מאמר שיטה

שיטה משופרת מבוססת אירוסולים להעברת בלומיצין תוך-קנה הנשימה למודלים של עכברים ניתנים לשחזור ומינימום פולשני של פיברוזיס ריאתי

DOI:

10.3791/69131

⸱

16 בינואר 2026

 ,  , 
1State Key Laboratory of Common Mechanism Research for Major Diseases, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים פרוטוקול למידול פיברוזיס ריאתי בעכברים באמצעות בלומיצין אירוסולי המועבר דרך קנה הנשימה. שיטה אופטימלית זו מאפשרת מסירה אחידה, כמותית ומדויקת ללא חתך כירורגי, ומשפרת את השחזור והאמינות של פיברוזיס הנגרמת על ידי בלומיצין.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פיברוזיס ריאתי מאופיינת בהצטברות הדרגתית של רקמת צלקת פיברוטית בתוך הפרנכימה של הריאה, מה שמוביל לפגיעה חמורה בהחלפת הגזים. הוא עומד בבסיס ספקטרום של מחלות ריאה בין-תקופתיות כרוניות, במיוחד פיברוזיס ריאתי אידיופתי, מצב הקשור לתחזית ירודה במיוחד. בהינתן היעדר טיפולים יעילים, מודלים חזקים של עכברים הם קריטיים להבהרת מנגנונים פתולוגיים בסיסיים ולהערכת התערבויות אנטיפיברוטיות חדשניות. פיברוזיס ריאתי המושרה על ידי בלומיצין נותר המודל הניסיוני הנפוץ ביותר. דרכי מתן נפוצות בעכברים כוללות הזרקות תוך-ורידיות ותוך-פריטוניאליות, הזרקה פולשנית של קנה הנשימה הפתוח, וטפטוף לא פולשני של קנה הנשימה. עם זאת, שיטות ניתוח פולשניות גורמות לעיתים לפגיעת רקמות משניות, שעלולות לפגוע ביכולת השחזור והיציבות של המודלים. לעומת זאת, טפטוף לא פולשני של קנה הנשימה בדרך כלל גורם להתפלגות בליומיצין לא אחידה בין אונות הריאות ומעלה סיכון לחנק, מה שמפחית את השחזוריות ומגביר את האתגרים הטכניים. כדי להתמודד עם מגבלות אלו, פותחה שיטת מתן תוך-קנה מעודנת מבוססת אירוסולים, שהיא פשוטה יותר מבחינה תפעולית, זעיר-פולשנית, ניתנת לשחזור גבוהה ואתית עליונה על ידי הפחתת מצוקה משמעותית של בעלי חיים. באמצעות לרינגוסקופ של בעלי חיים קטנים כדי להמחיש ישירות את רימה גלוטידיס, מוכנס מחט אירוסולית מיוחדת לקנה הנשימה, צרה משמעותית מקוטר קנה הנשימה של העכבר. תמיסת בלומיצין מועברת בלחץ מבוקר מדויק, ויוצרת אירוסול דק. דבר זה מבטיח פיזור אחיד ויעיל של החומר לאורך פרנכימת הריאה. יתרה מזאת, ניתן לכוון באופן סלקטיבי לריאה השמאלית או הימנית על ידי הכוונת המחט אל הברונכוס המתאים. הקשר בין מינון לתגובה במודל האופטימלי הזה מאופיין באופן נרחב במעקב שיטתי אחר שינויים בתפקוד הריאות, בהופעות היסטופתולוגיות ובתכולת הידרוקסיפרולין בריאות. פרוטוקול ניסויי משופר זה צפוי להקל על תקנון מעבדתי, ולבסוף להאיץ את פיתוח ואימות קדם-קליני של טיפולים אנטיפיברוטיים חדשניים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פיברוזיס ריאתי (PF) היא קבוצת מחלות קטלניות המאופיינות בנזק פרנכימלי מתקדם לריאות ותיקון לא תקין, כאשר פיברוזיס ריאתי אידיופתי (IPF) מהווה 30%-40%, כאשר גיל האבחון החציוני של המטופלים הוא 65, ויותר מ-80% מהם בני 60 מעל גיל60, 1. 2. ככל שההזדקנות העולמית מתעצמת, שכיחות ה-IPF עולה משנה לשנה, עם שכיחות IPF עולמית של 3-9 מתוך 100,000 בשנה, ולפי מחקר בארצות הברית בקרב אנשים מעל גיל 65, השכיחות באוכלוסייה זו זינקה ל-93.7 ל-100,000 בשנה 3.4.

המודל הראשון שפותח היסטורית לפיברוזיס ריאתי היה מודל המושרה על ידי בלומיצין, המשמש לעיתים קרובות באקדמיה, עם האפיון הטוב ביותר והמודל החי הנפוץ ביותר כיום5, המשקף תכונות רבות של IPF ו-ILDs פיברוטיים אחרים, כולל דלקת ריאות, פגיעה אפיתלית, התרבות פיברובלסטים והפקדת מטריצה חוץ-תאיתמופרזת 6. בנוסף, ניתן למודל פיברוזיס ריאתי חריפה וכרונית בהתאם למינון ולתדירות מתן הבלומיצין. דווח כי הריאות נכנסות לשלב דלקתי חריף בתוך 5-7 ימים לאחר החשיפה לבלומיצין, ואחריו שלב פיברוטי שמתחילה סביב היום השביעי. עד היום ה-21, בדרך כלל נצפית שיפוץ פיברוטי בולט, המאפשר למודל לסכם הן את התגובה הדלקתית המוקדמת והן את הפתולוגיה הפיברוטית בשלב המאוחר באופן מוגדר זמנית7 (איור 1A). דבר זה מאפשר חקר כל תהליך המחלה מהפגיעה הראשונית ועד לשלב הפיברוטי, דבר שהוא חשוב מאוד לפיתוח תרופות ולמחקר מנגנונים בכל שלבי 8,9.

מסלולי המידול של בלומיצין מגוונים ויכולים להימסר באופן מקומי או מערכתית, כולל דרכי אנדוטרכיה, אף, תוך-ורידי ותוך-פריטוניאלי. הנפוץ ביותר הוא הזרקת אנדוטרכיאל. החיסרון הוא שהוא יוצר חתכים בעכברים, המשפיעים על שיעור ההישרדות של העכברים המדומים. בהמשך בוצעו שיפורים כדי לאפשר שימוש במחט שקועה לאינטובציה של קנה הנשימה והזרקת טפטוף בעכברים11. עם זאת, התרופה הנדחפת על ידי המזרק יכולה להתחלק רק בריאות כבלוק, מה שעלול לגרום לחלוקה לא אחידה של בלומיצין בכל אונה ריאה, ולגרום לצפיפות מקומית ולהשפיע על יציבות מודל העכבר. בנוסף, מחסניות נבולייזר תאיות שימשו להעברת בלומיצין, אך כמות האירוסול של בליומיצין שנשאפה בכל עכבר אינה ניתנת לכימות מדויק, וזמן ההשראה היחיד הואארוך 12. לכן, פותחה שיטת אספקת בלומיצין תוך-קנה המבוססת על אירוסולים מזוקקים עבור מודלים פולשניים ופחות פולשניים של עכברים של פיברוזיס ריאתי. בליומיצין עובר אירוסול, מה שמאפשר פיזור והשקעה אחידים בריאות, ובכך משחזר טוב יותר את הפתולוגיה של מחלות הריאה. מקווים כי הופעת שיטה זו תזרז את המחקר על תרופות שיכולות לרפא לחלוטין פיברוזיס ריאתי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ההליכים בבעלי חיים בוצעו לפי הנחיות מוסדיות שאושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים המוסדית (IACUC). אמצעי רווחת בעלי חיים נכונים יושמו לאורך כל הניסוי. עכברים זכרים מסוג C57BL/6 בגילאי 6-8 שבועות, במשקל של כ-25 גרם, נבחרו לניסוי. טבלת החומרים מפרטת את כל בעלי החיים, התגובות והציוד ששימשו במחקר זה ואת מקורותיהם המסחריים.

1. ברירה והסתגלות של בעלי חיים

  1. לאור את כל העכברים בתנאים מסוימים ללא פתוגנים עם מחזור אור/חושך של 12 שעות וגישה אד-לביטום למזון ומים.
  2. הסתגלות עכברים למתקן למשך 5-7 ימים לפני שמתחילים את המודל המבוסס על אירוסול.

2. הכנת תמיסת בלומיצין

אזהרה: בלומיצין הוא חומר אנטי-גידולי ציטוטוקסי (cytotoxice). בצע את כל השלבים בארון בטיחות ביולוגית מוסמך תוך כדי לבישת ציוד מגן מתאים.

  1. באמצעות מזרק סטרילי בנפח 1 מ"ל, שואב 3 מ"ל נתרן כלוריד סטרילי 0.9% והזריק לבקבוקון המכיל 15 U של בלומיצין הידרוכלוריד.
  2. סובבו בעדינות את הבקבוקון עד שהאבקה נמסה לגמרי כדי לקבל תמיסת אחסון של 5 U/mL.
  3. עבירו את תמיסת המקור לצינורות מיקרוצנטריפוגה סטריליים בנפח 1.5 מ"ל. הכינו תמיסות עבודה של 3.75 U/mL ו-2.5 U/mL על ידי דילול עם סליין סטרילי.
    הערה: בעכבר במשקל 25 גרם, ריכוזים אלו מתאימים למינונים של 7.5 U/kg ו-5U/kg, בהתאמה. כוון את הריכוזים אם משקלי העכבר משתנים.
  4. אחסן תמיסות עובדות בטמפרטורה של 4°C למשך עד שבוע או ב-80- מעלות צלזיוס עד חודש. הפשרה והביאה לטמפרטורת החדר לפני השימוש.

3. אספקת בלומיצין תוך-קנה הבית מבוססת אירוסול

  1. הכנה ומתן להרדמה
    1. הכינו את תמיסת ההרדמה על ידי המסה של 0.1 גרם אבקת נתרן פנטוברביטל ב-10 מ"ל של מלח פיזיולוגי סטרילי. מסנן באמצעות מסנן ממברנה PES של 0.22 מיקרון. אחסן את התמיסה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בסביבה מוגנת מאור והשתמש תוך 3 ימים מההכנה.
    2. נתנו תמיסת נתרן פנטוברביטל באמצעות הזרקה תוך-פריטונאלית באמצעות מזרק של 1 מ"ל עם מחט 26 גייג' במינון של 60 מ"ג/ק"ג משקל גוף. אם עומק או משך ההרדמה אינם מספקים, יש להתאים את המינון לפי תגובת בעלי החיים בהנחיית הווטרינר המטפל.
    3. העריכו את עומק ההרדמה מספר דקות לאחר ההזרקה על ידי צביטה חזקה של האצבע ואישור היעדר רפלקס הגמילה לפני המשך ההליכים הבאים.
  2. הכנת מכשיר להעברת אירוסולים
    1. הכינו את מכשיר העברת האירוסולים, וודאו שמחט הנבוליזציה, מזרק הנבוליזציה ועמוד המינון כולם נוכחים וסטריליים (איור 1B).
    2. טבלו את מזרק ההובלה במלח סטרילי. שאפו לאט את הנוזל ועצרו ל-8 שניות. להוציא את הנוזל במהירות. חזור על זה שלוש פעמים כדי למלא ולשטוף את המערכת.
    3. מלא מחדש את המזרק במי מלח לאחר ההוצאה הסופית. חבר את מחט האירוסול, וודא שהחיבור מלא במלח.
    4. טבלו את המחט המורכבת במי מלח וחזרו על מחזור השהייה-הפסקה-הוצאה שלוש פעמים נוספות כדי להסיר בועות אוויר.
      הערה: לאישור מוכנות, יש להוציא מי מלח על רקע כהה. ודא שהמלח שנפלט במהירות יוצר ערפל בצורת מניפה על רקע כהה.
  3. הליך מתן תרסיס תוך-קנה הנשימה
    1. הכינו את מחט האירוסול עם תמיסת בלומיצין הפועלת על ידי שאיפת והוצאה שלוש פעמים עם 8 שניות הפסקות.
    2. הכנס עמוד מינון של 25 מיקרוליטר מעל עמוד ה-50 מיקרוליטר כדי לכייל את הנפח. שאפו את הנפח הנדרש (50 מיקרוליטר). להוציא כל נוזל עודף.
      הערה: תצורת המינון הזו מבטיחה אספקה עקבית על ידי מזעור טעויות אנוש.
    3. הניחו את העכבר המורדם על פלטפורמת האינטובציה, תפסו את החותכות העליונות והדביקו את הגפיים לייצוב (איור 1C).
      הערה: אשר תנועות חזה קצביות. אם החיה נראית פעילה, תנו מינון הרדמה נוסף.
    4. השתמש במלקחיים מעוקלים כדי למשוך בעדינות את הלשון. הכנס לרינגוסקופ של בעלי חיים קטנים כדי לחשוף את הגלוטיס (איור 1D).
    5. הכנס את מחט האירוסול אנכית דרך הגלוטיס. להעביר את האירוסול של הבלומיצין במהירות (איור 1E).
      הערה: זווית את קצה המחט לכיוון הריאה הרצויה ללידה ממוקדת. הימנעו מהחדרה עמוקה מדי כדי למנוע טראומה. קצה מחט הנבולייזר צריך להיות ממוקם קרוב אך לא לגעת בנקודת הפיצול (הפיצול הראשון) של קנה הנשימה של העכבר כדי להשיג את אפקט המודלים הטוב ביותר. אם הקצה מוכנס רק למרכז קנה הנשימה, האירוסול עשוי לפגוע רק בדופן קנה הנשימה וליצור טיפות גדולות שנשפכות או נבלעות. אם הקצה קרוב מדי לפיצול קנה הנשימה, קיים סיכון לנזק לקנה הנשימה.

4. החלמה לאחר הפרוצדורה

  1. הנח את העכבר על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. התבונן בעכבר ברציפות עד שהוא מתאושש מההרדמה (בדרך כלל 1-2 שעות).
  2. בצע צביטת אצבע כדי לבדוק רפלקסים ולוודא שהעכבר חי.
  3. בצע ניטור קליני יומי במשך 21 יום, כולל משקל גוף, רמת פעילות, טיפוח וסימנים נשימתיים.
  4. המית בעלי חיים כאשר מתקיימים אחד מהקריטריונים הבאים: (i) >ירידה של 20% במשקל הגוף לעומת קו הבסיס לפני הטיפול, או ירידה ≥15% בליווי סימנים קליניים נוספים של מצוקה; (ii) מצוקה נשימתית חמורה מתמשכת במנוחה (נשימה כבדה או בטנית, טכיפניאה או ברדיפנאה מסומנת, התפשטות באף או נשימה בפה פתוח), עם או בלי ציאנוזיס בגפיים; (iii) חוסר יכולת להשיג מזון או מים, עייפות בולטת או מראה גוסס (היעדר תגובה לטיפול ו/או אובדן הרפלקס המתיישר); או (ד) התייבשות חמורה, היפותרמיה או סימנים אחרים להידרדרות בלתי הפיכה כפי שנבחן על ידי הווטרינר המטפל. כאשר מגיעים לנקודות סיום הומניות אלו, יש להמתים את בעלי החיים במינון יתר של נתרן פנטוברביטל (≥150 מ"ג/ק"ג, i.p.), ואחר כך בשיטה פיזיקלית משנית (למשל, פריקה צווארית הרחם), כדי להבטיח מוות ולהפחית כאב ומצוקה.

5. מדידת תפקוד ריאה סופי ואיסוף רקמות

  1. ביום ה-21, הרדימו את העכבר עם 90 מ"ג/ק"ג I.p. של אותו תמיסת הרדמה כדי לגרום להרדמה עמוקה ולדכא את הנשימה.
  2. אשר הרדמה מלאה באמצעות צביטת האצבעות. חשפו את קנה הנשימה על ידי חיתוך העור והפרדת השרירים.
  3. בצע חתך קטן ומפותל בקנה הנשימה והכנס את מחט האינטובציה. אבטח עם חבורה כירורגית.
  4. העבר את העכבר למכונת הנשמה של מכונאי ריאות של בעלי חיים קטנים הנשלט על ידי המחשב. הפעל אוורור מכני וודא שאין נשימה ספונטנית. השתמש במערכת ההנשמה כדי למדוד פרמטרים של תפקוד הריאות.
  5. בצע פרפוזיה בחדר ימין עם 5-10 מ"ל תמיסת מלח סטרילית עד שהריאות נראות מלוורות.
  6. לנתח את כל הריאה. תקבע את הריאה השמאלית בפורמלין ניטרלי עם בופר למשך 24 שעות.
  7. הטמיעו את רקמת הריאה הקבועה בפרפין, חתכו אותה, ובצעו צביעת H&E, צביעת תלת-כרום של מסון, וצביעה אימונוהיסטוכימית ל-COL1A1 ו-α-SMA.
  8. שים את הריאה הימנית בצינור הומוגניזציה של 2 מ"ל עם חרוזים. הוסיפו מים לפי הפרוטוקול של ערכת ההידרוקסיפולין. הומוגניזציה והמשיכו עם הבדיקה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במחקר זה הצענו שיטת מתן תוך-סימפונית מבוססת אירוסול לגרימת פיברוזיס ריאתי בעכברים באמצעות בליומיצין. בניסויים ראשוניים, צבע ירוק הועבר לאירוסול וניתן לריאות של עכברים שונים. הצבע הראה דפוס פיזור מנוקד בכל הריאות, מה שמעיד כי מתן תוך-סימפונות מבוסס אירוסול אפשר פיזור אחיד של הסוכן בכל אונות הריאה (איור 1F). העברת הדיו הירוקה המוצגת באיור 1F בוצעה באותו הליך כמו זה שנעשה במתן בליומיצין לאחר מכן.

בניסוי ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה הציע מודל נבבוליזציה לא פולשני אופטימלי של פיברוזיס ריאתי המושרה על ידי בלומיצין בעכברים. לרינגוסקופ של בעלי חיים קטנים שימש לאיתור הגלוטיס, ומחט נבוליזציה זעירה הוכנסה לדרכי הנשימה של העכבר. הלחץ הופעל ידנית כדי להחדיר את התרופה לריאות, ובכך להפחית את אי הנוחות והחנק הקשורים למחט ההחזקה ששימשה בהזרקה לא פולשנית13,14. בנוסף, אירוסולים אלו יכולים להתפזר באופן אחיד בתבנית מנוקדת בכל אונה ריאה של העכבר. מודל זה מאזן בין עקרו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מומן על ידי פרויקט התמיכה המיוחד לרפורמה בחינוך וההוראה של המכללה המרכזית של הפקולטה הרפואית של פקינג לשנת 2024 (כותרת הפרויקט: OSF-מערכת הנשימה; פרויקט מס' 2024bkjg036), קרן החדשנות של האקדמיה הסינית למדעי הרפואה (2021-I2M-1-014), והקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81570077). הספונסרים לא היו מעורבים בעיצוב המחקר, איסוף וניתוח הנתונים, החלטת הפרסום או הכנת כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.22 & mu; מסנן מזרק פוליאתרסולפון mציטוסקיCSTPE3320
מזרק חד-פעמי בנפח 1 מ"לBD300481
צינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מ"לסרוויסביוEP-150-M
צינור ליזיס מחוזק 2.0 מ"לסרוויסביוHT-200-M
4 & דרגה מקרר מעבדה CמיילינגBCD-402WPCX
צינור צנטריפוגה קונית בקוטר 50 מ"לסרוויסביוEP-5001-J
-80 ו-deg; מקפיא בטמפרטורה אולטרה-נמוכה Cהייר ביומדיקלDW-86L828J
אתנול מוחלטחברת סינופארם חומר כימי בע"מ100092683
תמיסת גזירה חומציתסרוויסביוG1039
מיקרוספרייס אירוסול לאינטובציה של בעלי חיים קטניםשנגחאי יויאן אינסטרומנטס בע"מיאן-30012
סט כלי כירורגי בסיסישנגחאי יויאן אינסטרומנטס בע"מYAN-21A3
תמיסת הידרוכלוריד בליומיציןחברת התרופות חנהווי בע"מH20055883
תגובת בלוינגסרוויסביוG1040
מכונת הנשמה מבוקרת ממוחשבת למכונאי ריאות של בעלי חיים קטניםEMKA Biotech Beijing בע"מFX-2
סרט בידוד חשמלי3M1500
תמיסת צביעת Eosin Yג'והאי באסו ביוטכנולוגיה בע"מBA4022
דיו סימון ירוקפיילוטצ'יקו-רין
תמיסת צביעת המטוקסיליןסרוויסביוG1004
ערכת בדיקת כימות הידרוקסיפרוליןאבקאםAB222941
מכסה זרימה למינריHDLDL-CJ-1N
לרינגוסקופ לפרוצדורות לבעלי חיים קטניםשנזן Bilead Biology Technology Co., LTDDXSHJ0
מיקרוסקופ אורניקוןE100
תמיסת הסרת שעווה בעלות רעילות נמוכהסרוויסביוG1128
ערכת הצביעה בטריכרום של מסוןג'והאי באסו ביוטכנולוגיה בע"מBA4079B
קורא מיקרופלט עם זיהוי ספיגהאג'ילנטסינרגיה H1
פורמלין עם מאגר נייטרליסרוויסביוG1101-3ML
מדיום התקנה נייטרליחברת סינופארם חומר כימי בע"מ10004160
נוגדן אנטי-COL1A1 מונוקלונלי רקומביננטיחואביוHA722517
צנטריפוגה מקוררתאפנדורף5424R
מים ללא RNaseגנרלביולTYJC002
פלטפורמת אינטובציה של קנה הנשימה של בעלי חיים קטניםשנגחאי יויאן אינסטרומנטס בע"מCG-02M
תמיסת נתרן כלוריד 0.9% סטריליתסין אוצוקה פארמה בע"מH12020024
הומוגניזר רקמותסרוויסביוKZ-III
קסילןחברת סינופארם חומר כימי בע"מ10023418
חרוזי טחינת זירקוניהסרוויסביוG0203

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Morgan, J. E., Barkman, H. W., Waring, N. P. Idiopathic pulmonary fibrosis. Semin Respir Med. 5 (3), 255-263 (1984).
  2. Jo, H. E., Randhawa, S., Corte, T. J., Moodley, Y. Idiopathic pulmonary fibrosis and the elderly: diagnosis and management considerations. Drugs Aging. 33 (5), 321-334 (2016).
  3. Raghu, G., et al. Idiopathic pulmonary fibrosis in US Medicare beneficiaries aged 65 years and older: incidence, prevalence, and survival, 2001-11. Lancet Respir Med. 2 (7), 566-572 (2014).
  4. Hutchinson, J., Fogarty, A., Hubbard, R., McKeever, T. Global incidence and mortality of idiopathic pulmonary fibrosis: a systematic review. Eur Respir J. 46 (3), 795-806 (2015).
  5. Williamson, J. D., Sadofsky, L. R., Hart, S. P. The pathogenesis of bleomycin-induced lung injury in animals and its applicability to human idiopathic pulmonary fibrosis. Exp Lung Res. 41 (2), 57-73 (2015).
  6. Horowitz, J. C., Thannickal, V. J. Epithelial-mesenchymal interactions in pulmonary fibrosis. Semin Respir Crit Care Med. 27 (6), 600-612 (2006).
  7. Izbicki, G., Segel, M. J., Christensen, T. G., Conner, M. W., Breuer, R. Time course of bleomycin-induced lung fibrosis. Int J Exp Pathol. 83 (3), 111-119 (2002).
  8. Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis. Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).
  9. Peng, R., et al. Bleomycin induces molecular changes directly relevant to idiopathic pulmonary fibrosis: a model for "active" disease. PLoS One. 8 (4), e59348(2013).
  10. Gul, A., et al. Pulmonary fibrosis model of mice induced by different administration methods of bleomycin. BMC Pulm Med. 23 (1), 91(2023).
  11. Barbayianni, I., Ninou, I., Tzouvelekis, A., Aidinis, V. Bleomycin revisited: A direct comparison of the intratracheal micro-spraying and the oropharyngeal aspiration routes of bleomycin administration in mice. Front. Med. (Lausanne). 5, 269(2018).
  12. Song, D., et al. A mouse model of pulmonary fibrosis induced by nasal bleomycin nebulization. J. Vis. Exp. (191), e64097(2023).
  13. Li, W., Hu, Y., Yuan, W., Li, L., Huang, W. Comparison of two mouse models of lung fibrosis induced by intratracheal instillation and intratracheal aerosol administration of bleomycin. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 32 (2), 221-225 (2012).
  14. Meng, J., Peng, Z., Tao, L. Murine pulmonary fibrosis model induced by repeated low-dose intravenous injection and intratracheal instillation of bleomycin. Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. 38 (12), 1228-1232 (2013).
  15. Kadam, A. H., Schnitzer, J. E. Highly calibrated relationship between bleomycin concentrations and facets of the active phase fibrosis in classical mouse bleomycin model. Int J Mol Sci. 25 (22), (2024).
  16. Orlando, F., et al. Induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin. J Vis Exp. (146), e58922(2019).
  17. Morita, S., et al. Establishment of a stem cell administration imaging method in bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse models. Sci Rep. 14 (1), 18905(2024).
  18. Olsson, I. A., Hansen, A. K., Sandoe, P. Ethics and refinement in animal research. Science. 317 (5845), 1680(2007).
  19. Jenkins, R. G., et al. An official American Thoracic Society workshop report: use of animal models for the preclinical assessment of potential therapies for pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  20. Degryse, A. L., et al. Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).
  21. Li, Q., et al. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis and resolution in bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse model revealed by spatial transcriptome analysis. Heliyon. 9 (12), e22461(2023).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים