הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

כולסטרול וסטארמיד מתווכים אפופטוזיס לימפוציטים והפרשת ציטוקינים בזאבת אדמנתית מערכתית

529 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/69038

⸱

17 באוקטובר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Anhui University of Science & Technology, The First Hospital, 2Department of Rheumatism and Immunology, Peking University Shenzhen Hospital, 3School of Computer Science and Engineering, Anhui University of Science & Technology, 4Taizhou University of Medicine, 5School of Medicine, Anhui University of Science & Technology, 6Department of Radiotherapy, Shenzhen Traditional Chinese Hospital, the Fourth Clinical Medical College of Guangzhou University of Chinese Medicine, the Clinical Medical Research Center of Shenzhen People's Hospital, 7Anhui Provincial Academician Workstation of Anhui University of Science & Technology for Autoimmune Disease Diagnostic Technology, 8Departments of Nephrology, Shenzhen People's Hospital

במאמר זה

הודעת תיקון

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

סיכום

כאן, אנו מציגים מחקר המשלב אקראיות מנדליאנית של שתי דגימות, אימות מטבולומיקה מבוססת כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה (LC-MS) ובדיקות פונקציונליות באמצעות לימפוציטים שמקורם בחולה זאבת אדמנתית מערכתית (SLE) כדי להעריך אפופטוזיס ותגובות ציטוקינים לאחר גירוי מטבוליט, במטרה לזהות סמנים ביולוגיים הקשורים לשומנים ולחקור את תפקידיהם בוויסות החיסוני בזאבת.

תקציר

שינויים בהרכב המטבוליטים בסרום נקשרו יותר ויותר לזאבת אדמנתית מערכתית (SLE), אך ההשפעות הישירות של מטבוליטים אלה על תפקוד תאי החיסון נותרו מוגדרות בצורה גרועה. מחקר זה נועד לזהות מטבוליטים בדם היקפי הקשורים לזאבת ולהעריך את השפעתם על אפופטוזיס והפרשת ציטוקינים בלימפוציטים שמקורם בחולי זאבת.

ביצענו ניתוח אקראיות מנדליאנית (MR) של שתי דוגמאות כדי לחקור את הקשר בין 565 מטבוליטים בסרום לזאבת, תוך שימוש במודל משוקלל השונות ההפוכה כגישה האנליטית העיקרית. ממצאים משמעותיים אומתו באמצעות נתוני מטבולומיקה לא ממוקדים שפורסמו בעבר בהתבסס על כרומטוגרפיה נוזלית-ספקטרומטריית מסה (LC-MS). בניסויים פונקציונליים, לימפוציטים שבודדו מחולי זאבת עוררו עם מטבוליטים מטרתיים, ולאחר מכן הערכה של אפופטוזיס והפרשת ציטוקינים.

ניתוח MR זיהה 28 מטבוליטים הקשורים באופן מובהק לזאבת. מתוכם, כולסטרול (OR = 1.462, 95% CI: 1.100-1.940, P = 0.008) וסטארמיד (OR = 0.125, 95% CI: 0.020-0.660, P = 0.014) אומתו באמצעות LC-MS ונמצאו גבוהים בחולי זאבת. ניתוח מאפייני ההפעלה של המקלט הראה ביצועי אבחון חזקים (AUC = 0.999 עבור כולסטרול; AUC = 1.000 עבור סטארמיד). מבחינה תפקודית, שני המטבוליטים גרמו לאפופטוזיס מוגבר ולהפרשה מוגברת של TNF-α, IFN-γ ו-TGF-β1 בלימפוציטים של זאבת.

לסיכום, הגישה המשולבת שלנו המשלבת קשר גנטי, פרופיל מטבוליט ומבחנים פונקציונליים מגלה כי כולסטרול עשוי לתרום לחוסר ויסות חיסוני בזאבת. למרות שסטארמיד הראה קשר שלילי עם סיכון לזאבת בניתוח MR, ההשפעות שלו במבחנה שיקפו את אלו של כולסטרול, מה שמרמז על תפקיד מורכב ותלוי הקשר. ממצאים אלה מדגישים את חשיבות חילוף החומרים של שומנים בזאבת ותומכים במחקר מכניסטי וקליני נוסף של השפעתה האימונולוגית.

מבוא

זאבת אדמנתית מערכתית (SLE) היא מחלה אוטואימונית כרונית, המאופיינת בפתוגנזה מורכבת וביטויים קליניים מגוונים, המשפיעה על מיליוני אנשים ברחבי העולם1. ההטרוגניות של זאבת - כאשר התסמינים שונים מאוד בין אנשים ומתפתחים עם הזמן - יוצרת אתגרים משמעותיים באבחון, ניטור פעילות המחלה והתאמת תוכניות טיפול מותאמות אישית 2,3. למרות שקריטריוני סיווג הזאבת של הליגה האירופית נגד שיגרון והקולג' האמריקאי לראומטולוגיה (EULAR/ACR) לשנת 2019 שיפרו את דיוק האבחון4, קריטריונים אלה אינם לוכדים את כל ביטויי המחלה ולעתים קרובות תלויים בהליכים פולשניים כמו ביופסיה של הכליה, שעלולים להיות לא מעשיים ומכבידים על המטופלים.

בשנים האחרונות הולך וגדל המחקר על מטבוליטים כסמנים ביולוגיים בזאבת, מה שמדגים את הפוטנציאל האדיר שלהם באבחון מוקדם של מחלות, הקלדה והערכה פרוגנוסטית 5,6,7. עם זאת, פוטנציאל התרגום של מחקר מבוסס מטבוליט בזאבת נותר מוגבל על ידי מספר אתגרים מרכזיים. ראשית, גודל מדגם קטן הוא אילוץ עיקרי8. רוב המחקרים המטבולומיים עד כה כללו מעט משתתפים יחסית, מה שמגביל את יכולתם ללכוד את ההטרוגניות הקלינית המלאה של זאבת. בהתחשב בכך שזאבת יכולה לנוע בין מעורבות עורית קלה לביטויים כלייתיים או נוירולוגיים חמורים, מחקרים עם מגוון מדגם לא מספיק עלולים לסבול מיכולת שחזור ירודה והכללה מוגבלת9. שנית, העומק המכניסטי נותר חסר. בעוד שמחקרים קודמים הראו קשרים בין מטבוליטים ספציפיים לפעילות המחלה, נזק לאיברים או מאפיינים קליניים מסוימים, רוב הממצאים נותרו תיאוריים באופיים10. מחקרים אלה התמקדו בעיקר בהבדלים כמותיים ברמות המטבוליטים ובמתאמים הסטטיסטיים שלהם עם אינדיקטורים קליניים, מבלי לחקור את התפקידים הסיבתיים של מטבוליטים באימונופתולוגיה של זאבת. מכיוון שחוסר ויסות חיסוני - כולל אפופטוזיס לימפוציטים חריג והפרשת ציטוקינים לא מאוזנת - הוא מרכזי לפתוגנזה של זאבת, הבנת האופן שבו מטבוליטים משפיעים על תהליכים אלה היא קריטית11. נכון לעכשיו, מעט מחקרים חקרו ישירות כיצד מטבוליטים ספציפיים מווסתים אפופטוזיס של תאי חיסון או ייצור ציטוקינים בהקשר של זאבת.

כאן, מחקר זה נועד לזהות סמנים ביולוגיים מטבוליים הקשורים לזאבת באמצעות שילוב של ניתוחי מטבולומיקה לא ממוקדים של מנדליאן (MR) ו-LC-MS, ולהבהיר את התפקידים התפקודיים של מטבוליטים מועמדים אלה בוויסות אפופטוזיס לימפוציטים וייצור ציטוקינים דלקתיים באמצעות מבחנים מבוססי תאים ממוקדים, כפי שמוצג באיור 1.

זהו המחקר הראשון המשלב MR, אימות מטבולומי ומבחנים תפקודיים במבחנה כדי לחקור את התפקידים הסיבתיים והמכניסטיים של מטבוליטים של שומנים - במיוחד כולסטרול וסטארמיד - בפתוגנזה של זאבת. על ידי שילוב של ראיות גנטיות, מטבוליות וניסיוניות, עבודה זו מספקת תובנה מקיפה ורב-שכבתית לגבי האופן שבו שינויים ספציפיים בשומנים עשויים להשפיע על חוסר ויסות חיסוני בזאבת. גישה אינטגרטיבית זו מציעה מסגרת חדשה לזיהוי סמנים ביולוגיים מטבוליים פוטנציאליים ומטרות טיפוליות במחלות אוטואימוניות12.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה נערך על פי קריטריוני הסיווג של EULAR/ACR לשנת 2019. מחקר זה אושר על ידי בית החולים העממי של שנזן (מספר אישור ועדת האתיקה LL-KY-2019514).

ניתוח אקראיות מנדליאנית (MR)

מקורות נתונים של GWAS
נתוני אסוציאציות גנטיות עבור זאבת ו-565 מטבוליטים התקבלו ממסד הנתונים של OpenGWAS (https://gwas.mrcieu.ac.uk/). מערכי הנתונים של GWAS של המחלה מסוכמים בטבלה 1, בעוד שהמקורות וגדלי המדגם עבור נתוני GWAS של המטבוליטים מפורטים בטבלה 2. מערכי נתונים אלה סיפקו את הבסיס לניתוח MR כדי לחקור קשרים סיבתיים בין מטבוליטים ל-SLE 13,14,15,16.

בחירת משתנים אינסטרומנטליים
וריאנטים גנטיים הקשורים למטבוליטים בדם וזאבת נבחרו כמשתנים אינסטרומנטליים (IVs) לניתוח ה-MR. ה-IVs נבחרו על סמך שלוש הנחות הליבה של MR: רלוונטיות, עצמאות והגבלת הדרה17. באופן ספציפי, פולימורפיזמים של נוקלאוטידים בודדים (SNPs) הקשורים למטבוליטים בסף מובהקות כלל-גנומי של P < 5 × 10-8 נבחרו18. כדי להבטיח עצמאות בין ה-IVs, בוצע גוש חוסר שיווי משקל (LD) עם סף של r2 <-0.001 ומרחק פיזי של 10,000 kb תוך שימוש באוכלוסייה האירופית כפאנל ייחוס19. תהליך זה מזער את היתירות והבטיח שכל עירוי מספק מידע ייחודי לניתוח ה-MR.

ניתוחים סטטיסטיים
הגישה הסטטיסטית העיקרית לניתוח MR הייתה שיטת משוקלל השונות ההפוכה (IVW), המשלבת את ההשפעות של מספר IVs כדי להעריך את ההשפעה הסיבתית של מטבוליטים על SLE20. כדי להסביר את הפליאוטרופיה הפוטנציאלית, ניתוחי רגישות נערכו באמצעות רגרסיה MR-Egger21. החוזק של כל IV הוערך באמצעות סטטיסטיקת F, כאשר רק SNPs המציגים F > 10 נשמרו כדי להבטיח חוזק מכשירחזק 22. SNPs עם סטטיסטיקת F נמוכה יותר לא נכללו כדי למנוע הטיית מכשירים חלשה. ניתוחי ה-MR הסופיים בוצעו רק כאשר לא זוהו הטרוגניות או פליאוטרופיה משמעותית, מה שמבטיח את מהימנות ההערכות הסיבתיות23.

ניתוחי רגישות
נעשה שימוש במספר ניתוחי רגישות כדי להעריך את החוסן של ממצאי ה-MR. ההטרוגניות בין ה-IVs הוערכה באמצעות מבחן Cochran's Q, בעוד שהפליאוטרופיה הוערכה באמצעות רגרסיה MR-Egger24. בנוסף, נערך ניתוח להשאיר אחד כדי לקבוע אם תוצאות ה-MR הושפעו באופן לא פרופורציונלי מכל SNP25 בודד. חלקות יער נוצרו כדי להמחיש את ההשפעות האישיות והמשולבות של העירוי. ניתוחים אלה ביחד הבטיחו שתוצאות ה-MR לא היו מוטות על ידי השפעות פליאוטרופיות או SNPs חריגים.

מקור נתונים מטבולומי
נתוני מטבולומיקה ששימשו במחקר זה נגזרו ממחקר שפורסם בעבר על ידי קבוצת המחקר שלנו10. במחקר זה, ביצענו ניתוחים מטבולומיים על דגימות סרום מ-121 חולי זאבת ו-106 אנשים בריאים. פרופיל מטבולומי לא ממוקד נערך באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד יחד עם ספקטרומטריית מסה (UHPLC-MS). הנתונים עובדו באמצעות תהליכי עבודה מטבולומיים סטנדרטיים, כולל זיהוי שיא, יישור ונורמליזציה, כדי לזהות מטבוליטים הקשורים באופן משמעותי לזאבת. לאחר מכן הוצלבו מטבוליטים אלה עם תוצאות ניתוח ה-MR כדי לזהות מטבוליטים חופפים. מידע מפורט יותר ניתן למצוא בפרסום הקודם10. מטבוליטים הקשורים באופן משמעותי בניתוח המטבולומיקה ואלה עם קשרים סיבתיים משמעותיים בניתוח MR מופו למזהי HMDB שלהם בהתאמה באמצעות פלטפורמת MetaboAnalyst. לאחר מכן זוהו המטבוליטים הנפוצים על ידי הצטלבות שתי הקבוצות של מזהי HMDB.

מדידות ציטוקינים ובדיקת אפופטוזיס
בסך הכל נרשמו 3 חולי זאבת (טבלה 3), בהתאם לקריטריוני הסיווג של EULAR/ACR לשנת 2019.

איסוף דגימות דם היקפיות ובידוד לימפוציטים
דגימות דם היקפיות (3-6 מ"ל) נאספו מהמשתתפים באמצעות שפופרות ואקום המכילות נתרן הפרין כנוגד קרישה. תאים חד-גרעיניים בדם היקפי (PBMCs) בודדו באמצעות צנטריפוגה של שיפוע צפיפות Ficoll-Paque (400-800 × גרם למשך 20-30 דקות). התאים המבודדים נשטפו פעמיים בתמיסת מלח עם פוספט (PBS, HyClone) באמצעות צנטריפוגה במהירות נמוכה (250 × גרם למשך 10 דקות) והושעו מחדש במדיום RPMI-1640 שלם בתוספת סרום בקר עוברי 10%. צפיפות התאים הותאמה ל-1 ×-106 תאים/מ"ל, כפי שאומת על ידי מונה תאים אוטומטי. תרחיף התאים נזרע לתוך צלחות תרבית והודגר מראש למשך שעתיים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באטמוספירה של 5% CO2 כדי לקדם היצמדות. לאחר הדגירה המוקדמת, תאים שאינם נדבקים בתרבית נאספו בקפידה ועברו בידוד לימפוציטים. המתלים שנאספו הונחו בעדינות על Ficoll-Paque וצנטריפוגה שוב ב-400 × גרם למשך 20 דקות ללא בלם. שכבת התא החד-גרעיני בממשק הפלזמה-פיקול נשאבה בקפידה, נשטפה פעמיים בתמיסת מלח עם פוספט (PBS), והושעתה מחדש במדיום RPMI-1640 המכיל 10% סרום בקר עוברי. כדאיות התאים וריכוז התאים הוערכו באמצעות מונה התאים האוטומטי, והלימפוציטים שימשו לאחר מכן ליישומים במורד הזרם.

טיפול ותרבית תאים
התאים חולקו לחמש קבוצות לטיפול: קבוצת ביקורת: טופלה בנפח שווה של DMSO. קבוצת טיפול בכולסטרול: טופלה בכולסטרול בריכוז של 1.5 ממול/ליטר. ריכוז של 1.5 ממול/ליטר של כולסטרול חופשי ששימש במחקר זה נבחר כדי לדמות מיקרו-סביבה עשירה בשומנים מעבר לרמות הפיזיולוגיות. הכולסטרול החופשי במחזור הדם אצל אנשים בריאים נע בדרך כלל בין 0.9-1.3 ממול/ליטר. הריכוז הגבוה מעט ששימש בניסוי זה נועד לחקות הצטברות שומנים פתולוגית שעלולה להתרחש ברקמות דלקתיות או מופרעות מטבולית בזאבת. קבוצות טיפול בסטארמיד: מטופל בסטארמיד בריכוזים של 5 מיקרומול/ליטר ו-10 מיקרומול/ליטר. ריכוזי הסטארמיד (5 ו-10 מיקרומול/ליטר) נבחרו על סמך דוח קודם26, שהציע כי רמות סטארמיד בטווח של 5-10 מיקרומול/ליטר עשויות לחקות הצטברות שומנים מוגברת בתנאים פתולוגיים. הכוונה כאן הייתה לחקור את ההשפעות הפרו-אפופטוטיות והאימונומודולטוריות של חשיפה לשומנים בריכוז גבוה על לימפוציטים זאבת, המדמה מצבים דלקתיים או לא מווסתים מבחינה מטבולית. כולסטרול וסטארמיד הומסו תחילה ב-DMSO להכנת תמיסות מלאי בריכוז גבוה, אשר לאחר מכן דוללו במדיום תרבית כדי להשיג את ריכוזי היעד. ריכוז ה-DMSO הסופי בכל הקבוצות לא עלה על 0.1% (v/v). לאחר הוספת הטיפולים המתאימים, הצלחות טולטלו בעדינות כדי להבטיח פיזור אחיד והודגרו במשך 48 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בסביבה של 5%CO2.

בדיקת אפופטוזיס
עבור ניסויי האפופטוזיס, 1 × 106 עד 3 × 106 תאים נאספו ונשטפו פעמיים עם PBS מקורר מראש. קבוצת ביקורת חיובית הוכנה על ידי השעיית תאים ב-500 מיקרוליטר של תמיסת בקרה חיובית לאפופטוזיס מקוררת מראש ודגירה על קרח למשך 30 דקות, ולאחר מכן שטיפה נוספת של PBS. קבוצות הניסוי טופלו כמתואר בסעיף 1.7, עם ביקורת, כולסטרול (1.5 מילימול לליטר) וסטארמיד (10 מיקרומול לליטר). לאחר הטיפול, 1-10 × 105 תאים (כולל אלה מהתרבית העליונה) נאספו והושעו מחדש ב-500 מיקרוליטר של 1× Binding Buffer (שהוכן על ידי דילול 5× תמיסת מלאי במים מזוקקים כפולים). כל דגימה עורבבה עם מספר שווה של תאים חיים שלא טופלו, והנפח הותאם ל-1.5 מ"ל עם מאגר מחייב 1× מקורר מראש. לאחר מכן חולק המתלה לשלושה צינורות: אחד לבקרה ריקה ושניים לפיצוי על כתם יחיד (נספח V-FITC ו-PI). לכל צינור ניסוי נוספו 5 מיקרוליטר של Annexin V-FITC ו-10 מיקרוליטר של תמיסת צביעה PI, ולאחר מכן מערבולת ודגירה בטמפרטורת החדר בחושך למשך 5 דקות. ציטומטריית זרימה בוצעה באמצעות לייזר עירור של 488 ננומטר כדי לזהות Annexin V-FITC (פליטה ב-530 ננומטר) ו-PI (פליטה ב-615 ננומטר). צינור הבקרה הריק שימש להגדרת מתחי פיזור קדימה (FSC), פיזור צד (SSC) ותעלות פלואורסצנטיות, בעוד שהצינורות בעלי הכתם היחיד שימשו לפיצוי פלואורסצנטי. אפופטוזיס נותח באמצעות עלילות פיזור דו-פרמטריות כדי להעריך את שיעור התאים האפופטוטיים27,28.

זיהוי גורם חיסוני
לאחר הדגירה של 48 שעות, תרחיפי התאים עברו צנטריפוגה (250 × גרם למשך 5 דקות) כדי לאסוף את חומרי העל של התרבית, שאוחסנו בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס עד לניתוח. כימות הציטוקינים בוצע באמצעות פאנל תגובה חיסונית חיוני אנושי מסחרי, בהתאם להוראות היצרן עם אופטימיזציות למכשיר. בקצרה, 25 מיקרוליטר של מאגר בדיקה ו-25 מיקרוליטר של תקנים (הנעים בין 2.4 ל-10,000 pg/mL) או דגימות נוספו לכל באר של מיקרו-פלטה. תערובת החרוזים עברה מערבולת במשך 30 שניות ונוספה לבארות, מה שהביא את נפח התגובה הכולל ל-75 מיקרוליטר. הצלחת הודגרה בטלטול (800 סל"ד) בטמפרטורת החדר למשך שעתיים בחושך. לאחר שתי שטיפות אוטומטיות (1× מאגר כביסה, 250 × גרם למשך 5 דקות), נוספו 25 מיקרוליטר של נוגדן לזיהוי ביוטיניל לכל באר והודגרו למשך שעה. לאחר מכן, 25 מיקרוליטר של סטרפטווידין-פיקואריתרין (SA-PE) נוספו למשך 30 דקות כדי להגביר את האות.

איסוף הנתונים בוצע באמצעות ציטומטר זרימה המצויד בלייזר עירור של 488 ננומטר ומסנן 575/26 ננומטר לזיהוי PE. לפני כל ניסוי, חרוזי כיול שימשו לאופטימיזציה של מתחי צינור מכפיל פוטו ופיצוי ספקטרלי. הנתונים נותחו באמצעות תוכנת LEGENDplex v8.0, כאשר ריכוזי הציטוקינים נקבעו באמצעות התאמת עקומה לוגיסטית של חמישה פרמטרים (5PL). מגבלות הזיהוי של כל ציטוקין נעו בין 0.68 pg/mL ל-1.97 pg/mL, וניסויים נערכו בכפולות כדי להבטיח דיוק (מקדם שונות בין בארות <10%). התוצאות בוטאו כממוצע ±± סטיית תקן, והבדלים סטטיסטיים בין הקבוצות הוערכו באמצעות ANOVA חד כיווני ואחריו מבחן פוסט-הוק של טוקי בתוכנת ניתוח סטטיסטית מתאימה. תקופת הדגירה של 48 שעות נבחרה על סמך השינויים הדינמיים בהפרשת הציטוקינים כדי ללכוד את התגובה החיסונית באופן מקיף. כיול מכשירים יומי ובקרה על ריכוז ה-DMSO (≤0.1%) הבטיחו את האמינות והשחזור של התוצאות 29,30,31.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

קשר בין מטבוליטים מרכזיים לביטויים קליניים בזאבת

במחקר זה, ניתוח MR של 565 מטבוליטים עם זאבת זיהה קשרים סיבתיים משמעותיים. כפי שמוצג באיור 2, זוהו בסך הכל 28 מטבוליטים הקשורים באופן מובהק לזאבת, הכוללים קטגוריות כגון פפטידים, חומצות אמינו, אנרגיה, שומנים, פחמימות וחומצות שומן. פפטידים כמו גמא-גלוטמילפנילאלנין ופרו-הידרוקסי-פרו, חומצות אמינו כולל טריפטופן בטאין ואספרגין, ומטבוליטים אנרגטיים כמו אלפא-קטוגלוטראט נמצאו בקורלציה שלילית עם זאבת. לעומת ז...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

המחקר שלנו מדגים כי כולסטרול של 1.5 ממול/ליטר, 5 מיקרומול/ליטר סטארמיד ו-10 מיקרומול/ליטר סטארמיד גורמים לדפוסים דומים של אפופטוזיס והפרשת ציטוקינים בלימפוציטים מחולי זאבת, אם כי נצפו שינויים בעוצמתם. באופן ספציפי, גם כולסטרול של 1.5 ממול/ליטר וגם 5 מיקרומול/ליטר סטארמיד הגדילו משמעותית את האפופטוזיס בלימפוציטים של זאבת. בנוסף, טיפול בכולסטרול של 1.5 ממול/ליטר בשילוב עם 5 מיקרומול/ליטר או 10 מיקרומול/ליטר סטארמיד שיפר עוד יותר את הפרשת הגורמים החיסוניים הרלוונטיים. תוצאות הניסוי חשפו רמו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי פרויקט קרן החדשנות לתארים מתקדמים של אוניברסיטת אנהוי למדע וטכנולוגיה (מס' 2024cx2204), תחנת העבודה של האקדמאי המחוזי של אנהוי (תחנת העבודה של האקדמאים המחוזיים של אנהוי (טכניקות אבחון להפרעות אוטואימוניות), אוניברסיטת אנהוי למדע וטכנולוגיה, הואינאן, 232001 אנהוי, סין) (מסמך מס' 317 [2023], שהונפק על ידי המחלקה למדע וטכנולוגיה של מחוז אנהוי), קרן המחקר הבסיסי והיישומי של מחוז גואנגדונג (מס' 2021A1515110250), הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82271824).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת אפופטוזיס Annexin V-FITC/PIמדעים מרוביםAP101לזיהוי אפופטוזיס באמצעות ציטומטריית זרימה
כולסטרולשנחאי ג'יפן ביוטכנולוגיה בע"מ.JP1210051משמש לניסויי גירוי ב-PBMCs (10 גרם)
הכנסת באר הנגדקורנינגCBG10001משמש להפרדה פיזית של תאים בניסויי קוקולטורה
ציטומטר זרימהבקמן קולטרCytoFLEXניתוח ציטומטרי זרימה
תוכנת GraphPad PrismGraphPadניתוח סטטיסטי וגרפים
פאנל תגובה חיסונית חיונית לאדם LEGENDplexביולג'נד740390גילוי מולטיפלקס של ציטוקינים הקשורים למערכת החיסון
Micropipette Set אפנדורףמגווןטיפול בנוזלים והעברת נפח (0.1– 10 & mu; L, 10– 100 & mu; L, 100– 1000 & mu; L)
מדיום הפרדת לימפוציטים דם היקפייםיצרן מקומיB1.1420Aמשמש לבידוד PBMC (200 מ"ל)
RPMI-1640 בינוניגיבקוC22400500BTמדיום גידול ל-PBMCs
סטירמידשנחאי ג'יפן ביוטכנולוגיה בע"מ.1267285משמש לגירוי שומנים של PBMCs (100 גרם)
לוח סטרילי עם 24 בארותיצרן מקומיBLJ182Aלתרבית תאים
קאונטסטארשנחאי רויו ביוטכנולוגיהCS200מונה תאים אוטומטי
PBSהייקלון10010023שטיפת תאים
פיקול-פאק  ציטיבה17-5442-03בידוד תאים סינוביאליים
תוכנת LEGENDplex  ביולג'נדגרסה 8ניתוח נתוני ציטומטריית זרימה
GraphPad Prism 9.0תוכנת GraphPadגרסה 9ניתוח סטטיסטי

מקורות

  1. Barber, M. R., et al. Global epidemiology of systemic lupus erythematosus. Nat Rev Rheumatol. 17 (8), 515-532 (2021).
  2. Owen, K. A., Grammer, A. C., Lipsky, P. E. Deconvoluting the heterogeneity of SLE: the contribution of ancestry. J Allergy Clin Immunol. 149 (1), 12-23 (2022).
  3. Allen, M. E., Rus, V., Szeto, G. L. Leveraging heterogeneity in systemic lupus erythematosus for new therapies. Trends Mol Med. 27 (2), 152-171 (2021).
  4. Aringer, M., et al. European League against Rheumatism (EULAR)/American College of Rheumatology (ACR) SLE classification criteria item performance. Ann Rheum Dis. 80 (6), 775-781 (2021).
  5. Yoon, N., Jang, A. K., Seo, Y., Jung, B. H. Metabolomics in autoimmune diseases: Focus on rheumatoid arthritis, systemic lupus erythematous, and multiple sclerosis. Metabolites. 11 (8), 812(2021).
  6. Liang, J., et al. Targeted metabolomics combined with machine learning to identify and validate new biomarkers for early SLE diagnosis and disease activity. Clin Immunol. 264, 110235(2024).
  7. Liu, Y., Yang, X. A review on the novel biomarkers of systemic lupus erythematosus discovered via metabolomic profiling. Front Immunol. 15, 1443440(2024).
  8. Cheng, S., et al. Uncovering potential biomarkers and metabolic pathways in systemic lupus erythematosus and lupus nephritis through integrated microbiome and metabolome analysis. BMC Microbiol. 25 (1), 275(2025).
  9. Júnior, V. F. A. J. A., Silva, S. M., Amaral, A. L., Perini, J. V. deF. V., dos Santos, J. E. N. Systemic lupus erythematosus (SLE): Most common clinical manifestations and renal complications. Braz J Implantol Health Sci. 6, 647-660 (2024).
  10. He, J., et al. Serum proteome and metabolome uncover novel biomarkers for the assessment of disease activity and diagnosing of systemic lupus erythematosus. Clin Immunol. 251, 109330(2023).
  11. Moysidou, E., et al. Lymphocytes change their phenotype and function in systemic lupus erythematosus and lupus nephritis. Int J Mol Sci. 25, 10905(2024).
  12. Deng, P., Li, Z., Yi, B., Leng, Y. A Mendelian randomization study to assess the genetic liability of type 1 diabetes mellitus for IgA nephropathy. Front Endocrinol. 13, 874562(2022).
  13. Wang, Y. F., et al. Identification of 38 novel loci for systemic lupus erythematosus and genetic heterogeneity between ancestral groups. Nat Commun. 12, 772(2021).
  14. Hom, G., et al. Association of systemic lupus erythematosus with C8orf13-BLK and ITGAM-ITGAX. N Engl J Med. 358, 900-909 (2008).
  15. Shin, S. Y., et al. An atlas of genetic influences on human blood metabolites. Nat Genet. 46, 543-550 (2014).
  16. Kettunen, J., et al. Genome-wide study for circulating metabolites identifies 62 loci and reveals novel systemic effects of LPA. Nat Commun. 7, 11122(2016).
  17. Moodie, E. E., le Cessie, S. Instrumental variables analysis and mendelian randomization for causal inference. J Infect Dis. 231 (3), 556-558 (2025).
  18. Zhang, S., Zhang, W., Sun, H., Xue, R., Lv, Q. Therapeutic potential of single-nucleotide polymorphism-mediated interleukin-6 receptor blockade in cancer treatment: A Mendelian randomization study. Heliyon. 9, (2023).
  19. Yuan, S., Larsson, S. C., Gill, D., Burgess, S. Concerns about instrumental variable selection for biological effect versus uptake of proton pump inhibitors in Mendelian randomisation analysis. Gut. 74, e6-e6 (2025).
  20. Lin, Z., Deng, Y., Pan, W. Combining the strengths of inverse-variance weighting and Egger regression in Mendelian randomization using a mixture of regressions model. PLoS Genet. 17 (1), e1009922(2021).
  21. Markozannes, G., et al. Systematic review of Mendelian randomization studies on risk of cancer. BMC Med. 20, 41(2022).
  22. Li, Y., et al. The effects of coagulation factors on the risk of endometriosis: a Mendelian randomization study. BMC Med. 21, 195(2023).
  23. Grant, A. J., Burgess, S. Pleiotropy robust methods for multivariable Mendelian randomization. Stat Med. 40 (25), 5813-5830 (2021).
  24. Wang, C., Zhang, J., Han, F., Liu, D., Han, Y. No evidence for a causal link between Helicobacter pylori infection and irritable bowel syndrome: a Mendelian randomization study. Front Microbiol. 14, 1268492(2024).
  25. Zhu, K., Shi, J., Yang, R., Zhou, C., Liu, Z. Evidence based on Mendelian randomization: causal relationship between mitochondrial biological function and lung cancer and its subtypes. Neoplasia. 46, 100950(2023).
  26. Lin, F., Wang, Z., Xiang, L., Deng, L., Cui, W. Charge-guided micro/nano-hydrogel microsphere for penetrating cartilage matrix. Adv Funct Mater. 31, 2101132(2021).
  27. Chen, L. J., et al. Long non-coding RNA 01614 hyperactivates WNT/β-catenin signaling to promote pancreatic cancer progression by suppressing GSK-3β. Int J Oncol. 61, 116(2022).
  28. Zhao, J., Liang, K., Zhong, H., Liu, S., He, R., Sun, P. A cold-water polysaccharide-protein complex from Grifola frondosa exhibited antiproliferative activity via mitochondrial apoptotic and Fas/FasL pathways in HepG2 cells. Int J Biol Macromol. 218, 1021-1032 (2022).
  29. Tovar Acero, C., et al. IL-4, IL-10, CCL2 and TGF-β as potential biomarkers for severity in Plasmodium vivax malaria. PLoS Negl Trop Dis. 16, e0010798(2022).
  30. Strengert, M., et al. Cellular and humoral immunogenicity of a SARS-CoV-2 mRNA vaccine in patients on haemodialysis. EBioMedicine. 70, 103524(2021).
  31. Bhandi, S., et al. Modulation of the dental pulp stem cell secretory profile by hypoxia induction using cobalt chloride. J Pers Med. 11, 247(2021).
  32. Mao, C., et al. Alpha-ketoglutarate alleviates systemic lupus erythematosus-associated periodontitis in a novel murine model. J Clin Periodontol. 52, 457-470 (2025).
  33. Vaishnav, P., Yoo, Y. J., Yoon, Y. J., Demain, A. L. Immunosuppressants: Remarkable Microbial Products. Bioactive Nat. Prod. Chem. Biol. , 43-82 (2014).
  34. Shi, W., et al. Causal effect of three autoimmune diseases on brain functional networks and cerebrospinal fluid metabolites to underlie the pathogenesis of autoimmune psychosis: a two-sample Mendelian randomization analysis. J Transl Med. 23, 440(2025).
  35. Baig, S., Vanarsa, K., Ding, H., Titus, A., McMahon, M., Mohan, C. Baseline elevations of leukotriene metabolites and altered plasmalogens are prognostic biomarkers of plaque progression in systemic lupus erythematosus. Front Cardiovasc Med. 9, 861724(2022).
  36. Warda, M., et al. Lipid rafts: novel therapeutic targets for metabolic, neurodegenerative, oncological, and cardiovascular diseases. Lipids Health Dis. 24, 147(2025).
  37. Hu, C., Wu, H., Zhu, Q., Cao, N., Wang, H. Cholesterol metabolism in T-cell aging: accomplices or victims. FASEB J. 37, e23136(2023).
  38. Song, Y., Liu, J., Zhao, K., Gao, L., Zhao, J. Cholesterol-induced toxicity: an integrated view of the role of cholesterol in multiple diseases. Cell Metab. 33, 1911-1925 (2021).
  39. Wei, Y., Wang, D., Topczewski, F., Demain, A. L. Saturated fatty acids induce endoplasmic reticulum stress and apoptosis independently of ceramide in liver cells. Am J Physiol-Endocrinol Metab. 291 (2), E275-E281 (2006).
  40. Rámek, J., Němcová-Fürstová, V., Pavlíková, N., Kovář, J. Effect of saturated stearic acid on MAP kinase and ER stress signaling pathways during apoptosis induction in human pancreatic β-cells is inhibited by unsaturated oleic acid. Int J Mol Sci. 18 (11), 2313(2017).
  41. Westerterp, M., et al. Cholesterol accumulation in dendritic cells links the inflammasome to acquired immunity. Cell Metab. 25 (6), 1294-1304.e6 (2017).
  42. Chen, J., et al. UPLC-MS/MS-based plasma lipidomics reveal a distinctive signature in systemic lupus erythematosus patients. MedComm (2020). 2 (2), 269-278 (2021).
  43. López, P., et al. Low-density granulocytes and monocytes as biomarkers of cardiovascular risk in systemic lupus erythematosus. Rheumatology (Oxford). 59 (7), 1795(2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תיקון


Formal Correction: Erratum: Cholesterol and Stearamide Mediate Lymphocyte Apoptosis and Cytokine Secretion in Systemic Lupus Erythematosus
Posted by JoVE Editors on 11/18/2025. Citeable Link.

This corrects the article 10.3791/69038

תגיות

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.