הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

הערכה כמותית של פגוציטוזיס של אריתרוציטים אלוגניים וקסנוגניים על ידי מקרופאגים של חולדות במבחנה

775 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68904

⸱

22 באוגוסט 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Regenerative Medicine, and Department of Dermatology, Affiliated Hospital of Jiangsu University, Jiangsu University, 2Haihe Laboratory of Cell Ecosystem, Institute of Hematology, Chinese Academy of Medical Sciences, 3Guangdong Provincial Key Laboratory of Large Animal Models for Biomedicine, and South China Institute of Large Animal Models for Biomedicine, School of Pharmacy and Food Engineering, Wuyi University, 4State Key Laboratory of Cell Biology, Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, University of Chinese Academy of Sciences, 5Innovation and Transformation Center, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, 6Prometheus RegMed Tech Ltd, 7Department of Medicinal and Life Sciences, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Tokyo University of Science

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

עבודה זו מתארת פרוטוקול מתוקנן במבחנה לכימות והשוואה של שיעורי הפגוציטוזיס של תאי דם אדומים קסנוגניים (אנושיים) ואלוגניים (חולדות) על ידי מקרופאגים מבודדים של חולדות.

תקציר

השתלת תאים קסנוגניים נתקלת לעתים קרובות בדחייה חיסונית משמעותית, אפילו במודלים של בעלי חיים חסרי חיסון. בין מרכיבי החיסון הנותרים, מקרופאגים יכולים באופן פעיל להשתיל תאים אנושיים פגוציטוז, מה שמציב אתגר להשתלה ארוכת טווח. כדי לטפל בכך, פיתחנו בדיקה מתוקננת במבחנה לכימות פגוציטוזיס בתיווך מקרופאגים של תאי דם אדומים אנושיים לעומת חולדות (RBCs). מקרופאגים צפקיים של חולדות בודדו, תורבבו ונחשפו ל-RBCs אנושיים או חולדות. RBCs אנושיים זוהו באמצעות CD235a, בעוד ש-RBCs של חולדות סומנו מראש ב-DeepRed. ניתוח ציטומטריית זרימה נערך באמצעות CD163 לזיהוי מקרופאגים והרחקת יוד פרופידיום (PI) לתאים חיים בשער. התוצאות הראו הבדל משמעותי בפעילות הפגוציטית: 5.08% מהמקרופאגים בלעו RBCs אנושיים, בעוד שרק 1.59% פגוציטוזים RBCs של חולדות, מה שהניב אינדקס פגוציטוזיס יחסי של 3.21. פרוטוקול זה מאפשר הערכה כמותית של תאימות חיסונית ומציע שיטה הניתנת לשחזור להערכת תגובות חיסוניות מולדות בהשתלת זרים. הוא טומן בחובו פוטנציאל לחידוד בחירת התורם-מקבל והנחיית אסטרטגיות דיכוי חיסון במחקר תרגומי.

מבוא

השימוש בהשתלת תאים קסנוגניים, במיוחד השתלת תאים אנושיים במודלים של בעלי חיים, הוא אסטרטגיה חיונית במחקר ביו-רפואי1. זה מאפשר להעריך את הישרדות התאים, ההשתלה והתגובות החיסוניות בסביבה מבוקרת in vivo . בעוד שמודלים של עכברים שלטו היסטורית בתחום זה בשל הגנטיקה המאופיינת היטב וקלות המניפולציה שלהם, גודלם הקטן מהווה מגבלה משמעותית במחקרים הדורשים נפחי דם גדולים או תפוקת תאים גבוהה. לעומת זאת, חולדות מציעות מספר יתרונות, כולל מסת גוף גדולה יותר, רלוונטיות פיזיולוגית משופרת למערכות אנושיות ותשואה גבוהה יותר של דגימות ביולוגיות כגון דם או מקרופאגים צפקיים2. כתוצאה מכך, מודלים של חולדות נמצאים בשימוש הולך וגובר במחקרים הכוללים מחקר המטופויאטי ומערכת החיסון3.

