הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

במבחנה עירוי ג'ל תוך-לומינלי: גישה מתקדמת לניתוח מיקרוסקופי של עורקי התנגדות אנושיים

558 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68773

⸱

19 באוגוסט 2025

 ,  ,  ,  , 
1Physiology Unit, Laboratory of Malaria and Vector Research, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, 2Surgical Oncology Program, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, 3Infectious Disease Pathogenesis Section, National Institute of Allergy and Infectious Diseases

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לשימור ארכיטקטורת העורקים האנושית על ידי החדרת ג'ל מייצב רקמות ללומן כלי הדם לפני החיתוך לניתוח מולקולרי או היסטופתולוגי.

תקציר

עורקי התנגדות, הכוללים עורקים קטנים ועורקים, ממלאים תפקידים חיוניים בוויסות לחץ הדם וזלוף הרקמות. תפקוד לקוי בעורקים אלה עלול להוביל למצבים קרדיווסקולריים שונים כגון יתר לחץ דם, טרשת עורקים ואי ספיקת לב, כמו גם למצבים נוירו-וסקולריים. בחינת עורקי ההתנגדות האנושיים חיונית להבנת מנגנוני מחלות לב וכלי דם ולפיתוח אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות. מחקר זה מציג שיטה חדשנית להכנת עורקי התנגדות אנושיים מבודדים על ידי החדרת ג'ל מייצב רקמות ללומן, תוך שמירה על הארכיטקטורה הטבעית שלהם ושלמות התאים. רקמות אומנטליות אנושיות התקבלו מחולים שעברו ניתוחי בטן, ועורקי התנגדות קטנים (קוטר 100-300 מיקרומטר) בודדו על ידי מיקרו-דיסקציה זהירה. לאחר מכן העורקים עברו קנולציה, לחץ בתא שריר תרבית וקובעו עם פורמלין ניטרלי של 10%. ג'ל מייצב רקמות הוזרק ללומן של העורק הקנולטי, שהותר להתמצק כדי לשמר את המבנה התלת מימדי. ניתוחים היסטולוגיים, אימונוהיסטוכימיים וביטוי גנים בוצעו כדי להעריך את שימור העורקים. חתכים היסטולוגיים חשפו את השלמות המבנית והארכיטקטורה הטבעית של העורקים שנשמרו היטב, תוך שמירה על שכבות אנדותל ושרירים חלקים מוגדרות היטב. צביעה אימונוהיסטוכימית הראתה לוקליזציה מובהקת של סמנים כגון CD31 ואקטין שריר חלק α. הכלאה באתרה חשפה דפוסי ביטוי גנים ספציפיים, וסיפקה תובנות לגבי המנגנונים המולקולריים. שיטה מתקדמת זו של עירוי ג'ל תוך לומינלי מציעה יתרונות משמעותיים, ומאפשרת הדמיה מתקדמת וניתוח מקיף של מבנה העורקים, שיפוץ ואינטראקציות תאיות במצבים בריאים וחולים כאחד. לשיטה זו יש פוטנציאל לשפר את האבחון הקליני ואת האסטרטגיות הטיפוליות במחלות כלי דם, ובכך לספק כלי רב ערך לקידום המחקר בביולוגיה של כלי הדם.

מבוא

עורקי התנגדות מווסתים את זרימת הדם והלחץ ועוברים שינויים משמעותיים במצבים כמו יתר לחץ דם, סוכרת וטרשת עורקים 1,2,3,4,5. בחינת עורקי התנגדות אנושיים חיונית להבנת פתולוגיות לב וכלי דם ולפיתוח טיפולים ממוקדים 6,7,8,9,10. שיטות מסורתיות לחקירת כלי דם הובילו לעתים קרובות לחפצים ולאובדן שלמות תלת מימדית 10,11,12,13,14,15. כדי להתמודד עם מגבלות אלו, אנו מציגים שיטה חדשנית להכנת עורקי התנגדות אנושיים מבודדים על ידי החדרת ג'ל ללומן, ובכך לשמר את המבנה המשוער שלהם ex vivo ו/או in vivo.

