מאמר שיטה

מחקר השוואתי על תכולת הפוליסכרידים ופעילויות נוגדות החמצון של Hippophae rhamnoides subsp. sinensis ו-Hippophae gyantsensis

DOI:

10.3791/68855

⸱

15 באוגוסט 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה השווה את תכולת הפוליסכרידים של Hippophae rhamnoides subsp. sinensis Rousi ו-Hippophae gyantsensis (Rousi) Y. S. Lian שהושג באמצעות מיצוי מים חמים וכימת באמצעות קולורימטריה של פנול-חומצה גופרתית. חקרנו גם פעילויות נוגדות חמצון במבחנה של פוליסכרידים משני מיני היפופיאה אלה באמצעות ניסויי ניקוי רדיקלים חופשיים 2,2-דיפניל-1-picrylhydrazyl.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה מדווח על מחקר השוואתי מתוכנן היטב ומעמיק על תפוקות הפוליסכרידים, התוכן והפעילות נוגדת החמצון של שני מיני Hippophae בעלי ערך מחקרי רב, כלומר, Hippophae rhamnoides subsp. sinensis Rousi ו-Hippophae gyantsensis (Rousi) Y. S. Lian. סך הפוליסכרידים של H.rhamnoides subsp. sinensis ו-H. gyantsensis הושגו באמצעות מיצוי מים חמים. התשואות הושוו, ותכולת הפוליסכריד נקבעה במדויק באמצעות קולורימטריית פנול-חומצה גופרתית והושווה. בינתיים, הפעילות נוגדת החמצון של הפוליסכרידים הוערכה באמצעות ניקוי רדיקלים חופשיים של 2,2-דיפניל-1-picrylhydrazyl (DPPH). התוצאות הראו כי תפוקת הפוליסכריד (אחוז התמצית הגולמית ביחס לחומר הגלם) של H.rhamnoides subsp. sinensis (1.18% ± 0.02%) הייתה נמוכה משמעותית מזו של H. gyantsensis (3.12% ± 0.06%) (P < 0.01). תכולת הפוליסכרידים (המוגדרת כפוליסכרידים טהורים בתמצית) של H.rhamnoides subsp. sinensis (352.97±1.07 מ"ג/גרם) הייתה גבוהה משמעותית מזו של H. gyantsensis (300.21 ± 1.49 מ"ג/גרם) (P < 0.01). הריכוז המעכב למחצה של פעילות ניקוי הרדיקלים החופשיים DPPH של פוליסכרידים H.rhamnoides subsp. sinensis (0.026 ± 0.004 מ"ג/מ"ל) היה מעט נמוך מזה של פוליסכרידים של H. gyantsensis (0.021 ± 0.004 מ"ג/מ"ל). עם זאת, לא נמצא הבדל משמעותי בין שני מיני היפופיאה (P > 0.05). ניסוי זה הבהיר את ההבדלים בתפוקת הפוליסכריד, התוכן והפעילות נוגדת החמצון בין H.rhamnoides subsp. sinensis ו-H. gyantsensis. עבודה זו יכולה לספק בסיס מדעי להערכת האיכות של אשחר הים ולהמשך פיתוח של רכיבים פעילים רב-סוכרים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אשחר הים הוא הפרי הבשל המיובש של צמחים ממשפחת Elaeagnaceae. זהו חומר רפואי ואכיל נפוץ בסין, כמו גם מקור חשוב לתוספי תזונה ומוצרי בריאות בהודו, רוסיה, פינלנד ומדינות אחרות באירופה בגלל תכונותיו של המרצת הטחול כדי לסייע לעיכול, הקלה על שיעול והוצאת ליחה, קידום זרימת הדם ופיזור קיפאון דם1. אובליפיחה מכילה מערך עשיר של רכיבים ביו-אקטיביים, כגון פלבנואידים, תרכובות פנוליות, פוליסכרידים, גליקוזידים וחומצות אורגניות, ויש לה היסטוריה ארוכת שנים של שימוש ברפואה הסינית המסורתית 2,3. באופן כללי, פלבונואידים נחשבים לתרכובות הביו-אקטיביות החשובות ביותר של אובליפיחה. עם זאת, פוליסכרידים הוכרו לאחרונה כבעלי פעילות פיזיולוגית ופרמקולוגית מצוינת ולכן משכו את תשומת ליבם של חוקרים מדעיים. הוכח כי לפוליסכרידים של אובליפיחה יש פעילות בוויסות מערכת החיסון, הגנה על הכבד וויסות הפרעות בחילוף החומרים של השומנים ומיקרוביוטת המעי, כמו גם השפעות נוגדות חמצון, אנטי דלקתיות, אנטי גידוליות והיפוגליקמיות 4,5,6. הם יכולים לשמש כנוגדי חמצון טבעיים, ובכך לאפשר פיתוח של מזונות ותרופות פונקציונליים חדשים. בינתיים, פוליסכרידים של אשחר הים עלולים גם הם להתפרק על ידי חומצת קיבה, המועילה לספיגה וניצול של חומרים מזינים בגוף האדם 7,8.

מיצוי מים חמים (HWE), מיצוי בסיוע מיקרוגל ומיצוי בסיוע אולטרסאונד הן השיטות הנפוצות למיצוי פוליסכרידים של אשחר הים9. המבנים של פוליסכרידים המתקבלים בשיטות מיצוי שונות משתנים10מבחינת הרכב חד-סוכר, משקל מולקולרי (Mw), דרגת הסתעפות, תכולת חומצה אורונית, סוגי קישור גליקוזידיים וקונפורמציה טריהליקס11,12. בדרך כלל, תמיסות פוליסכרידים בהספק של מגה-וואט גבוהות הן בעלות צמיגות גבוהה ומסיסות נמוכה, מה שעלול להשפיע על הפעילויות והיישומים הביולוגיים שלהם13. HWE היא הטכניקה הנפוצה ביותר למיצוי פוליסכריד במסגרות מעבדה ותעשייתיות בשל יתרון הפשטות שלה14,15. יתר על כן, זוהי אחת משיטות המיצוי הנפוצות ביותר עבור פוליסכרידים של אשחר הים9. לכן, במחקר זה, פוליסכרידים הופקו באמצעות HWE. השיטות העיקריות לקביעת תכולת הפוליסכריד כוללות את שיטות החומצה הפנולית-גופרתית וחומצה אנטרה-גופרתית 16,17,18,19. שיטת החומצה הפנולית-גופרתית מיושמת באופן נרחב בגלל הליך הזיהוי הפשוט שלה, היציבות הטובה והרגישות הגבוההשלה 20. וון ועמיתיו קבעו את תכולת הפוליסכרידים המופקים מאשחר הים בשיטת פנול-חומצה גופרתית21. לכן, בניסוי זה, תכולת הפוליסכרידים נקבעה בשיטת חומצה פנולית-גופרתית. עומק תמיסת התרכובת הכתומה שנוצרה לאחר תגובת החומצה הפנולית-גופרתית הוא פרופורציונלי לתכולת הפוליסכרידים וניתן לקבוע אותו באורך גל של 490 ננומטר22.

פוליסכרידים טבעיים מפגינים פעילות נוגדת חמצון יוצאת דופן in vivo ו-in vitro. פוליסכרידים של פטל עשויים להקל על מתח חמצוני במודלים של תזונה עתירת שומן על ידי ויסות מיקרוביוטת המעיים23. פוליסכרידים הם המרכיבים הפעילים העיקריים ב-Pueraria lobata ומציגים פעילויות ביולוגיות מגוונות, כולל נוגדי חמצון24. Dou et al. מצאו כי לפוליסכרידים של פטל שחור יש פונקציות פיזיולוגיות, כגון נוגד חמצון25. הפעילות נוגדת החמצון של פוליסכרידים מוערכת בדרך כלל על בסיס יכולתם לנקות רדיקלים חופשיים שונים, כולל 2,2-דיפניל-1-picrylhydrazyl (DPPH), הידרוקסיל ורדיקלים אניונים סופראוקסיד, כמו גם יכולת ניקוי הקטיונים הרדיקליים שלהםABTS 26. ניתוח DPPH נמצא בשימוש נרחב מכיוון שהוא מודד את יכולתם של נוגדי חמצון להפחית רדיקלים סגולים של DPPH למולקולות יציבות צהובות בהירות באמצעות העברת אטומי מימן27. רדיקלי ה-DPPH הסגולים הנותרים מכומתים על ידי שימוש בספקטרופוטומטר אולטרה סגול (UV) גלוי (Vis) בכ-515-520 ננומטר כדי לקבוע פעילות נוגדת חמצון28,29.

מחקרים קודמים חקרו את התוכן והפעילות נוגדת החמצון של פוליסכרידים של אשחר הים21. עם זאת, הרוב המכריע של מחקרים אלה הוגבלו ל-Hippophae rhamnoides subsp. sinensis. זהו המין הנפוץ ביותר בסין והוא מתועד באופן רשמי בפרמקופיאה הסינית. מחקרים על Hipphophae gyantsensis, מין אנדמי לשיזאנג, סין, המשמש לעתים קרובות ברפואה הטיבטית ומתועד בקטלוג החומרים הרפואיים הטיבטיים של מחוז סצ'ואן, דווחו רק לעתים רחוקות. בנוסף, אף מחקר לא השווה את התוכן והפעילות נוגדת החמצון של פוליסכרידים ממינים שונים של היפופאה, כלומר H. rhamnoides subsp. sinensis ו-H. gyantsensis. לכן, מחקר זה משווה תחילה את תכולת הפוליסכרידים של H. rhamnoides subsp. sinensis ו-H. gyantsensis המופקים באמצעות HWE וכומתו באמצעות קולורימטריה של חומצה פנולית-גופרתית. הפעילויות נוגדות החמצון של פוליסכרידים משני מיני היפופיאה אלה נחקרו עוד יותר באמצעות מבחני ניקוי רדיקלים חופשיים DPPH. המחקר הנוכחי צפוי לספק נתונים מדעיים להערכת איכות ופיתוח נוסף של מרכיבי הפוליסכריד הפעילים של שני מיני היפופיאה הנ"ל.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. דוגמאות וחומרים

  1. אספו דגימות של אשחר הים של היפופיאות שונות מרמת צ'ינגהאי-שיזאנג.
    הערה: הדגימות זוהו על ידי פרופסור חבר יו ליו מאוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית. דגימות השוברים הופקדו בבית הספר לרפואה אתנית, אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית. מידע הדגימה מוצג בטבלה 1. פרטי הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.
  2. יבש את הדגימות בתנור בחום של 40 מעלות צלזיוס למשך 72 שעות.
  3. טוחנים 20 גרם מכל דגימת אשחר הים לאבקה ומעבירים אותה דרך מסננת מס '3. עבד כל דגימה עם שלושה שכפולים מקבילים. המשיכו לרסק את הדגימות שלא עברו דרך המסננת, ואז סננו אותן עד שכולן נופו.
  4. אחסן את הדגימות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס למחקרי מעקב.

2. מיצוי פוליסכרידים של אשחר הים

הערה: מחקר זה אימץ את שיטת המיצוי שנקבעה בעבר עבור אשחר הים עם כמה שינויים להשגת פוליסכרידים30.

  1. שוקלים 5.0 גרם אבקת דגימת אשחר הים ומניחים אותה בבקבוק עם תחתית עגולה בנפח 250 מ"ל. הוסף לאבקה 50 מ"ל אתנול נטול מים והשרו אותו בטמפרטורת החדר (RT; 25 מעלות צלזיוס) למשך 24 שעות כדי להסיר רכיבים ליפופיליים. עבד כל דגימה עם שלושה שכפולים מקבילים.
  2. סנן את אבקת הדגימה, שהושרה למשך הלילה, באמצעות משפך בוכנר, ולאחר מכן השליך את המסנן כדי להשיג את שאריות המסנן. שטפו את שאריות המסנן שלוש פעמים עם 50 מ"ל מים נטולי יונים וייבשו אותם למשקל קבוע ב-40 מעלות צלזיוס.
  3. העבירו את שאריות המסנן נטול השומן לבקבוק מיובש עם תחתית עגולה בנפח 250 מ"ל, הוסיפו 150 מ"ל מים נטולי יונים ביחס נוזלי מוצק של 1:30 (גרם/מ"ל), ובצעו מיצוי ריפלוקס באמבט מים בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס פעמיים למשך שעתיים בכל פעם. הפרד את המסנן כדי לקבל את תמיסת הפוליסכריד של אשחר הים הגולמי.
  4. יש לרכז את התמצית באמצעות מאייד סיבובי בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס למשך שעה וחצי. יש לאחסן את התמיסה המרוכזת במקרר בחום של 4 מעלות צלזיוס לשימוש מאוחר יותר.
  5. הוסף מגיב Sevage (CHCl3:C4H9OH = 4:1, v:v) לתמיסת הפוליסכריד הגולמי במגיב Sevage: יחס נפח תמיסת פוליסכריד גולמי של 1:4. מערבבים את התערובת בעזרת מערבל מגנטי במהירות של 1050 סל"ד למשך 20 דקות.
  6. העבירו את הנוזל לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל וצנטריפוגה אותו בטמפרטורה של 4000 × גרם למשך 15 דקות, ואז אספו את הסופרנטנט. חזור על הפעולה לעיל שלוש פעמים עד שלא יופיע משקע פלוקולנטי לבן בממשק בין שני השלבים.
  7. לרכז את הפוליסכריד של אשחר היםתמצית לאחר הסרת החלבון. הוסף אתנול נטול מים ביחס נפח 1:3 למשקעי אתנול נטול מים והניח את התערובת ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  8. הסר את השכבה העליונה של אתנול נטול מים, העביר את התערובת לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל וצנטריפוגה בחום של 4000 × גרם למשך 15 דקות כדי להשיג את המשקעים. יבש בהקפאה את המשקעים כדי להשיג פוליסכרידים כוללים.
  9. חשב את סך תפוקות הפוליסכריד באמצעות משוואה (1) להלן:
    figure-protocol-1
    הערה: במשוואה (1), m מייצג את המשקל (g) של פוליסכרידים של אשחר הים, ו-M מייצג את המסה (g) של דגימת אשחר הים.

3. קביעת תכולת פוליסכריד

  1. הכנת פתרון
    1. הכנת תמיסת מגיב פנול
      1. שקלו במדויק 3 גרם פנול והעבירו אותו לבקבוק נפחי חום. הוסף 50 מ"ל מים נטולי יונים כדי להמיס פנול.
      2. מנערים היטב את התערובת עד שהיא הומוגנית. סמן את הבקבוק ואחסן אותו לשימוש מאוחר יותר.
    2. הכנת תמיסה סטנדרטית של גלוקוז
      1. שקלו במדויק 10 מ"ג גלוקוז נטול מים והעבירו אותו לבקבוק נפח של 10 מ"ל. מוסיפים מים נטולי יונים להמסת הגלוקוז ומנערים היטב את התערובת.
      2. מדללים את התערובת לנפח הרצוי במים נטולי יונים לקבלת תמיסה סטנדרטית של גלוקוז.
    3. הכנת תמיסת מדגם בדיקה.
      1. שקלו במדויק 5 מ"ג של פוליסכרידים של אשחר הים מיובשים בהקפאה (ZG1-ZG5 ו-JZ1-JZ5) לתוך צלוחיות נפח (n = 10). הוסף מים נטולי יונים לכל בקבוק לנפח סופי של 50 מ"ל.
      2. סוניקטי את התערובת למשך 20 דקות עד שהפוליסכרידים נמסים לחלוטין. עבד כל דגימה עם שלושה שכפולים מקבילים.
  2. בניית העקומה הסטנדרטית
    הערה: בשיטת חומצה פנול-גופרתית, פוליסכרידים מגיבים עם חומצה גופרתית מרוכזת ליצירת נגזרות פורפורליות, אשר לאחר מכן מתעבות עם פנול ליצירת תרכובת כתומה-צהובה. אורך גל הספיגה המרבי של תרכובת זו הוא כ-490 ננומטר. לכן, אורך גל הזיהוי לניסוי זה נקבע על 490 ננומטר22.
    1. יש לדלל את תמיסת הגלוקוז הסטנדרטית במים נטולי יונים לריכוז של 0.1 מ"ג/מ"ל. על ידי שימוש במיקרופיפטה, העבירו בזהירות 200, 300, 400, 500, 600 ו-700 מיקרוליטר מהתמיסה הסטנדרטית של הגלוקוז לשש מבחנות נקיות נפרדות. הוסיפו מים טהורים לנפח כולל של 1.0 מ"ל, ולאחר מכן ערבבו בעדינות כל תמיסה כדי להבטיח דילול אחיד.
    2. הוסף 1.0 מ"ל של תמיסת פנול 6% ו-5.0 מ"ל חומצה גופרתית למבחנות שהוזכרו לעיל. מערבבים היטב, מצננים ואז מניחים לעמוד ב-RT למשך 30 דקות.
      הערה: פנול הוא תרכובת כימית רעילה, וחומצה גופרתית מרוכזת היא קורוזיבית. יש ללבוש כפפות בעת הכנת תמיסות פנול וחומצה גופרתית, ולבצע את ההליך בתוך מכסה אדים.
    3. העבירו את הדגימות הנ"ל לקובטות והשתמשו במים טהורים כריק במקום הדגימה. מדוד את הספיגה שלהם ב-490 ננומטר עם ספקטרופוטומטר UV-Vis ושלושה שכפולים.
    4. שרטט את העקומה הסטנדרטית עם ריכוזי גלוקוז כציר ה-x וערכי הספיגה כציר ה-y. השג את משוואת הרגרסיה וחשב את מקדם המתאם (R²).
      הערה: יש לחמם מראש את הספקטרופוטומטר UV-Vis במשך חצי שעה מראש. בעת מדידת הספיגה בשלב זה, הספיגה חייבת להיות בין 0.2 ל-0.8. לכן, יש לכמת את ריכוז הדגימה.
  3. מחקר מתודולוגיה
    1. מבחן דיוק:
      1. קח את JZ2 והכין את תמיסת הבדיקה בהתאם לשיטה המתוארת בשלב 3.1.3. בצע קולורימטריה של חומצה פנולית-גופרתית על ידי ביצוע השיטה המתוארת בשלב 3.2.2.
      2. לאחר מכן, קבע את הספיגה בהתאם להליך המתואר בשלב 3.2.3. חזור על הליך זה שש פעמים וחשב את סטיית התקן היחסית (RSD).
    2. מבחן יציבות:
      1. הכן את הפתרון לדוגמה של JZ2 על ידי ביצוע השיטה המתוארת בשלב 3.1.3. לאחר 0, 2, 4, 6, 8 ו-10 שעות לאחר הכנת הדגימה, בצע קולורימטריה של חומצה פנול-גופרתית בהתאם לשיטה המפורטת בשלב 3.2.2.
      2. לאחר מכן, קבע את הספיגה על ידי ביצוע ההליך המתואר בשלב 3.2.3 וחשב את ה-RSD.
    3. מבחן חזרתיות:
      1. הכן את הפתרון לדוגמה של JZ2 על ידי ביצוע השיטה המתוארת בשלב 3.1.3. הכן שישה שכפולים במקביל. לבצע קולורימטריה פנול-חומצה גופרתית בהתאם לשיטה שצוינה בשלב 3.2.2.
      2. לאחר מכן, קבע את הספיגה על ידי ביצוע ההליך המתואר בשלב 3.2.3 וחשב את ה-RSD.
    4. מבחן התאוששות:
      1. קח את JZ2 והכין את תמיסת הבדיקה בהתאם לשיטה המתוארת בשלב 3.1.3. הכן תשעה שכפולים במקביל. הוסף את פתרונות הייחוס השווים ל-80%, 100% ו-120% מסך תכולת הפוליסכריד בדגימה והכן שלוש דגימות מקבילות.
      2. בצע קולורימטריה פנול-חומצה גופרתית בהתאם לשיטה המצוינת בשלב 3.2.2. לאחר מכן, קבע את הספיגה על ידי ביצוע ההליך המתואר בשלב 3.2.3 וחשב את שיעור ההתאוששות באמצעות משוואה (2).
        figure-protocol-2
        הערה: במשוואה (2), A מייצג את כמות הגלוקוז בתמיסת דגימת אשחר הים, B מייצג את כמות הגלוקוז שנוספה, ו-C מייצג את הערך הנמדד של התמיסה המכילה גלוקוז ותמיסת דגימת אשחר הים.
  4. קביעת תוכן
    1. הכן את תמיסת הדגימה כמתואר בשלב 3.1.3 ובצע קולורימטריה של חומצה פנול-גופרתית בהתאם לשיטה המצוינת בשלב 3.2.2.
    2. קבע את הספיגה על ידי ביצוע ההליך המתואר בשלב 3.2.3 וחשב את תכולת הפוליסכריד בשיטת העקומה הסטנדרטית. בצע פעולות אלה במקביל שלוש פעמים עבור כל דגימה.

4. פעילות ניקוי רדיקלי של DPPH31,32

  1. שקלו במדויק 2.7 מ"ג DPPH לבקבוק נפח ריק של 50 מ"ל. ממיסים אותו ב-50 מ"ל של אתנול נטול מים כדי להכין תמיסת מלאי DPPH בריכוז של 0.054 מ"ג/מ"ל ולקבל את תמיסת העבודה DPPH.
    הערה: יש לאחסן את תמיסת ה-DPPH בחושך.
  2. שקלו במדויק 5 מ"ג ויטמין C (Vc) לבקבוק נפחי ריק של 10 מ"ל והמיסו אותו ב-10 מ"ל מים נטולי יונים להכנת תמיסת Vc בריכוז של 0.5 מ"ג/מ"ל. יש לדלל אותו ברציפות להכנת תמיסות בדיקת Vc בריכוזים של 0.5, 0.125, 0.03125, 0.0078125 ו-0.001953 מ"ג/מ"ל.
  3. שקלו במדויק 5 מ"ג מכל פוליסכריד של אשחר הים (ZG1-ZG5 ו-JZ1-JZ5). ממיסים כל דגימה ב-10 מ"ל של מים נטולי יונים להכנת תמיסות דגימה של פוליסכריד אשחר הים בריכוז של 0.5 מ"ג/מ"ל. יש לדלל את הפתרונות הנ"ל ברציפות להכנת תמיסות בדיקה של פוליסכריד של אשחר הים בריכוזים של 0.5, 0.125, 0.03125, 0.0078125 ו-0.001953 מ"ג/מ"ל.
  4. באמצעות תמיסת DPPH כמצע, הכינו את הקבוצות הבאות בצלחת של 96 בארות: קבוצת בקרה שלילית A0 (150 מיקרוליטר מים ו-50 מיקרוליטר תמיסת DPPH), קבוצת דגימה A1 (150 מיקרוליטר של תמיסת דגימה או Vc ו-50 מיקרוליטר של תמיסת DPPH), וקבוצת ביקורת דגימה A2 (150 מיקרוליטר של דגימה ו-50 מיקרוליטר של אתנול נטול מים). בצע הליך זה בשלוש עותקים.
  5. אפשר לתגובה להמשיך במשך 30 דקות בחושך. לאחר מכן, מדוד את הספיגה ב -517 ננומטר. חזור על הניסוי שלוש פעמים וחשב את קצב ניקוי הרדיקלים החופשיים DPPH באמצעות משוואה (3).
    הערה: יש לשמור על הספיגה של תמיסת ה-DPPH ב-0.7 ±-0.02. ריכוזים גבוהים ונמוכים מדי עלולים להוביל לקריאות ספיגה לא מדויקות, ובכך להשפיע על תוצאות הניסוי הסופיות.
    figure-protocol-3
    במשוואה (3), A0 הוא הספיגה של מים נטולי יונים ותמיסת DPPH, A1 הוא הספיגה של הדגימה או תמיסת Vc ו-DPPH, ו-A2 הוא הספיגה של הדגימה ואתנול נטול מים.
  6. חישוב ריכוז חצי מעכב (Ic50)
    1. צור טבלת נתונים מאורגנת ויזואלית הממחישה את המתאם בין ריכוזי תרכובות בדיקת התגובה (0.5, 0.125, 0.03125, 0.0078125 ו-0.001953 מ"ג/מ"ל) לבין ערכי התגובה באחוזים המתאימים להם.
    2. השתמש בהתאמת עקומה לא-ליניארית (עם GraphPad Prism) כדי לקבוע את ה-IC50 ואת שגיאת התקן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תשואה של פוליסכרידים גולמיים
פוליסכרידים הופקו באמצעות HWE. ריפלוקס אמבטיית המים מוצג באיור משלים 1. ריכוז תמיסת תמצית הפוליסכריד מתואר באיור משלים 2. אפקט ריבוד הצנטריפוגה לאחר דה-פרוטאינציה מוצג באיור משלים 3. לחמש הקבוצות של H. rhamnoides subsp. sinensis יש תפוקת פוליסכריד של 0.89% ± 0.01%, 0.78% ±-0.02%, 1.63% ±-0.03%, 1.50% ±-0.01%, 1.12 ±-0.03%, והתשואה הממוצעת היא 1.18% ±-0.02% (טבלה 2). התשואות הפוליסכרידיות ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אשחר הים הוא תרופה טיבטית מסורתית. פוליסכרידים הם מרכיבים חשובים של אשחר הים. מחקרים רבים נערכו על קביעת תכולת פוליסכרידים ופעילות נוגדת חמצון21. עם זאת, רק מעטים השוו את תכולת הפוליסכרידים והפעילויות נוגדות החמצון של מינים שונים של היפופאה, כגון מיני המרפא H. rhamnoides subsp. sinensis ו-H. gyantsensis. לכן, עבודה זו קבעה את תכולת הפוליסכרידים של שני מיני היפופיאה באמצעות קולורימטריית פנול-חומצה גופרתית והעריכה את פעיל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו נתמכה כספית על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82374145), הקרן למדעי הטבע של מחוז סצ'ואן (מס' 2025ZNSFSC0608) והקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' U23A20520)

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
איזון אנליטי (בדיוק של 0.0001 גרם)Sartorius Scientific Instruments (בייג'ינג) ושות', בע"מBSA224S-CW
איזון אנליטי (עם דיוק של 0.00001 גרם)Sartorius Scientific Instruments (בייג'ינג) ושות', בע"מCPA225D
צנטריפוגה במהירות נמוכה על ספסלשנחאי זיגוי מכשיר ושות', בע"מTD4K-Z
DPPHשנחאי Yuanye ביו-טכנולוגיה ושות', בע"מCAS 1898-66-4
אתנולצ'נגדו קלונג מוצרים כימיים ושות', בע"מCAS 64-17-5
צינור EPהונאן BKMAK אחזקות ושות', בע"מBS-20-M2 מ"ל
מייבש הקפאהתאגיד Labconcoלאבקונקו
גלוקוז נטול מיםצ'נגדו קלונג מוצרים כימיים ושות', בע"מCAS 50-99-7תקן ייחוס
GraphPad  פריים 9.5.0 תוכנת GraphPadלא ישיםקבע את ערך IC50 ואת ערך P.
תנור ייבוש בזרימת אוויר חםשנחאי Yiheng טכנולוגיה מכשיר ושות', בע"מנ.ב. DGG-9070A
חומצה L-אסקורביתבייג'ינג Labgic טכנולוגיה ושות', בע"מCAS 50-81-7תרופת ביקורת חיובית
קורא מיקרופלייטשנחאי Shanpu ביוטכנולוגיה ושות', בע"מקרא מקסימום 1500
צלחת 96 בארותבייג'ינג Labgic טכנולוגיה ושות', בע"מ11512
אוריג'ינפרו 2025מעבדת אוריג'יןלא ישיםיצירת תרשים קו של קצב שחרור ממכס
טיפים לפיפטותבייג'ינג Labgic טכנולוגיה ושות', בע"מBS-200-T200 μ L
טיפים לפיפטותבייג'ינג Labgic טכנולוגיה ושות', בע"מטי-1000-ב1000 μ L
פנולצ'נגדו קלונג מוצרים כימיים ושות', בע"מCAS 108-95-2
מאייד סיבובי  BUCHI ציוד מעבדה מסחר (שנחאי) בע"מבוצ'י R-100
מערכת מים טהורים סטנדרטית מסוג ריאגנטצ'ינגדאו פלום טכנולוגיה ושות', בע"מFBZ2001-up-p
אמבט מים לתצוגה דיגיטלית תרמוסטטיתGuan'an מכשירים מדעיים (ג'ה-ג'יאנג) ושות', בע"מWB100-6F
ספקטרופוטומטר גלוי UVשנחאי Mapada מכשירים ושות', בע"מ V-1100D
מנקה אולטראסונישנג ז'נג ChaoJie תעשייתי ושות', בע"מCJ-060SDמנקה אולטראסוני 360 W 50 הרץ

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chinese Pharmacopoeia Committee. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. 1, Chinese Medical Science and Technology Press. (2025).
  2. Su, S. Y., et al. Structure elucidation, immunomodulatory activity, antitumor activity and its molecular mechanism of a novel polysaccharide from Boletusreticulatus Schaeff. Food Sci Hum Wellness. 12 (2), 647-661 (2023).
  3. Wang, Y. X., et al. Utilizing relative ordered structure theory to guide polysaccharide purification for structural characterization. Food Hydrocoll. 115, 106603(2021).
  4. Zhang, W., et al. Seabuckthorn berry polysaccharide protects against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice: via anti-oxidative and anti-inflammatory activities. Food Funct. 8 (9), 3130-3138 (2017).
  5. Wang, X., et al. Seabuckthorn berry polysaccharide extracts protect against acetaminophen induced hepatotoxicity in mice via activating the Nrf-2/HO-1-SOD-2 signaling pathway. Phytomedicine. 38, 90-97 (2018).
  6. Zhao, L., et al. Proteomic analysis reveals the molecular mechanism of Hippophae rhamnoides polysaccharide intervention in LPS-induced inflammation of IPEC-J2 cells in piglets. Int J Biol Macromol. 164, 3294-3304 (2020).
  7. Chen, J. H., Chen, X., Zhou, G. H., Xu, X. L. Ultrasound: a reliable method for regulating food component interactions in protein-based food matrices. Trends Food Sci Technol. 128, 316-330 (2022).
  8. Pundir, S., et al. Ethnomedicinal uses, phytochemistry and dermatological effects of Hippophae rhamnoides L.: A review. J Ethnopharmacol. 266, 113434(2021).
  9. Teng, H., He, Z. G., Hong, C. Z., Xie, S. Z., Zha, X. Q. Extraction, purification, structural characterization and pharmacological activities of polysaccharides from sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.): A review. J Ethnopharmacol. 324, 117809(2024).
  10. Niu, H., et al. Pectin-stabilized emulsions: Structure-emulsification relationships, covalent and non-covalent modifications, and future trends. Trends Food Sci Technol. 159, 104986(2025).
  11. Dou, Z. M., Chen, C., Huang, Q., Fu, X. The structure, conformation, and hypoglycemic activity of a novel heteropolysaccharide from the blackberry fruit. Food Funct. 12 (12), 5451-5464 (2021).
  12. Niu, H., et al. Multiscale combined techniques for evaluating emulsion stability: A critical review. Adv Colloid Interface Sci. 311, 102813(2023).
  13. Yuan, D., Li, C., Huang, Q., Fu, X. Ultrasonic degradation effects on the physicochemical, rheological and antioxidant properties of polysaccharide from Sargassum pallidum. Carbohydr Polym. 239, 116230(2020).
  14. Chen, R., et al. Extraction, structural characterization and biological activities of polysaccharides from mulberry leaves: A review. Int J Biol Macromol. 257, 128669(2024).
  15. Lei, J., et al. Pressurized hot water extraction, structural properties, biological effects, and in vitro microbial fermentation characteristics of sweet tea polysaccharide. Int J Biol Macromol. 222 (Pt B), 3215-3228 (2022).
  16. Chen, F., Huang, G. L. Antioxidant activity of polysaccharides from different sources of ginseng. Int J Biol Macromol. 125, 906-908 (2019).
  17. Chen, Y. F., Yang, H., Shen, Z. Z., Ye, J. R. Whole-genome sequencing and potassium-solubilizing mechanism of Bacillus aryabhattai SK1-7. Front Microbiol. 12, 722379(2022).
  18. Yun, Y. H., et al. A green method for the quantification of polysaccharides in Dendrobium officinale. RSC Adv. 5, 105057-105065 (2015).
  19. Kim, J. M., et al. Quantitative determination of fucoidan using polyion-sensitive membrane electrodes. Anal Chim Acta. 877, 1-8 (2015).
  20. Ogura, I., Sugiyama, M., Tai, R., Mano, H., Matsuzawa, T. Optimization of microplate-based phenol-sulfuric acid method and application to the multi-sample measurements of cellulose nanofibers. Anal Biochem. 681, 115329(2023).
  21. Wen, J., et al. Polysaccharides from sea buckthorn - Ultrasound-assisted enzymatic extraction, purification, structural characterization, and antioxidant activity analysis. Food Chem X. 26, 102265(2025).
  22. Yue, F. F., et al. Effects of monosaccharide composition on quantitative analysis of total sugar content by phenol-sulfuric acid method. Front Nutr. 9, 963318(2022).
  23. Dou, Z. M., et al. Pectin-type polysaccharides from raspberry (Rubus idaeus L.): structure characterization and activity against DSS-induced colitis. Carbohydr Polym. 364, 123710(2025).
  24. Li, Q., et al. α-D-1,3-glucan from Radix Puerariae thomsonii improves NAFLD by regulating the intestinal flora and metabolites. Carbohydr Polym. 299, 120197(2023).
  25. Dou, Z. M., Chen, C., Fu, X. Digestive property and bioactivity of blackberry polysaccharides with different molecular weights. J Agric Food Chem. 67 (45), 12428-12440 (2019).
  26. Zhou, S. Y., Huang, G. L., Huang, H. L. Extraction, derivatization and antioxidant activities of onion polysaccharide. Food Chem. 388, 133000-133009 (2022).
  27. Musa, K. H., Abdullah, A., Kuswandi, B., Hidayat, M. A. A novel high throughput method based on the DPPH dry reagent array for determination of antioxidant activity. Food Chem. 141 (4), 4102-4106 (2013).
  28. Garcia, E. J., et al. Antioxidant activity by DPPH assay of potential solutions to be applied on bleached teeth. Braz Dent J. 23 (1), 22-27 (2012).
  29. Wei, A., Shibamoto, T. Antioxidant/lipoxygenase inhibitory activities and chemical compositions of selected essential oils. J Agric Food Chem. 58 (12), 7218-7225 (2010).
  30. Song, Y. C. Extraction, purification and modulation of mice gut microbiota by sea buckthorn polysaccharides. , Xihua University. (2022).
  31. Dong, N., et al. Exploring quality variations of Polygonati Rhizoma during nine-steaming and nine-drying process through color-polysaccharides-antioxidant activity linkages. Chin Tradit Herbal Drugs. 56 (2), 476-486 (2025).
  32. Rumpf, J., Burger, R., Schulze, M. Statistical evaluation of DPPH, ABTS, FRAP, and Folin-Ciocalteu assays to assess the antioxidant capacity of lignins. Int J Biol Macromol. 233, 123470(2023).
  33. Zhang, C. C., et al. Research progress in microevolutionary process of excellent traits and quality of Dao-di herbs. Chin Mater Med. 48 (22), 6021-6029 (2023).
  34. Li, X. W., Zhang, H. T., Zhang, Z. J. The relation between contents of flavonoids in leaves of Hippophae tibetana Schlecht. and ecological factors. J Ecological Environ. 27 (02), 239-245 (2018).
  35. Li, C., et al. Characterization, antioxidant and immunomodulatory activities of polysaccharides from Prunella vulgaris Linn. Int J Biol Macromol. 75, 298-305 (2015).
  36. Cao, C., et al. Physicochemical characterization, potential antioxidant and hypoglycemic activity of polysaccharide from Sargassum pallidum. Int J Biol Macromol. 139, 1009-1017 (2019).
  37. Li, Q. Y., et al. A comparison study on structure-function relationship of polysaccharides obtained from sea buckthorn berries using different methods: antioxidant and bile acid-binding capacity. Food Sci Hum Wellness. 13 (1), 494-505 (2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Sea BuckthornDPPH

מאמרים קשורים