אחד האתגרים העיקריים בהשתלה קסנוגנית הוא דחייה חיסונית. אפילו במודלים חסרי חיסון שבהם תאי T, תאי B או תאי NK מבוטלים גנטית, שאריות תאי חיסון מולדים, במיוחד מקרופאגים, נשארים פעילים מבחינה תפקודית4. מקרופאגים משמשים כמגנים קו ראשון של מערכת החיסון המארח, מזהים ומחסלים תאים זרים באמצעות פגוציטוזיס5. תהליך זה מווסת בחלקו על ידי האינטראקציה בין חלבון ויסות האות אלפא (SIRPα) על מקרופאגים ו-CD47, אות "אל תאכל אותי" המתבטא ברוב סוגי התאים. כאשר CD47 מתאים אנושיים אינו מזוהה על ידי מכרסמים SIRPα, אי התאמה זו עלולה לגרום לפגוציטוזיס משופר. אפילו בבעלי חיים מתירניים אלה הסובלים מחסר חיסוני, תופעה זו קיימת גם 6,7.

כימות פגוציטוזיס בתיווך מקרופאגים בהקשר זה הוא קריטי להערכת הסבירות להישרדות התאים ולאופטימיזציה של אסטרטגיות השתלה8. למרות שפותחו שיטות שונות in vivo ו-ex vivo להערכת דחייה חיסונית, בדיקות מתוקננות במבחנה לפגוציטוזיס מקרופאגים נותרו מוגבלות. שיטות מסורתיות מבוססות מיקרוסקופיה הן לרוב עתירות עבודה וחסרות קפדנות כמותית. ציטומטריית זרימה, לעומת זאת, מציעה בדיקה מבוססת תא יחיד ופלטפורמה כמותית המסוגלת להבחין במדויק בין סוגי תאים ולמדוד קליטה פגוציטית באמצעות זיהוי סמני פני השטח.

במאמר זה, פיתחנו בדיקה מתוקננת במבחנה כדי להעריך את הפגוציטוזה הדיפרנציאלית של RBCs אנושיים וחולדות על ידי מקרופאגים צפקים של חולדות. תאי דם אדומים משמשים כמודל אידיאלי לבדיקות פגוציטוזיס בשל המבנה הפשוט שלהם וביטוי CD47, הפועל כאות "עצמי" לעיכוב פינוי בתיווך מקרופאגים9. בפרוטוקול זה, מקרופאגים צפקיים של חולדות נקצרים באמצעות שטיפת צפק, מתורבתים במבחנה, ונחשפים ל-RBCs אנושיים או ל-RBCs אלוגניים של חולדות המסומנים ב-DeepRed. לאחר הדגירה המשותפת, ציטומטריית זרימה משמשת להערכת הפנמת RBCs על ידי מקרופאגים. מקרופאגים מזוהים על ידי ביטוי CD163, RBCs אנושיים על ידי CD235a, ו-RBCs של חולדות על ידי פלואורסצנטיות DeepRed. תאים מתים אינם נכללים באמצעות צביעת PI, מה שמבטיח שרק מקרופאגים ברי קיימא מנותחים.

גישה זו מאפשרת הערכה כמותית מדויקת של הפעילות הפגוציטית של תאי דם אדומים אלוגניים וקסנוגניים במבחנה, ומספקת תובנה לגבי היקף הפינוי החיסוני בתיווך מקרופאגים. בניסויים שלנו, מקרופאגים של חולדות הראו פגוציטוזיס גבוה משמעותית של RBCs אנושיים (5.08%) בהשוואה ל-RBCs של חולדות (1.59%), מה שהניב אינדקס פגוציטוזיס יחסי של 3.21. תוצאות אלו מדגישות את החשיבות של מנגנוני חיסון מולדים בסביבות קסנוגניות ומדגישות את הערך של בדיקה זו באימות מודל פרה-קליני.

לסיכום, הפרוטוקול המוצג כאן מציע שיטה ניתנת לשחזור ויעילה למדידת פגוציטוזיס מקרופאגים במבחנה. זה שימושי במיוחד עבור חוקרים העובדים בתחומים של השתלת זרים, מחקר תאי גזע המטופויאטיים ובדיקות תאימות אימונולוגית. על ידי מתן מסגרת סטנדרטית לכימות פגוציטוזיס, בדיקה זו יכולה לתרום לשיפור יכולת השחזור הניסויית ולהבנה משופרת של תגובות חיסוניות מולדות במודלים של השתלה בין מינים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים נערכו על פי המדיניות והנהלים האתיים שאושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת ג'יאנגסו (UJS-IACUC) (אישור מס. UJS-IACUC-2021090102). מחקר זה אושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית של בית החולים המסונף של אוניברסיטת ג'יאנגסו. כל הדגימות נאספו ממטופלים שנתנו הסכמה מדעת. יש להניח את הסופרנטנט שהוסר במיכל נוזל פסולת ייעודי ולהעבירו למחלקת המחלות הזיהומיות של בית החולים.

1. בידוד מקרופאגים

  1. הכנה: הכינו את החומרים הדרושים, כולל חולדות ניסוי, מיכלי הרדמה, כוסות ואיזופלורן כחומר הרדמה, וקררו מראש את הצנטריפוגה ב-4 מעלות צלזיוס.
  2. הרדמה והקרבת החולדות: בהתאם להנחיות המוסדיות לטיפול בבעלי חיים, המתת חסד של חולדות לאחר שאיפת הרדמה מוגזמת של איזופלורן.
  3. חיטוי אלכוהול: מניחים את החולדה המוקרבת בכוס ומוסיפים כמות מספקת של 75% אתנול כדי לכסות את החולדה במלואה. משרים 10 דקות.
  4. הזרקה וערבוב של נוזל בטן: חיטוי בטן החולדה והזרקת 50 מ"ל PBS סטרילי קר כקרח לחלל הבטן לאורך קו האמצע באמצעות מזרק.
    1. יש לנער בעדינות את החולדה ולעסות את דופן הבטן באצבעות כדי להבטיח ערבוב יסודי של הנוזל בחלל הבטן. יש לעסות במשך 2-3 דקות.
  5. איסוף נוזל הבטן: בצע חתך קטן בדופן הבטן של החולדה, הטה מעט את הגוף ושאף את נוזל הבטן בעזרת מזרק.
  6. צנטריפוגה: צנטריפוגה את הנוזל שנאסף ב-500 x גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס, והשליכו את הסופרנטנט.
  7. ליזה של RBCs: הוסף פי 3-5 מנפח כדורי התא של מאגר הליזה של RBC וערבב בעדינות במשך 1-2 דקות.
    הערה: למשלample, אם נפח גלולת התא הוא 1 מ"ל, הוסף 3-5 מ"ל של מאגר ליזה. ניתן לבצע שלב זה בטמפרטורת החדר או ב-4 מעלות צלזיוס, ואחריו צנטריפוגה ב-400-500 x גרם למשך 5 דקות. צנטריפוגה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס יעילה יותר. בשל הלחץ האוסמוטי, RBCs יעשו ליזה, והתמיסה תהפוך לאדומה. לאחר הצנטריפוגה, הסר את הסופרנטנט האדום.
    1. מתכון חיץ ליזה של תאי דם אדומים (RBC): ממיסים 8.3 גרם NH4Cl, 1.0 גרם KHCO3 ו-1.8 מ"ל של 5% EDTA ב-800 מ"ל של H2O מזוקק, ומסנן לעקר דרך מסנן של 0.2 מיקרומטר, qs עד 1000 מ"ל עם H2O מזוקק, ולהתאים את ה-pH 7.2~7.4. אם המשקעים האדומים עדיין נראים לעין, חזור על שלב זה עד שהתמיסה תהיה ברורה ושקופה. בדרך כלל, כמות קטנה של שאריות RBCs אינה משפיעה על הבדיקות הבאות (אם יש מעט RBCs בגלולה, ניתן להשמיט שלב זה).
  8. שטיפת תאים: שטפו את התאים פעמיים עם כ-10 מ"ל של מדיום RPMI 1640 מקורר מראש. צנטריפוגה ב-500 x גרם למשך 5 דקות ב-4 מעלות צלזיוס בכל פעם והשליכו את הסופרנטנט.
  9. השעיה מחדש וספירת תאים: השעו מחדש את התאים במדיום מקורר מראש המורכב מ-RPMI 1640 + 1% FBS + 1% PS, ספרו את התאים באמצעות צביעת Trypan Blue והעריכו את כדאיות התאים.
  10. תרבית תאים: אם נדרשת תרבית, זרעו את התאים בצפיפות של 1 × 106 / מ"ל בצלחת תרבית של 24 בארות, עם 1 מ"ל של RPMI 1640-10% FBS-1% PS בינוני לבאר. לאחר שעתיים של דגירה, החלף את המדיום ושטוף את הבארות 1-2 פעמים במדיום RPMI 1640 כדי להסיר תאים שאינם נדבקים.
    הערה: התאים הדבקים יהוו שכבה אחת של מקרופאגים. אם יש צורך במיצוי RNA, הוסף 1 מ"ל טריזול לגלולת התא, פיפטה מספר פעמים כדי לשבש את התאים, והעביר את התערובת לצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מ"ל למיצוי RNA מיידי או לאחסון ב-80 מעלות צלזיוס. לניתוח FACS, התאם את ספירת התאים ל-1 ×-106 לכל צינור, הוסף 20 מיקרוליטר של מאגר FACS והמשך עם צביעת FACS. מאגר FACS: DPBS + 2% FBS, מסנן מעוקר דרך מסנן 0.22 מיקרומטר, מאוחסן ב-4 מעלות צלזיוס).

2. אוסף RBCs של חולדות או בני אדם

  1. הכנה: יש לשטוף מראש צינורות צנטריפוגה של 15 מ"ל ומזרקים של 10 מ"ל עם הפרין.
  2. איסוף דם לב חולדה: לאחר הרדמה והקרבת החולדה, חותכים בזהירות חלק קטן מזנב החולדה במספריים ואוספים דם מווריד הזנב.
  3. איסוף דם אנושי: אסוף דם אנושי בטכניקת ניקור הוורידים.
  4. ערבוב דגימות דם: מערבבים 1 מ"ל של PBS עם 1 מ"ל של דם ורידי אנושי או דם חולדות.
  5. הפרדת שיפוע צפיפות Ficoll: הוסף 1.5 מ"ל של תמיסת Ficoll בצפיפות של 1.077 לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל לדם היקפי אנושי; הוסף 1.5 מ"ל של תמיסת Ficoll בצפיפות של 1.084 לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל לדם חולדות.
  6. שכבות של דגימות דם: שכבו לאט את דגימות הדם המדוללות לאורך דופן צינור הצנטריפוגה על תמיסת שיפוע הצפיפות המתאימה.
  7. צנטריפוגה: צנטריפוגה ב-400 x גרם למשך 30 דקות בטמפרטורה של 18-20 מעלות צלזיוס.
  8. הסרת שכבות פלזמה ולימפוציטים: הסר את שכבת הפלזמה העליונה, שכבת הלימפוציטים ושכבת תמיסת פיקול, והשאיר רק את שכבת כדוריות הדם האדומות התחתונה.
  9. שטיפת כדוריות דם אדומות: שטפו את תאי הדם האדומים פעם אחת עם 10 מ"ל PBS.
  10. צנטריפוגה והוצאת סופרנטנט: צנטריפוגה ב-400 x גרם למשך 5 דקות והשליכו את הסופרנטנט.
  11. השעיה מחדש וספירת תאים: הוסף 1 מ"ל של מדיום RPMI 1640 לצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מ"ל, ערבב עם כמות מתאימה של כדורית כדוריות דם אדומות ובצע ספירת תאים.

3. בדיקת פגוציטוזיס במבחנה

  1. בידוד ותרבית מקרופאגים: בודדו מקרופאגים וזרעו אותם בצפיפות של 1 × 106 תאים / באר בצלחת תרבית של 12 בארות. דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2 למשך שעתיים כדי לאפשר לתאים להידבק.
  2. הסרת תאים שאינם נדבקים: לאחר שעתיים של דגירה, הסר בזהירות תאים שאינם נדבקים ושטוף בעדינות עם מדיום RPMI 1640.
  3. המשך תרבית: המשיכו לתרבית את המקרופאגים הדבקים עד שעתיים כדי להבטיח הידבקות מלאה לתחתית צלחת התרבית.
  4. טיפול ברעב: לאחר שעתיים, יש להחליף את המדיום ב-RPMI 1640 ללא סרום ולדגור בתנאי רעב למשך שעתיים כדי להגביר את הפעילות הפגוציטית של המקרופאגים.
  5. תוספת של תאים אנושיים: הוסף תאים אנושיים שנצבעו מראש ב-DeepRed לצלחת התרבית ודגירה ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2 למשך שעתיים כדי לאפשר למקרופאגים לפגוציטוזה של התאים האנושיים.
  6. מסקנה וניתוח: לאחר בדיקת הפגוציטוזיס, התבונן בפעילות הפגוציטית תחת מיקרוסקופ או כמת באמצעות ציטומטריית זרימה (FACS).

4. ציטומטריית זרימה

  1. הכנת תאים: לעכל את התאים עם 0.05% טריפסין-EDTA ולהפסיק את העיכול באמצעות מדיום RPMI 1640 המכיל 10% FBS. צנטריפוגה של התאים, השליכו את הסופרנטנט, השעו מחדש את התאים במאגר FACS וספרו אותם. הכן 1 × 106 תאים לכל צינור בשני צינורות. בנוסף, הכינו צינור אחד של תאי דם אדומים אנושיים וצינור אחד של תאי דם אדומים של חולדות.
  2. הכנת צינור כתם יחיד: הוסף נוגדן CD163 נגד עכבר-חולדה לצינור דגימה אחד, נוגדן CD235a אנטי-אנושי לעכבר לצינור תאי הדם האדומים האנושיים, ו-DeepRed לצינור תאי הדם האדומים של החולדה.
    1. דגרו את הצינורות הללו על קרח, מוגנים מפני אור, למשך 30 דקות, עם ערבוב כל 10 דקות. הוסף 1 מ"ל של מאגר FACS כדי לשטוף את כל הנוגדנים הלא קשורים, הצנטריפוגה ולהשליך את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים ב-500 מיקרוליטר של מאגר FACS.
  3. הכנת דגימה: הוסף לצינורות הדגימה CD163 נגד עכבר-חולדה, נוגדנים CD235a אנטי-אנושיים לעכבר ו-DeepRed. דגירה על קרח, מוגן מאור, למשך 30 דקות, עם ערבוב כל 10 דקות. הוסף 1 מ"ל של מאגר FACS לכל צינור דגימה כדי לשטוף את כל הנוגדנים הלא קשורים, הצנטריפוגה ולהסיר את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים ב-500 מיקרוליטר של מאגר FACS.
  4. ניתוח: אל תכלול הידבקות תאים על ידי שער על FSC-H לעומת FSC-A. השתמש בשפופרות עם כתם יחיד כדי לכוונן את הגדרות המתח והקיזוז המתאימות לפני ניתוח הדגימות (איור 1). נתח את הנתונים באמצעות תוכנת FlowJo v10.8.1.
    הערה: בקרות CD163-FITC ו-PI מוכתמות בודדות שימשו לקביעת פיצוי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

באמצעות ניתוח זרימה ציטומטרית, אנו יכולים להסיק את קצב הפגוציטוזה של מקרופאגים בחולדות כלפי RBCs אנושיים ו-RBCs של חולדות. תאים מתים אינם נכללים תחילה באמצעות PI. מקרופאגים חיוביים ל-CD163 המבטאים חיובי ל-CD235a מצביעים על פגוציטוזיס של תאי דם אדומים אנושיים. שיעור המקרופאגים שיש להם hRBCs פגוציטוזיים מוגדר כקצב הפגוציטוזיס של מקרופאגים של חולדות כלפי RBCs אנושיים. שיעור הפגוציטוזיס של RBCs של חולדות חושב באופן דומה. תאים חיוביים כפולים CD235a ו-Deep Red מייצגים מקרופאגים שפוגציטוזים RBC...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקר זה ביסס בדיקה חזקה וניתנת לשחזור במבחנה כדי להעריך פגוציטוזיס בתיווך מקרופאגים של RBCs קסנוגניים ואלוגניים כאחד. במחקר זה, תאי דם אדומים אנושיים סומנו ב-CD235a-BV421, בעוד ש-RBCs של חולדות נצבעו בצבע DeepRed. כאשר מקרופאגים פוגוציטוזים את ה-RBCs המסומנים , הנוגדנים המצומדים (CD235a-BV421) או הצבע (DeepRed) מופנמים יחד. כתוצאה מכך, המקרופאגים עצמם מציגים פלואורסצנטיות מתאימה. בתנאים אלה, מקרופאגים פגוציטים יכולים להיות מזוהים בקלות על ידי FACS כאוכלוסיות חיוביות כפולות (למשל...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

JYG היא יועצת מדעית לחברת Prometheus RegMed Tech Ltd. מחברי השמאל מצהירים שאין ניגוד אינטרסים פוטנציאלי.