טכניקת עירוי ג'ל תוך-לומינלית זו שומרת על הארכיטקטורה הטבעית של העורקים, ומאפשרת ייצוג מדויק יותר של מצבם הפיזיולוגי. על ידי ייצוב מבנה כלי הדם, שיטה זו מאפשרת בחינה מפורטת של שיפוץ עורקים, מבנה תאי, מיקרו-דומיינים, צמתים הטרו-תאיים וביטוי גנים/חלבונים על פני שכבות תאים שונות. טכניקה זו מועילה במיוחד לחקר רכיבים ספציפיים לסוג התא במצבים בריאים וחולים כאחד.

טכניקה זו יושמה בהצלחה במחקר האחרון שלנו16, והדגימה את יעילותה בשימור השלמות המבנית והמולקולרית של עורקי ההתנגדות האנושיים, מה שמקל על הדמיה מתקדמת וניתוח מקיף. הצלחת יישום זה נתנה לנו השראה לתעד את הפרוטוקול המפורט הזה לשימוש אחרים.

במאמר שיטה זה, אנו מתארים את הפרוטוקול להכנת עורקי התנגדות אנושיים מבודדים והחדרת ג'ל מייצב רקמות תואם ביולוגית (Tissue Guard Gel). כאן, אנו מתארים את שיטת הניסוי ומדגימים את יישומיה להערכת מבנה העורקים ולחקירת דפוסי ביטוי גנים וחלבונים בשכבות תאים שונות. על ידי מתן טכניקה מקיפה וניתנת לשחזור להכנת עורקי התנגדות אנושיים, אנו שואפים לקדם את המחקר בביולוגיה קרדיווסקולרית, לשפר את יכולת השחזור של התוצאות ולתרום לגישות אבחון וטיפול חדשות למחלות לב וכלי דם.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

לפני ביצוע הניסויים הבאים, ודא שהשימוש ברקמות אנושיות והנהלים הבאים מאושרים על ידי מועצת הביקורת המוסדית (IRB). איסוף רקמת האומנטל ממטופלים שעברו ניתוחי בטן בעלי התוויה קלינית במרכז הקליני של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) בוצע באישור מועצת הביקורת המוסדית של ה-NIH (NCT01915225). כל המשתתפים סיפקו הסכמה מדעת בכתב.

1. חומרים וציוד

  1. עיין בטבלת החומרים למידע על כל הריאגנטים והחומרים הנדרשים לפרוטוקול זה. לפרטים נוספים, ניתן לעיין במדריכים ובאתרי האינטרנט המשויכים לספקים המתאימים לפי הצורך.

2. אוסף רקמות אומנטליות אנושיות

  1. אסוף רקמות אומנטליות אנושיות מהצוות המנתח.
  2. הנח מיד את הרקמות למיכל דגימה מקורר מראש המכיל מאגר קרבס הנסלייט (KH) קר (הרכב: 118 מ"מ NaCl, 4.7 מ"מ KCl, 1.2 מ"מ MgSO4, 1.2 מ"מ KH2PO4, 25 מ"מ NaHCO3, 10 מ"מ HEPES, 2.0 מ"מ CaCl2 ו-11.1 מ"מ גלוקוז) על קרח.
  3. ודא שהטישו שקוע במלואו במאגר ולאחר מכן סגור היטב את המכסה.
  4. העבירו את הרקמות במיכל הסגור על קרח למעבדה תוך 30 דקות מרגע האיסוף כדי להבטיח את כדאיות הרקמות.
    הערה: הקפד להתאים את ה-pH ל-7.4 באמצעות NaOH במהלך הכנת המאגר.

3. מיקרו-דיסקציה של עורקי התנגדות קטנים אנושיים

  1. עם ההגעה למעבדה, יש לשטוף את רקמות האומנטל עם בופר KH קר כדי להסיר עודפי דם.
  2. בחר חתיכה מהאזור הוסקולרי יותר של הרקמה לדיסקציה במאגר קר בצלחת פטרי על קרח.
  3. תחת מיקרוסקופ דיסקציה זהה עורקי התנגדות קטנים (קוטר 100-300 מיקרומטר) על סמך מיקומם ודפוס ההסתעפות שלהם.
  4. בודד בזהירות את העורקים המזוהים מרקמות השומן והחיבור שמסביב. בעזרת מלקחיים עדינים ומספריים מיקרו, חותכים ומסירים את הרקמות שמסביב מבלי לפגוע בעורק.
  5. שמור את העורקים המבודדים במאגר קר לאורך כל הליך הדיסקציה כדי לשמור על כדאיות ולמנוע כל השפלה אנזימטית.
    הערה: לפני הדיסקציה, ודא שאזור החיתוך נקי. ודא שקנה המידה האובייקטיבי של המיקרוסקופ ו/או תוכנת המצלמה מכוילים כראוי כדי למדוד במדויק את הקוטר בהגדלות שונות. בדרך כלל, הוורידים נראים בבירור, והעורקים ממוקמים ממש ליד הוורידים או סביבם. דפנות העורקים עבות יותר מאלה של הוורידים. כאשר הם מבודדים מהרקמות הסובבות, העורקים שומרים על המבנה שלהם כצינורות כלי דם שלמים. לעומת זאת, לוורידים יש דפנות דקות יותר, לעתים קרובות נראים בהירים יותר בגלל הדם בלומן שלהם, ונוטים להיות שבירים יותר לאחר הפרדה מהרקמה.

4. הכנת תא השריר התרבית

  1. הכן תא מיוגרף תרבות עם שתי צינוריות זכוכית לקנולציה ולחץ של העורקים המנותחים.
  2. הכינו מזרק של 5 מ"ל עם צינורות נימיים נקיים ומלאו במאגר KH טרי. חבר את הצינור לקצה אחד של הצינורית ומלא ב-KH, מבלי להשאיר בועות אוויר.
  3. מלאו את החדר במאגר קר והניחו אותו על קרח כדי לשמור על טמפרטורה נמוכה.
    הערה: ניתן להשתמש בכלי קטן בהתאמה אישית עם שתי צינוריות, שנועדו לחקות את תא השריר.

5. קנולציה ולחץ של עורקים

  1. העבירו בזהירות את העורק המנותח לתא השריר באמצעות מלקחיים עדינים או פיפטת העברה בקוטר גדול מזה של העורק.
  2. הכינו ארבעה קשרים פתוחים עם תפר הניילון (תפר 11/0, 7 שכבות) והניחו שניים מהם על כל צינורית לפני קנולציה של העורק.
  3. קנול את הקצה הפרוקסימלי של העורק על ידי החלקתו על צינורית זכוכית באמצעות מלקחיים עדינים ואבטח אותו עם שני תפרי הניילון.
  4. השתמש במאגר KH במזרק כדי לשטוף בעדינות את העורק הקנולטי כדי להסיר את כל הדם שנותר.
  5. קנול את הקצה הדיסטלי של העורק ואבטח אותו באופן דומה.
  6. הנח את התא על יחידת השריר המחוברת לבקר הלחץ והטמפרטורה.
  7. הגדר את הטמפרטורה ל-37 מעלות צלזיוס.
  8. הגדר את הלחץ התוך-לומינלי הראשוני ל-10 מ"מ כספית.
  9. הגדל את הלחץ התוך-לומינלי במרווחים של 10 מ"מ כספית כל 10 דקות עד להגעה ל-60 מ"מ כספית. ודא שהלחץ נשמר באופן עקבי באמצעות ווסת הלחץ המחובר למערכת השריר התרבית.
  10. השתמש במיקרו-מיקום כדי ליישר לאורך את העורק בלחץ לפי הצורך כדי להביא את האורך בערך לרמתו הפיזיולוגית.
  11. הפעל את MyoVIEW או תוכנה מתאימה אחרת על צג המחשב כדי לעקוב אחר קוטר העורקים הפנימי והחיצוני באמצעות מחוגה דיגיטלית.
  12. אפשר לעורק להתייצב במשך 45 דקות כדי להשיג קוטר יציב, ולהבטיח שהוא שומר על הממדים הפיזיולוגיים והגוון שלו.
  13. בדוק את כדאיות העורק באמצעות מכווץ כלי דם (למשל, 60 מ"מ KCl או פנילפרין) או מרחיב כלי דם (למשל, אצטילכולין) ורשום את השינויים בקוטר העורק.
    הערה: הפעלת לחץ מוגזם עם מזרק עלולה לפגוע בעורק, לכן חשוב לנקוט משנה זהירות בעת שטיפתו. השתמשו בכמות מינימלית של חוצץ והמשיכו בעדינות. לחלופין, ניתן לשטוף את הדם העורקי החוצה באמצעות מאגר הזלוף תוך הפעלת לחץ על העורק. ניתן ללחוץ על העורקים ב-80 מ"מ כספית, וזמן שיווי המשקל יכול להיות עד שעה.

6. קיבוע עורקים

  1. לאחר שיווי משקל, תקן את העורקים בצורה לומינלית ובלומינלית למשך הלילה עם פורמלין ניטרלי של 10%. שמור על לחץ קבוע של 60 מ"מ כספית כדי להבטיח שתהליך הקיבוע שומר על השלמות המבנית של דופן העורקים ורכיבי התא.
  2. לאחר הקיבוע יש לשטוף את העורקים בצורה זוהרת ואלומינלית עם PBS כדי להסיר כל קיבוע שנותר מהעורק ומהחדר.
    הערה: בהתאם למטרת המחקר ולאזור העניין לניתוח, ניתן לתקן את הכלי המותקן בנוכחות חומרים פרמקולוגיים כגון מרחיב כלי דם או מכווץ כלי דם. בשלב זה, ניתן לאחסן את העורק ב-PBS ב-4 מעלות צלזיוס למשך עד 48 שעות.

7. הכנת ג'ל מייצב רקמות

  1. נזלו את הג'ל מייצב הרקמות בשפופרת שלו על ידי חימום ל-60 ±-5 מעלות צלזיוס לפני השימוש.
  2. הנח את הצינור בטמפרטורת החדר (RT) למשך 3-5 דקות כדי שהג'ל הנוזלי יוריד את הטמפרטורה, ולאחר מכן הנח אותו על בלוק חימום בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס כדי לשמור על הג'ל הנוזלי למשך 10-15 דקות.
  3. השתמש במזרק סטרילי של 3 מ"ל המחובר לצינור נימי באורך 10-15 אינץ' כדי למשוך את הג'ל הנוזלי. המשך מיד לשלבי העירוי שלהלן.
    הערה: ניתן להנזיל את הג'ל בשיטות שונות. חיוני לעקוב אחר הוראות היצרן.

8. עירוי והטמעה של ג'ל תוך לומינלי

  1. שמור את העורקים הקבועים בתא עם PBS בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
  2. חבר את הקצה הדיסטלי של צינור הנימים המלא בג'ל נוזלי לצינורית הפרוקסימלית.
  3. כדי למנוע בועות אוויר שעוברות דרך הלומן בזמן החדרת הג'ל, הסר את הקצה הפרוקסימלי של העורק מהצינורית הראשונה כדי לאפשר לאוויר לבעבע החוצה ולאפשר לג'ל למלא את הצינורית.
  4. הרכיבו את העורק בחזרה על הצינורית והחדירו בעדינות את הג'ל ללומן העורק עד שהוא יוצא מהצינורית הדיסטלית.
  5. החלף מיד את ה- PBS בתא בנפח שווה של ג'ל נוזלי כדי למלא את החדר עד לרמה העליונה.
  6. אפשר לתא עם העורקים לנוח ב-RT על ידי ניתוק היחידה מבקר הטמפרטורה למשך כ-10 דקות כדי לאפשר לג'ל להתמצק בתוך הלומן כמו גם מחוץ ללומן בתא. זה מבטיח שהעורק מוטבע במלואו בג'ל, ושומר על המבנה התלת מימדי שלו.
  7. בעזרת מלקחיים עדינים, שחרר את תפרי הניילון ושלף בעדינות את הצינוריות מהתא.
  8. העבירו את כל הג'ל המוצק המכיל את העורק מהתא למיכל מלא באתנול 70%. האתנול משמש כפתרון החזקה לשימור הדגימה עד לעיבוד נוסף.
    הערה: שסתום תלת כיווני יכול להקל על הסרת בועות אוויר לפני החדרת הג'ל. ניתן לאשר את התמצקות הג'ל על ידי נגיעה עדינה בג'ל בתא באמצעות קצה פיפטה נקי.

9. היסטופתולוגיה

  1. חותכים את העורק לרוחב בעודו בג'ל ומניחים את הדגימות הללו במכונת עיבוד הרקמות לעיבוד לפי הוראות היצרן.
  2. לאחר מכן, הטמע את הרקמה ליצירת גוש פרפין. ודא שהדגימות מוטמעות "בקצה" כך שחתכים פונים כלפי מטה על הבלוק.
  3. חותכים חתכים ציריים בעובי 5 מיקרומטר באמצעות מיקרוטום. העבירו את החלקים החתוכים לשקופיות דבק.
  4. אופים את החלקים בחום של 60 מעלות צלזיוס למשך שעה, ואז מסירים שעווה עם קסילן, ולאחר מכן לחות עם שטיפות אלכוהול מדורגות.
  5. צבעו את החלקים בהמטוקסילין ואאוזין (HE) להיסטופתולוגיה שגרתית והתמינו באלכוהול חומצי 1%. בחנו את הקטעים במיקרוסקופ אור באמצעות מיקרוסקופ מתאים וצלמו תמונות באמצעות מצלמה תואמת.

10. אימונוהיסטוכימיה

  1. השג צביעה באמצעות מערכת אוטומטית עם מערכת זיהוי זיקוק פולימרים בהתאם לפרוטוקול היצרן.
  2. הסירו שעווה מחלקי הרקמה ב-72 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות עם תמיסת הסרת שעווה, ולאחר מכן החזירו לחות לחלקים עם שטיפות אלכוהול מדורגות ותמיסת כביסה.
  3. בצע אחזור אפיטופ המושרה על ידי חום על ידי חימום החלקים ל-100 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות בתמיסת אחזור אפיטופ 1 והחל בלוק מי חמצן למשך 5 דקות כדי להרוות את פעילות הפרוקסידאז האנדוגנית.
  4. יש למרוח נוגדנים ראשוניים (למשל, נוגדנים נגד CD31 או אקטין נגד שרירים חלקים) בריכוזים מתאימים מדוללים ברקע מדלל נוגדנים. דגרו את החלקים בפולימר פרוקסידאז חזרת למשך 8 דקות וצבעו את החלקים בתמיסת כרומוג'ן למשך 10 דקות. מכתים את השקופיות עם המטוקסילין למשך 5 דקות.

11. RNAScope הכלאה כרומוגנית באתרה

  1. בצע צביעה באמצעות מערכת אוטומטית עם ערכה מתאימה וערכת זיהוי אדום זיקוק פולימר בהתאם לפרוטוקול היצרן.
  2. אופים את החלקים במשך 30 דקות בחום של 60 מעלות צלזיוס, ואז מסירים את החלקים במשך 30 שניות בתמיסת שעווה המחוממת ל-72 מעלות צלזיוס.
  3. החזר את הרקמות עם שטיפות אתנול מוחלטות ותמיסת כביסה.
  4. טפל בקטעים בתמיסת אחזור אפיטופ 2 למשך 15 דקות בטמפרטורה של 95 מעלות צלזיוס ודגר את החלקים בתמיסת אנזים למשך 15 דקות בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס.
  5. הכלאה של הדגימות עם בדיקות RNAScope המתאימות לגני המטרה.
  6. השתמש בבדיקת גן משק בית בעלת ביטוי בינוני (למשל, פפטידילפרוליל איזומראז B) כדי לאשר שפע ושלמות RNA נאותים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

רקמות אומנטליות אנושיות התקבלו ממטופלים שעברו ניתוחי בטן בעלי התוויה קלינית. עורקי התנגדות קטנים (קוטר 100-300 מיקרומטר) בודדו בקפידה מרקמות השומן והחיבור שמסביב תחת מיקרוסקופ דיסקציה (איור 1A-C). העורקים המבודדים נוקו, עברו קנולציה מוצלחת והורכבו על צינוריות הזכוכית בתא השריר התרבית לצורך לחץ (איור 1D-F). העורקים שמרו על הממדים הפיזיולוגיים והטונוס שלהם כאשר הם מופעלים בלחץ של 60-80 מ"מ כספית, ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

התקדמות בהדמיה רפואית, טכניקות כירורגיות ומתודולוגיות מחקר שיפרו את ההבנה שלנו בארכיטקטורת כלי דם תלת מימדית, וחוללו מהפכה באבחון, תכנון כירורגי ומחקר 17,18,19,20. למרות חידושים אלה, שימור המבנה התלת-ממדי של עורקי התנגדות אנושיים מבודדים נותר מאתגר בשל אופיים העדין והמורכב, המסבך את הבידוד וההדמיה, ומגביל את המחקר המקיף של המאפיינים האנטומיים והפיזיולוגיים שלהם...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

NIAID GenAI שימש ליצירת מתאר ראשוני וטיוטה של כתב היד, שנכתב, נבדק ונערך ביסודיות על ידי המחברים האנושיים כדי להבטיח דיוק וקוהרנטיות.

תודות

מחקר זה מומן על ידי המחלקה למחקר תוך-כיתתי במכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות, פרויקט מספר AI001150 ל-HCA. אנו מודים לחבר המעבדה לשעבר שלנו, ד"ר סטיבן ברוקס, כמו גם לחברי המעבדה הנוכחיים שלנו, מוחמד איברהים, מרי ג'קסון וג'יאן וו מהמחלקה לגנומיקה פונקציונלית של מלריה, על סיועם בצילום תמונות במהלך התהליך.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אלכוהול חומצי 1% פוקוסStatLab  SL89-1
10% NBSLeica Biosystems3800598
מצלמת HDMI מיקרוסקופית 4Kהייטק אינסטרומנטס, בע"מ.HT-XP4K8MA
מדלל נוגדנים - הפחתת רקעדאקוS3022
מעבד רקמות אוטומטי Leica Biosystemsפגסוס/Cat# 14048858005 HistoCore
תמיסת הסרת שעווה בונדLeica BiosystemsAR9222
פתרון שחזור אפיטופ בונד 1Leica BiosystemsAR9961
פתרון שחזור אפיטופ בונד 2Leica BiosystemsAR9640
זיהוי זיקוק פולימרי קשרLeica BiosystemsDS9800
זיהוי אדום מזוקק בפולימר בונדLeica BiosystemsDS9390
תמיסת שטיפת בונד (10x)Leica BiosystemsAR9590
חבילת קנולה (זכוכית), 80– 100 & mu; mDMTקוד מוצר: 300407
CD31אבקאםab28364
צלחות ניתוח, גדולות (זכוכית פירקס), 93 מ"ממערכות אינסטרומנטציהSKU: DD-90
צלחות ניתוח, קטנותמערכות אינסטרומנטציהSKU: DD-50
מיקרוסקופ דיסקציההייטק אינסטרומנטס, בע"מ.ZEISS SteREO Discovery.V8 
דומונט #5 מלקחייםכלי המדע המדויקפריט מס' 11295-10
דומונט #5SF מלקחייםכלי המדע המדויקפריט מס' 11252-00
אקומאונטביו-קייר מדיקלEM897L
אאוסיןIHC WorldIW-3100B
המטוקסיליןביו-קייר מדיקלקת'-MM
מצלמה מפעילהאוליומפוסDP28
מיקרוסקופ הדמיהאוליומפוסBX51
בופר קרבס הנסלייט (עם 2 מ"מ סידן כלוריד)Boston BioProducts, Inc.SKU: C-10625N-200mL
בופר קרבס-הנסלייט (ללא סידן)Boston BioProducts, Inc.SKU: C-9906W-200mL
מדיית הרכבהתרמופישר סיינטיפיק4111
תא ומיוגרף ויחידהDMT202/204 ס"מ
PBS (מלח עם מאגר פוספט)תרמופישר סיינטיפיק10010023
PPIB  ACDBio313908
ערכת RNAscope 2.5 LS Reagent-REDACDBio322150
סטיינרלייקהמערכת אוטומטית Leica Bond RX
פיני חיתוך מפלדת אל-חלדמערכות אינסטרומנטציהSKU: PIN-0.1MM | PIN-0.2MM | PIN-#3 | PIN-VP-1
הפרפלסט של הניתוחLeica Biosystems39601006
ג'ל מגן רקמותStatLab  TissueGuard/SKU: TG12
מספריים קפיץ של ואנאס - קצה חיתוך 2 מ"מכלי המדע המדויקפריט מס' 15000-03
מספריים קפיץ ואנאס - קצה חיתוך 2.5 מ"מכלי המדע המדויקפריט מס' 15000-08
מספריים קפיץ ואנאס - קצה חיתוך 3 מ"מכלי המדע המדויקפריט מס' 15000-00
α-SMAאבקאםab5694

מקורות

  1. Intengan, H. D., Schiffrin, E. L. Vascular remodeling in hypertension: Roles of apoptosis, inflammation, and fibrosis. Hypertension. 38 (3 Pt 2), 581-587 (2001).
  2. Mulvany, M. J. Small artery remodelling in hypertension. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 110 (1), 49-55 (2012).
  3. Petrie, J. R., Guzik, T. J., Touyz, R. M. Diabetes, hypertension, and cardiovascular disease: Clinical insights and vascular mechanisms. Can J Cardiol. 34 (5), 575-584 (2018).
  4. Schiffrin, E. L. Vascular remodeling in hypertension: Mechanisms and treatment. Hypertension. 59 (2), 367-374 (2012).
  5. Zieman, S. J., Melenovsky, V., Kass, D. A. Mechanisms, pathophysiology, and therapy of arterial stiffness. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (5), 932-943 (2005).
  6. Bell, J. S., et al. Microstructure and mechanics of human resistance arteries. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 311 (6), H1560-H1568 (2016).
  7. Intengan, H. D., Schiffrin, E. L. Structure and mechanical properties of resistance arteries in hypertension: Role of adhesion molecules and extracellular matrix determinants. Hypertension. 36 (3), 312-318 (2000).
  8. Rajendran, P., et al. The vascular endothelium and human diseases. Int J Biol Sci. 9 (10), 1057-1069 (2013).
  9. Chistiakov, D. A., Orekhov, A. N., Bobryshev, Y. V. Endothelial barrier and its abnormalities in cardiovascular disease. Front Physiol. 6, 365(2015).
  10. Gurina, T. S., Simms, L. Histology, Staining. , Statpearls Publishing. Treasure Island, FL. (2025).
  11. Hillman, H. Limitations of clinical and biological histology. Med Hypotheses. 54 (4), 553-564 (2000).
  12. Taylor, A. M., Bordoni, B. Histology, Blood Vascular System. , Statpearls Publishing. Treasure Island, FL. (2025).
  13. Nolte, P., et al. Spatial correlation of 2D hard-tissue histology with 3D microCT scans through 3C printed phantoms. Sci Rep. 13 (1), 18479(2023).
  14. Taqi, S. A., Sami, S. A., Sami, L. B., Zaki, S. A. A review of artifacts in histopathology. J Oral Maxillofac Pathol. 22 (2), 279(2018).
  15. Torii, S., et al. Histopathologic characterization of peripheral arteries in subjects with abundant risk factors: Correlating imaging with pathology. JACC Cardiovasc Imaging. 12 (8 Pt 1), 1501-1513 (2019).
  16. Brooks, S. D., et al. Sickle trait and alpha thalassemia increase nos-dependent vasodilation of human arteries through disruption of endothelial hemoglobin-enos interactions. Circulation. 151 (1), 8-30 (2025).
  17. Chatzizisis, Y. S., et al. Role of endothelial shear stress in the natural history of coronary atherosclerosis and vascular remodeling: Molecular, cellular, and vascular behavior. J Am Coll Cardiol. 49 (25), 2379-2393 (2007).
  18. Li, S., Liu, S., Wang, X. Advances of 3D printing in vascularized organ construction. Int J Bioprint. 8 (3), 588(2022).
  19. Rengier, F., et al. 3D printing based on imaging data: Review of medical applications. Int J Comput Assist Radiol Surg. 5 (4), 335-341 (2010).
  20. Solanki, R., et al. The importance of three dimensional coronary artery reconstruction accuracy when computing virtual fractional flow reserve from invasive angiography. Sci Rep. 11 (1), 19694(2021).
  21. Tucker, W. D., Arora, Y., Mahajan, K. Anatomy, Blood Vessels. , Statpearls Publishing. Treasure Island, FL. (2025).
  22. Choi, J., Lee, E. J., Jang, W. B., Kwon, S. M. Development of biocompatible 3D-printed artificial blood vessels through multidimensional approaches. J Funct Biomater. 14 (10), 497(2023).
  23. De Graaf, M. N. S., et al. Multiplexed fluidic circuit board for controlled perfusion of 3D blood vessels-on-a-chip. Lab Chip. 23 (1), 168-181 (2022).
  24. Lapierre-Landry, M., Liu, Y., Bayat, M., Wilson, D. L., Jenkins, M. W. Digital labeling for 3D histology: Segmenting blood vessels without a vascular contrast agent using deep learning. Biomed Opt Express. 14 (6), 2416-2431 (2023).
  25. Abdul Sisak, M. A., et al. A near-infrared organic fluorescent probe for broad applications for blood vessel imaging by high-throughput screening via 3D-blood vessel models. Small Methods. 5 (8), e2100338(2021).
  26. Yu, T., Yang, Q., Peng, B., Gu, Z., Zhu, D. Vascularized organoid-on-a-chip: Design, imaging, and analysis. Angiogenesis. 27 (2), 147-172 (2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

ניתוח עורקים אנושייםטכניקת מיקרו-דיסקציהתא מיאוגרף לתרביותהרצפה של עורקיםצביעה אימונוהיסטוכימיתהיברידיזציה באתר (In Situ Hybridization)סממנים לתאי אנדותלתאי שריר חלק
במבחנה עירוי ג'ל תוך-לומינלי: גישה מתקדמת לניתוח מיקרוסקופי של עורקי התנגדות אנושיים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.