכבד. (ג) מישור אל הרטרופריטונאום נוצר על ידי ניתוח ישיר מיד מאחורי הכליה (חץ שחור). (D) בלוטת הלימפה הכלייתית הימנית (חצים לבנים) נראית מיד בתוך מעטפת שומן. (ה) לאחר מכן נוצר מישור סביב הצומת (חץ לבן). (ו) הצומת נמשך בעדינות ונחתך בחדות לאורך המישור שנוצר. (G) המוסטזיס מאושר, והמרחב הריק (חצים דהויים מ-(D)) שבו חיה בעבר בלוטת הלימפה (החץ הלבן) נרשם כחופשי מכל קשר לימפה שאריתי. (H) בלוטת הלימפה הימנית היא צומת כדורית אחת (חץ לבן). הטבעת היא בלוטת לימפה אקס ויבו (2 מ"מ x 1.5 מ"מ). פסי סולם: 0.2 ס"מ. טיק = 1 מ"מ. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של הדמות הזו.
4. טיפול לאחר הניתוח
- העבירו את החיה לכלוב נקי, שהוא חצי על משטח מים חמים עם גישה למזון ומים חופשי.
- אפשרו לבעל החיים להתאושש מההרדמה (~10-15 דקות) ולעקוב מקרוב אחר סימני מצוקה. אם בעלי חיים אינם מחלימים במהירות מההרדמה באמצעות התנהגויות מתאימות (כגון קצב נשימה מוגבר, התיישרות, הליכה, טיפוח), יש להמתים את החיה באופן הומני (בהתאם לפרוטוקולים מאושרים על ידי המוסד).
- כאשר כל בעלי החיים החלימו מההרדמה, החזירו את הכלובים למוסד הטיפול בבעלי חיים עם גישה למים, מזון, מצעים וחומרי העשרה בחופשיות.
- בדקו עכברים לאחר הניתוח כל 12 שעות במשך 3 ימים לסימני כאב או מצוקה (למשל, יציבה כפופה, ירידה בפעילות, ירידה במעורבות, טיפוח לקוי). הורד עכברים באופן הומני שמראים סימני מצוקה.
- אם משתמשים בתפר קבוע (כגון פוליפרופילן מונופילמנט 6-0), בדקו את החתכים ביום העשירי לאחר הניתוח והסירו כל חומר תפר שנותר.
5. טיפול בבלוטות לימפה
הערה: בלוטת הלימפה שהוצאה מוכנה מיד להיכנס לצינורות ליישומים נוספים במורד הזרם.
- כאשר לומדים לראשונה את ההליך והאנטומיה, יש לאשר את כריתת בלוטת הלימפה באמצעות היסטולוגיה או ציטומטריית זרימה באמצעות צביעות נוגדנים לבחירתך.
- הניחו את הרקמה במדיות תרבית תאים (כגון DMEM, RPMI) או במי מלח מפוזר-פוספטים (PBS) על קרח לטכניקות תא חי או בקיבוע (למשל, 10% פורמלין עם בופר ניטרלי, 4% פאראפורמלדהיד) להיסטולוגיה מתוכננת.
הערה: דרך מהירה, אך פחות מדויקת, לאשר בלוטות לימפה היא למקם את הדגימה שנכרתה ב-PBS. באופן כללי, דגימה של בלוטות לימפה בעיקר תשקע, בעוד דגימה של רקמה שומנית בעיקר תצוף; עם זאת, מומלץ לבצע בדיקות אישור נוספות כאשר מבצעים אופטימיזציה ראשונית של הליך זה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
ניתן לבצע את ההליך הזה תוך 15-20 דקות לכל עכבר. כדי לאשר את דיוק ההליך הזה, בוצעו לימפאדנקטומיות דו-צדדיות על חמישה ילדים בני 8-12 שבועות, בגיל, מין וגנוטיפ. כל העכברים סבלו את ההליך היטב עם הישרדות מלאה סביב הניתוח. דגימות שנלקחו הונחו ב-PBS על קרח. כל הדגימות שקעו מיד, ואישרו תכו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
מתואר כאן הליך הישרדות לניתוח לימפאדנקטומיה דו-צדדית של עכברים בטוחה ונסבלת היטב. המגבלה העיקרית של הליך זה היא הגודל הקטן יחסית של בלוטות הלימפה בכליות, מה שמחייב מיקרוסקופ ניתוח. ללא מיקרוסקופ תפעולי, כריתה בטוחה יכולה להיות קשה להשגה. חלק מהמודלים הגנטיים של העכברים ?...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
R.A.F. הוא יועץ ל-Glaxo Smith Kline, Plythera Inc. ו-Ventus Therapeutics. כל שאר המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.
תודות
אנו מודים ל-J. Alderman, B. Cadugan, E. Hughes-Picard, ו-J. Horrocks על סיוע מנהלי, ול-C. Hughes על ניהול מושבת העכברים. H.N.B. הוא עמית בתוכנית ההכשרה למדעני מנתח של ייל, שמימנה ותמכה חלקית בפרויקט זה. עבודה זו מומנה גם על ידי מכון הווארד יוז לרפואה (ל-R.A.F.) ופרס המחקר המתמחה של הקולג' האמריקאי לכירורגים (ל-H.N.B.).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מעגל הרדמה | כל | או הרדמה בהזרקה | |
| BD LSRII זרימת ציטומטר (או שווה ערך) | BD ביוסיינסס | מצויד בתוכנת FACS Diva | |
| בופרנורפין XR | כל | לשיכוך כאבים | |
| מדיה לתרבות תאים | כל | (לטכניקות תאים חיים; כלומר DMEM או RPMI) | |
| DAPI | ביולג'נד | 422801 | ריכוז עבודה: 15 מיקרוגרם/מ"ל |
| נורות LED עם מיקרוסקופ צוואר אווז כפול/כפול | כל | ||
| אתנול (70% במים) | כל | לניקוי | |
| CD45.2 (104) אנטי-עכבר מצומד FITC (104) | ביולג'נד | 109806 | ריכוז עבודה: 5 מיקרוגרם/מ"ל |
| מלקחיים: מלקחיים עם קצה דק בזווית (x2) | רובוז | RS-5058 | חומר: דומוקסל; דגם #5, זווית של 45 מעלות; גודל קצה 0.1 X 0.06 מ"מ |
| מלקחיים: מלקחיים עם קצה דק | רובוז | RS-4960 | חומר: דומוסטאר; תבנית #1; גודל הקצה: 0.20 x 0.12 מ"מ |
| מלקחיים: מלקחיים עם קצה דק | רובוז | RS-4966 | חומר: Dumostar, טיפ Biologie; תבנית #3; גודל קצה: 0.08 x 0.04 מ"מ |
| לידוקאין | כל | לשיכוך כאבים | |
| עכברים | ג'קס | לזן C57BL/6, עכברים מסוג פראי: מעבדות ג'קסון #000664 | |
| דרייברי מחט | רובוז | RS-6410 | מחזיק מחט קסטרובייחו; סטרייט |
| מיקרוסקופ תפעולי | לייקה | MZ9.5 | מיקרוסקופ ראש סטריאו Leica Mz9.5 |
| <הם>אופציונלי: צבע כחול של אוונס | סיגמא | E2129-10G | למעקב לימפה. |
| סליין ממוגן בפוספט (PBS) | כל | ||
| תמיסת פובידון/יוד | כל | להכנה/עיקור עור | |
| מספריים: מספריים עם קצה דק במיוחד | רובוז | RS-5605 | מקפרסון-ואנס; קצה חיתוך 3 מ"מ; מעוקל |
| מספריים: מספריים בינוניים | רובוז | RS-5676 | נויס; קצה חיתוך 13 מ"מ; ישר |
| דבק כירורגי | כל | לדוגמה, דבק רקמה 3M Vetbond | |
| תפר: פוליפרופילן מונופילמנט כחול 6-0 | כל | ||
| קיבוע רקמות | כל | (להיסטולוגיה מתוכננת; כלומר 10% פורמלין ניטרלי עם בופר או 4% פאראפורמלדהיד) | |
| כרית חימום מחזור מים חמים | כל | ||
| עכברים | מעבדות ג'קסון | לזן Balb/c, עכברים נוטים לזאבת (MRL/MpJ-Fas-lpr/J): #000485 |
מקורות
- Amador-Patarroyo, M. J., Peñaranda, A. C., Bernal, M. T., Anaya, J. -. M. Autoimmunity. Autoimmunity: From bench to bedside. , (2013).
- Echeverri, A. F., Tobón, G. J., Anaya, J. -. M. Systemic autoimmune diseases. Autoimmunity: From bench to bedside. , (2013).
- García-Carrasco, M., Anaya, J. -. M., et al. Autoimmune disorders and pathogenesis. Autoimmunity: From bench to bedside. , (2013).
- Sarmiento-Monroy, J. C., Mantilla, R. D., Rojas-Villarraga, A., Anaya, J. -. M., Anaya, J. -. M., et al. Lupus and immunological profiling. Autoimmunity: From bench to bedside. , (2013).
- Solari, N. F., Cherñavsky, A. C., Anaya, J. -. M., et al. Rheumatologic autoimmune syndromes. Autoimmunity: From bench to bedside. , (2013).
- Kamradt, T., Mitchison, N. A. Tolerance and autoimmunity. N Engl J Med. 344 (9), 655-664 (2001).
- Rouiz-Argüelles, A., Anaya, J. -. M., et al. Hematologic autoimmune conditions. Autoimmunity: From bench to bedside. , (2013).
- Venanzi, E. S., Benoist, C., Mathis, D. Good riddance: Thymocyte clonal deletion prevents autoimmunity. Curr Opin Immunol. 16 (2), 197-202 (2004).
- Meng, X., et al. Immunological mechanisms of tolerance: Central, peripheral and the role of T and B cells. Asia Pac Allergy. 13 (4), 175-186 (2023).
- Swartz, M. A., Hubbell, J. A., Reddy, S. T. Lymphatic drainage function and its immunological implications: From dendritic cell homing to vaccine design. Semin Immunol. 20 (2), 147-156 (2008).
- O'Byrne, A. M., Van Baarsen, L. G. M. Lymph nodes as gatekeepers of autoimmune diseases. RMD Open. 10 (4), e004097 (2024).
- Hampton, H. R., Chtanova, T. Lymphatic migration of immune cells. Front Immunol. 10, 1168 (2019).
- Fortuna, G., Brennan, M. T. Systemic lupus erythematosus: Epidemiology, pathophysiology, manifestations, and management. Dent Clin North Am. 57 (4), 631-655 (2013).
- Hanly, J. G., et al. The frequency and outcome of lupus nephritis: Results from an international inception cohort study. Rheumatology. 55 (2), 252-262 (2016).
- Andrews, B. S., et al. Spontaneous murine lupus-like syndromes: Clinical and immunopathological. J Exp Med. 148, 1198-1215 (1978).
- Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. Lymph node mapping in the mouse. J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).
- Morse, H. C., et al. Abnormalities induced by the mutant gene, lpr. Patterns of disease and expression of murine leukemia viruses in SJL/J mice homozygous and heterozygous for lpr. J Exp Med. 161 (3), 602-616 (1985).
- Ayalon, G., et al. Antibody semorinemab reduces tau pathology in a transgenic mouse model and engages tau in patients with Alzheimer's disease. Sci Transl Med. 13 (593), eabb2639 (2021).
- Dong, X., et al. Antigen presentation by dendritic cells in renal lymph nodes is linked to systemic and local injury to the kidney. Kidney Int. 68 (3), 1096-1108 (2005).
- Lan, H. Y., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. Trafficking of inflammatory macrophages from the kidney lymph nodes during experimental glomerulonephritis. Clin Exp Immunol. 92, 336-341 (1993).
- Karmali, R. J., Suami, H., Wood, C. G., Karam, J. A. Lymphatic drainage in renal cell carcinoma: Back to the basics. BJU Int. 114 (6), 806-817 (2014).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה