הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

מנגנון הדקוקציה של ג'יאנפי שנגשו בהקלה על דיכוי מיאלופ מושרה על ידי ציקלופוספאמיד בעכברים

557 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/69542

⸱

2 בינואר 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Hunan University of Chinese Medicine, 2Department of Traditional Chinese Medicine /Integrative Oncology, Hunan Cancer Hospital/The Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine, Central South University

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מבהיר באופן שיטתי כיצד דקוקטון ג'יאנפי שנגשואה מפחית את דיכוי המיאלוספידים הנגרם מציקלופוסמיד באמצעות גישה משולבת של פרמקולוגיה רשתית וניסויים בבעלי חיים, וחושף את המנגנונים הרב-מטרותיים והפוטנציאל שלו כטיפול עזר.

תקציר

המאמר נועד לחקור כיצד תרסיס ג'יאנפי שנגשו (JPSXD) מקל על דיכוי המיאלותרפייה הנגרמת באמצעות פרמקולוגיה רשתית וניסויים בבעלי חיים. לשם כך, נותחו רכיבים מרכזיים ומטרות, ונבנו רשת אינטראקציה בין חלבון לחלבון (PPI) ורשתות עשב-רכיב-מטרה. אונטולוגיית גנים (GO) והאנציקלופדיה של קיוטו לגנים וגנומים (KEGG) זיהו מסלולים עיקריים. מודל דיכוי מיאלופמיד מושרה על ידי CTX הוקם ב-60 עכברי C57/BL6. JPSXD ניתנה במינונים שונים במשך 7 ימים. ספירות דם פריפריאליות, ציטוקינים (תרומבופואיטין [TPO], אריתרופויטין [EPO], גורם מגרה מושבות גרנולוציטים-מקרופאגים [GM-CSF]), מדד תימוס, מורפולוגיית מח עצם, תאי CD34+ וביטוי AKT1, JAK2 ו-EGFR הוערכו. ניתוח רשת זיהה 172 תרכובות ו-454 מטרות, תוך הדגשת מסלולי PI3K-Akt ו-JAK-STAT. בחיים החיים, CTX הפחית את רמות החלבון הלויקוציטים והאיתות, בעוד ש-JPSXD שיקם את הספירה, העלה את הוויסות של AKT1, JAK2 ו-EGFR, ושיפר את מדד התימוס (p < 0.05). JPSXD במינון בינוני וגבוה העלה את תאי TPO, EPO, GM-CSF, CD34+ ושיפר את מבנה מח העצם, כאשר המינון הגבוה הראה את ההשפעה החזקה ביותר. לסיכום, JPSXD מקל על דיכוי המיאלוא באמצעות ויסות רב-מטרתי ורב-מסלולים, ותומך בפוטנציאל שלו כטיפול משלים ללוקופניה הנגרמת על ידי כימותרפיה.

מבוא

כימותרפיה היא אבן יסוד בטיפול במגוון ממאירויות, בעיקר על ידי עיכוב התרבות והישרדות תאי סרטן 1,2, ובכך מאריך את הישרדות המטופלים. עם זאת, בשל חוסר סלקטיביות במיקוד ברקמות תקינות, תרופות כימותרפיה גורמות לעיתים קרובות לנזק חמור לתאים ורקמות בריאות, מה שמוביל למגוון תופעות לוואי3. אחת מתופעות הלוואי הנפוצות והחמורות ביותר של כימותרפיה היא דיכוי המיאלו, המאופיין בהפחתה בייצור תאי דם, כולל תאי דם לבנים (WBCs), תאי דם אדומים (RBCs) וטסיות דם (PLTs)2,4. דיכוי מיאלוא פוגע קשות במערכת החיסון, ומעלה את הסיכון לזיהומים, דימום, אנמיה וסיבוכים נוספים. הוא גם מפחית משמעותית את איכות החיים של המטופלים ואףעלול להיות מסכן חיים. לכן, הקלה ומניעה של דיכוי מיאלוטרפיה הנגרמת על ידי כימותרפיה הם קריטיים לשיפור סבילות המטופלים לכימותרפיה ולשיפור ההישרדות הכוללת.

הטיפולים הקליניים הנוכחיים לדיכוי מיאלואציה כוללים בעיקר גורמי גדילה המטופואטיים כגון גורם מגרה מושבות גרנולוציטים [G-CSF], אריתרופואטין [EPO])וטיפול בהעברה 6,7. עם זאת, גישות אלו לרוב קשורות לעלויות גבוהות, תופעות לוואי פוטנציאליות ויעילות מוגבלת. כתוצאה מכך, חקר שיטות בטוחות ויעילות יותר למניעה והקלה על דיכוי המיאלוסיה נותר מוקד מחקר מרכזי. בשנים האחרונות, הרפואה הסינית המסורתית (TCM) זכתה לתשומת לב רבה בזכות תפקידה בטיפול בסרטן ובניהול תופעות לוואי הנגרמות מכימותרפיה 8,9. רבים מהנוסחאות של הרפואה הסינית הסינית מאמינים כבעלות השפעות מחזקות ומווסת מערכת חיסון, כמו טחן Shengxuebao10, טבליות Dihuang Shengbai11, ותרכובות ג'ינסנוזיד12, אשר לא רק מגנות על תאים תקינים ומפחיתות תופעות לוואי רעילות, אלא גם משפרות את היעילות האנטי-גידולית.

ג'יאנפי שנגשו דקוקציה (JPSXD) היא נוסחה קלאסית ל-TCM הממחישה את העקרונות הטיפוליים של חיזוק צ'י והזנתדם. נוסחה זו היא שינוי מתוחכם של תרמיל סיג'ונזי בשילוב עם אר ג'י וואן, המשלבת את ההשפעות הסינרגטיות של עשבים מרובים כדי לטפל בצ'י וחסר דם14. הנוסחה כוללת ג'ינסנג (רן שן), אסטרגלוס (חואנג צ'י), אפימדיום (יין יאנג הו), אטרקטילודות (באי ג'ו), יאם (שאן יאו), סלוויה (דן שן), רהמניה מוכנה (שו די הואנג), זרעי דודר (טו סי זי), וולפברי (גו צ'י זי), ליגוסטרום (נוו ג'ן זי), אנג'ליקה (דאנג גווי), שעורה מטוגנת (צ'או מאי יא), גיזארד עוף מטוגן (צ'או ג'י ניי ג'ין), קליפת קלמנטינה מיובשת (Chen Pi), זרעי קואה (Yi Yi Ren) ועוד כמה עשבי תיבול. כל צמח ממלא תפקיד מסוים בנוסחה, תוך שמירה על עקרון ה-TCM של צמחי מרפא ריבוניים, משרת, עוזר ומדריך, שמבטיח אפקט טיפולי מאוזן וממוקד.

סיג'ונזי דקוקציון, נוסחה בסיסית ב-TCM, ידועה ביכולתה לחזק את הצ'י ולחזק את הטחול. הוא שימש רבות לטיפול במצבים הקשורים לצ'י ומחסור בדם, כגון עייפות, חוסר תיאבון ומערכת חיסון מוחלשת. מחקרים פרמקולוגיים מודרניים הראו כי סיג'ונזי דקוקציה משפר את תפקוד מערכת החיסון, מקדם המטופואזיס ומשפראת יכולות התיקון העצמי של הגוף. בהתבסס על בסיס זה, JPSXD משלב עשבים נוספים כדי לשפר עוד יותר את יעילותו בהזנת הדם ולטפל בחסרים מורכבים יותר. לדוגמה, רהמניה מוכנים ואנג'ליקה הם צמחי מרפא מרכזיים למזיןדם, בעוד אסטרגלוס וג'ינסנג פועלים בסינרגיה להגברת הצ'י ולשיפור החיוניות הכללית18.

מחקרים עדכניים הדגישו את ההשפעות האנטי-גידוליות הפוטנציאליות של JPSXD, והציעו כי הגישה הרב-מרכיבית ורב-המטרה שלו עשויה לעכב את גדילה של גידול ולשפר את יעילות הטיפולים הקונבנציונליים לסרטן. היכולת של הנוסחה לווסת תגובות חיסוניות ולשפר את תפקוד המטופואטיה הופכת אותה לחשובה במיוחד בתמיכה במטופלים העוברים כימותרפיה או טיפול קרינתי, אשר לעיתים קרובות חווים צ'י וחוסר דם כתופעות לוואי של הטיפול. יתרה מזאת, הכללת צמחים כמו סלביה ואפימדיום הוכחה כמשפרת את המיקרוזרימה ומשפרת מנגנוני תיקון תאי, מה שתורםליתרונות הטיפוליים הכוללים של הנוסחה.

מחקרים פרמקולוגיים מודרניים הראו שכל צמח בודד ב-JPSXD מפעיל פעילויות פרמקולוגיות הקשורות לתפקוד המטופואטית, אנטי-מיאלודיאסיה, אימונומודולציה ונוגדי חמצון, וכן שיפור מיקרו-זרימחזור הדם, ומספק תמיכה מחקרית עקיפה לשימוש ב-JPSXD להקלה על דיכוי המיאלו-המושרה על ידי כימותרפיה. טבלה 1 מסכמת את ההשפעות הפרמקולוגיות הראשוניות של כל צמח יחד עם ההפניות המתאימות, עם דגש על מחקרים החוקרים המטופואזיס, פעילות אנטי-מדכאת מיאלוס, אימונודולציה, ותכונות אנטי-חמצוניות או משפרות מיקרוזרימולציה. הסינרגיה המורכבת של הרכיבים ב-JPSXD כוללת אינטראקציות שיתופיות ואנטגוניסטיות בין הצמחים, תוך התמקדות במסלולים מרובים להשגת אפקט טיפולי הוליסטי. לדוגמה, בעוד שג'ינסנג ואסטרגלוס עובדים יחד כדי לחזק את הצ'י, הסלוויה והרהמניה המוכנה משתפים פעולה להזנת הדם ולשיפור זרימת הדם. במקביל, עשבי תיבול כמו קליפת קלמנטינה מיובשת ושעורה מטוגנת מסייעים בוויסות העיכול ומניעת קיפאון, ומבטיחים שההשפעות המחזקות של הפורמולה נספגות ומנוצלות ביעילותעל ידי הגוף. גישה רב-ממדית זו מתיישבת עם הפילוסופיה של הרפואה הסינית הסינית (TCM) של טיפול בשורש המחלה תוך התמודדות עם התסמינים.

לסיכום, JPSXD היא נוסחת TCM מאוזנת ונתמכת מדעית שמגלמת את עקרונות הצ'י והניקוי בדם. היישומים הפוטנציאליים שלו בחיזוק מערכת החיסון, קידום המטופואזיס ותמיכה בטיפול נגד גידולים הופכים אותו לתוספת חשובה הן לפרקטיקות הרפואיות המסורתיות והן למודרניות. עם זאת, ראיות קליניות איכותיות שמעריכות ישירות את יעילות JPSXD בהקלה על דיכוי מיאלותרפיה הנגרמת על ידי כימותרפיה עדיין חסרות. נדרש מחקר נוסף כדי להבהיר את המנגנונים הבסיסיים שלו ולייעל את אסטרטגיות היישום הקליניות שלו. לכן, מחקר זה שואף לספק הוכחת היתכנות להשפעות הטיפוליות האפשריות של JPSXD מנקודת מבט מכנית פרה-קלינית.

פרמקולוגיה רשתית, עם אופייה המערכתי והאינטגרטיבי, שימשה רבות לזיהוי רכיבים פעילים ברפואה הסינית ולהבהרת מנגנוני הפעולה שלהם24,25. במחקר זה, פרמקולוגיה רשת שימשה לניתוח מסלולי האיתות הפוטנציאליים והיעדים המרכזיים המושפעים מ-JPSXD בהקשר של דיכוי המיאלו. בנוסף, הוקם מודל עכברי מיאלודיכאון מושרה על ידי ציקלופוספאמיד (CTX) להערכת אינדיקטורים רלוונטיים ולהערכת השפעות JPSXD על דיכוי המיאלו. נערך גם אימות ראשוני של היעדים המרכזיים והמסלולים שזוהו באמצעות פרמקולוגיית הרשת. זהו המחקר הראשון שמשלב באופן שיטתי את הפרמקולוגיה הרשתית עם ניסויים בבעלי חיים, במטרה להבהיר את המנגנון המולקולרי שבו JPSXD מקל על דיכוי המיאלופיה המושרה על ידי כימותרפיה באמצעות ויסות רב-מטרתי של מסלולי איתות, כגון מסלול PI3K-AKT, ובכך למלא פער בהבנה המכאנית של השפעות ההגנה ההמטופואטיות של נוסחת התרכובת הזו.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם בקפדנות לתקנות ניהול בעלי חיים במעבדה ולהנחיות האתיות של מרכז בעלי החיים הניסיוניים של בית החולים לסרטן חונאן. פרוטוקול המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה לבעלי חיים של בית החולים לסרטן חונאן (מספר אישור: KNZY-202416). במהלך המחקר, החוקרים עשו כל מאמץ למזער את מספר בעלי החיים בשימוש ולהקל על סבלם.

הכנה לבעלי חיים
בסך הכל 60 עכברים זכרים בני 10 שבועות מ-C57/BL6 נרכשו מחברת Hunan Slack Jingda Laboratory Animal Co., Ltd. (מספר רישיון: SCXK [Hu] 2021-0002). כל העכברים אוחסנו במרכז הניסויים לבעלי חיים בבית החולים לסרטן חונאן בתנאים סביבתיים מבוקרים: טמפרטורה: 23 ± 2 מעלות צלזיוס, לחות: 50% ± 10%, ומחזור אור/חושך של 12 שעות (8:30-20:30). לעכברים הייתה גישה חופשית למזון ולמים. לפני הניסויים, הם התרגלו לסביבה באמצעות טיפול יומי במשך 5 דקות במשך 3 ימים. לאחר ההסתגלות, כל 60 העכברים חולקו לפי משקל גוף וחולקו באקראי לשש קבוצות (n = 10 לכל קבוצה) באמצעות טבלת מספרים אקראית שנוצרה על ידי מחשב. הקבוצות כללו: ביקורת ריקה, מודל, בקרת סליין נורמלית (NS), JPSXD במינון גבוה (40 מ"ג/ק"ג), JPSXD במינון בינוני (30 מ"ג/ק"ג), ו-JPSXD במינון נמוך (20 מ"ג/ק"ג). תהליך האקראיות לא הבטיח הבדלים משמעותיים במשקל הגוף הממוצע בין קבוצות (p > 0.05). רצף האקראיות נוצר ובוצע על ידי חוקרים שלא היו מעורבים בהליכים ניסיוניים מאוחרים יותר כדי למזער הטיה.

הכנת חומר
בטיחות וסילוק פסולת: מחקר זה כלל את CTX, חומר כימותרפיה רעיל מאוד. כל הנהלים בוצעו בהתאם בקפדנות לתקנות לניהול בטיחות כימיקלים מסוכנים ולתקני מעבדות בטיחות ביולוגית רמה 2. אמצעי הזהירות הספציפיים כללו שימוש בבגדי מגן חד-פעמיים, כפפות ניטריל, מסכות N95 ומשקפי מגן על ידי כל הצוות. הכנת CTX ומתן ה-CTX בוצעו בתוך ארון בטיחות ביולוגית מסוג Class II. הכנת תמיסת ההזרקה של CTX בוצעה במכסה אדים באמצעות מכשירים ייעודיים למניעת היווצרות אירוסולים. חפצים חדים וחפצים מזוהמים ב-CTX, כגון מזרקים וכפפות, הושלכו במיכלי חדים עמידים לדקירה. חומרים מזוהמים אחרים (כגון מצעים, רקמות בעלי חיים) הושבתו על ידי טבילה ב-10% נתרן היפוכלוריט למשך 24 שעות ולאחר מכן נשרפו על ידי ספק מוסמך לפינוי פסולת רפואית. במקרה של שפיכת CTX, האזור כוסה מיד בכותנה סופגת ונונטרל בתמיסת תיוסולפט נתרן 1%. האירוע דווח לאחר מכן למפקח הבטיחות.

תרופות ותגובות: הזרקת CTX התקבלה מ-Baxter Oncology GmbH, גרמניה (מספר אצווה: HJ20160467). JPSXD הוכן על ידי המחלקה לרפואה סינית מסורתית בבית החולים לסרטן חונאן. הוא כלל 15 עשבי תיבול מסורתיים – ג'ינסנג פאנקס, אסטרגלוס ממברנאצאוס, אפימדיום ברוויקורנום, אטרקטילודס מקרוצפלה, דיוסקורה אופפוזיטה, סלוויה מילטיוריזה, רהמניה גלוטינוזה, קוסקוטה צ'יננסיס, ליסיום ברברום, ליגוסטרום לוסידום, אנג'ליקה סיננסיס, מאלט מטוגן, ריפוד גיזר עוף, קליפת קלמנטינה מיובשת וזרעי קוקס – בשילוב לפי יחסי התאמה קלאסיים20. התרכז התרכז לריכוז סופי של 3 ק"ג/ליטר (כלומר, 3 גרם למ"ל). לפני הגאבג', התרכז דולל עם NS כדי להגיע לריכוזים הנדרשים לכל קבוצת מינון: 4 מ"ג/מ"ל לקבוצת המינון הגבוה (40 מ"ג/ק"ג), 3 מ"ג/מ"ל לקבוצת המינון הבינוני (30 מ"ג/ק"ג), ו-2 מ"ג/מ"ל לקבוצת המינון הנמוך (20 מ"ג/ק"ג)26. נפח Gavage חושב כ-0.1 מ"ל ל-10 גרם משקל גוף, מה שהוביל לנפח מתן סופי של 0.2-0.25 מ"ל לעכבר (בהתבסס על טווח משקל של 20-25 גרם)27.

ערכות ELISA: נעשה שימוש בערכות ELISA מסחריות עבור גורם גירוי מושבות גרנולוציטים-מקרופאג' לעכברים (GM-CSF), EPO ותרומבובואטין (TPO). דגימות הסרום מדוללות ביחס של 1:5 בבופר PBS (pH 7.4) לפני הבדיקה. התקנים הורכבו מחדש ב-100 מיקרוליטר לבאר.

נוגדן משני: IgG אנטי-ארנב מנוגד ב-HRP דולל ב-1:5000 (ריכוז סופי: 0.04 מיקרוגרם/מ"ל) בבופר TBST שכלל 5% חלב יבש דל שומן ו-0.05% Tween-20. התמיסה הוכנה טרייה ודגרה בטמפרטורת החדר למשך שעה.

נוגדנים עיקריים ל-Western Blot: GAPDH (פוליקלונל ארנב), AKT (פוליקלונלי ארנב), JAK2 (מונוקלונלי ארנב) ו-EGFR (מונוקלונל עכבר). כל הנוגדנים דוללו בבופר TBST המכיל 5% BSA: GAPDH (1:1000), AKT (1:1000), JAK2 (1:800) ו-EGFR (1:800). נפח הדגירה היה 100 מיקרוליטר לממברנה.

קיבוע רקמות: תמיסה של 4% פאראפורמלדהיד (PFA) הוכנה על ידי המסה של אבקת PFA ב-PBS (pH 7.4). הרקמות תוקנו ל-24 שעות.

תמיסת צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E): תמיסת המטוקסילין (0.1% המטוקסילין האריס) ותמיסת אאוזין Y (0.5%) הוכנו בהתאם לפרוטוקולי פתולוגיה סטנדרטיים28. משך הצביעה היה 5 דקות להמטוקסילין ו-3 דקות לאאוזין.

בופר חסימת אימונופלואורסצנציה: בופר PBS המכיל 10% סרום עזים ו-1% BSA שימש לחסימה, עם דגירה של 30 דקות.

בופר דילול נוגדנים לאימונופלואורסצנציה: נוגדנים ראשוניים (CD34+, TPO, EPO, GM-CSF) לאימונופלואורסצנציה דוללו בבופר PBS המכיל 1% BSA, בהתאם ליחס הדילול המומלץ על ידי היצרן (1:200), מה שהניב ריכוז סופי של 2.5 מיקרוגרם/מ"ל. נפח הדגירה היה 50 מיקרוליטר לכל חתך רקמה.

השראה של מודל בעל חיים
60 עכברים חולקו באקראי לשש קבוצות (n = 10 לכל קבוצה): ביקורת ריקה, מודל, מינון גבוה, מינון בינוני, מינון נמוך, וקבוצת ביקורת NS. למעט קבוצת הביקורת הריקה, כל העכברים קיבלו זריקות תוך-פריטונאליות של CTX (20 מ"ג/ק"ג) פעם ביום במשך 3 ימים רצופים כדי להקים מודל דיכוי מיאלו. כל עכברי הדגם הציגו גלמים לבנים < 1.8 × 109/ליטר, PLT < 85 × 10⁹/ליטר, וירידה של >55% בתאי גרעין מח עצם לאחר 24 שעות לאחר ההזרקה הסופית. פרוטוקול זה תואם למודלים מבוססים של דיכוי מיאלוא שנגרם על ידי CTX29,30. לאחר ההזרקה, העכברים נבדקו מדי יום למצבם הכללי, כולל רמת פעילות, מראה הפרווה ושינויים במשקל הגוף. מתחילת המודלים ועד לסיום הניסוי, משקל הגוף נרשם באותו זמן בכל יום באמצעות איזון אלקטרוני. קצב שינוי משקל הגוף חושב כך: (משקל סופי / משקל התחלתי) x 100%, כדי להעריך את המצב הפיזיולוגי הכללי ואת ההשפעה המגנה הפוטנציאלית של JPSXD. לאחר ההזרקה, העכברים אוחסנו בכלובים מאווררים (IVCs), שכל אחד מהם סומן בבירור כמזוהם ב-CTX. המצעים הוחלפו כל יומיים, וכל המצעים שהשתמשו בהם הושלכו בהתאם לפרוטוקולי פסולת מסוכנת שתוארו לעיל.

מתן תוך-קיבה
עכברים בקבוצות המינון הגבוה, הבינוני והנמוך קיבלו JPSXD במינונים של 40 מ"ג/ק"ג, 30 מ"ג/ק"ג ו-20 מ"ג/ק"ג, בהתאמה. קבוצת הביקורת של מי מלח קיבלה נפח שווה של NS. תמיסות Gavage הוכנו בריכוזים של 4 מ"ג/מ"ל, 3 מ"ג/מ"ל ו-2 מ"ג/מ"ל, בהתאמה, וניתנו בנפח של 0.1 מ"ל ל-10 גרם משקל גוף. כל העכברים נלקחו פעמיים ביום במשך 7 ימים רצופים. קבוצת הביקורת במי מלח קיבלה 0.2-0.25 מ"ל לכל עכבר של NS. לא ניתן טיפול בקבוצות הריקות והמודלים. היעדר שיעול או קושי במהלך הטיפול הראה את שיטת המתן הנכונה.

איסוף דם והכנת סרום
ביום השלישי לאחר הזרקת CTX, נאספו 0.2 מ"ל דם מהווריד הזנבי כדי להעריך את הצלחת הקמת המודל באמצעות מדידת ספירות תאי דם היקפיים באמצעות מנתח המטולוגיה אוטומטי לחלוטין. ב-24 שעות לאחר הבדיקה הסופית של JPSXD, נאסף דם מהסינוס האורביטלי של עכברים שנבחרו באקראי (n = 10 לכל קבוצה). חלק מהדם שימש לניתוח ספירת דם מלאה, בעוד שהיתר עובד להכנת סרום. הדגימות צנטריפוגה ב-3,000 x גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. הסופרנטנט (שכבה עליונה שקופה בצבע צהוב-בהיר) נאסף כסרום ונלקח לאחסון בטמפרטורה של מינוס 80°C לבדיקות ELISA ובדיקות תפקוד כבד/כליה נוספות. שכבת הסרום נצפתה מופרדת בבירור משכבת תאי הדם, ללא סימני המוליזה או עכירות במיוחד. פרמטרים המטולוגיים שנמדדו כללו רמות WBC, RBC, PLT ורמות המוגלובין (Hb).

הערכת תפקוד כבד וכליות
אנלייזר ביוכימי אוטומטי לחלוטין שימש למדידת סמני תפקוד כבד בסרום – אלנין אמינוטרנספראז (ALT) ואספרטט אמינוטרנספראז (AST) – וסמני תפקוד כליות – חנקן אוריאה בדם (BUN) וקריאטינין (Cre). כל ההליכים פעלו לפי פרוטוקול ההפעלה הסטנדרטי של הכלי. באופן ספציפי, 100 מיקרוליטר סרום מעורבבים עם ערכות הבדיקה המתאימות (ALT, AST, BUN ו-Cre) ודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. הספיגה נמדדה ב-340 ננומטר. כל דגימה נבדקה בכפלה, והערך הממוצע שימש לניתוח.

חישוב מדד האיברים
ב-24 שעות לאחר מתן הגוואג' הסופי של JPSXD, עכברים הושתו באמצעות שאיפת פחמן דו-חמצני (CO2) במילוי הדרגתי (קצב זרימה: 20% נפח תא לדקה) ואחריה ניתוק צווארי כשיטה משנית31. מיד לאחר המתת החסד, הכבד, הכליות, הטחול והתימוס נקטפו באופן אספטי דרך חתך בקו האמצע התחתון. האיברים נחתכו בעדינות ללא רקמות חיבור ושומן מסביב, ואז נשטפו במלח נורמלי קרח (NS) להסרת שאריית דם. האיברים יובשו בנייר סינון שנשקל מראש בלחץ סטנדרטי (3 לחיצות עדינות) ונשקלו מיד על מאזן אלקטרוני מכויל (דיוק: ±0.1 מ"ג) בטמפרטורת החדר (22 ± 1°C).

כל ההליכים בוצעו על מגש נירוסטה מקורר מראש כדי למזער את האוטוליזה. מדד האיברים חושב כמשקל איבר (mg) חלקי משקל גוף (g) כדי להעריך את השפעות JPSXD על איברים עיקריים. חלקים מכל רקמה נשמרו לניתוח ווסטרן בלוט, בעוד שהדגימות הנותרות הוקצו ב-4% PFA להערכה היסטולוגית מאוחרת יותר.

אליסה
ריכוזי הסרום של TPO, EPO ו-GM-CSF נמדדו באמצעות ערכות ELISA בהתאם להוראות היצרנים. כל שלבי הצנטריפוגה, כולל שטיפת דגימות והרכבת מחזור, בוצעו בטמפרטורת החדר בטמפרטורה של 1,000 x גרם במשך 5 דקות. שלבי השטיפה בוצעו באמצעות בופר PBST (PBS המכיל 0.05% טווין-20), עם הוספת 300 מיקרוליטר תמיסת שטיפה לכל באר וחזרה על עצמה 3 פעמים. לאחר הכביסה, לא נותר נוזל שאריתי בתחתית הבארות. לאחר התפתחות הצבע, נראה משקע כחול מובחן. הספיגה נמדדה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט לאחר סיום התגובה.

צביעת H&E
לאחר המתת החסד, התימוס והירך נקטפו. התימוס נשקל כדי לחשב את מדד התימוס (משקל תימוס [mg]/משקל גוף [g]). לאחר שקילה, חלק מהתימוס שימש לניתוח כתם מערבי, בעוד שהשאר, יחד עם עצם הירך, הוקבע ב-4% PFA. דגימות הירך עברו התייבשות אתנולית מדורגת (70%, 80%, 95% ו-100%, כל אחת למשך שעה). התייבשות תקינה התאפיינה במראה לבן אחיד, ללא ריכוך או עיוות. בלוקי רקמה מוטמעים בפרפין חולקו בעובי 4 מיקרון באמצעות מיקרוטום סיבובי המצויד בלהבי טונגסטן-קרביד מדויקים (סוג H31). קטעים הוצפו על אמבט מים בטמפרטורה של 40°C עם תמיסת ג'לטין של 0.5% להסרת קמטים, ואז הותקנו על שקופיות מיקרוסקופ. כל החתכים הציגו מורפולוגיה שלמה, קצוות חלקים ושקיפות אחידה תחת מיקרוסקופ אור, מה שמאשר איכות חתך אופטימלית. בוצעה צביעת H&E, ואחר כך הורכבה עם מכשיר הרכבה מימימדיום 28. לאחר הצביעה, הגרעינים נראו כחולים וורוד ציטופלזם, עם ארכיטקטורה תאית מוגדרת היטב תחת תצפית מיקרוסקופית באמצעות מיקרוסקופ הפוך. ניתוח היסטומורפולוגי בוצע באמצעות תוכנה. לכל קטע מוצבע ב-H&E נבחרו שלושה שדות אקראיים בהגדלה של פי 200. התוכנה כימתה אוטומטית את מספר התאים הגרעיניים ליחידת שטח לאחר ההגדרה הידנית של אזור העניין, והתוצאות הובעו כסטיית תקן ממוצעת ± (x̄ ± s).

כתם מערבי
רקמות תימוס (50 ± 2 מ"ג לדגימה) הומוגנו בבופר RIPA קר קפוא המכיל קוקטייל מעכב פרוטאז 1x ביחס מדויק של 100 מ"ג רקמה ל-1 מ"ל בופר, באמצעות הומוגניזר עלי כדורים ממונעים המצויד בעלי ללא RNase. הומוגניזציה בוצעה על קרח עם 15 פולסים (פולס אחד / 2 שניות הפסקה), ואחריה דגירה של 30 דקות על קרח עם מערבולת כל 10 דקות. ההומוגנט צנטריפוגה ב-12,000 x גרם למשך 20 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, והסופרנטנט שהתקבל נאסף לצורך כימות חלבון. הסופרנטנט נראה שקוף וברור, ללא משקעים או שכבות שומן. ריכוז החלבון נמדד באמצעות ערכת בדיקת חלבון BCA, עם טווח עקומה סטנדרטי של 0-2000 מיקרוגרם/מ"ל. בוצע ווסטרן בלוט להערכת רמות הביטוי של AKT1, JAK2 ו-EGFR ברקמת תימוס, תוך שימוש ב-GAPDH כבקרה פנימית. לאחר אלקטרופורזה והעברת ממברנה, סמן החלבון (10-200 kDa) הציג רצועות ברורות, ורצועות המטרה היו מיושרות למשקלים המולקולריים הצפויים (AKT1: 60 kDa, JAK2: 130 kDa, EGFR: 170 kDa, ו-GAPDH: 37 kDa).

ניתוח דנסיטומטרי של תחומי כתמים מערביים בוצע באמצעות תוכנה. לפני הניתוח, פסים נבדקו ויזואלית כדי לאשר היעדר טשטוש או דיפוזיה. תהליך הניתוח כלל: בחירה ידנית של אזורי רצועות היעד לאחר ייבוא תמונה, עם זיהוי קצוות אוטומטי על ידי התוכנה, ולאחר מכן חיסור רקע מקומי באמצעות אזורים סמוכים לרצועות לתיקון ערכים אפורים. לאחר מכן בוצע חישוב יחס הערך האפור בין חלבון היעד לבקרה פנימית לכימות יחסי. נוסחת הנירמול ששימשה הייתה:

ביטוי יחסי של חלבון המטרה = (ערך אפור של רצועת המטרה −רקע מקומי) / (ערך אפור של בקרה פנימית −רקע מקומי)

אימונוהיסטוכימיה
בוצעה צביעת אימונוהיסטוכימיה על חתכי הירך. הפרוסות היו חדירות עם 0.1% Triton X-100 למשך 10 דקות, ואחריה חסימה למשך 30 דקות. נוגדנים ראשוניים נדגרו במהלך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, והנוגדנים המשניים דוגרו למשך שעה בטמפרטורת החדר. לאחר הצביעה, נצפו אותות חיוביים מובחנים עם רקע נמוך וללא צביעה לא ספציפית תחת מיקרוסקופ אור. שקופיות הותקנו באמצעות מדיום נגד דהייה המכיל DAPI, שצבע את הגרעינים בכחול. לאחר מכן הוערך ביטוי CD34+, TPO, EPO ו-GM-CSF. תמונות של אימונוהיסטוכימיה נותחו באמצעות תוכנת פתולוגיה דיגיטלית (גרסה 2.1.0). לפני הניתוח, התמונות אומתו כחפות מחשיפה יתר או פגיעה באות. הליך הניתוח32כלל:

בחירת מודל: מודל סגמנטציה של מח עצם מאומן מראש (מבוסס U-Net) שימש לזיהוי אוטומטי של אזורי רקמה33.
הגדרת סף: ספי אות חיוביים הוגדרו בהתבסס על קבוצת הביקורת השלילית. אזורים עם עוצמת כרומוגנית שעלתה על הממוצע הרקע בשלוש סטיות תקן סווגו כחיוביים.
הגדרת ROI: התוכנה חילקה אוטומטית כל שדה לאזורי רשת של 500 × 500 מיקרון וחישבה את מספר התאים החיוביים ליחידת שטח (מספר תאים חיובי/שטח שדה).
ייצוא נתונים: דו"ח סטטיסטי של צפיפות תאים חיובית נוצר אוטומטית.

ניתוח סטטיסטי
ניתוח סטטיסטי בוצע באמצעות תוכנת SPSS (גרסה 22.0). הנתונים הוצגו כ-x̄ ± s. לפני השוואות בין-קבוצתיות, הוערכה נורמליות באמצעות מבחן שפירו-וילק, והומוגניות של השונות הוערכה באמצעות מבחן לוון. אם אושרו גם התפלגות נורמלית (p > 0.05) וגם הומוגניות שונות (p > 0.05), נעשה שימוש ב-ANOVA חד-כיווני להשוואות קבוצתיות. בוצעו השוואות מרובות לאחר מכן באמצעות שיטת ההבדל המשמעותי המינימלי (LSD); כדי לשלוט בשגיאה מסוג I, כל ערכי ה-P לאחר מכן הותאמו באמצעות תיקון בונפרוני, כאשר p < 0.05 מותאם נחשב מובהק סטטיסטית.

אם הנתונים לא עמדו בהנחות של נורמליות או הומוגניות שונות (p ≤0.05 בשני המבחנים), הוחל מבחן קרוסקל-ווליס, ואחריו מבחן דאן לניתוח פוסט-הוק עם תיקון בונפרוני. כל הגרפים והוויזואליזציות הסטטיסטיות נוצרו באמצעות GraphPad Prism (גרסה 9.0). רמת המובהקות נקבעה על α = 0.05. כל ערכי ה-p המדווחים היו ערכים מותאמים. יוצאי דופן זוהו באמצעות מבחן גרבס (α = 0.05) והודרו רק אם הם מיוחסים בבירור לטעות ניסויית. כל הנתונים שנותרו נכללו בניתוח הסופי. התוצאות מוצגות כ-x̄ ± s.

מתודולוגיית הפרמקולוגיה הרשתית
מחקר זה השתמש בגישה של פרמקולוגיה רשתית כדי לחקור את המנגנונים הפוטנציאליים שבאמצעותם JPSXD מקל על דיכוי המיאלו-המושרה על ידי כימותרפיה. ראשית, המרכיבים הכימיים של JPSXD והיעדים התואמים שלהם נאספו ממאגר הנתונים והניתוח של מערכות פרמקולוגיה מסורתיות ברפואה סינית (TCMSP, https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php). קריטריוני הסקר נקבעו כדלקמן: זמינות ביולוגית דרך הפה (OB) ≥30%) ודמיון תרופה (DL) ≥0.18). עבור תרכובות שאינן כלולות במאגר הנתונים של TCMSP, בוצע חיזוי מטרות באמצעות פלטפורמת SwissTargetPrediction (https://www.swisstargetprediction.ch/).

כדי להבטיח שהתרכובות הנבחרות יכסו את המרכיבים הביואקטיביים העיקריים של JPSXD, הוזכר הפרמקופיאה של הרפובליקה העממיתשל סין 34. באופן ספציפי, זיהינו תרכובות סמן כמו ג'ינסנוסידים, אסטרגלוזיד IV, איקרין וחומצות סלביאנוליות על ידי סקירת חלקי הזיהוי והבדיקה לכל צמח. תרכובות אלו, המשמשות בדרך כלל כסמני בקרת איכות35, בעלות מבנים כימיים מוגדרים ודרישות כמותיות. למען הדיוק, השווינו את ההודעות הכלליות והנספחים של הפרמקופיאה כדי לאשר קונבנציות שמות ושיטות אנליטיות (למשל, כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים, HPLC). הניתוח אישר כי קריטריוני הסינון (OB ≥30%, DL ≥0.18) תפסו ביעילות את התרכובות המרכזיות של פורמולה36, כולל רכיבים פרמקופיאליים מרכזיים כמו ג'ינסנוסידים Rg1 ו-Rb1 ( מג'ינסנג פאנקס), אסטרגלוסיד IV ( מאסטרגלוס ממברנאסאוס) ואיקרין ( מ-Epimedium brevicornum), מה שמעיד שהתרכובות הנבחרות מייצגות וכוללות את הרכיבים הפעילים העיקריים האחראים לחיטוב הצ'י והדם של JPSXD השפעות.

בהמשך, מטרות גנים הקשורות לדיכוי מיאלואציה נאספו ממאגר GeneCards (https://www.genecards.org/), והתוצאות הורדו לגיליון אלקטרוני. גנים עם ציון רלוונטיות ≥44 נבחרו לניתוח נוסף. הצטלבות בין מטרות תרופות לגנים הקשורים למחלה הוצגה באמצעות דיאגרמת ון, והגנים החופפים יובאו למסד הנתונים של STRING (https://string-db.org/). האורגניזם הוגדר לאדם, ומקורות האינטראקציה הוגבלו לניסויים ולמסדי נתונים עם ציון אינטראקציה מינימלי נדרש > 0.7. רשת האינטראקציה בין חלבון לחלבון (PPI) שהתקבלה נותחה לאחר מכן למאפיינים טופולוגיים לזיהוי מטרות ליבה והוצגה באמצעות Cytoscape 3.10.2.

בהתבסס על היעדים המרכזיים שזוהו, נערכו ניתוחי העשרה של אונטולוגיית גנים (GO) ואנציקלופדיית קיוטו לגנים וגנומים (KEGG) באמצעות מסד הנתונים של DAVID (https://david.ncifcrf.gov/). הפרמטרים הוגדרו כך: ספירה ≥5, ציון EASE ≥0.05, וערך p < 0.01. תוצאות ההעשרה הוצגו באמצעות פלטפורמת האות המיקרוביולוגית (http://www.bioinfo-cloud.org/). ניתוח המסלולים הבהיר עוד יותר את מסלולי האיתות המרכזיים והסמנים הרגולטוריים המעורבים, ובכך חשף את המנגנונים הפוטנציאליים שבאמצעותם JPSXD מפחית את דיכוי המיאלותרפיה המושרה על ידי כימותרפיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ניתוח פרמקולוגיה רשתית
זיהוי תרכובות ומטרות פעילות
זיהינו תחילה את תרכובות הסמן העיקריות של כל צמח ב-JPSXD בהתבסס על הספרות כדילהבטיח ברירה מקיפה34. במיוחד, על ידי עיון ברשומות התרופות של צמחי מרפא רלוונטיים (למשל, ג'ינסנג פאנקס, אסטרגלוס ממברנאצאוס, אנג'ליקה סיננסיס), ריכזנו רשימה של רכיבי הסמן הרשמיים לכל 15 המרכיבים הצמחיים בנוסחה. אלה כוללים: ג'ינסנוזידים Rg1, Re, ו-Rb1 ( מ-Panax ג'ינסנג); אסטרגלוסיד IV (

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

על רקע העלייה בשכיחות הסרטן ברחבי העולם, הקהילה הרפואית מתמודדת עם אתגרים כפולים: לא רק הטיפול בסרטן עצמו אלא גם ניהול תופעות הלוואי הנלוות, ביניהן דיכוי מיאלוא הוא תגובת לוואי נפוצה וחמורה במיוחד. מחקר זה חקר באופן שיטתי את תפקידו ומנגנוני הפוטנציאל של JPSXD בהפחתת דיכוי המיאלו-מושרה על ידי CTX בעכברים, תוך שימוש בשילוב של פרמקולוגיה רשתית וניסויים בבעלי חיים. התוצאות מצביעות על כך ש-JPSXD עשוי לשפר את תסמיני דיכוי המיאלוסיה באמצעות מנגנון רגולציה רב-מטרותי ורב-מ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם ניגודי עניינים.

תודות

מחקר זה נתמך כלכלית על ידי פרויקט Integrative Western and Traditional Chinese Medicine Focus - DCA Mode Intervention for Prevention Extra-ניתוח בחולים מבוגרים עם ממאירות במערכת העיכול, עם מספר פרויקט A2023053, במימון המינהל המחוזי לרפואה סינית מסורתית של חונאן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4% פאראפורמלדהיד (PFA)סיגמא-אלדריץ'P6148
AKT (פאן) Rabbit mAbטכנולוגיית איתות סלולרי#4691
מכונת שטיפה אוטומטית עם מיקרופלטהביו-טק (Agilent)ELx405
BC-2800vet אנלייזר המטולוגיה אוטומטיתמיינדרייBC-2800vet
קריוסטט מיקרוטוםתרמו פישר סיינטיפיקCryoStar NX50
הזרקת ציקלופוספאמידBaxter Oncology GmbHאין (באץ': HJ20160467)
מיקרוסקופ E100ניקוןE100
נוגדן EGFR (A-10)ביוטכנולוגיה של סנטה קרוזSC-373746
מכונת הטמעהלייקהEG1150
EPO (עכבר) ELISA KitR& D SystemsMEP00B
נוגדן פוליקלונלי ארנב GAPDHפרויטנטק10494-1-AP
ערכת ELISA GM-CSF (עכבר)R& D SystemsMMC00B
עיזים נגד ארנבים IgG בצורת HRPJackson ImmunoResearch111-035-003
H& ערכת צביעת Eסיגמא-אלדריץ'HT10
צנטריפוגה מקוררת מהירהתרמו פישר סיינטיפיקסורוול ST 16R
מטחנת רקמות בעל תפוקה גבוההסרוויסביוKZ-II
עט אימונוהיסטוכימיהמעבדות וקטורH-4000
JAK2 Rabbit mAbאבקאםab108596
ג'יאנפי שנגשו דקוקשן (JPSXD)בית המרקחת של בית החולים לסרטן חונאןנוסחה מותאמת אישית
קורא מיקרופלטביו-טק (Agilent)סינרגיה H1
סליין רגילבקסטר2B1324X
מיקרוטום סיבובילייקהRM2016
מעבד רקמותלייקהASP300S
TPO (עכבר) ערכת אליסהR& D SystemsMTP00B
מערבל מערבולתסרוויסביוMX-F

מקורות

  1. Wang, D. H., et al. Validated herbal extracts for alleviating chemotherapy-induced myelosuppression: A systematic review and meta-analysis. Phytomedicine. 141, 156659(2025).
  2. Goldschmidt, J., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with ES-SCLC in US community oncology settings. Future Onco. 18 (35), 3881-3894 (2022).
  3. Jia, W., Li, X., Zhang, T., Wang, C., Zhen, M. Efficiently normalizing leukopoiesis by gadofullerene nanoparticles to ameliorate radiation-triggered myelosuppression. J Mater Chem. B. 11 (31), 7401-7409 (2023).
  4. Hart, L., et al. Burden of chemotherapy-induced myelosuppression among patients with extensive-stage small cell lung cancer: A retrospective study from community oncology practices. Cancer med. 12 (8), 10020-10030 (2023).
  5. Pan, L., Zhang, T., Cao, H., Sun, H., Liu, G. Ginsenoside Rg3 for Chemotherapy-Induced Myelosuppression: A Meta-Analysis and Systematic Review. Front Pharmacol. 11, 649(2020).
  6. Schneider, A., Kuhn, H. -G., Schäbitz, W. R. A role for G-CSF (granulocyte-colony stimulating factor) in the central nervous system. Cell Cycle. 4 (12), 1753-1757 (2005).
  7. Hart, C., Grassinger, J., Andreesen, R., Hennemann, B. EPO in combination with G-CSF improves mobilization effectiveness after chemotherapy with ifosfamide, epirubicin and etoposide and reduces costs during mobilization and transplantation of autologous hematopoietic progenitor cells. Bone Marrow Transpl. 43 (3), 197-206 (2008).
  8. Miao, K., Liu, W., Xu, J., Qian, Z., Zhang, Q. Harnessing the power of traditional Chinese medicine monomers and compound prescriptions to boost cancer immunotherapy. Front Immunol. 14, 1277243(2023).
  9. Li, S., et al. Tailoring traditional Chinese medicine in cancer therapy. Mol Cancer. 24 (1), 27(2025).
  10. Ma, L. X., Ai, P., Li, H., Vardy, J. The prophylactic use of Chinese herbal medicine for chemotherapy-induced leucopenia in oncology patients: a systematic review and meta-analysis of randomized clinical trials. Support Care Cancer. 23 (2), 561-579 (2015).
  11. Han, J., et al. Study of the Effects and Mechanisms of Ginsenoside Compound K on Myelosuppression. J Agr Food Chem. 67 (5), 1402-1408 (2019).
  12. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi Decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302, 115876(2023).
  13. Zhao, N., et al. Jianpi-Yangxue-Jiedu decoction improves the energy metabolism of psoriasis mice by regulating the electron transfer of oxidative phosphorylation. J Ethnopharmacol. 324, 117714(2024).
  14. Zhang, S., et al. Jianpi Huayu Jiedu Decoction prevents the progression of H. pylori and MNU-induced gastric precancerous lesions by inhibiting ferroptosis and remodeling linoleic acid metabolism. J Ethnopharmacol. 352, 120217(2025).
  15. Gao, B., Wang, R., Peng, Y., Li, X. Effects of a homogeneous polysaccharide from Sijunzi decoction on human intestinal microbes and short chain fatty acids in vitro. J Ethnopharmacol. 224, 465-473 (2018).
  16. Luo, X., et al. STAT3 as a critical target of Sijunzi Decoction in the treatment of gastric cancer: evidence from integrated network pharmacology and experimental validation. Front Mol Biosci. 12, 1683806(2025).
  17. Zhang, L., et al. Danggui buxue decoction attenuates doxorubicin-induced cardiotoxicity by inhibiting ZBP1-mediated PANoptosis in vivo and in vitro. Phytomedicine. 145, 157037(2025).
  18. Mei, Z. G., et al. Fermented Chinese formula Shuan-Tong-Ling attenuates ischemic stroke by inhibiting inflammation and apoptosis. Neural Regen Res. 12 (3), 425-432 (2017).
  19. Huang, Q., et al. Jian-Pi-Bu-Xue-Formula Alleviates Cyclophosphamide-Induced Myelosuppression via Up-Regulating NRF2/HO1/NQO1 Signaling. Front Pharmacol. 11, 1302(2020).
  20. Yang, J., et al. Effect of Jianpi Shengxue Tablet on Iron Metabolism and Nutritional Status in Patients with Renal Anemia: A Prospective, Randomized, Open, Parallel Controlled and Multicenter Clinical Study. Curr Med Sci. 44 (3), 603-610 (2024).
  21. Hou, B., et al. Oral Chinese Herbal Medicine as an Adjuvant Treatment for Chemotherapy, or Radiotherapy, Induced Myelosuppression: A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Evid-Based Compl Alt. 2017, 3432750(2017).
  22. Han, J. Y., et al. Ameliorating effects of compounds derived from Salvia miltiorrhiza root extract on microcirculatory disturbance and target organ injury by ischemia and reperfusion. Pharmacol Therapeut. 117 (2), 280-295 (2007).
  23. Liu, Y., et al. Integration of Network Pharmacology and Experimental Validation to Explore Jixueteng - Yinyanghuo Herb Pair Alleviate Cisplatin-Induced Myelosuppression. Integr Cancer Ther. 23, 15347354241237969(2024).
  24. Liu, Y., et al. Anti-Alzheimers molecular mechanism of icariin: insights from gut microbiota, metabolomics, and network pharmacology. J Transl Med. 21 (1), 277(2023).
  25. Zhang, H., et al. Bioinformatics and Network Pharmacology Identify the Therapeutic Role and Potential Mechanism of Melatonin in AD and Rosacea. Front Immunol. 12, 756550(2021).
  26. Qu, W., et al. Effect of Jianpi Shengxue Granule on Fertility and Early Embryo Development Toxicity of Rats. Chin J Integr Med. 37 (3), 356-359 (2017).
  27. Ouyang, X., et al. Induction of anaplastic lymphoma kinase (ALK) as a novel mechanism of EGFR inhibitor resistance in head and neck squamous cell carcinoma patient-derived models. Cancer Biol Ther. 19 (10), 921-933 (2018).
  28. Cinque, L., et al. Novel association of MEN1 gene mutations with parathyroid carcinoma. Oncol Lett. 14 (1), 23-30 (2017).
  29. Huyan, X. H., Lin, Y. P., Gao, T., Chen, R. Y., Fan, Y. M. Immunosuppressive effect of cyclophosphamide on white blood cells and lymphocyte subpopulations from peripheral blood of Balb/c mice. Int Immunopharmacol. 11 (9), 1293-1297 (2011).
  30. He, Y., et al. Mesenchymal stem cells empower T cells in the lymph nodes via MCP-1/PD-L1 axis. Cell Death Dis. 13 (4), 365(2022).
  31. Recordati, C., et al. Repeated oral administration of low doses of silver in mice: tissue distribution and effects on central nervous system. Part Fibre Toxicol. 18 (1), 23(2021).
  32. Ram, S., et al. Pixelwise H-score: A novel digital image analysis-based metric to quantify membrane biomarker expression from immunohistochemistry images. Plos One. 16 (9), e0245638(2021).
  33. Woo, B., et al. Automated anomaly-aware 3D segmentation of bones and cartilages in knee MR images from the Osteoarthritis Initiative. Med Image Anal. 93, 103089(2024).
  34. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopeia of the People's Republic of China. , People's Medical Publishing House. Beijing, China. (2005).
  35. Chen, Y., et al. Quality Control of Glehniae Radix, the Root of Glehnia Littoralis Fr. Schmidt ex Miq. Along its Value Chains. Front Pharmacol. 12, 729554(2021).
  36. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminformatics. 6, 13(2014).
  37. Matsuura, S., et al. Negative effects of GM-CSF signaling in a murine model of t(8;21)-induced leukemia. Blood. 119 (13), 3155-3163 (2012).
  38. Tsiftsoglou, A. S. Erythropoietin (EPO) as a Key Regulator of Erythropoiesis, Bone Remodeling and Endothelial Transdifferentiation of Multipotent Mesenchymal Stem Cells (MSCs): Implications in Regenerative Medicine. Cells. 10 (8), 2140(2021).
  39. Yu, L., Wei, J., Liu, P. Attacking the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway for targeted therapeutic treatment in human cancer. Semin Cancer Biol. 85, 69-94 (2021).
  40. Alves, C. L., Ditzel, H. J. Drugging the PI3K/AKT/mTOR Pathway in ER+ Breast Cancer. Int J Mol Sci. 24 (5), 4522(2023).
  41. Guan, P., Cui, R., Wang, Q., Sun, Y. A 3D hydrogel loaded with exosomes derived from bone marrow stem cells promotes cartilage repair in rats by modulating immunological microenvironment. Nanfang Yike Daxue Xuebao. 42 (4), 528-537 (2022).
  42. Liu, Z., et al. Activating Angiogenesis and Immunoregulation to Propel Bone Regeneration via Deferoxamine-Laden Mg-Mediated Tantalum Oxide Nanoplatform. Acs Appl Mater Inter. 16 (19), 24384-24397 (2024).
  43. McCloskey, E. V., Guest, J. F., Kanis, J. A. The clinical and cost considerations of bisphosphonates in preventing bone complications in patients with metastatic breast cancer or multiple myeloma. Drugs. 61 (9), 1253-1274 (2001).
  44. Lin, L., et al. Characterization of Differences in Chemical Profiles and Antioxidant Activities of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera Based on Multi-Technique Data Fusion. Molecules. 29 (20), 4865(2024).
  45. Dabeek, W. M., Marra, M. V. Dietary Quercetin and Kaempferol: Bioavailability and Potential Cardiovascular-Related Bioactivity in Humans. Nutrients. 11 (10), 2288(2019).
  46. Li, W., et al. Flavonoids from Glycyrrhiza pallidiflora hairy root cultures. Phytochemistry. 60 (4), 351-355 (2002).
  47. Nian, Q., Liu, R., Zeng, J. Unraveling the pathogenesis of myelosuppression and therapeutic potential of natural products. Phytomedicine. 132, 155810(2024).
  48. Kellogg, C., Equils, O. The role of the thymus in COVID-19 disease severity: implications for antibody treatment and immunization. Hum Vaccin Immunother. 17 (3), 638-643 (2020).
  49. Liu, X., et al. Critical role of niche S100A8 for acute myeloid leukemia progression and hematopoiesis regeneration. Blood Adv. 9 (24), 6575-6589 (2025).
  50. Jafari, M., Ghadami, E., Dadkhah, T., Akhavan-Niaki, H. PI3k/AKT signaling pathway: Erythropoiesis and beyond. J Cell Physiol. 234 (3), 2373-2385 (2018).
  51. Novoplansky, O., et al. Activation of the EGFR/PI3K/AKT pathway limits the efficacy of trametinib treatment in head and neck cancer. Mol Oncol. 17 (12), 2618-2636 (2023).
  52. Weidemann, A., Johnson, R. S. Nonrenal regulation of EPO synthesis. Kidney Int. 75 (7), 682-688 (2009).
  53. Pallard, C., et al. Thrombopoietin activates a STAT5-like factor in hematopoietic cells. Embo J. 14 (12), 2847-2856 (1995).
  54. Stasi, R., et al. Thrombopoietic agents. Blood Reviews. 24 (4-5), 179-190 (2010).
  55. He, K., et al. G-CSF/GM-CSF-induced hematopoietic dysregulation in the progression of solid tumors. FEBS Open Bio. 12 (7), 1268-1285 (2022).
  56. Patsoukis, N., et al. Immunometabolic Regulations Mediated by Coinhibitory Receptors and Their Impact on T Cell Immune Responses. Front Immunol. 8, 330(2017).
  57. Geraud, A., et al. Clinical Pharmacology and Interplay of Immune Checkpoint Agents: A Yin-Yang Balance. Annu Rev Pharmacol. 61, 85-112 (2020).
  58. Naveiras, O., et al. Bone-marrow adipocytes as negative regulators of the haematopoietic microenvironment. Nature. 460 (7252), 259-263 (2009).
  59. Ambrosi, T. H., et al. Adipocyte Accumulation in the Bone Marrow during Obesity and Aging Impairs Stem Cell-Based Hematopoietic and Bone Regeneration. Cell Stem Cell. 20 (6), 771-784 (2017).
  60. Zhang, L., et al. Qingjie Fuzheng Granule attenuates 5-fluorouracil-induced intestinal mucosal damage. Biomed Pharmacother. 118, 109223(2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

דיכוי מחה שגרום לציקלופוספמידפרמקולוגיה של רשתותרשת אינטראקציית חלבוניםהעשרה של KEGGאונטולוגיה של גניםמסלול PI3K-Aktמסלול JAK-STATתאים חיוביים ל-CD34לוקופניה מושרית כימותרפיה

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.