האם עמידות לטייקופלנין שזוהתה על ידי המערכת האוטומטית בזני SPP של סטפילוקוקוס אמינה?

סיכום

כאן מוצג פרוטוקול להערכת אמינות מערכת אוטומטית (VITEK 2) לקביעת רגישות לטייקופלנין בבידוד סטפילוקוקוס בהשוואה למיקרודילול מרק (BMD), עם יישומים לאישור עמידות ולהכוונת טיפול אנטימיקרוביאלי מתאים.

תקציר

בסך הכול נכללו במחקר זה 467 בודדי סטפילוקוקוס אוראוס (S. aureus) ו-66 בודדים שליליים לקואגולאז (CoNS) שנאספו בין יוני 2022 לדצמבר 2024. בדיקת רגישות לטייקופלנין בוצעה באמצעות מערכת אוטומטית לבדיקת רגישות אנטימיקרוביאלית, מיקרו-דילול ציר (BMD) ושיטת בדיקת גרדיאנט. התגלתה עמידות למתיצילין ב-71.7% מבודדי S. aureus ובכל מבודדי CoNS. במחקר זה, זוהו 13 מבודדי S. aureus ו-4 מבודדי CoNS כעמידים לטייקופלנין באמצעות מערכת בדיקות רגישות אוטומטית. כל 13 הבודדים של S. aureus נמצאו רגישים לטייקופלנין הן בבדיקת הגרדיאנט והן ב-BMD. כל ארבעת הבודדים של CoNS זוהו כרגישים על ידי בדיקת הגרדיאנט, בעוד ש-BMD סיווגה שניים כבודדים רגישים ושניים כעמידים. התגלתה עמידות לטייקופלנין בארבעה זנים [S. capitis (n = 1) ו-S. haemolyticus (n = 3)] בקרב מבודדי CoNS על ידי BMD. ארבעת זני CoNS עמידים לטייקופלנין שזוהו על ידי BMD בודדו מתרביות דם; שלושה מהם התקבלו ממטופלים ילדים ואחד ממטופל מבוגר. בסך הכול, שיעור ה-MRSA (עמיד למתיצילין) היה גבוה יחסית במחקר, וכל הבודדים של CoNS היו עמידים למתיצילין. בנוסף, נמצאו מערכות אוטומטיות כבלתי אמינות לקביעת עמידות לטייקופלנין, ויש לאשר מבודדים שזוהו כעמידים על ידי BMD. בהינתן שטייקופלנין הוא אנטיביוטיקה אחרונה המשמשת לטיפול בפתוגנים כמו MRSA ו-CoNS עמיד למתיצילין, יש לעקוב מקרוב אחר רגישותו לזה.

מבוא

Staphylococcus aureus (S. aureus) הוא אחד ממיני הסטפילוקוקוס בעלי החשיבות הקלינית הגבוהה ביותר, בזכות מגוון גורמי האלימות הרחב שלו ויכולתו לגרום לזיהומים חמורים ברקמות ואיברים שונים. הוא אחראי לזיהומים בעור וברקמות רכות, זיהומים ברקמות עמוקות, בזיהומים בדרכי הנשימה, בזיהומים בדרכי השתן וזיהומים בזרם הדם, ונשאר אחד הפתוגנים החשובים ביותר במוסדות בתי חולים ^1,2. בפרט, S. aureus עמיד למתיצילין (MRSA) הוא גורם מרכזי לזיהומים הקשורים לבריאות ברחבי העולם וממשיך להיות גורם מוביל לזיהומים פצעים לאחר ^ניתוח. סטפילוקוקים שליליים לקואגולז (CoNS), אף שהם חלק מהפלורה הטבעית של העור, מעורבים יותר ויותר בזיהומים מקומיים ומערכתיים בשנים האחרונות. עלייה זו הובילה לבדיקות רגישות אנטימיקרוביאליות תכופות יותר, ובהתאם לכך לגילוי מוגבר של עמידות לאנטיביוטיקות גליקופפטידיות כגון טייקופלנין⁴.

מכיוון שזני S. aureus ו-CoNS מציגים לעיתים עמידות לאנטיביוטיקות β-לקטם, אנטיביוטיקות גליקופפטיד, בעיקר ונקומיצין וטייקופלנין, משמשות באופן נרחב לטיפול בזיהומים אלו. השכיחות הגוברת של פתוגנים נוזוקומיים עמידים לגרם-חיוביים הובילה להרחבת השימוש בגליקופפטידים, מה שתרם לירידה ברגישות החיידקים לחומרים אלו ^5,6. לוואנקומיצין וטייקופלנין יש יעילות אנטימיקרוביאלית דומה; עם זאת, מחקרים רבים הראו כי טייקופלנין קשור לפחות תופעות לוואי, במיוחד ירידה בנפרוטוקסיות ^7,8. לכן, טייקופלנין נחשב לעיתים קרובות לאלטרנטיבה מתאימה לונקומיצין באוכלוסיות מטופלים מסוימות, כולל אלו עם נויטרופניה, בקטרמיה^{או תפקוד} כלייתי לקוי ^9,10.

קביעה מהירה ומדויקת של רגישות לגליקופפטיד חשובה בשל השימוש הנרחב בחומרים אלו בזיהומי סטפילוקוקוס עמידים למתיצילין ובשל הדיווחים ההולכים וגדלים על זנים עמידים לגליקופפטיד¹¹. קיימות מספר שיטות מעבדה להערכת רגישות לגליקופפטיד במיני סטפילוקוקוס, כולל דילול אגר, בדיקות גרדיאנט, מיקרו-דילול בציר (BMD) ומערכות אוטומטיות לבדיקות רגישות אנטימיקרוביאליות⁵. מחקרים קודמים דיווחו על פערים בין מערכות אוטומטיות לשיטות ייחוס בזיהוי ירידה ברגישות או עמידות לגליקופפטידים, במיוחד לטייקופלנין, במיני סטפילוקוקוס ^4,11.

המחקר הנוכחי נועד להעריך את אמינות מערכת בדיקת הרגישות האנטי-מיקרוביאלית האוטומטית לקביעת רגישות לטייקופלנין בבידוד סטפילוקוקוס , בהשוואה לשיטת המיקרודילול של המרק, התקן הייחוס. הערכת מאפייני הביצועים של המערכת האוטומטית עשויה לסייע במעבדות קליניות להעריך את התאמתה לגילוי שגרתי של רגישות לגליקופפטיד בפרקטיקה קלינית.

פרוטוקול

המחקר אושר על ידי ועדת האתיקה המקומית ב-27 בינואר 2025 (מספר פרוטוקול: HRU/25.02.03). המחקר נערך בהתאם לעקרונות הצהרת הלסינקי.

1. עיצוב מחקר

מחקר רטרוספקטיבי זה העריך את ביצועי מערכת בדיקת הרגישות האנטימיקרוביאלית האוטומטית לקביעת רגישות לטייקופלנין במיני סטפילוקוקוס , תוך השווה תוצאות לשיטת ההתייחסות למיקרודילול מרק (BMD) ושיטת בדיקת גרדיאנט.

2. ברירה מבודדת

1. איסוף מבודדים קליניים
   1. כולל סך הכל 467 בודדי S. aureus ו-66 בודדי סטפילוקוקוס (CoNS) שליליים לקואגולאז שנאספו מדגימות קליניות שונות בין יוני 2022 לדצמבר 2024.
   2. עבד את כל הדגימות הקליניות לפי פרוצדורות מיקרוביולוגיות שגרתיות במעבדה האבחנתית.
   3. כלול בניתוח רק בידוד אחד לכל מטופל. יש להחריג מבודדים חוזרים שהתקבלו מדגימות שונות מאותו מטופל.
2. זיהוי ראשוני וסינון
   1. זהה את כל הבודדים ברמת המין באמצעות ספקטרומטריית מסה בלייזר בסיוע מטריצה (MALDI-TOF MS).
   2. בדקו את S. aureus ו-CoNS לבידוד עמידות למתיצילין ולרגישות לטייקופלנין באמצעות כרטיסי VITEK 2 AST-P664 באמצעות מערכת בדיקת רגישות אוטומטית.
   3. רשמו את ערכי הריכוז המעכב המינימלי (MIC) שנוצרו על ידי מערכת בדיקת הרגישות האוטומטית להשוואה נוספת.
3. אחסון בידוד ותת-תרבות
   1. יש לאחסן מבודדים בטמפרטורה של −80 מעלות צלזיוס בציר סויה טריפטי עם תוספת של 20% גליצרול לאחר מערכת בדיקת רגישות אוטומטית.
   2. לפני בדיקות ייחוס, ההפשרה מבודדת בטמפרטורת החדר ותת-תרבית פעמיים על אגר דם כבש 5%.
   3. דגירה של לוחות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות לאחר כל מעבר כדי להבטיח טוהר וכדאיות.

3. בדיקת רגישות אנטימיקרוביאלית

1. מיקרודילול מרק (BMD)
   1. הכנת תמיסות טייקופלנין
      1. הכינו תמיסה מלאית של אבקת טייקופלנין בריכוז של 2560 מ"ג/ליטר במרק מולר-הינטון מותאם לקטיון (CAMHB).
   2. הליך מיקרו-דילול בציר
      1. בצע בדיקות מיקרודילול בציר באמצעות מיקרופלטות U-bottom סטריליות עם 96 בארים.
      2. זרקו 100 מיקרו-ליטר של CAMHB לכל באר. מדלל את תמיסת המלאי של הטייקופלנין פי עשרה והוסף 100 מיקרוליטר לבאר הראשונה.
      3. הכינו דילול סדרתי כפול בין בארות 1–10 כדי להשיג ריכוזי אנטיביוטיקה סופיים הנעים בין 64 ל-0.125 מיקרוגרם/מ"ל.
      4. השתמש בבאר 11 כאמצעי בקרה לגדילה המכיל CAMHB וחינוקולום חיידקים. השתמש בבאר 12 כבקרה שלילית המכילה רק את CAMHB¹².
   3. הכנת אינוקולום ודגירה
      1. השהי מושבות חיידקים טהורות במי מלח סטריליים וכוון את המתלה לעכירות השווה לתקן מקפרלנד 0.5.
      2. הכינו דילול של 1:100 ב-CAMHB והוסיפו 100 מיקרוליטר של תשיין חיידקי לבארות 1–11 כדי להגיע לריכוז חיסון סופי של כ-5 × 10⁵ CFU/mL.
      3. דגרו את המיקרופלטות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות בתנאי אטמוספירה סביבתית¹².
   4. קביעת MIC ופרשנות
      1. הגדר את ריכוז המעכב המינימלי (MIC) כרכוז הנמוך ביותר של טייקופלנין שמעכב לחלוטין את צמיחת החיידקים הגלויים לאחר הדגירה.
      2. פרש ערכי MIC לפי הנחיות הוועדה האירופית לבדיקות רגישות אנטימיקרוביאלית (EUCAST) גרסה 14.0¹³.

4. בקרת איכות

1. השתמש ב-Staphylococcus aureus ATCC 29213, עם טווח ייחוס של TEICOPLANIN MIC של 0.25–1 mg/L, כזן בקרת איכות.

5. ניתוח סטטיסטי

1. השוואת שיטות
   1. השווה את תוצאות ה-TEICOPLANIN MIC שהושגו באמצעות מערכת בדיקות רגישות אוטומטית לאלו שהתקבלו באמצעות שיטת ההתייחסות BMD.
   2. הגדר הסכמה קטגורית (CA) כתוצאות רגישות או עמידות בין שתי השיטות.
2. סיווג שגיאות
   1. הגדר שגיאות חמורות מאוד (VME) כמבודדות המסווגות כרגישות על ידי מערכת בדיקת רגישות אוטומטית אך עמידות על ידי BMD.
   2. הגדר שגיאות עיקריות (ME) כבודדים המסווגים כעמידים על ידי מערכת בדיקת רגישות אוטומטית אך רגישים ל-BMD.
3. קריטריוני ביצועים
   1. יש לשקול את ביצועי השיטה כמקובלים כאשר ההסכמה הקטגורית היא ≥90% ושיעורי VME ו-ME הם ≤3%, בהתאם לקריטריוני ההערכה שפורסמו^14,15.

תוצאות

בסך הכול נכללו בניתוח 533 בודדים שנמצאו מדגימות קליניות במשך תקופה של שנתיים וחצי. כל מבודדי ה-CoNS (MR-CoNS) עמידים למתיצילין, ו-71.7% מהבודדים של S. aureus , נמצאו עמידים למתיצילין. דגימות מפצע היו הדגימות הקליניות הנפוצות ביותר שהניבו מבודדי S. aureus , בעוד שדגימות MR-CoNS נמצאו לרוב מתרביות דם (איור 1).

דיון

עמידות לאנטימיקרוביאלים היא אחד האיומים המשמעותיים ביותר על בריאות הציבור העולמית, ותורמת לעלייה בעלויות הבריאות, כישלון טיפול ותמותה³. השכיחות של זיהומים נרכשים בקהילה ובבתי חולים הנגרמים על ידי סטפילוקוקוס אוראוס ממשיכה לעלות ברמה הלאומית והגלובלית. עמידות למתיצילין, במיוחד, קשורה לעלייה בתחלואה ובתמותה; לכן, פרופילי ההתנגדות מנוטרים באופן שגרתי ברחבי העולם¹⁶.

לפי דוח המעקב אחרי זיהומי דם באוסטרליה משנ...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מרק מולר הינטון מותאם לקטיון	סיגמא-אלדריך, דרמשטאדט, גרמניה	CM0405B	לצמיחת חיידקים בשיטת המיקרודילולציה של המרק
כתב יד MALDI-TOF	VITEK MS, BioMé ריו, צרפת	410893	לזיהוי חיידקים
תקן מקפרלנד	bioMé ריו, צרפת	95060-958	סטנדרטיזציה של חיסון חיידקים
צלחות פטרי	RTA, Tü RKIYE	2102	להכנה בינוניים וגידול חיידקים
טיפ פיפט 20 - 200 & mu; L	סיגמא-אלדריך, דרמשטאדט, גרמניה	Z740105	להפצת מולר מותאם לקטיון – מרק הינטון (CAMHB) למיקרופלטות U-bottom והכנת דילול סדרתי
אגר דם כבשים	RTA, Tü RKIYE	2001	בידוד וגידול מיקרואורגניזמים
סטפילוקוקוס אוראוס	אוסף תרבות הטיפוס האמריקאית	29213	זן ההתייחסות ששימש במחקר זה
אבקת טייקופלנין	סיגמא-אלדריך, דרמשטאדט, גרמניה	T0578	אנטיביוטיקה
מרק סויה טריפטי	מרק, גרמניה	1,054,590,500	בידוד וגידול מיקרואורגניזמים
פלטת באר תחתית U	תרמו פישר סיינטיפיק	163320	לבדיקת רגישות אנטימיקרוביאלית בשיטת מיקרו-דילול בציר
כרטיסי VITEK 2 AST-P664	bioMé ריו, צרפת	414197	לבדיקת רגישות אנטימיקרוביאלית
VITEK2 קומפקט	bioMé ריו, צרפת	4700030	לבדיקת רגישות אנטימיקרוביאלית