תודות

ברצוננו להודות לגב' מיי פאנג, גב' מין מא, גב' יו-טונג מנג ומר צ'ואן-קאי ליי על תרומתם הראשונית. מחקר זה מומן בחלקו על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82270697), פרויקט תכנון המדע והטכנולוגיה של מחוז גואנגדונג בסין (2021B1212040016), קרן המחקר הבסיסי והיישומי של גואנגדונג (2023A1515012574), היחידה לטיפוח משמעת מפתחות רפואיים במחוז ג'יאנגסו (JSDW202229) ומעבדת האיהה של קרן החדשנות של המערכת האקולוגית התאית (HH24KYZX0008), קרן סין ליזמות ותעסוקה לנוער - רווחת הציבור קרן (HH25KYHX0003).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.05% Trypsin-EDTAתרמופישר25300062
Deep Red Cell Trackerתרמופישר  C34565The Powder (15 & mu; g) פורקה ב-DMSO (20 & mu; L)
דימתיל סולפוקסיד (DMSO)סיגמאD2650
המלח המאופר בפוספט של דולבקו (DPBS)תרמופישרC10010500BT
Ficoll-Paque PLUSציטיבה17144002
פיקול-פאקה פרימיוםציטיבה17544602
נוגדן אנטי-אנושי לעכבר CD235a BV421BD ביוסיינסס562938
נוגדן FITC נגד עכבר CD163ביו-ראדMCA342F
חלבון KסיגמאP2308
RPMI 1640תרמופישר11875093

מקורות

  1. Ito, M., et al. NOD/SCID/GAMMAC(null) mouse: An excellent recipient mouse model for engraftment of human cells. Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).
  2. Szpirer, C. Rat models of human diseases and related phenotypes: A novel inventory of causative genes. Mamm Genome. 33 (1), 88-90 (2022).
  3. Zhang, L., et al. Survival-assured liver injury preconditioning (SALIC) enables robust expansion of human hepatocytes in Fah Rag2(-/-) IL2rg(-/-) rats. Adv Sci (Weinh). 8 (19), e2101188(2021).
  4. Rongvaux, A., et al. Corrigendum: Development and function of human innate immune cells in a humanized mouse model. Nat Biotechnol. 35 (12), 1211(2017).
  5. Furuya, K., et al. The evidence of a macrophage barrier in the xenotransplantation of human hematopoietic stem cells to severely immunodeficient rats. Xenotransplantation. 28 (4), e12702(2021).
  6. Barclay, A. N., Van den Berg, T. K. The interaction between signal regulatory protein alpha (SIRPα) and CD47: Structure, function, and therapeutic target. Annu Rev Immunol. 32, 25-50 (2014).
  7. Ide, K., et al. Role for CD47-SIRPalpha signaling in xenograft rejection by macrophages. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (12), 5062-5066 (2007).
  8. Matlung, H. L., et al. The CD47-SIRPα signaling axis as an innate immune checkpoint in cancer. Immunol Rev. 276 (1), 145-164 (2017).
  9. Oldenborg, P. A., et al. Role of CD47 as a marker of self on red blood cells. Science. 288 (5473), 2051-2054 (2000).
  10. Gu, B. J., et al. A quantitative method for measuring innate phagocytosis by human monocytes using real-time flow cytometry. Cytometry A. 85 (4), 313-321 (2014).
  11. Joffe, A. M., Bakalar, M. H., Fletcher, D. A. Macrophage phagocytosis assay with reconstituted target particles. Nat Protoc. 15 (7), 2230-2246 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

CD163CD235aIn Vitro
הערכה כמותית של פגוציטוזיס של אריתרוציטים אלוגניים וקסנוגניים על ידי מקרופאגים של חולדות במבחנה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.